全 文 ：收稿日期:2013-06-25 接受日期:2013-11-21
* 通讯作者 Tel:86-411-87403834;E-mail:dalianwyq@ 163． com
天然产物研究与开发 Nat Prod Ｒes Dev 2014，26:1257-1260
文章编号:1001-6880(2014)8-1257-04
广西产黄杞叶不同溶媒提取物中二氢黄酮醇的定量分析
付晓雪1，宋明明1，周 辉2，史丽颖1，唐 玲1，王永奇1
*
1大连大学药物研究所，大连 116622;2 广西钦州市农业机械学校，钦州 535000
摘 要:为了测定黄杞叶不同溶媒提取物中主要化学成分二氢黄酮醇的含量，以落新妇苷为标准品，采用分光
光度法测定黄杞叶醇提物、水提物及醇提物的 PE层、EtoAc层、H2O层和水提物的 EtoAc层、H2O层中总二氢黄
酮醇的含量。结果表明:落新妇苷在 12． 3 ～ 28． 7 μg /mL 范围内呈良好的线性关系(Ｒ2 = 0． 9991);该方法灵敏
度高、稳定性好，可用于黄杞叶提取物的质量控制。
关键词:黄杞叶提取物;总二氢黄酮醇;落新妇苷
中图分类号:Ｒ284 文献标识码:A
Determination of Total Dihydroflavonols in Extract of
Engelhardtia roxburghianan Wall． Leaves
FU Xiao-xue1，SONG Ming-ming1，ZHOU Hui2，SHI Li-ying1，TANG Ling1，WANG Yong-qi1*
1 Institute of Materia Medica of Dalian University，Dalian 116622，China;
2 Agricultural Machinery Technology College of Qinzhou，Qinzhou 535000，China
Abstract:The objective of this study was to determine the content of total dihydroflavonols in different extracts of En-
gelhardtia roxburghiana wall． leaves． The contents of total dihydroflavonols in ethanol extract and its PE，EtoAc and water
fractions as well as water extract and its EtoAc and water fractions of E． roxburghiana leaves were determined by spectro-
photometry with astilbin as standard． The results indicated that astilbin showed a good linear relationship in the range of
12． 3 ～ 28． 7μg /mL (Ｒ2 = 0． 9991);the developed method was with high sensitivity，good stability，and it is applicable
for the quality control of E． roxburghiana leaves．
Key words:Engelhardtia roxburghiana Wall． leaves;total dihydroflavonols;astilbin
黄杞(Engelhardtia roxburghiana Wall．)俗称甜
茶，为胡桃科(Juglandanceae)黄杞属(Engelhardtia
Leschen． ex B1．)植物。其叶和树皮均为中华本草
所收载［1］，具有清热、止痛、行气、化湿、导滞之功
能，用于治疗感冒发热、疝气腹痛、脾胃湿滞、腔腹胀
闷、泄泻［1］。分布于广西、广东、云南等省区，资源
非常丰富。现代研究发现其富含大量的二氢黄酮醇
类成分，并从中首次发现具有甜味的二氢黄酮醇，这
也是其称之为甜茶的原因之所在［2］。它不仅是二
氢黄酮醇的主要资源，而且也是落新妇苷(Astilbin)
和黄杞苷(engeletin)及其异构体和同系物的重要药
源植物［3］。现代研究还发现其所含的二氢黄酮醇
类成分具有降糖［3，4，8］、降血脂［5］、镇痛［6］、抗高尿酸
血症(痛风)［7，9］、活血化瘀［10］、抗粥样动脉硬
化［11，12］作用，其所含的色原酮苷(euryphin)具有治
疗烧伤、烫伤、刀伤、冻伤及毒蛇咬伤作用［13］。但对
其所含的二氢黄酮醇类成分在植物部位及不同提取
物中的定量分析，未见报道。
硝酸铝-亚硝酸钠法是目前在中药和中草药测
定黄酮时使用最多的方法之一，而标准品多选择芦
丁。该法显色发生在芦丁 B 环的 3，4-邻二-OH 部
位，具有邻二-OH结构的原儿茶醛、原儿茶酸、咖啡
酸、绿原酸、羟基苯甲酸等非黄酮类多酚也可发生此
显色反应，并在波长 200 ～ 600 nm 左右有最大吸收
峰或较强吸收峰，而黄杞中亦含有非黄酮类多酚，显
然会对黄酮的测定造成干扰，势必导致测定结果偏
高。
氯化铝法的测定环境是酸性，可以避免邻二羟
基结构的非黄酮类化合物的干扰，所以氯化铝法具
有更好的专属性，更高的准确度，其显色机理见图
1。通过显色机理的比较分析说明氯化铝法是黄杞
DOI:10.16333/j.1001-6880.2014.08.022
叶中总黄酮测定的适宜方法。本文以落新妇苷为标
准品(图 2)，采用分光广度法和氯化铝法，对其醇提
物、水提物及醇提物石油醚萃取物(PE)、EtoAc萃取
物、H2O层和水提物的 EtoAc萃取物、H2O层进行了
定量分析。以期从药效物质基础上为其开发利用提
供参考。
图 1 氯化铝法的显色机理
Fig. 1 Mechanism of color development of aluminum chloride method
图 2 落新妇苷的化学结构式
Fig. 2 Chemical structure of astilbin
1 仪器与药品
1． 1 仪器
Unico7200 可见分光光度计(尤尼柯上海仪器
有限公司);BP210S 十万分之一电子天平(Sartorius
公司);Jasco v-560 紫外可见分光光度计(日本 Jasco
公司)。
1． 2 药品
黄杞叶采集于广西壮族自治区钦州市那坡乡，
经广西林科院庞定轮研究员鉴定为黄杞，标本存放
于大连大学生命科学与技术学院标本室;落新妇苷
(Astilbin)(对照品购自成都曼思特生物科技有限公
司，纯度 98% );其余试剂均为分析纯;水为蒸馏
水。
2 方法与结果
2． 1 提取物的制备
取黄杞叶 2 kg，用 95%乙醇回流提取 3 次，2． 5
h /次，合并提取液，浓缩至干，得 95%乙醇提取物
779． 06 g。
取黄杞叶 0． 5 Kg，水煎法提取 3 次，2 h /次，合
并提取液，浓缩至干，得水提物 196． 41g。
95%乙醇提取物依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，
得石油醚萃取物(85． 17 g)、乙酸乙酯萃取物(289．
17 g)、水层(352． 09 g)。
水提物直接用乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯萃取
物(79． 73 g)和水层(104． 06 g)。
2． 2 总黄酮的含量测定［14］
2． 2． 1 对照品溶液的制备
精确称取干燥至恒重的落新妇苷对照品 5 mg，
置于 50 mL容量瓶中，加入甲醇溶解并稀释到刻度，
摇匀，得浓度为 0． 1 mg /mL的标准溶液，备用。
2． 2． 2 供试品溶液的制备
分别精确称取黄杞叶 95%乙醇提取物及其石
油醚层、乙酸乙酯层、水层的干浸膏 50． 76、50． 98、
50． 52、50． 38 mg，置于 100 mL 棕色容量瓶中，加入
甲醇溶解并稀释至刻度摇匀，得浓度为 0． 5076、
0. 5096、0． 5052 mg /mL、0． 5038 mg /mL 的供试品溶
液，备用。再分别精确称取黄杞叶水提物及其乙酸
乙酯层和水层的干浸膏 50． 80、50． 63、50． 82 mg 置
于 100 mL棕色容量瓶中，加入甲醇溶解并稀释至刻
度摇匀，得到浓度为 0． 5080、0． 5063、0． 5082 mg /mL
的供试品溶液，备用。
2． 2． 3 测定波长的选择
取黄酮对照品溶液、供试品溶液各 0． 6 mL，置
于具塞试管中，各加甲醇至 4． 0 mL，再分别加入质
量分数为 5%的 NaNO2 溶液 0． 3 mL，摇匀，室温放
置 6 min，再加 10% AlCl3 溶液 0． 3 mL，摇匀，室温
放置 10 min，在 200 ～ 600 nm波长下扫描，空白溶液
做参比，样品溶液在 400 nm 波长处有强吸收。因
此，选定总黄酮的检测波长为 400 nm。
2． 2． 4 线性关系考察
分别精确称取 0、0． 6、0． 8、1． 0、1． 2 和 1． 4 mL
的落新妇苷对照品溶液置于具塞试管中，按“2． 2．
3”项方法，自“各加甲醇至 4． 0 mL”起重复同样操
作，于 400 nm处测定吸光度，同时以空白试剂做参
比。以吸光度 A为纵坐标、浓度 C(mg /mL)为横坐
标绘制标准曲线，得回归方程为:A = 18． 902C-
0. 0141(Ｒ2 = 0． 9991)，落新妇苷的线性范围为 12． 3
～ 28． 7 μg /mL。
2． 2． 5 精密度实验
取 0． 6 mL落新妇苷对照品，按“2． 2． 3”中所述
8521 天然产物研究与开发 Vol. 26
实验方法操作，测定吸光度值，平行测定 5 次，ＲSD
为 0． 74%，实验说明精密度良好。
2． 2． 6 稳定性实验
按样品测定方法操作，测定同一供试品在不同时
间吸收度。结果表明，吸收值在 45 min内基本稳定。
2． 2． 7 重现性实验
取同一提取物 5 份，按“2． 2． 2”法配制供试品
溶液，按“2． 2． 3”法处理并显色，在 400 nm 处测定
吸光度 A，平行测定 5 次，代入回归方程，计算黄酮
含量，黄杞叶 95%乙醇提取物及醇提物的石油醚
层、乙酸乙酯层、水层的 ＲSD 分别为:1． 02%、
0. 84%、1． 07%、0． 223%;黄杞叶水提及水提的乙酸
乙酯层、水层的 ＲSD 分别为:0． 783%、0． 588%、
1. 08%;结果表明重现性良好。
2． 2． 8 加样回收率实验
(1)精确量取已知总黄酮含量的黄杞叶 95%乙
醇提取物 0． 2 mL，醇提物石油醚层 0． 2 mL，醇提物
乙酸乙酯层 0． 1 mL，醇提物水层 0． 4 mL 置于具塞
试管中，分别加入 0． 1 mg /mL 的落新妇苷标准品溶
液 0． 4 mL，余下实验部分按“2． 2． 3”中所述显色方
法进行操作，平行测定 3 次，计算加样回收率，结果
见表 1。
(2)精确量取已知总黄酮含量的黄杞叶的水提
取物 0． 2 mL，水提物乙酸乙酯层 0． 1 mL，水提物水
层 0． 8 mL置于置于具塞试管中，分别加入 0． 1 mg /
mL的落新妇苷标准品溶液 0． 4 mL，余下实验部分
按“2． 2． 3”中所述显色方法进行操作，平行测定 3
次，计算加样回收率，结果见表 2。
表 1 黄杞叶 95%乙醇提取物及其不同溶媒提取物总黄酮加样回收率实验(n = 3)
Table 1 Ｒecoveries of total flavonoids in 95% ethanol extract and its different fractions of E． roxburghianan leaves (n = 3)
编号
No．
样品
Samples
吸光度平均值
Average of absorbance(A) ＲSD (%)
1 黄杞叶 95%乙醇提取物 95% ethanol extract 107． 3 0． 41
2 醇提物石油醚层提取物 PE fraction of 95% ethanol extract 100． 7 1． 38
3 醇提物乙酸乙酯层提取物 EtOAc fraction of 95% ethanol extract 104． 3 0． 77
4 醇提物水层提取物 Water fraction of 95% ethanol extract 110． 2 0． 42
表 2 黄杞叶水提物及其不同溶媒提取物中总黄酮加样回收率实验(n = 3)
Table 2 Ｒecoveries of total flavonoids in water extract and its different fractions of E． roxburghianan leaves (n = 3)
编号
No．
样品
Samples
吸光度平均值
Average of absorbance(A) ＲSD (%)
1 黄杞叶水提提取物 Water extract 108． 0 1． 46
2 水提乙酸乙酯层提取物 EtOAc fraction of water extract 101． 4 1． 11
3 水提物水层 Water fraction of water extract 103． 1 0． 43
2． 2． 9 样品中总黄酮的测定
2． 2． 9． 1 黄杞叶醇提物及其不同溶媒提取物中总
黄酮含量的测定
取 95%的乙醇提取物供试液 0． 4 mL，醇提石油
醚层供试液 0． 4 mL，醇提乙酸乙酯层 0． 2 mL，醇提
水层 0． 8 mL置于具塞试管中按“2． 2． 3”项方法，自
“各加甲醇至 4． 0 mL”起重复同样操作，于 400 nm
处测定吸光度，同时以空白试剂做参比，各平行测定
五次，总黄酮含量(%)=［(C × 4． 6)/V取)］× 100，
得出样品中的总黄酮含量如表 3 所示。
表 3 黄杞叶 95%乙醇提取物及其不同溶媒提取物中总黄酮含量测定结果(n = 5)
Table 3 Total dihydroflavonols contents detected in 95% ethanol extract and its PE，EtOAc and water fractions of E． roxburghianan
Wall． leaves (n = 5)
编号
No．
样品
Samples
吸光度平均值
Average of absorbance(A)
黄酮含量
Flavonoids content (%)
1 黄杞叶 95%乙醇提取物 95% ethanol extract 0． 392 48． 71
2 醇提物石油醚层提取物 PE fraction of 95% ethanol extract 0． 367 45． 57
3 醇提物乙酸乙酯层提取物 EtOAc fraction of 95% ethanol extract 0． 256 65． 10
4 醇提物水层提取物 Water fraction of 95% ethanol extract 0． 446 22． 19
9521Vol. 26 付晓雪等:广西产黄杞叶不同溶媒提取物中二氢黄酮醇的定量分析
2． 2． 9． 2 黄杞叶水提物及其不同溶媒提取物中总
黄酮含量的测定
取水提物供试液 0． 4 mL，水提物乙酸乙酯层供
试液 0． 2 mL，水提物水层供试液 1． 2 mL 置于具塞
试管中按“2． 2． 3”项方法，自“各加甲醇至 4． 0 mL”
起重复同样操作，于 400 nm 处测定吸光度，同时以
空白试剂做参比，各平行测定五次，计算样品中的总
黄酮含量如表 4 所示。
表 4 黄杞叶水提物及其不同溶媒提取物中总黄酮含量测定结果(n = 5)
Table 4 Total dihydroflavonols contents detected in water extract and its EtOAc and water fractions of E． roxburghianan Wall． leaves
(n = 5)
编号
No．
供试品
Samples
吸光度平均值
Average of absorbance(A)
黄酮含量
Flavonoids content (%)
1 黄杞叶水提提取物 Water extract 0． 338 42． 11
2 水提乙酸乙酯层提取物 EtOAc fraction of water extract 0． 266 67． 20
3 水提物水层 Water fraction of water extract 0． 242 10． 18
3 结论
黄杞叶中二氢黄酮醇类成分在不同提取物中的
含量如下:醇提物为 48． 71%，醇提物石油醚萃取物
为 45． 57%，EtoAc 萃取物为 65． 10%，水层为
22. 19%;水提物为 42． 11%，水提物 EtoAc萃取物为
67． 20%，水层为 10． 18%。由此可见，黄杞叶中二
氢黄酮醇类成分采用醇、水提取皆可，但必须采取
EtoAc萃取的工艺路线。
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