全 文 ：电暨迪 二为班一 (丝连 -崖生查堕卫期 176
荫风轮 、 风轮菜总皂戒对血小板
功能影响及机理的研究
刘青云 彭代银 陆 敏 戴
安徽中医学院 中药系中药药理室
张 敬 礼
( 解放军一 O五 医院 同位素室
敏
合肥
合肥
提要 荫风伦总皂武 ( T SP C )、 风枪 菜总皂武 ( T S C C )均明显增
强 AD P 诱导的血小 板聚集 、 提高血 小板拈附率 。 T S CP 作 用比 T S C C稍
强 。 效扮 免疚法 刚 定血 装 、 血小板中 。 A MP 、 T X B Z含量 , 结果 : T S C P
可 使 T X B : 显著升高, 此作用可能是该药促进血小 板聚集的主要机理 。
关键词 荫风轮总皂武 风轮 莱总皂武 血 小板聚集与拈 附 c A M P
T X B :
”é“二曰:”“月U二:
荫风轮总皂试 ( T o t a l S a p o n i n o f
C l i n o p o d i u m P o l y e e p h a l u m
,
`
r S C P
)
、 风轮菜总皂贰 ( T o t 。 1 s a p 。 n i n 。 f
C l i ont p
o d i u m C h i n e n s e
,
T S C C ) 是
从唇形科风轮菜属植物荫风轮 、 风轮菜中
提出的总有效成分 。 临床报道 : 荫风轮粗
提物 ( 主要含皂试 ) 对多种出血症有显著
疗效 〔 ` · ` , ; 药理研究证实 , 荫风轮 、 风轮
菜粗提物止血作用与血管因素有关 〔日 · ` ’ 。
本文报道 T S C P 、 T S C C对血小板功能的
影响 , 以进一步阐明其止血机理 , 并比较
两者作用强弱 。
材 料
T S C P
、
T S C C 由我系植化教研室供
给 ,配成 。 . 5% 、 2 % 、 4 % 的浓度 , p H调至
7
.
4 ; A D P由上海工业卫生研究所 供应 ,
实验前用 o . Zm ol / L磷酸缓冲液配成 2 0件 g /
2 0 时 , 置冰箱备用 ; 环一磷酸腺普 ( 。 A
M P ) 放射免疫分析试剂盒 , 系上海 第 二
医科大学同位素宝产吕; ; 血栓素 B Z ( T X
B ; ) 放射免疫分析药盒 , 系中国人民解放
军总院出品 。 S P A 一 3 型 P P P自动 平 衡
血小板聚集仪 ( 上海科达测试仪器厂 ) ;
血小板粘附测定管 ( 上海玻璃体仪器总厂
)
。
方法与结果
对 A乃 P 诱导血小板聚集的影响
1
. 体汁实验 血小板聚集仪 ( 包括
测量杯 ) 预热至 37 ℃ 。 大白鼠 ( 25 0士 2叱
) 戊巴比妥钠麻醉 , 颈总动脉取血 , 3 . 8%
构摊酸钠抗凝 ( 血与抗凝剂之 比为 9 : l
)
。 离心分离富血小板血浆 ( P R P , 1 0 0 0
r / m i n X 5 m i n ) 和贫血小板血浆 ( P P P ,
3 0 0 o r /m i n x l o m i n )
, 以 p P P稀释 p R P ,
使 P I丈P 血小板数为 2 2 5 x 1 0 。士 2 5 x 1 0 。 / L
, 取 P R P置 s 只测量杯中 ( 2 0 0协 l /只 ) ,
分别加入 0 . 2 m ol / L磷酸缓冲液 、 0 . 5% T
5 C P
、
0
.
5% T S C C各 2 0协1 ( p H均为 7 . 4
)
,于 3 7℃ 温育 8 一 1 0m i n ,按比浊法 〔 “ ’ ,
用 A D P ( l 林 m O I/ L ) 诱导聚集 ,侧定 血
小板聚集程度 , 记 录曲线变化 。 结果如表
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· 主7 6 ·
表 1 显示 : T S C P 、 T S C C增强血小
板聚集作用非常显著地高于对照组 , 、 一初发_
聚集速率和蒙集平均速卑快; 解聚速氧 - 一
按最大聚集强度为标准 , T 3 C P 、 T S C C
5 m in 解聚 6 7 . 6% 、 弱 声%矛而对照组 一 a 户扒
m in 已解聚 9 2 . 6% , 5 m in 完全解聚 。 两
个药物组相比 , 血小板聚集各项指标均无
明 显差异 ( P > 0 . 05 ) 。
2
. 体 内实验 取健康雄性小鼠 36 只
( 2 5 + 2 9 )
, 随机分成 3 组 , 2 % T S C
P和 2 % T S C C组 1 6 0m g / k g / d i g x 4 d ,
对照组灌以等体积的生理盐水 。 最后 l d
于灌胃后 l h , 颈总动脉取血 , 按体 外 实
验法制备 P P P 、 卫 R P , 测定血小板 聚 集
并记录样品对A D P ( l 料m ol / L ) 诱导血
小板聚集的影 响 , 结果如表 2 :
由表 2 可见 , T S C P增强血小板聚集
作用的各项 指 标 ( 除 T : , Z M A 外 ) 均 非
常显著地高于对照组 , 不同时间的继发聚
集速率和初发聚集速率以及聚集平均速率
快 ; T S C C只在初发聚集速率和聚集平均
速率和对照组有差 异 。 解 聚 速 率 , T S -
C P与对照组相近乍 6 m in 分别解聚 32 . 3%
和 39 . 3% , 、 T S C C解聚较快为 49 . 3% 。 T
S C P与 T S C C相比 , 显示 T S C P 促 进 血
小板聚集作用比 T S C C强 , 在 1 产 A 、 3
`
A
、
5, A
、
M A
, 均 P < 0 . 050
对血小板粘附功能的影响
取雄性健康小鼠 ( 27 士 3 9 ) 3 6 只 ,
随机分成 3 组 , 4 % T S C P和 4 % T S 一
C C组 2 8 o m g / k g / d 59 x 4 d , 对照 组 灌
以等体积的生理盐水。 最后一次在给药后
l h
, 颈总动脉取血 。 按玻璃珠柱法 〔 ” ’ ,
准确掌握每段柱的血液流速 和血 小 板 计
数 , 计算血小板粘附率
血小板粘附率 ( % ) 二
乡
(门
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粘附前血小板数 一粘附后血小板数
粘附前血小板数 X 10 0 蔽 箱
结果表明 ( 表 3 ) : 给药组血小板粘
1 7 7
附率显著增加 , T S C P与 T S C C相比 , 两 者粘附率差异不明显 ( P > 0 . 05 ) 。
表 3 荫风轮 、 风轮菜总皂试对血小板粘附功能的影响
药物 动物数 剂量 ( m g / k g ) 血小板粘附率 ( 肠 )
( X士 SD )
P值
N S
T S C P
T S C C
几
1 2
28 0
2 8 0
4 8
.
7 0土 5 . 8 6
7 5
.
6 1土 5 . 1 0
7 3
.
6 4士 3 . 4 8
< 0
.
0 01
< 0
.
0 0 1
放射免疫法测定血浆 、 血小板 c A M P 、
T X B
: 含皿
1
. 动物分组及处理 取雄性大鼠 20
只 ( 2 50 士 2 0 9 ) , 随机分成 T S C P ( 5 2 0
。 g / k g / d i g x 4 d ) 和对照组 ( 等 量 生
理盐水 ) 。
2
. 大白 鼠血浆 、 血小板样品制备 大
鼠用戊巴 比妥钠麻醉 , 颈总动脉取血 s m l
(
c A M P血样管用 1 % E D T A 一 N a 生理盐
水 0 . s m l抗凝 , T X B : 血样管 用 o . Z m l消
炎痛一肝素溶液抗凝 ) 。 8 0 o r /m i n X 1 5 m i n
( 4 C )
, 吸出上清液 ( P R P ) 1 m l 。
下层血浆样品 4 0 0 o r /m i n x 1 5 m i n ( 连℃ ) ,
弃去沉淀物 , 保留上清液血浆 , 置冰箱 (
一 Z D℃ ) 待测。
P R P 1 m l以 4 0 0 0 r /m i n x i s m i n ( 4
℃ ) , 弃去上清液 , 沉淀物中加生理盐水
o
.
s m l
,双蒸馏水 1 m l ,保存 2 m i n , 使残
存于沉淀中的红细胞溶解 , 再加 入 4 . 5%
N a C I 0
.
2 5m l
,使其恢复等渗 , 再以 4 0 0 0
r
/m i
n X l o m i n ( 4 ℃ ) , 弃上清 液 , 沉
淀物即为血小板样品 。
3
. 样品 测 定
3
.
1
. 血浆中 c A M P测定 取 1 m l 血
浆加 I N H C IO : 0 . 5m l ,搅匀 , 3 0 0 0 r /m i n
x 15 m i n
,取上清液 ,按 0 . s m l上清液加 0 . 1
m l的比例加入 Z N K O H , 冰浴中放置片
刻 , 2 0 0 0 r /m i n x l o m i n ,分出上清液 , 取
1 0 0件1, 按放射免疫法测定 , 计算每 m l血
浆中 c A M P含量 。
3
.
2
. 血浆中 T X B : 测定 取 l m l血浆 ,
加 i N H C I 0 . i m l , 使 p H调至 3 . 5~ 4 . 0 ,
加重蒸乙酸乙醋 5 m l提取 2 次 ,减压抽干 ,
再用缓冲试剂 ( P B S ) 复溶 , 按 T X B Z 放
射免疫法测定并计算 , 求出 T X B : 含量 。
3
.
3
. 血小板 内c A M P 、 T X B Z含量 测
定 将分离好的血小板样 品 , 按放射免疫
分析法 , 分别测定其含量 , 结 浪见表 4 。
讨 论
表 4 荫风轮总皂试对血浆 、 血小板中`: A M P和 T X B : 含量影响 ( X 土 S D
组别
N S
T SC P
与N S比较
剂 量
(m g / k g )
一扩嘿黔些嘿。:鑫厂品乍)
5 6
.
3 8士 1 5 . 8 3
5 5
.
2 9土 1 0 . 4 0
T X B
:
( p g / m l ) ( n = 9 )
血 浆 血小板 ( P R P )
9 9
.
7 0土 1 5 . 9 0 1 7 3 . 2 2士 30 . 7 2
1 19
.
7 1土 1 7 . 7 4率 2 3 4 . 0 2士 4 5 . 4 8 * 中
.
P < 0
.
0 5
, . 今
P
<乏0 . 01
本文结果表明 : T S C P 、 T S C C体内
给药或体外实验均明显促进血小板聚集 ,
表现聚集强度大 , 聚集平均速率快 , 解聚
慢。 T S C P作用比 T S C C 稍强 。 两药使血
小板粘附率亦 明显增加 。 前已研究 , 荫风
轮 、 风轮菜粗提物止血作用与血管因素有
关 。 本结果显示 : T S C P 、 T S C C增强血
小板功能 、 促进粘附与聚集 , 可能是发挥
其止血作用的另一重要因素 , 因出血时血
小板粘附 、 聚集 、 释放与止血 密切相关 〔7 ’ 。
至于该药为什么促进血小板聚集 , 据现代
理论 ; 血小板聚集与 c A M P 、 T X B 、含最
·7 18
·
有关 , c A M P含量降低 、 T X A : 增高可促
使血小板聚集 〔 . ’ 。 本文 T S C P非常 显 著
地升高血浆 、 血小板内的 T X A : 代谢产物
T X B
: 含量 , 此作用可能是 T S C P促血 小
板聚集的主要机理 。 T X A Z又受 。 A M P含
量的调节 , 而 T S C P对 c A M P含量无明显
影响 , 因此 T X B : 升高 , 可能是 T S C P 直
接作用于合成 T X A : 的酶系统或其他途径
有关 。 此点尚待证实 。
目前临床使用荫风轮粗提物用于多种
出血症 , 同科属植物风轮菜 , 因外形 与荫
风轮很相似 f “ “ 。 ’ , 有时混用 , 但尚未开
发 。 比较两者作用 , 对血管作用 , 风轮菜
比荫风轮稍强 , 促进血小板聚集作用 , 荫
风轮比风轮菜稍强 , 动物外伤止血 , 两者
作用相似 。 因风轮菜资源丰富 , 亦有一定
的开发价值 。
( 本文承安徽医科大学徐叔云教授审
阅指正 , 本院 辞申茄副教授提供样品 , 谨致
谢忱 。 )
参考文蔽
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E X p E R IM E N T A L S T U D I旦5 O N T H E E F F E C T S O F T S C p ,
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L i u Q i
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n h u i T r a d i t io n a l C h i n o s e M e d s e a l C o l l e g e
,
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T h e e f f e e t s o f 子 S C P a n d T S C C o n a g g r e g a t i o n a n d a d h e s i o 几 o f
b l o o d p l a t e l e t s w e r e m e a s u r e d b y t u r b i d i m e t r i e m e t h o d a n d s a l z m a n
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T S C P a n d T S C C s t r o n g ly i n e r e a s e m o u s e a 几 d
r a t P l a t e l e t a g g r e g a t i o n a n d p l a t e l e t a d h e s i o n
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T h e s e e f f e e t s
i m p o r t a n t f o r b l o o d e o a g u l a t i o n
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l e v e l s i n p l a s m a
a n d p l a t e l e t w e r e d e t e r m i n d b y R I A T S C P 5 19几 i f i e a n t l y i n e r e a s e d
t h e T X B
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l e v e l i n p l a s m a a n d p l a t e l e t
.
T h i s e f f e e t m a y b e t h e m a i n
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c l i n o p o d i u m C h i n e s e ; P l a t e l e t a g g r e g a t i o n a o d a d h o s i o n ; c A M P ;
T X B
: