全 文 :白二丸对氢醌诱导的实验性白癜风
豚鼠治疗作用的实验研究
施 慧 龙子江■ 王 靓 陈 明 王 芳 卞 海
(安徽中医学院·合肥 230038)
摘 要 目的:观察白二丸对氢醌制备的实验性白癜风模型豚鼠的治疗作用。方法:采用对苯二酚(氢
醌)化学脱色法制备实验性白癜风豚鼠模型 ,观察白二丸对实验性白癜风模型豚鼠皮肤黑色素 、血液中酪
氨酸酶含量和血液流变学的影响。结果:白二丸能够使实验性白癜风模型豚鼠皮肤中黑色素增加 , 血液
中酪氨酸酶含量增加 , 血液流变学的各项指标相应的改善。结论:白二丸对白癜风有较好的治疗作用。
主题词 白癜风 中医药疗法 @白二丸 治疗应用 豚鼠
■通讯作者
白癜风是一种后天性原发性色素脱失病 ,发病原因目前
尚不是十分清楚 ,从发病机制来看 , 是黑色素能力的迸行性
减少或消失。除黑色素细胞外 ,任何影响黑色素合成的因素
如酪氨酸 、酪氨酸酶 、多巴 、氧 、酮 、锌 、紫外线等都可影响黑
色素的合成。现用对苯二酚(氢醌)制备实验性白癜风豚鼠
模型观察白二丸对白癜风的治疗作用 ,报告如下。
1 材料
1.1 药物 白二丸:以中药补骨脂为主要成分 , 由安徽中医
学院药理教研室制备提供。白癜风胶囊:由天津宏仁堂药业
有限公司生产 ,批号:G06002。
1.2 试剂 酪氨酸酶:由 Sigma公司生产。 L-多巴:由瑞士
Fiuka 公司生产。对苯二酚(氢醌):由广东汕头市西拢化工
厂生产。其余均为合肥市场购买。
1.3 实验动物 豚鼠(黑色或黑花色), 体重 300~ 350g , 雌
雄兼用 , 由南京安立默科技有限公司提供 , 许可证号:SYXK
(苏)2002-0017。
1.4 实验仪器 YDA-IU血液流变仪:北京宏润达科技发
展有限公司。 TDL-5 台式离心机:上海安亭科学仪器厂。
754 紫外-可见分光光度计:上海精密科学仪器有限公司。
2 实验方法[ 1 ,2]
2.1 动物分组 、造模及给药处理 取体重 300~ 350g黑色和
黑花色豚鼠 60只 , 雌雄各半 , 按体重随机分为正常组(等容
量蒸馏水)、模型组(等容量蒸馏水)、阳性药物组(白癜风胶
囊1.68g 生药/kg 体重)、白二丸小(2.09g 生药/kg 体重)、中
(4.18g生药/ kg体重)、大剂量组(8.36g生药/ kg 体重), 各剪
去背部黑色皮肤区毛约 4cm×4cm , 用 8%的硫化钠脱毛 , 每
4 天 1次 , 除正常组涂自来水外 , 其余各组在脱毛区每天涂
5%的氢醌 0.5ml两次 ,第 11 天开始各组分别每天在涂抹氢
醌过后 1小时按剂量分别灌胃给药 ,给药的容积为 2ml/ 100g
体重 ,每天 1 次 ,连续 40 天 ,共 50 天。
2.2 观察指标及测定 末次给药后 40 分钟 , 取血 , 测酪氨
酸酶 、血液流变学指标 , 并在脱毛区中心取 1cm×1cm 皮肤做
病理切片 , 观察皮肤黑色素的变化。
2.2.1 豚鼠皮肤黑色素的测定
将各组豚鼠取皮肤 1cm×1cm , 用 10%甲醛固定 , 常规石
蜡包埋切片 , 用硫酸亚铁 Lillie法进行黑色素染色 , 观察表皮
基底细胞和棘细胞黑色素分布和毛囊有黑色素的豚鼠个数。
程度分级:“ -”表示无黑色素;“±”表示偶见黑色素;“+”表
示 30%~ 50%有黑色素;“ ++”表示 51%~ 85%有黑色素;
“+++”表示 85%以上有黑色素。
2.2.2 豚鼠酪氨酸酶(TYR)活力的测定 取试管 5支 , 分别
加入 1ml L-多巴溶液(2mg/ml)和2.8ml 0.1M磷酸盐缓冲液
(pH7.0), 摇匀 ,放入 25℃恒温水浴箱中预热 10 分钟 ,再向上
述试管中分别加入不同浓度的酪氨酸酶溶液 1ml , 立即混
匀 , 并准确计时 , 25℃水浴反应 5 分钟。迅速加入0.2ml硫脲
-乙醇溶液 , 混匀 ,终止反应。以 0.1M磷酸盐缓冲液为空白
对照管 ,用 754紫外可见分光光度计在波长 475nm 处测吸收
值 ,根据吸收值求得回归方程。将测得吸收值代入回归方
程 ,求得酪氨酸酶含量。
2.2.3 豚鼠血液流变学指标测定 采用 YDA-IU血液流变
仪测定。
2.3 统计方法 计量资料以(x±s)表示 , 进行 t 检验;计数
资料进行 χ2 检验 , 均应用 SPSS10.0 统计软件包进行处理。
3 结果
3.1 各组豚鼠皮肤黑色素测定结果 见表 1。
表 1 各组豚鼠皮肤黑色素的测定(n , n=10)
组别 剂量(g kg)
表皮基底细胞和
棘细胞黑色素分布
- ± + ++ +++
有黑色素
毛囊数
正常组** - 10 10
模型对照组 - 6 3 1 3
阳性对照组* 1.68 0 2 3 4 1 7
白二丸组(小)* 2.09 0 2 5 3 6
白二丸组(中)* 4.18 0 2 4 3 1 6
白二丸组(大)** 8.36 0 1 4 3 2 8
与模型组比较*P<0.05 , **P<0.01
·28· 中国中医药科技 2010年 1 月第 17 卷第 1期 Jan.2010 Vol.17 No.1
3.2 各组豚鼠血浆中酪氨酸酶含量的测定 结果见表 2。 3.3 各组豚鼠血液流变学指标的测定 结果见表 2。
表 3 各组豚鼠酪氨酸酶活性 、血液流变学指标的测定(x±s , n=10)
组别
剂量
(g kg)
吸收度
(E)
酶含量
(mg ml)
全血黏度(mPa·s)
高切 中切 低切
血浆黏度
(mPa·s)
红细胞沉降率
(mm h)
红细胞压积
(%)
正常组 - 0.950±0.106 0.303±0.052■■ 4.413±0.346■■ 5.399±0.436■■ 6.671±0.404■■ 1.255±0.056■ 5.90±0.94 45.80±2.14
模型对照组 - 0.559±0.111 0.113±0.054 6.161±1.163 8.035±1.375 9.848±1.297 1.358±0.972 5.40±1.20 47.50±1.28
阳性对照组 1.68 0.808±0.128 0.234±0.062■■ 4.970±0.922■ 6.548±0.990■ 8.024±1.139■■ 1.284±0.086 5.70±0.79 46.00±1.89
白二丸组(小) 2.09 0.670±0.135 0.167±0.066 5.936±1.503 7.846±2.039 9.156±1.937 1.322±0.175 5.50±0.81 46.90±2.21
白二丸组(中) 4.18 0.711±0.104 0.187±0.051■■ 5.076±0.982■ 6.415±0.818■■ 8.594±0.873■ 1.298±0.120 5.60±0.49 46.40±1.80
白二丸组(大) 8.36 0.820±0.100 0.240±0.049■■ 4.188±0.865■■ 5.786±0.971■■ 7.114±1.443■■ 1.265±0.089■ 5.60±0.66■ 45.90±1.51
与模型组比较■P<0.05 , ■■P<0.01
4 讨论 白癜风是一种常见的后天性局限或泛发的色素脱
失性皮肤病 ,发病率为 0.5%~ 2%[3] 。黑色素是皮肤颜色的
主要决定性物质 ,它是人体皮肤的黑色素细胞产生的 , 可维
持正常的肤色。黑色素是一种高分子量的蛋白质 ,它的形成
要经过一系列代谢过程:酪氨酸在酪氨酸酶的作用下逐渐变
成多巴※多巴醌※无色素物质※多巴色素※醌式吲哚 , 最后
形成黑色素[ 4] 。这一系列代谢过程中需要有酶 、铜 、锌 、铁及
多种氨基酸 、泛酸 、维生素 B12等参与 , 其中任何一个环节发
生障碍 ,均可影响黑色素的形成。本文采用 5%的氢醌可以
使豚鼠皮肤的黑色素明显减少 , 血中酪氨酸含量显著减少 ,
与临床白癜风患者病理状况类似 , 说明采用 5%的氢醌可复
制实验性白癜风动物模型。并且模型豚鼠血液的全血和血
浆黏度以及纤维蛋白原等也显著增加 ,符合中医关于白癜风
病因病机中“瘀血阻滞”之说。本文实验结果表明白二丸可
明显增加实验性白癜风模型豚鼠的皮肤黑色素 ,明显增加皮
肤表皮基底细胞和棘细胞黑色素分布和皮肤毛囊中黑色素 ,
血液中酪氨酸酶含量也显著性增加 , 并且显著性改善血液流
变学各项指标;说明白二丸能增加实验性白癜风模型豚鼠皮
肤黑色素生成 ,减少皮肤黑色素分解和改善血液循环 , 对白
癜风有较好的治疗作用。
参考文献
1 龙子江 ,吕晓英 ,王元勋 ,等.白癜风动物模型的制备.动物学杂
志 , 1998 , 33(4):41.
2 龙子江 ,吕晓英 ,樊彦 ,等.消白灵片对白癜风模型动物血液中酪
氨酸酶含量和血液流变学的影响.中国中医药科技 , 2001, 8(1):
40.
3 S challreuterku , Lemke R , Brandto , et al.Vitiligo and other dieases:
Coexistence or true association.J Dermatology ,1994 , 188:269.
4 李洪武 ,朱文元 ,夏明玉.赤芍等 5 种上调酪氨酸酶活性中药乙
醇提取液对棕黄色豚鼠背部皮肤的增色作用.临床皮肤科杂志 ,
2001 , 30(2):69. (修回:2009-09-06)
温胆汤加减治疗冠心病心绞痛 50例
李 祥
(河南中医学院第三附属医院·郑州 450058)
1 临床资料 本组患者 50例 ,来自在本院门诊及住院患者 , 其中男
性 27例 ,女性 23例;年龄最小 35岁 ,量大 82岁。 其中合并心衰 11
例 、心律不齐 10例 、高血压 19例 、糖尿病 10例。 诊断符合文献[ 1] 标
准。
2 治疗方法 温胆汤加味:制半夏 9g 、竹茹 12g 、枳实 6g、橘皮 12g 、
茯苓 30g 、甘草 6g 、丹参 10g 、红花 10g、川芎 10g、降香 10g 、赤芍 10g 、生
姜 3片 、大枣 5枚。每日 1剂煎服 , 7 天为 1个疗程 ,一般服 2 ~ 3疗
程。加减:心衰者加五味子 、西洋参 、麦冬;头晕 、高血压者加菊花 、
石决明 、钩藤;心痛彻背者加瓜蒌 、薤白 、桂枝:心律不齐者加苦参 、
生龙骨 、生牡蛎;浮肿者加益母草 、泽兰 、猪苓。
3 结果
3.1 疗效标准 参照 1979年 9月上海全国中西医结合防治冠心
病 、心绞痛 、心律失常研究座谈会制订的《冠心病心绞痛疗效评定标
准》[ 2] 。
3.2 治疗结果 显效 26 例 ,有效 21 例 , 无效 3 例。总有效率为
94%。
4 体会 中医学认为冠心病属胸痹 、心痛 、心悸范畴 ,其病机为本虚
标实。本虚指脏气衰微 ,气血不足:标实指痰浊闭阻 ,血脉瘀滞。素
体肥胖或过食肥甘厚味 ,痰湿甚多 ,伤及于脾 ,脾胃运化失常 ,痰浊
内生阻滞气机 ,而发为胸痹。温胆汤出自《千金备急要方》 ,由半夏 、
陈皮 、茯苓 、枳实 、竹茹 、甘草 、生姜组成。方中以半夏为君 ,降逆和
胃 、燥湿化痰;以竹茹为臣 ,清热化痰 、止呕除烦;枳实行气消痰 ,使
痰随气下;佐以陈皮理气燥湿 , 茯苓健脾渗湿, 俾湿去痰消。 使以
姜 、枣 、甘草益脾和胃而协调诸药。综合全方 ,共奏理气化痰 、清胆
和胃之效。已有研究表明[ 2] ,温胆汤具有抑制血小板凝聚 、增强心
肌抗氧化和消除自由基、调节血脂代谢 、改善血液黏滞状态 、减轻动
脉粥样硬化 、扩张冠脉血管 、增加冠脉流量 、改善血液循环等作用 ,
达到气机条达 、心脉通畅 、通而不痛之效果。因此 ,以此方为基础 ,
结合辨证加减 ,治疗冠心病心绞痛取得满意的疗效。
参考文献
1 国际心脏病学会和协会及 WHO临床命名标准化联合专题组.缺
血性心脏病的命名和诊断标准.中华心血管杂志 , 1981, 9(1):75.
2 陈可冀.心脑血管病研究.上海:上海科学技术出版社 , 1998:
318. (收稿:2008-10-24)
·29·中国中医药科技 2010年 1 月第 17卷第 1 期 Jan.2010 Vol.17 No.1