全 文 ：2008年总第40卷第9期
传统医学认为虎斑游蛇 Natrixtigrina.Lateralis(Berthord)
具有祛风湿、止痹痛、解毒等功能,是一种有着重要开发及药
用价值的动物类药材,在民间广泛应用。但长期以来,由于对
其缺乏系统的科学研究,故我国一直未将虎斑游蛇作为商品
药材在临床上使用。本实验旨在进行虎斑游蛇醇提物的镇痛
药效学研究,并探讨虎斑游蛇的外周镇痛作用与单胺类神经
递质的释放及抑制等方面的关系,从而深入探讨其镇痛作用
机制,为临床开发蛇类动物药及更深入研究提供科学的实验
依据。
1 实验材料
1.1 药材及制备 虎斑游蛇捕捉于黑龙江省虎林县境内,活
体经分类鉴定为游蛇科动物虎斑游蛇 Natrixtigrina.Lateralis
(Berthord)。药材经干燥磨粗粉,制成 100%醇提液(含生药量
1g/mL),实验时根据所需浓度以生理盐水稀释。
1.2 实验动物 昆明种小白鼠、Wistar大白鼠,均由黑龙江中
医药大学实验动物中心提供。
1.3 实验仪器 电子天平 (梅特勒-托利多仪器有限公司,
PL202-S型),高功率数控超声震荡器(昆山市超声仪器有限
公司,KQ-800KDE),自动平衡微型离心机(北京医用离心机
厂,LDZ4-0.8),荧光分光光度计 (日本岛津公司,RF-
5301PC)。
2 实验方法
2.1 小鼠醋酸扭体实验 取健康昆明小鼠 40只,雌雄各半,
体重为(20±2)g,随机分成 4组,分别灌胃给予不同浓度的虎
斑游蛇醇提物(100%、50%)、空白对照药 0.9%生理盐水和阳
性对照药 0.6%阿司匹林。连续用药 7d,末次给药 1.5h后小鼠
腹腔注射 0.7%冰醋酸 0.1mL/10g。记录致痛后 15min内小鼠
扭体次数,并计算镇痛抑制百分率。结果见表1。
镇痛抑制百分率(%)=阳性对照组扭体次数-给药组扭体反应次数
阳性对照组扭体次数
×100%
2.2 小鼠甲醛致痛实验 动物分组、给药同前。于第 7d给药
后 1h于小鼠右后足足部皮下注射 1.8mol/L福尔马林溶液
20μL/只致痛。以小鼠舔足累计时间为痛反应指标,分别记录
一相及二相累计舔足时间。
2.3 血清单胺类神经递质的含量测定 取健康 wistar大鼠
40只,雌雄各半,体重为 160～200g,随机分成 4组,分别灌胃
给予虎斑游蛇醇提物 (100%、50%)、0.9%生理盐水及阳性对
照药(阿司匹林等效剂量)。每日灌胃给药 1次,连续给药 7d。
末次给药后 80min,大鼠左足跖皮下注射 5%甲醛溶液 50μL,
造成伤害性疼痛模型。40min后各组大鼠断头取血,按化学荧
光法测定血清中神经递质5-HT、5-HIAA、NE含量。
2.4 数据处理 实验数据以(x±s)表示,组间差异比较采用
Student’sT-test分析。
3 实验结果
3.1 对醋酸致小鼠扭体反应的影响 从表 1可见,虎斑游蛇
醇提物的高、低剂量组及阿司匹林对照组与空白对照组相比
较,对醋酸所致小鼠扭体反应均有显著抑制作用,具有统计学
意义(P<0.01);给药后镇痛抑制率分别为 64.7%、53.9%,呈量
效关系。提示虎斑游蛇醇提物具有外周镇痛作用。
3.2 对小鼠甲醛致痛反应的影响 从表2可见,虎斑游蛇醇
提物的高、低剂量组及阿司匹林对照组与空白对照组相比较,
虎斑游蛇醇提物外周镇痛作用与血清单胺类
神经递质相关性实验研究
赵文静 1 张 乔 2 旺建伟 1
(1.黑龙江中医药大学,黑龙江哈尔滨150040;2.哈尔滨市食品药品检验检测中心,黑龙江哈尔滨150525)
摘 要 目的:研讨虎斑游蛇醇提物外周镇痛作用及其镇痛作用机制与血清单胺类神经递质的
相关性。方法:建立多种实验性外周性疼痛的动物模型,观察虎斑游蛇不同浓度醇提物对多种疼痛模
型的镇痛作用、镇痛程度;建立伤害性疼痛动物模型,通过化学荧光法,测定大鼠血清中五羟色胺(5-
HT)、五羟乙哚乙酸(5-HIAA)、前列腺素(NE)含量,观察虎斑游蛇不同浓度醇提物对其含量的影响。
结果:虎斑游蛇醇提物对多种外周性疼痛模型均具有镇痛作用,且以高剂量组镇痛作用程度显著;虎
斑游蛇醇提物对大鼠血清中单胺类神经递质含量有影响,能够降低 5-HT、NE的含量,以高剂量组作
用显著,呈量效关系。结论:虎斑游蛇醇提物镇痛作用与其作用于外周神经系统有关,其作用机理之
一与其对血清中单胺类神经递质含量的影响有关,具有外周镇痛作用。
关键词 实验性外周性疼痛 虎斑游蛇提取物 单胺类神经递质 5-HT NE 5-HIAA
昆明小鼠
中图分类号 R282.740.5 文献标识码 A 文章编号 1672-397X(2008)09-0081-02
基金项目:黑龙江中医药大学科研基金重点项目(200507)
实 验 研 究
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2008年总第40卷第9期
表1 虎斑游蛇醇提物对醋酸致小鼠扭体反应的影响(x±s)
组别 动物数 剂量(g/kg)
空白对照组 10
扭体次数(次) 抑制率(%)
52.7±6.8
阿司匹林对照组 10 0.1 11.1±4.6** 78.9
虎斑游蛇醇提物高剂量组 10 20 18.6±6.5** 64.7
虎斑游蛇醇提物低剂量组 10 10 24.3±6.6** 53.9
注:与空白对照组比较,**P<0.01。
表2 虎斑游蛇醇提物对小鼠甲醛致痛反应的影响(x±s)
一相(0～3min)
舔足时间(s) 抑制率(%) 舔足时间(s)
43.6±10.4 45.6±10.0
33.2±10.7* 23.9 23.6±8.58**
剂量
(g/kg)
0.1
二相(20～40min)
抑制率(%)
48.2
组别 动物数
空白对照组 10
阿司匹林对照组 10
32.4±9.74* 25.7 19.7±7.56**20 56.8虎斑游蛇醇提物高剂量组 10
虎斑游蛇醇提物低剂量组 10 10 42.5±10.9 2.5 33.2±9.53* 27.2
注:与空白对照组比较,*P<0.05,**P<0.01。
表3 虎斑游蛇醇提物对血清5-HT、5-HIAA、NE含量的影响(x±s) ng/g
剂量(g/kg) 5-HT
0.103±0.041
5-HIAA NE
0.02±0.02 0.087±0.036
0.015 0.069±0.029* 0.019±0.013 0.058±0.028
20 0.07±0.02* 0.02±0.017 0.055±0.03*
10 0.08±0.056 0.018±0.019 0.065±0.05
组别 动物数
空白对照组 10
阿司匹林对照组 10
虎斑游蛇醇提物高剂量组 10
虎斑游蛇醇提物低剂量组 10
注:与空白对照组比较,*P<0.05,**P<0.01。
对甲醛所致的二相疼痛反应有显著抑
制作用(P<0.01,P<0.05),对甲醛所致的
一相疼痛反应抑制作用不明显,仅高
剂量组具有统计学意义(P<0.05),与阿
司匹林组强度相似,对二相疼痛镇痛
抑制率分别为 56.8%、27.2%,呈量效
关系。提示虎斑游蛇醇提物具有外周
镇痛作用。
3.3 对血清 5-HT、5-HIAA、NE含量
的影响 从表 3可见,虎斑游蛇醇提
物高剂量可降低疼痛模型大鼠血清中
5-HT、NE的含量,与空白对照组相比
较,有统计学意义(P<0.05)。而各组对
5-HIAA含量影响均不大,均无统计学
意义(P>0.05)。提示虎斑游蛇醇提物高
剂量组对疼痛模型大鼠血清内单胺类
神经递质有影响。
4 讨论
疼痛产生的机制很复杂,不完全
是由炎症所致,但炎症常伴有疼痛症
状。炎症介质如组胺、5-HT等均可激
活伤害性感受器,由传入神经末梢传
到大脑皮层及边缘系统,从而产生疼
痛。本实验采用醋酸致小鼠扭体实验
主要是间接通过腹腔急性炎症所致化
学性疼痛刺激,是筛选非甾体抗炎药
镇痛作用的一种敏感而简便的方法[1]。
甲醛致痛是化学刺激引起的持续性疼
痛的有效模型,广泛应用于疼痛机制
研究和镇痛药的筛选。甲醛所致小鼠的疼痛行为反应包括典
型两相[2]:一相为注射后 0～3min的急性化学伤害疼痛反应,
二相为 20～40min紧张持续性疼痛反应。一相急性疼痛反应
系直接刺激皮下化学感受器和 C纤维传递的结果,对麻醉性
镇痛药较敏感;二相继发性疼痛反应则是由于疼痛刺激的中
枢反应和外周炎性反应的综合结果,对非甾体抗炎药较敏
感。
本实验通过对醋酸扭体实验、甲醛致痛实验所致腹腔和
足跖部急性炎性刺激而产生痛反应的动物模型观察,表明虎
斑游蛇醇提物在高、低剂量范围内,对醋酸扭体反应、甲醛致
痛的二相外周疼痛反应均有良好的抑制作用,与模型对照组
比较,有显著性差异,且呈量效关系,提示虎斑游蛇具有外周
镇痛作用。
不论何种性质的疼痛,神经递质作为神经系统传导的媒
介,在疼痛产生的全过程中均起着举足轻重的作用。目前研究
得较为清楚的有单胺类神经递质,所以在本次实验中,我们选
择单胺类神经递质作为客观指标进行检测,旨在从单胺类神
经递质这一侧面对虎斑游蛇的镇痛机制进行深入的探讨。单
胺类神经递质包括 DA、NE和 5-HT,它们既是神经递质,又
能直接致痛,在外周它们均是致痛因子。本实验结果表明,虎
斑游蛇醇提物在外周能显著降低 5-HT、NE含量,对 5-HT的
代谢产物 5-HIAA没有影响。5-HT是由色胺酸与 5-羟色胺
酸在酶的参与下合成的一种生理活性广泛的生物胺[3],主要由
血小板摄取和释放。血液中的 5-HT不能透过血脑屏障进入
神经组织,当组织破坏时,5-HT从解体的血小板中释放出来,
因其能提高伤害性感受器对缓激肽的敏感性,所以低浓度即
可致痛。因此虎斑游蛇对外周血中 5-HT含量的降低有利于
减少 5-HT的致痛效应,从而减轻疼痛。其机理可能是虎斑游
蛇促使血小板对 5-HT的摄取增加而释放减少,但是虎斑游
蛇对 5-HT的代谢产物 5-HIAA没有影响,说明其对单胺氧
化酶影响不大。NE在外周也是一种致痛物质,而虎斑游蛇能
使其在外周血清中含量减少,从而进一步减轻其对局部的疼
痛刺激。
5 参考文献
[1] 黄国平,马传庚,徐叔云.维拉帕米、硝苯啶和粉防己碱加强吲哚
美辛的镇痛作用.中国药理学通报,1993,9(1):36
[2]VaccarinoAL,MelzackR.Temporalcingulumbundle,fornixpathway
and processofformalin pain:diferentialrole ofthemedial
bulboreticularformation.Pain,1992,49:257
[3] 周舒,娄艾琳.5-羟色胺的生理和病理生理.北京:人民卫生出版
社,1988:6、103
第一作者:赵文静(1960-),女,教授,硕士研究生导师,从
事中药学、药用动物及动物药的教学及科研工作。电子邮箱:
zhaowenjing@hljucm.net
收稿日期:2008-03-26
编辑:乔 婧 吴 宁
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