全 文 ：葫芦巴对糖尿病大鼠肾脏保护作用的实验研究
阮　耀　黄川锋
(河南省南阳医学高等专科学校·南阳 473000)
摘　要　目的:探讨葫芦巴对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其机制。 方法:链脲佐菌素腹腔注射建立糖
尿病大鼠模型 ,观察葫芦巴对糖尿病大鼠血糖 、肾功能 、ET、TXB2 的影响。结果:葫芦巴能明显降低糖尿
病大鼠血糖 、尿蛋白 、ET、TXB2(P<0.01 ～ 0.05)。结论:葫芦巴能阻止或延缓糖尿病肾脏损害 , 可能降低
ET 、TXB2 水平是其作用机制之一。
主题词　糖尿病肾病 中医药疗法　葫芦巴 治疗应用　大鼠
　　糖尿病肾病(DN)是糖尿病(DM)常见的慢性并发症之
一 ,也是 DM 致残 、致死的主要原因[ 1] 。DN 的发病机制复杂
多样 , 目前确切机制仍不十分明确 。葫芦巴(Semen Trigone
llae , ST)为豆科葫芦巴属一年生草本植物 , 药食兼用。最新
发现葫芦巴所含的“葫芦巴甙”(共有 19 种不同的分子结构)
具有出色的降血糖作用[ 2] ,但其作用机制及对糖尿病大鼠肾
脏的保护作用未见报到。本文观察了葫芦巴对糖尿病大鼠
ET、TXB2 水平的影响 ,探讨其对糖尿病大鼠肾脏的保护作用
及其机制。
1　材料与方法
1.1　葫芦巴水煎液制备　将葫芦巴种子研磨成粉末 , 筛网
过滤 ,取葫芦巴粉 250g 加水温火煎煮至 2500ml(100mg/ml)。
1.2　动物模型的建立与分组　选择 40 只体重为 180 ～ 220g
雄性SD大鼠(郑州大学实验动物中心提供), 喂以基础饲料 ,
自由进食 、饮水 , 适应环境 1 周后 , 随机选择 10 只为正常对
照组(NC 组), 其余按照 55mg/kg 腹腔注射 1%STZ(临用前溶
于0.1mol/ L柠檬酸缓冲液 , pH4.2 ～ 4.5),正常组注射等量
柠檬酸钠缓冲液。 72 小时后采用断尾法取血 , 测定空腹血
糖(FBG)≥16.6mmol/ L的大鼠即为DM 大鼠。造模成功的大
鼠随机分为 2组 , 每组 10只。糖尿病葫芦巴治疗组(ST组予
葫芦巴 1.0g kg·d-1灌胃;糖尿病对照组(DM 组)和正常组每
天以同体积生理盐水灌胃。每周称 1次 , 根据体重变化调整
给药量。每组分 2笼喂养 , 自由进食和饮水。
1.3　标本采集及检测　各组大鼠于第 8 周末给药后禁食 12
小时 , 用代谢笼收集 24 小时尿液 , 用作尿蛋白和肌酐测定。
称重后腹腔注射戊巴比妥钠(40mg·kg -1)麻醉 ,股动脉取血 2
～ 3ml。酶免法测定血浆 ET、TXB2 , 试剂购自上海天呈科技
有限公司 、BIO-RAD680 全自动酶标仪测定。HELENA DS-
5 糖化血红蛋白分析仪测定糖化血红蛋白(HbAlc)。 取 1ml
血液分离血清测定血糖(FBG)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Cr),
计算内生肌酐清除率(Ccr), 试剂盒购自上海科华公司 , 用日
立 7060 全自动生化分析仪进行测定。无菌条件下迅速取双
肾并称重 , 4℃生理盐水冲洗后 , 剪取肾皮质制备 10%组织
匀浆 , 用于测定 SOD、MDA 的含量 , 试剂盒购自南京建成生
物有限公司 ,组织标本处理及测定按照试剂盒说明书操作。
1.4　统计学处理　应用 SPSS12.0 数据系统进行统计学分
析。结果以均数士标准差( x±s)表示 , 进行 t 检验;组间比
较用 F 检验和 q 检验。
2　结果
2.1　各组大鼠的 FBG 、HbAlc及肾皮质 SOD、MDA 的变化　
见表 1。
表 1 各组大鼠 FBG、HbAlc、SOD、MDA结果比较(x±s , n=10)
组别 　FBG(mmol L)
　HbAlc
　(%)
　SOD
(U mg·prot)
　MDA
(nmol mg·prot)
正常组 5.83±0.58 3.12±0.83 87.47±11.25 3.36±0.53
模型组 23.56±1.42＊＊ 7.95±0.41＊＊ 36.58±12.81＊＊14.82±2.41＊＊
ST组 11.61±1.25＊＊■■ 5.83±0.53＊＊■■ 56.31±10.17＊＊■■ 8.47±1.57＊＊■■
　　与正常组比较＊P<0.05 , ＊＊P<0.01;与模型组比较■P<0.
05 , ■■P<0.01(下同)
2.2　各组大鼠体重 、肾重 体重 、Ccr、24 小时尿蛋白的变化
　见表 2。
表 2 各组大鼠肾重 、体重 、Ccr 、24h尿蛋白结果比较(x±s , n=10)
组别 体重　(g)
肾重 体重
(×103)
　Ccr
(ml min·kg)
24h尿蛋白
(mg 24h)
正常组 344.9±13.8 2.03±0.11 3.62±0.43 5.21±0.84
模型组 225.3±25.1＊＊ 5.17±0.87＊＊ 5.41±0.38＊＊ 58.36±4.12＊＊
ST组 261.5±20.3＊＊■■ 4.18±0.72＊＊■■ 4.60±0.51＊＊■■ 28.13±3.25＊＊■■
2.3　各组大鼠 ET、TXB2 的变化　见表 3。
表 3 各组大鼠血浆 ET 、TXB2 水平的比较(x±s)
组别 例数 ET(pg ml) TXB2(pg ml)
正常组 10 62.53±21.67 120.36±42.32
模型组 10 94.12±15.83＊＊ 212.71±48.73＊＊
ST 10 74.52±18.76■ 163.30±30.82＊■
3　讨论　许多研究表明 , 糖尿病肾病的早期存在肾小球高
滤过[3] , TXA2/PGI2 的动态平衡异常以及 ET 在肾脏高滤过
中起重要作用。 ET 由血管内皮细胞分泌 , 是引起血管强烈
持久收缩的一种调节肽和生长因子。血栓素 A2(TXA2)是一
种具有强烈促进血管收缩和血小板聚集的生物活性物质 ,主
要作用于肾出球小动脉。 血栓素 B2(TXB2)为 TXA2 的终末
代谢产物 ,可反映 TXA2 的水平[ 4] 。研究表明长期高血糖刺
激会引起血管内皮细胞合成和释放 TXB2 和 ET 增加[ 5] 。高
·432· 中国中医药科技 2008 年 11月第 15 卷第 6期 Nov.2008 Vol.15 No.6
血糖导致细胞及细胞外基质发生非酶糖基化 ,糖基化产物的
形成 、堆积及氧化应激对糖尿病肾病的发生起重要作用[ 5] 。
在本实验中 , 糖尿病大鼠血浆中存在高水平的 ET、
TXB2;治疗组 ET、TXB2 、FBG 、HbAlc 含量较糖尿病组明显降
低(P<0.01 ～ 0.05)。证明葫芦巴具有明显的降低血糖作
用。治疗后糖尿病大鼠 ET、TXB2 水平下降 , 表明葫芦巴可
抑制高血糖刺激引起的血管内皮细胞合成和释放 TXA2 和
ET 的增加 , 从而抑制血小板聚集 ,减轻血管内皮的损伤 , 促
进血管内皮细胞功能的恢复。
由此可见 , 葫芦巴可显著降低糖尿病大鼠的 ET、TXB2
和血糖水平 ,有效改善糖尿病肾病肾血液动力学 , 增强抗氧
化能力 ,从而降低血糖和尿微量白蛋白 , 保护肾功能。
　　参考文献
1　吕学爱 ,关广聚.氨基胍对糖尿病大鼠肾脏保护作用的实验研究
.山东大学学报 ,2006 , 44(6):20.
2　徐铮奎.葫芦巴降血糖作用新发现.中国医药报 ,2003 ,(5):13.
3　曾明.中药葛根防治糖尿病血管病变的研究.华东师范大学博
士后研究工作报告 , 2001:10212.
4　张梅 , 温进坤 ,陈兴 ,等.冠心 Ⅱ号对动脉粥样硬化大鼠血脂 、
TNF-α、NO 及 TXA2 PGI2 影响的实验研究.中国中医药科技 ,
2008 , 15(1):20.
5　Bucala R , Vlassara H.Advanced glycosylation endproducts in diabetic re-
nal disease:clinical measurement , pathophysiological significance , and
prospects for pharmacological inibition.Blood Purif ,1995 , 13:160.
(修回:2008-09-06)
护肝片中北五味子超临界 CO2 萃取工艺的研究＊
全　红　鲁　一　张洪君　蔺莉莉　董培良　陈大中　孙永慧　宗　鸣　张晓燕
(黑龙江中医药大学中医药研究院·哈尔滨 150040)
＊黑龙江省科技计划项目 No.GC06C32601
黑龙江省教育厅科技项目 No.1153136
1　材料　GM32-1型超临界二氧化碳萃取装置:大连光明超临界技
术开发中心。试药:北五味子 ,购于黑龙江省药材公司。
2　实验方法　采用超临界CO2 流体萃取(SFE-CO2)[ 1] 及正交实验
因素与水平设计。
影响萃取效果的因素主要有萃取温度 、萃取压力 、萃取时间 、药
材投药量(堆积密度)、CO 2 流量 、分离压力 、分离温度等。本文采用
固定堆积密度为 100g 罐 , CO2 流量为 15kg h ,分离釜 Ⅰ 、Ⅱ的压力均
为 5mPa ,分离釜Ⅰ 、Ⅱ温度分别为 50℃、40℃,以萃取压力(15.20 、
25mPa)、萃取温度(40 、45 、50℃)、萃取时间(1.0、1.5 、2.0小时)为因
素 、3水平 ,用 L9(34)正交实验表安排试验,见表 1。
3　结果
3.1　不同工艺下提取物的收率　见表 1。
表 1 L9(34)正交试验结果分析表
序号 A B C D 提取率(%)
1 1 1 1 1 9.2
2 1 2 2 2 11.5
3 1 3 3 3 13.9
4 2 1 2 3 14.7
5 2 2 3 1 16.3
6 2 3 1 2 13.7
7 3 1 3 2 15.6
8 3 2 1 3 13.0
9 3 3 2 1 15.0
Ⅰ j 11.533 13.167 11.967 13.500
Ⅱ j 14.900 13.600 13.733 13.600
Ⅲ j 14.533 14.200 15.267 13.867
Rj 3.367 1.033 3.300 0.367
　　由表 1可见 , 对提取物收率影响最大的是萃取压力 , 其次是时
间 ,影响最小的是温度。
3.2　正交实验结果分析　见表 2。
表 2 方差分析结果
来源 SS v MS F 显著性
A 20.469 2 10.2345 94.764 P<0.05
B 1.616 2 0.8080 7.481 P>0.1
C 16.362 2 8.1810 75.750 P<0.05
D 0.220 2 0.1100
　　F 0.1(2.2)=9.00　F 0.05(2.2)=19.00　F 0.01(2.2)=99.00
由表 2的方差分析可知 ,萃取压力 、萃取时间对萃取工艺的影响
显著 ,萃取温度对结果的影响不显著 , 从节约能源的角度考虑 ,定为
40℃即可。结合表 1的直观分析 ,确定最佳的萃取工艺是A2B1C3 ,即
萃取压力为 20mPa ,萃取温度为 40℃,萃取时间为 2.0小时。
3.3　验证试验　以优选出的最佳工艺条件进行 3 批(批号为
20080617 、20080618 、20080619)验证试验 , 3批试验结果的提取率分别
是 16.2%、15.8%、15.7%,平均提取率为 15.9%, 说明该最佳工艺适
用于大批量生产。
4　讨论　压力是超临界萃取中的一个重要参数,增加压力有利于五
味子油的萃取,但高压下 CO 2 密度较大 ,可压性小 ,增加压力很难大
幅度提高溶解度。而且萃取率的增加与设备 、动力的消耗不成比例。
升温时 ,CO2 的密度急剧下降 ,此时虽提高了待分离组分的挥发度和
扩散系数 ,但不足以弥补由于密度变化而引起的溶解能力的下降 ,总
的结果是萃取率降低。为此选择适中的萃取压力 、萃取温度和适当
的萃取时间既可保证有较高的萃取率 ,又可降低生产成本[2] 。
本法最大的一个特点是没有溶剂残留 ,工艺简单 , 时间短 ,有效
成分被高度浓缩 ,将此提取方法应用于护肝片的制备工艺中大大增
加了原料的利用率,节省成本 ,简化生产流程。
　　参考文献
1　周庆华 ,范卓文 ,杨莲荣 ,等.五味子提取物超临界 CO2 萃取工艺
的研究.中医药学报 , 2003 , 31(3):44.
2　张怡.北五味子的超临界 CO2 萃取研究.中成药 , 2005 , 27((8):
88.
(修回:2008-08-11)
·433·中国中医药科技 2008年 11 月第 15 卷第 6期 Nov.2008 Vol.15 No.6