全 文 ：·药物制剂与药品质量控制·
双波长超高效液相色谱法测定
复方黄根颗粒中没食子酸和齐墩果酸含量*
杨辉
(广西南宁食品药品检验所，南宁 530001)
摘 要 目的 建立超高效液相色谱(UPLC)法同时测定复方黄根颗粒中齐墩果酸和没食子酸的含量。方法 采用
Agilent Eclipse Plus C18色谱柱，以甲醇-0． 1%磷酸溶液为流动相，梯度洗脱，流速:0． 2 mL·min
－1，波长切换，0 ～ 7 min波长
270 nm测定没食子酸，7 ～ 14 min 波长 215 nm 测定齐墩果酸。结果 没食子酸和齐墩果酸溶液分别在 0． 022 06 ～
0． 198 54 mg·mL －1(r =0． 999 6，n =5)，0． 031 04 ～0． 279 36 mg·mL －1(r = 0． 999 8，n = 5)范围内与峰面积积分值呈良好
线性关系，平均回收率分别为 100． 20%和 99． 96%;ＲSD分别为 0． 45%和 0． 64%。结论 该方法操作简便、重复性好，可以
更有效地控制制剂的质量。
关键词 黄根颗粒，复方;没食子酸;齐墩果酸;色谱法，超高效液相
中图分类号 Ｒ286． 6;Ｒ927． 2 文献标识码 B 文章编号 1004 － 0781(2016)02 － 0171 － 03
DOI:10． 3870 / j． issn． 1004-0781． 2016． 02． 017
Determination of Gallic Acid and Oleandic Acid in Compound Huanggen Granules by
UPLC with Double-wavelength
YANG Hui(Nanning Institute for Food and Drug Control，Nanning 530001，China)
ABSTＲACT Objective To establish an UPLC method for content determination of gallic acid and oleandic acid in
compound Huanggen granules． Methods Agilent Eclipse Plus C18 column was used with the mobile phase of methanol-0． 1%
phosphoric acid by gradient elution． Flow rate was 0． 2 mL·min －1 ． Detection wavelength was set at 270 nm in the first 7 min for
gallic acid and then changed to 215 nm for oleandic acid between 7 and 14 min． Ｒesults The linear concentration ranges of
gallic acid and oleandic acid were 0． 022 06 －0． 198 54 mg·mL －1(r =0． 999 6，n =5)and 0． 031 04 －0． 279 36 mg·mL －1(r =
0． 999 8，n =5)． Their average recovery was 100． 20% (ＲSD =0． 45%)and 99． 96%(ＲSD = 0． 64%) ，respectively． Conclusion
The extablished method is simple，reproducible and specific，and can be use to the quality control of compound Huanggen granules．
KEY WOＲDS Huanggen granules，compound;Gallic acid;Oleandic acid;Chromatography，ultra performance liquid
复方黄根颗粒是由广西平乐县中医医院根据传统
壮族医药新研制开发生产的院内制剂，由黄根、叶下
珠、三叶香茶菜、三七、黄芪、白术、绞股蓝等 7 味药组
成［1-4］。本制剂具有祛瘀生新、利湿退黄、平肝清热、保
肝降酶、利水解毒和抗肝纤维化的作用，临床用于治疗
不同证型的慢性乙型肝炎、脂肪肝、酒精性肝病等肝病
具有较好的功效［5-7］。原质量标准仅对制剂的性状、颗
粒剂项下有关各项规定进行检验，没有对制剂中有效
成分进行含量测定［2］。为更好地控制药品质量，笔者
参考相关文献报道［8-11］，建立超高效液相色谱(ultra
performance liquid chromatography，UPLC)双波长切换
收稿日期 2015 － 02 － 10 修回日期 2015 － 06 － 15
基金项目 * 广西壮族自治区卫生厅基金资助项目
(GZYZ-10-40)
作者简介 杨辉(1963 －) ，男，广西桂林人，副主任药师，
主要研究方向:药品检验、质量标准研究。电话:0771 －
3100835，E-mail:yh07719001@ 21cn． com。
同时测定制剂中没食子酸和齐墩果酸含量的方法，报
道如下。
1 仪器与试药
1． 1 仪器 美国 Agilent 1290 高效液相色谱仪(二极
管阵列检测器) ;AE240 电子天平(梅特勒-托利多仪器
公司，感量:0． 01 mg) ;KQ-300 型超声波清洗器(江苏
昆山市超声仪器有限公司)。
1． 2 试药 没食子酸(批号:110831-200803，含量:
90． 1%) ，齐墩果酸(批号:110709-200304) ，均购自中
国食品药品检定研究院;甲醇为色谱纯，水为高纯水，
其他试剂均为分析纯。实验用药材由广西平乐县中医
医院提供，并经本所中药室鉴定为现行药品标准收载
品种;复方黄根颗粒(广西平乐县中医医院制备，规
格:每袋 3 g，批号:20130311，20130326，20130403，
20130512，20130521，20130610)。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件 色谱柱:Agilent Eclipse Plus C18柱
·171·医药导报 2016 年 2 月第 35 卷第 2 期
(100 mm × 2． 1 mm，1． 8 μm ) ;流动相:甲醇(A)-0．
1% 磷酸溶液(B) ，梯度洗脱;0 ～ 7 min，20% A，～ 14
min，20% A→80% A;流速:0． 2 mL·min －1;柱温:30
℃;进样量:2 μL;检测波长:波长切换，0 ～ 7 min 在
270 nm波长测定没食子酸含量，7 ～ 14 min 在 215 nm
波长测定齐墩果酸含量。
2． 2 溶液的制备
2． 2． 1 对照品溶液 分别精密称取干燥至恒重的没食
子酸、齐墩果酸对照品 12． 24，15． 52 mg，分别置50 mL棕
色量瓶中，加 50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓
度分别为 0． 220 6 mg·mL －1和0． 310 4 mg·mL －1对照
品储备液。
对照品混合溶液制备:分别精密吸取对照品储备
液各 5 mL置 20 mL 棕色量瓶中，加 50%甲醇稀释至
刻度，摇匀，即得。
2． 2． 2 供试品溶液 取本品内容物，混匀，研细，取约
0． 4 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 50%甲醇
25 mL，称定质量，超声处理 30 min(功率 300 W，频率
40 kHz ) ，放冷，再称定质量，用 50%甲醇补足减失的
质量，摇匀，用微孔滤膜(孔径 0． 45 μm)滤过，取续滤
液，即得。
2． 2． 3 阴性对照溶液 按广西平乐县中医医院提供
的处方比例及制备工艺要求配制分别不含叶下珠、三
叶香茶菜药材的阴性对照样品，照“2． 2． 2”项供试品
溶液的制备方法制成阴性对照溶液。
2． 3 专属性和系统适用性实验 在上述色谱条件下，
取混合对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液，分别进
样，色谱图见图 1。结果阴性供试品的色谱图分别在没
食子酸、齐墩果酸保留时间的相应位置上无干扰峰出
现，此方法专属性强，阴性对照无干扰，分离度均 ＞1． 5。
2． 4 线性关系考察 精密吸取“2． 2． 1”项对照品储备
溶液 1，3，5，7，9 mL，分别置 10 mL棕色量瓶中，加 50%
甲醇至刻度，摇匀，制成不同浓度的混合对照品溶液。
取上述不同浓度对照品溶液分别进样，测定峰面积，以
浓度(C，μg·mL －1)对峰面积(A)进行线性回归，没食
子酸、齐墩果酸的回归方程分别为:A = 137． 52C + 76． 35
(r =0． 999 6，n = 5) ，A =154． 71C +18． 73(r =0． 999 8，
n = 5) ，结果表明，没食子酸、齐墩果酸溶液分别在 0．
022 06 ～ 0． 198 54 mg·mL －1， 0． 031 04 ～
0． 279 36 mg·mL －1内与峰面积呈良好的线性关系。
2． 5 精密度实验 取同一供试品溶液按上述色谱条
件连续进样 6 次，测定峰面积，没食子酸、齐墩果酸的
ＲSD分别为 0． 56%，0． 74%。表明仪器精密度良好。
2． 6 重复性实验 取同一批号复方黄根颗粒(批号:
20130311) ，按“2． 2． 2”项方法制备供试品溶液 6 份，
分别测定，计算没食子酸、齐墩果酸各组分含量。结果
含量分别为 3． 71，5． 29 mg·g －1，ＲSD分别为 0． 56%，
0． 70%(n = 6) ，表明重复性良好。
A．缺三叶香茶菜阴性样品;B．缺叶下珠阴性样品;C．对照
品;D．供试品;1．没食子酸;2．齐墩果酸
图 1 阴性样品、对照品和供试品超高效液相色谱图
A． negative sample without Ｒabdosia ternifolia Hara;B．
negative sample without Phyllanthus urinaria;C． reference
substance;D． sample;1． gallic acid;2． oleandic acid
Fig． 1 UPLC chromatograms of negative sample，
reference substance and sample
2． 7 稳定性实验 取新制备的供试品溶液(批号:
20130311 ) ，分别在 0，2，4，6，8，10，12，24 h 进样测定，
记录峰面积，没食子酸峰、齐墩果酸峰面积的 ＲSD 分
别为 0． 52%，0． 71%，表明供试品溶液在 24 h内稳定。
2． 8 加样回收率实验 精密称取已测定同一批样品
(批号:20130311，没食子酸、齐墩果酸的含量分别为
3． 71，5． 29 mg·g －1)0． 4 g，置 50 mL 量瓶中，分别各
精密加入没食子酸、齐墩果酸对照品储备溶液 5，7，
8 mL，按“2． 2． 2”项供试品溶液的制备方法制备所需
要溶液，取供试品溶液和对照品混合溶液各 2 μL，分
别注入液相色谱仪，计算其加样回收率。没食子酸、齐
墩果酸加样平均回收率分别为 100． 20%和 99． 96%;
ＲSD分别为 0． 45%和 0． 64%。结果见表 1。
2． 9 样品含量测定 取复方黄根颗粒的不同批号样
品，按“2． 2． 2”项下的方法制备供试品溶液。精密吸
取对照品溶液和供试品溶液各 2 μL，注入液相色谱
仪，测定，按外标法以峰面积计算样品中没食子酸、齐
墩果酸的含量，结果见表 2。
3 讨论
3． 1 检测波长的选择 在实验中，将没食子酸、齐墩
果酸对照品混合溶液，在 DAD 进行全波长紫外扫描，
结果没食子酸、齐墩果酸分别在 270 和 215 nm处吸收
·271· Herald of Medicine Vol. 35 No. 2 February 2016
表 1 没食子酸和齐墩果酸加样回收率实验结果
Tab． 1 Ｒesults of recovery tests of gallic acid and
oleandic acid
被测组分
取样量 /
g
原有量 加入量 测得量
mg
回收率 /
%
没食子酸 0． 401 2 1． 487 1 1． 103 0 2． 587 7 99． 78
0． 399 7 1． 481 5 1． 103 0 2． 594 2 100． 88
0． 400 6 1． 484 9 1． 544 2 3． 024 3 99． 69
0． 401 0 1． 486 4 1． 544 2 3． 035 1 100． 29
0． 408 9 1． 515 7 1． 764 8 3． 289 5 100． 51
0． 409 5 1． 517 9 1． 764 8 3． 283 0 100． 02
齐墩果酸 0． 401 2 2． 121 0 1． 552 0 3． 685 2 100． 79
0． 399 7 2． 113 1 1． 552 0 3． 650 0 99． 03
0． 400 6 2． 117 8 2． 172 8 4． 278 1 99． 42
0． 401 0 2． 119 9 2． 172 8 4． 299 1 100． 29
0． 408 9 2． 161 7 2． 483 2 4． 651 4 100． 26
0． 409 5 2． 164 9 2． 483 2 4． 647 4 99． 97
表 2 复方黄根颗粒含量测定结果
Tab． 2 Content determination of compound huanggen
granule mg·g －1，n = 3
样品批号
没食子
酸含量
齐墩果
酸含量
ＲSD /
%
20130311 3． 71 5． 29 0． 63
20130326 3． 73 5． 24 0． 79
20130403 3． 46 4． 81 0． 81
20130512 4． 11 5． 30 0． 62
20130521 3． 65 5． 13 0． 56
20130610 3． 77 4． 62 0． 70
值最大，并在此波长无干扰，故选择双波长切换。
3． 2 流动相的选择 实验中考察不同比例的甲醇-醋
酸水溶液、甲醇-磷酸水溶液、乙腈-磷酸水溶液、乙腈-
醋酸水溶液的流动相对该制剂中的没食子酸、齐墩果
酸与其他成分的分离效果，最后选定为:以甲醇为流动
相 A，以 0． 1%磷酸溶液为流动相 B，按本实验设计的
梯度洗脱，出峰时间约为 3． 8 和 11． 2 min，基线稳定，
对照品与样品中其他组分达到基线分离，且出峰时间
适宜，阴性对照色谱中无干扰峰出现，专属性强，故选
择该流动相，结果令人满意。
3． 3 提取方法的选择 在提取溶剂考察时分别用不
同浓度的甲醇、乙醇为提取溶剂。结果表明，50%甲醇
对没食子酸和齐墩果酸提取效率高，故以 50%甲醇作
为提取溶剂。对提取方法冷浸法、热回流提取法、超声
处理法的考察结果表明，超声处理法效果较理想。
实验结果表明，采用 UPLC 法同时测定复方黄根
颗粒中齐墩果酸和没食子酸的含量，具有良好的准确
性和重复性，可用于该制剂的质量控制。
参考文献
［1］ 广西壮族自治区食品药品监督管理局．广西壮族自治区
壮药质量标准(第二卷) ［M］．南宁:广西科学技术出版
社，2011:254，89．
［2］ 广西壮族自治区食品药品监督管理局．广西壮族自治区
壮药质量标准(第一卷) ［M］．南宁:广西科学技术出版
社，2008:20 － 21．
［3］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部) ［M］．北
京:中国医药科技出版社，2010:11 － 12，283 － 284，95 －
96，附录 36 － 38．
［4］ 广西壮族自治区食品药品监督管理局．广西壮族自治区
中药饮片炮制规范［M］． 南宁:广西科学技术出版社，
2007:277 － 278．
［5］ 覃文慧，涂燕云，黄彬，等．复方黄根液治疗慢性乙型肝
炎的临床观察［J］．时珍国医国药，2010，21(10) :2612 －
2613．
［6］ 黄彬，李益忠，张红星，等．不同剂型复方黄根治疗慢性
乙型肝炎的临床观察［J］． 广西中医药，2011，34(5) :3
－ 6．
［7］ 黄彬，李益忠，张红星，等．复方黄根颗粒对不同证型慢
性乙型肝炎的疗效观察［J］． 中医药临床杂志，2012，24
(9) :851 － 853．
［8］ 王琳，周浓，代亨英． HPLC 法测定黄牡丹不同部位中没
食子酸和丹皮酚的含量［J］． 医药导报，2015，34(2) :
228 － 231．
［9］ 吴英俊，韩冬梅，武艳，等．高效液相色谱法同时检测蛇
莓饮片齐墩果酸与熊果酸的含量［J］．医药导报，2010，
29(8) :1069 － 1071．
［10］ 张小燕，杭佳，叶晓川，等． HPLC 切换波长法同时测定
白蔹中没食子酸、原儿茶醛、儿茶素和白藜芦醇的含量
［J］．药物分析杂志，2014，34(3) :428 － 431．
［11］ 何丹，杨林，秦少容，等． UPLC法测定藿香正气口服液中
3 种核苷［J］．中成药，2013，35(12) :2658 － 2661．
·371·医药导报 2016 年 2 月第 35 卷第 2 期