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Adaptability of Helianthus annuus seedlings to crude oil pollution in soil and its improvement measures under salinization stress.

盐渍化胁迫下油葵对土壤原油污染的适应性及其改良措施


为了探究植物在盐渍化胁迫下对原油污染的适应性及改良措施,本研究以油葵作为研究对象,进行了原油-氯化钠-脱硫石膏盆栽正交试验和煤渣-沸石-脱硫石膏-锯沫盆栽正交试验.结果表明: 在盐渍化条件下,随着原油浓度的增大,油葵幼苗株高相对生长率(RGR)、地上生物量RGR、根氮磷比均显著减小,超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性呈先增加后显著降低的趋势;随着锯沫体积分数的加大,油葵株高RGR和地上生物量RGR均显著增加,SOD活性逐渐降低,说明锯沫在改良盐渍化原油污染土壤方面比煤渣、沸石和脱硫石膏效果显著.在盐渍化条件下,原油污染能够降低油葵幼苗的生长率,锯沫对改良原油污染有较好的效果.
 

To explore the adaptability of plant under salt stress to crude oil pollution of soil and improvement measures, a pot experiment of Helianthus annuus seedlings was conducted using orthogonal experiment method with crude oilsodium chloridedesulfurization gypsum and cinderzeolitedesulfurization gypsumsawdust. The results showed that, with the increase of soil crude oil concentration, the relative growth rate (RGR) of plant height, RGR of aboveground biomass and root N:P ratios of H. annuus seedlings decreased significantly, while the activity of SOD and CAT increased at first and then decreased significantly. The RGR of plant height and aboveground biomass significantly increased (P<0.05), while the activity of SOD decreased gradually with the increase of the volume fraction of sawdust, indicating that sawdust had the most significant effect in comparison with cinder, zeolite, desulfurization gypsum under salinization condition. The crude oil pollution of soil could decrease the relative growth rate of H. annuus seedling, and sawdust could reduce the influence of crude oil pollution on plant growth under salt stress.


全 文 :盐渍化胁迫下油葵对土壤原油污染的适应性
及其改良措施∗
张京磊  慈华聪  何兴东∗∗  梁玉婷  赵  绚  孙会婷  颉洪涛
(南开大学生命科学学院, 天津 300071)
摘  要  为了探究植物在盐渍化胁迫下对原油污染的适应性及改良措施,本研究以油葵作为
研究对象,进行了原油⁃氯化钠⁃脱硫石膏盆栽正交试验和煤渣⁃沸石⁃脱硫石膏⁃锯沫盆栽正交
试验.结果表明: 在盐渍化条件下,随着原油浓度的增大,油葵幼苗株高相对生长率(RGR)、地
上生物量 RGR、根氮磷比均显著减小,超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性呈先
增加后显著降低的趋势;随着锯沫体积分数的加大,油葵株高 RGR 和地上生物量 RGR 均显
著增加,SOD活性逐渐降低,说明锯沫在改良盐渍化原油污染土壤方面比煤渣、沸石和脱硫石
膏效果显著.在盐渍化条件下,原油污染能够降低油葵幼苗的生长率,锯沫对改良原油污染有
较好的效果.
关键词  盐渍化; 原油污染; 油葵; 相对生长率; 氮磷比; 抗氧化酶
文章编号  1001-9332(2015)11-3503-06  中图分类号  Q948.116  文献标识码  A
Adaptability of Helianthus annuus seedlings to crude oil pollution in soil and its improvement
measures under salinization stress. ZHANG Jing⁃lei, CI Hua⁃cong, HE Xing⁃dong, LIANG Yu⁃
ting, ZHAO Xuan, SUN Hui⁃ting, XIE Hong⁃tao (College of Life Sciences, Nankai University,
Tianjin 300071, China) . ⁃Chin. J. Appl. Ecol., 2015, 26(11): 3503-3508.
Abstract: To explore the adaptability of plant under salt stress to crude oil pollution of soil and im⁃
provement measures, a pot experiment of Helianthus annuus seedlings was conducted using orthogo⁃
nal experiment method with crude oil⁃sodium chloride⁃desulfurization gypsum and cinder⁃zeolite⁃
desulfurization gypsum⁃sawdust. The results showed that, with the increase of soil crude oil concen⁃
tration, the relative growth rate (RGR) of plant height, RGR of aboveground biomass and root N:
P ratios of H. annuus seedlings decreased significantly, while the activity of SOD and CAT in⁃
creased at first and then decreased significantly. The RGR of plant height and aboveground biomass
significantly increased (P<0.05), while the activity of SOD decreased gradually with the increase
of the volume fraction of sawdust, indicating that sawdust had the most significant effect in compari⁃
son with cinder, zeolite, desulfurization gypsum under salinization condition. The crude oil pollution
of soil could decrease the relative growth rate of H. annuus seedling, and sawdust could reduce the
influence of crude oil pollution on plant growth under salt stress.
Key words: salinization; crude oil pollution; Helianthus annuus; RGR; N / P ratio; antioxidant en⁃
zyme.
∗国家高技术研究发展计划项目(2013AA06A205)资助.
∗∗通讯作者. E⁃mail: xingd@ nankai.edu.cn
2015⁃06⁃05收稿,2015⁃07⁃28接受.
    土壤的石油污染是世界性的环境问题之一[1] .
我国东北、华北、西北地区含有丰富的油气资源,同
时上述地区土壤都不同程度的盐渍化[2] .在长期勘
探开采、储运炼制过程中,由于操作不当、事故泄漏
及钻井液影响,石油烃类污染已造成严重的土壤环
境破坏[3-4],因此,如何采取相关措施修复原油污染
土壤,降低生态风险,是亟待解决的环境瓶颈问
题[5] .
原油污染土壤的生境中,植物体内抗氧化防御
系统的变化是指示原油污染物胁迫的生物标志
物[6],已成为环境科学领域的研究热点.在逆境情况
下,植物体内会产生大量的活性氧自由基,过量自由
基会使以超氧化物歧化酶 ( superoxide dismutase,
应 用 生 态 学 报  2015年 11月  第 26卷  第 11期                                                         
Chinese Journal of Applied Ecology, Nov. 2015, 26(11): 3503-3508
SOD)、过氧化物酶(peroxidase, POD)和过氧化氢酶
(catalase, CAT)为主的抗氧化防御系统遭到破坏,
对细胞构成氧化胁迫, 造成 DNA 链断裂、脂质过氧
化、酶蛋白失活等氧化损伤,从而影响植物的生长.
因此,SOD、POD和 CAT 等酶活性的变化在一定程
度上能反映机体在环境胁迫下抗氧化系统的变化,
可作为环境污染胁迫的指标[7] .另一方面,原油污染
常会对植物生长形成胁迫,进而影响植物的生长率,
生长率假说表明,氮磷比的大小影响植物的生长
率[8-10] .
油葵(Helianthus annuus)是油用型向日葵的俗
称,是世界四大油料作物之一.具有耐干旱、耐瘠薄、
早熟高产、适应性强等特点,是菊科双子叶植物中的
耐盐作物,有盐碱地先锋作物之称[11] .本研究以油
葵为研究对象,通过室内盆栽试验模拟盐渍化原油
污染土壤,研究了油葵对盐渍化原油污染土壤的响
应,比较了煤渣、沸石、脱硫石膏、锯沫 4种改良物质
对盐渍化原油污染土壤的改良效果,分析了原油污
染土壤中油葵生长率的变化以及油葵体内氧化酶和
氮磷比的变化,旨在为原油污染土壤的植物修复提
供理论依据.
1  材料与方法
1􀆰 1  试验材料与设计
油葵种子购于种子公司,原油取自大港油田,土
壤取自天津塘沽大田,煤渣为农家蜂窝煤残渣,脱硫
石膏取自电厂,沸石为购买的天然沸石,锯沫取自木
材厂.本研究分为两个正交试验,都采用 L16(45)正
交表,每处理 3 个重复.第 1 个为原油⁃氯化钠⁃脱硫
石膏正交试验:原油的 4 个水平分别为 0%、0􀆰 6%、
1􀆰 2%和 1.8%,氯化钠含量分别为 0%、0.15%、0􀆰 3%
和 0􀆰 45%,脱硫石膏含量分别为 0%、0.3%、0.6%和
0.9%,本试验目的是探究油葵在盐渍化原油污染环
境下的生理生长状况.第 2 个为煤渣⁃沸石⁃脱硫石
膏⁃锯沫正交试验:煤渣体积分数分别为 0%、5%、
10%和 15%,沸石体积分数分别为 0%、5%、10%和
15%,脱硫石膏含量分别为 0%、 0. 3%、 0. 6%和
1􀆰 2%,锯沫体积分数分别为 0%、5%、10%和 15%,
原油含量均为 1.5%,氯化钠含量均为 0.2%,本试验
目的主要是通过油葵的生理生长状况来探究 4种外
源添加物质对盐渍化原油污染土壤的改良效果.
1􀆰 2  试验方法
2014年 10 月 5 日,在南开大学温室用穴盘育
苗,基质为蛭石,每穴表面播 3~4 粒种子,然后盖上
一层纸膜,在纸膜上浇水,出苗后揭掉纸膜,每天保
持穴盘湿润状态.
2014年 10 月 25 日,按照试验设计的处理水
平,向土壤中加入试验所需的物质,充分混合使其均
匀,然后将其分别装入事先标有相应号码的塑料盆
中.试验所用的 PVC 塑料盆高 ×口径为 15 cm ×
12 cm,装土深为 12 cm,每盆混合土质量为 1.1 kg.
从穴盘中选取大小一致的幼苗分别置于不同处
理的盆中,每个试验分别为 48 盆,总共 96 盆.移苗
后,96盆中分别浇蒸馏水 300 mL以缓苗.测量 96盆
油葵幼苗的株高.同时从穴盘中挑取大小一致的油
葵幼苗 50株并测量株高,再将这 50株幼苗挖出,清
洗根部泥土,用滤纸吸掉水分,测量幼苗的根长,称
量地上部和地下部生物量.
此后,定期对试验盆浇蒸馏水,每次 300 mL,试
验期间,温室白天平均温度在 25 ℃左右,夜间在
18 ℃左右.
2014年 11月 23 日,盆栽试验结束,期间油葵
幼苗生长了 30 d.将每盆油葵苗挖出、清洗,测量每
株幼苗的株高和根长,称量地上部和地下部生物量.
然后分别装入贴有标签的封口袋中,放入-80 ℃冰
箱中保存备用.
植物全氮含量采用 H2SO4⁃H2O2消煮、凯氏定氮
法测定[12],植物全磷含量采用 H2SO4⁃H2O2消煮、钼
锑抗比色法测定[12] .SOD活性采用 NBT光化还原法
测定[13],CAT 活性参考张蜀秋等[13]的方法测定,
POD活性参考孙群等[14]的方法测定.组织含水量采
用烘干法测定.
1􀆰 3  数据处理
所有数据经 Excel 处理,计算油葵相对生长率、
氮磷比、抗氧化酶活性的平均值和标准误,并作图,
之后采用 SPSS 20.0检验其差异显著性(α= 0.05).
2  结果与分析
2􀆰 1  盐渍化条件下原油污染与改良措施对油葵生
长率的影响
原油⁃氯化钠⁃脱硫石膏正交试验结果表明(图
1),原油对油葵地上生物量相对生长率(RGR)的影
响最为显著(P<0.05),低浓度原油含量时(0.6%),
油葵地上生物量 RGR 下降明显,不足对照的 1 / 3,
随着原油含量的增加,油葵地上生物量 RGR继续降
低,当原油含量达到最大时(1.8%),油葵地上生物
量 RGR 降到最低,不足对照的 1 / 6;原油对株高和
根长RGR无显著影响( P > 0 . 05) .氯化钠对根长
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图 1  原油⁃氯化钠⁃脱硫石膏正交试验油葵幼苗相对生长率
的变化
Fig.1  Variations of RGR of Helianthus annuus in the orthogo⁃
nal experiment of crude oil⁃NaCl⁃desulfurization gypsum.
Ⅰ: 株高 Plant height; Ⅱ: 根长 Root length; Ⅲ: 地上生物量
Aboveground biomass. 不同字母表示同一指标间差异显著(P<0.05)
Different letters meant significant difference among treatments for the same
index at 0.05 level. 下同 The same below.
RGR影响显著,NaCl 含量大于 0.3%时,根长 RGR
明显降低(P<0.05).
    原油⁃氯化钠⁃脱硫石膏正交试验结果表明(表
1),原油处理组油葵根部氮含量显著低于对照(P
<0.05),原油含量 0.6%、1.2%、1.8%时,油葵根部氮
含量分别为对照处理的 60.3%、54.8%和 47.3%,但
各个处理组之间差异不显著.尽管原油对油葵根部
磷含量影响不显著,但施加原油的油葵幼苗根部氮
磷比均显著小于未施加处理.
表 1  原油对油葵根部氮、磷、氮磷比的影响
Table 1  Effects of crude oil on total N, total P and N / P
ratio in Helianthus annuus roots (mean±SE)
原油含量
Content of
crude oil (%)
氮含量
N content
(g·kg-1)
磷含量
P content
(g·kg-1)
N / P
0 1.46±0.07a 1.26±0.14a 1.19±0.12a
0.6 0.88±0.10b 1.35±0.13a 0.67±0.09b
1.2 0.80±0.10b 1.38±0.09a 0.59±0.08b
1.8 0.69±0.10b 1.18±0.16a 0.60±0.06b
同列不同字母表示处理间差异显著(P<0.05) Different letters within
the same column indicated significant difference among treatments at 0􀆰 05
level.
    煤渣⁃沸石⁃脱硫石膏⁃锯沫正交试验结果表明
(图 2),煤渣、沸石和脱硫石膏对油葵幼苗 RGR 影
响均不显著,而锯沫影响显著.其中,施加锯沫对油
葵幼苗株高和地上生物量 RGR 均影响显著 ( P
<0􀆰 05),但对油葵根长 RGR 影响不显著.随着锯沫
体积分数的增加,株高和地上生物量 RGR 逐渐增
加,当锯沫体积分数为 10%和 15%时,株高 RGR 显
著大于对照,当锯沫体积分数达到最大(15%)时,
地上生物量 RGR达到最大并表现出显著性差异(P
<0.05).
2􀆰 2  盐渍化条件下原油污染与改良措施对油葵抗
氧化酶活性的影响
原油⁃氯化钠⁃脱硫石膏正交试验结果表明(图
3),油葵叶 SOD、CAT 活性随着原油含量增加均先
增加后降低,且差异显著(P<0.05).但 SOD 和 CAT
对原油含量的敏感度不同,在低含量原油时
(0􀆰 6%),SOD活性首先增加,随着原油含量继续增
大,SOD 活性随之降低,当原油含量达到最大
(1􀆰 8%)时, SOD 活性降到最低;低含量原油时
(0􀆰 6%),CAT活性并无显著变化,当原油含量继续
图 2  原油污染下锯沫对油葵幼苗相对生长率的影响
Fig.2  Effects of sawdust on RGR of Helianthus annuus seed⁃
lings under the crude oil pollution.
图 3  原油对油葵幼苗体内抗氧化酶活性的影响
Fig.3  Effects of crude oil on the activities of antioxidant en⁃
zymes in Helianthus annuus seedlings.
505311期                  张京磊等: 盐渍化胁迫下油葵对土壤原油污染的适应性及其改良措施           
图 4  原油污染下锯沫对油葵体内抗氧化酶活性的影响
Fig.4   Effects of sawdust on the activities of antioxidant en⁃
zymes of Helianthus annuus seedlings under the crude oil pollu⁃
tion.
增大到 1􀆰 8%时,CAT 活性显著降低.本研究中未发
现 POD对试验范围原油含量的敏感性.
煤渣⁃沸石⁃脱硫石膏⁃锯沫正交试验结果表明
(图 4),煤渣、沸石和脱硫石膏对油葵幼苗抗氧化酶
活性影响均不显著,锯末对 SOD活性影响显著.SOD
活性随着锯沫体积分数的增加而降低,当加入少量
的锯沫时(5%),SOD 活性比对照降低,但并没有显
著性差异,当锯沫继续增加,SOD 活性持续降低,并
在锯沫体积分数达到最大(15%)时,表现出显著性
差异(P<0.05).本研究中,锯沫对 CAT 和 POD 活性
并没有显著影响.
3  讨    论
3􀆰 1  盐渍化条件下原油污染对油葵生长的影响
本研究结果表明,盐渍化条件下,原油污染能显
著降低油葵幼苗的生长率,株高和生物量都随着原
油浓度的增加表现出不同程度的降低,这与前人的
研究基本一致[15] .出现这种现象的原因是:原油处
理后,油葵叶片开始出现不同程度的发黄现象,高含
量原油处理组的油葵叶片甚至出现局部发黑、干枯
现象,这严重影响了油葵的生长.但也有学者认为这
是植物通过叶片挥发的形式来分解有机污染物.
Wilst等[16]发现种植在原油污染土壤中的苜蓿叶片
有灼伤的现象,他们推测有未知物质从污染土壤中
通过植物叶片转移到空气中挥发掉了,并且随着试
验的进行叶片的灼伤现象逐渐消失,表明造成叶片
灼伤的污染物消失了. Schwab 等[17]利用紫花苜蓿
(Medicago sativa)和牛毛草(Bulbostylis barbata)研究
植物根系对萘的吸附降解时,发现植物挥发所占比
例最大,达 32%~45%.油葵是否可以通过叶片挥发
的形式来对原油污染产生一定的适应性还需进一步
探究.在本研究之前的一年里,我们分别进行了狼尾
草(Pennisetum alopecuroides)、碱蓬(Suaeda glauca)、
紫花苜蓿(Medicago sativa)和紫茉莉(Mirabilis jala⁃
pa)相同试验处理,均告失败,说明狼尾草、碱蓬、紫
花苜蓿和紫茉莉不能有效抵御原油的胁迫,而油葵
抵御原油胁迫的效果要好得多.
原油污染影响植物生长主要是通过限制植物对
氮磷的吸收.氮和磷是植物生长的必需元素,同时也
最容易成为生长的限制元素[18-20] .原油进入土壤后
会发生一系列的物理、化学、生物变化,从而使得土
壤的理化性质发生变化.任芳菲[21]对大庆油田土壤
的研究结果表明,石油污染土壤的有效氮、有效磷含
量显著降低.刘五星等[22]研究表明,石油污染土壤
对全氮、全磷无显著影响,但会使土壤有机质增加,
pH降低.土壤理化性质的变化必然会影响植物的生
长.本研究结果表明,原油污染显著影响油葵体内的
氮含量,但并未对磷含量产生影响,可见原油主要通
过对氮含量影响来影响油葵的生长.由于原油对氮
含量影响显著,造成油葵体内氮磷比随着氮含量变
化而变化,这使得油葵根部氮磷比和油葵相对生长
率呈相同的变化趋势,表面上看,这与 Elser 等[8-10]
提出的“生长率假说”(growth rate hypothesis, GRH)
理论不一致.但我们对油蒿(Artemisia ordosica)幼苗
叶和根氮磷比测定表明,叶和根中氮磷比的变化是
有所不同的.在本试验中,由于油葵幼苗太小,受样
品量的限制,没有测定油葵幼苗叶样品的氮磷比,这
需要以后进一步的试验分析.
原油污染会影响植物的抗氧化酶活性. SOD 活
性的高低是植物抗逆性的重要标志之一, 它可以将
超氧阴离子自由基歧化成 H2O2,在保护系统中处于
核心地位,CAT、POD可以将 SOD 产生的 H2O2转化
为 H2O,与 SOD 协同反应,使活性氧维持在较低水
平[23] .本研究结果表明,SOD 和 CAT 活性对原油变
化有类似的反应趋势,均随原油含量增加呈现先增
加后降低的趋势.根据刘宛等[24]的研究,之所以出
现酶活性先增加后降低的现象,可解释为低浓度原
油下油葵为适应性反应,酶活性增加,高浓度原油下
油葵为中毒反应,酶活性降低. SOD 要比 CAT 先表
现出这种差异,这可能与它们自身的反应机制有关.
总之,原油污染影响油葵的生长发育状况,使其
生长率下降,生物量降低,但油葵对低浓度的原油表
现出一定的适应性.
3􀆰 2  锯沫改良盐渍化原油污染土壤的效果
本研究结果表明,盐渍化条件下,煤渣、沸石和
6053 应  用  生  态  学  报                                      26卷
脱硫石膏对油葵幼苗生长影响均不显著,理论上脱
硫石膏含有一定的钙,对抵御盐分胁迫应有作用,但
由于各处理均含有 1.5%的原油,原油对植物的影响
远超过盐分的影响,因而,脱硫石膏对油葵幼苗生长
影响不显著,在这种情况下,只有锯沫对油葵幼苗的
生长影响显著.这是由于原油进入土壤后,会增加土
壤的疏水性,降低土壤通透性,从而抑制植物生长.
锯沫本身疏松多孔,保水性较好,透气性也较好.叶
小梅等[25]在研究木屑、蛭石、稻草 3 种调理剂对污
泥中石油降解速率的影响时,发现木屑效果最佳;张
坤等[26]在麦秸强化石油烃污染耕地水浸洗盐过程
及场地试验研究中也表明,加入麦秸后土壤的疏水
性降低,透气性变好.由于锯沫本身疏松多孔,加入
土壤后有效地改善了土壤的通透性.另外,锯沫对原
油也具有一定的吸附性,可能作为吸附剂来吸附土
壤中的原油和盐分,大大缓解了对油葵的胁迫[27],
因此对改良盐渍化原油污染土壤有一定的效果.
抗氧化酶活性的测定同样证明了加锯末的良好
环境效应.盐渍化条件下施加锯末的原油污染土壤
处理油葵叶片 SOD 活性随着锯沫体积分数的增大
而降低,而且 CAT和 POD活性较稳定,表明锯沫的
加入大大缓解了原油对油葵的氧化损害.
对于原油和盐混合污染的土壤,原油的存在能
够影响油葵幼苗的抗氧化酶活性,而施加锯沫能够
缓解原油对油葵幼苗的氧化损失,在油田区油盐混
合物污染土壤的修复中,施加锯沫具有很好的修复
应用前景.
4  结    论
原油进入土壤后,油葵生长率降低,生物量下
降,油葵对低浓度的原油(0.6%)有一定的适应性,
在高浓度 (1.8%)情况下,油葵的生长发育受到严
重抑制.原油污染对油葵叶片抗氧化酶活性产生影
响,低浓度原油下,油葵具有一定的适应性,表现为
SOD、CAT活性增加,高浓度原油下,SOD、CAT 活性
降低.在煤渣、沸石、脱硫石膏和锯沫 4 种改良物中,
锯沫对原油污染土壤的改良效果最佳,添加锯沫使油
葵叶片 SOD活性逐渐降低,株高、生物量明显增加.
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作者简介  张京磊, 男, 1991年生, 硕士研究生. 主要从事
生态恢复和生态稳定性研究. E⁃mail: zhangjinglei910524@
163.com
责任编辑  肖  红
8053 应  用  生  态  学  报                                      26卷