全 文 ：根际真菌对黄瓜土传病害的抑制作用∗
吕　 恒１， ２　 牛永春２∗∗　 邓　 晖２　 林晓民１　 金春丽２
（ １河南科技大学林学院， 河南洛阳 ４７１００３； ２中国农业科学院农业资源与农业区划研究所 ／农业部农业微生物资源收集与保
藏重点实验室， 北京 １０００８１）
摘　 要　 为了了解根际真菌对黄瓜土传病害的影响，通过平板对峙试验和温室人工接种盆栽
试验，对分离自根际土的 １６株真菌开展了对土传病原真菌的拮抗作用和黄瓜土传病害的抑
制作用研究．结果表明： 有 ４株真菌对一种或多种供试病原真菌表现有拮抗作用，其中经鉴定
为土曲霉的菌株 ＪＣＬ１４３对黄瓜枯萎病菌、立枯病菌和菌核病菌 ３ 种供试病原真菌均有较强
的拮抗作用．在温室盆栽试验中，接种菌株 ＪＣＬ１４３对黄瓜 ３种病害的相对防效均在 ７４％以上；
而在不灭菌育苗基质的盆栽试验中，接种菌株 ＪＣＬ１４３ 对立枯病和菌核病的防效均在 ８５％以
上．在用自然土进行的温室盆栽试验中，接种菌株 ＪＣＬ１４３ 对伸蔓期黄瓜枯萎病的相对防效平
均达 ８４．１％．菌株 ＪＣＬ１４３的发酵液对 ３种供试病原真菌菌落生长都有不同程度的抑制作用，
对菌核病菌的菌落生长抑菌率达 ６３．３％．发酵液的抑菌活性随处理温度的升高而下降，对碱性
ｐＨ值比酸性 ｐＨ值敏感，而对蛋白酶处理不敏感．说明土曲霉是土壤中抑制植物土传病害的
重要因素，菌株 ＪＣＬ１４３的抑病效果稳定，具有潜在的生防应用价值．
关键词　 根际真菌； 土曲霉； 土传病害； 黄瓜； 生物防治
∗国家高技术研究发展计划项目（２０１３ＡＡ１０２８０１， ２０１３ＡＡ１０２８０２）资助．
∗∗通讯作者． Ｅ⁃ｍａｉｌ： ｎｉｕｙｏｎｇｃｈｕｎ＠ ａｌｉｙｕｎ．ｃｏｍ
２０１５⁃０２⁃０６收稿，２０１５⁃０８⁃２０接受．
文章编号　 １００１－９３３２（２０１５）１２－３７５９－０７　 中图分类号　 Ｑ９３９．９６　 文献标识码　 Ａ
Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｒｅｅ ｓｏｉｌ⁃ｂｏｒｎｅ ｄｉｓｅａｓｅｓ ｏｆ ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｂｙ ａ ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ ｆｕｎｇａｌ ｓｔｒａｉｎ． ＬＹＵ
Ｈｅｎｇ１，２， ＮＩＵ Ｙｏｎｇ⁃ｃｈｕｎ２， ＤＥＮＧ Ｈｕｉ２， ＬＩＮ Ｘｉａｏ⁃ｍｉｎ１， ＪＩＮ Ｃｈｕｎ⁃ｌｉ２ （ １Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ，
Ｈｅｎａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｌｕｏｙａｎｇ ４７１００３， Ｃｈｉｎａ； ２Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｒｅ⁃
ｓｏｕｒｃｅｓ ａｎｄ Ｒｅｇｉｏｎａｌ Ｐｌａｎｎｉｎｇ， Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ／ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｍｉｃｒｏ⁃
ｂｉａｌ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ， Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ， Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００８１， Ｃｈｉｎａ） ． ⁃Ｃｈｉｎ． Ｊ． Ａｐｐｌ． Ｅｃｏｌ．， ２０１５， ２６
（１２）： ３７５９－３７６５．
Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｏ ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ ｆｕｎｇｉ ｏｎ ｓｏｉｌ⁃ｂｏｒｎｅ ｄｉｓｅａｓｅｓ ｏｆ ｃｕｃｕｍｂｅｒ， １６ ｆｕｎ⁃
ｇａｌ ｓｔｒａｉｎｓ ｆｒｏｍ ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ ｓｏｉｌ ｗｅｒｅ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｔｏ ｔｈｒｅｅ ｓｏｉｌｂｏｒｎｅ ｐａｔｈｏ⁃
ｇｅｎｉｃ ｆｕｎｇｉ ｗｉｔｈ ｄｕａｌ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｆｏｒ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｄｉｓｅａｓｅｓ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｐａｔｈｏ⁃
ｇｅｎｓ ｉｎ ｐｏｔ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ． Ｆｏｕｒ ｓｔｒａｉｎｓ ｓｈｏｗｅｄ ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ ｔｏ ｏｎｅ ｏｒ ｍｏｒｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｆｕｎｇｉ ｔｅｓｔｅｄ． Ｔｈｅ
ｓｔｒａｉｎ ＪＣＬ１４３， ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ａｓ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｔｅｒｒｅｕｓ， ｓｈｏｗｅｄ ｓｔｒｏｎｇ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｔｏ ｔｈｅ ｔｈｒｅｅ ｐａｔｈ⁃
ｏｇｅｎｉｃ ｆｕｎｇｉ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ． ｓｐ． ｃｕｃｕｍｅｒｉｎｕｍ， Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ ａｎｄ Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉｏ⁃
ｒｕｍ． Ｉｎ ｇｒｅｅｎｈｏｕｓｅ ｐｏｔ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ， ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｓｔｒａｉｎ ＪＣＬ１４３ ｐｒｏｖｉｄｅｄ ７４％ ｏｒ ｍｏｒｅ ｏｆ ｒｅｌａ⁃
ｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｅｆｆｅｃｔ ｔｏ ａｌｌ ｔｈｅ ｔｈｒｅｅ ｄｉｓｅａｓｅｓ ｏｆ ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｓｅｅｄｌｉｎｇ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ａｂｏｖｅ ｔｈｒｅｅ ｐａｔｈｏｇｅｎ⁃
ｉｃ ｆｕｎｇｉ， ａｎｄ ｐｒｏｖｉｄｅｄ ８５％ ｏｒ ｍｏｒｅ ｏｆ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｅｆｆｅｃｔ ｔｏ Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｒｏｏｔ ｒｏｔ ａｎｄ Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ
ｒｏｏｔ ａｎｄ ｓｔｅｍ ｒｏｔ ｉｎ ｐｏｔ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ｎｏｎ⁃ｓｔｅｒｉｌｉｚｅｄ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ． Ｉｎ ｐｏｔ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ｎａｔｕｒａｌ ｓｏｉｌ
ａｓ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ， ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｓｔｒａｉｎ ＪＣＬ１４３ ｐｒｏｖｉｄｅｄ ａｖｅｒａｇｅ ８４． １％ ｏｆ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｅｆｆｅｃｔ ｔｏ
Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｗｉｌｔ ｏｆ ｃｕｃｕｍｂｅｒ ａｔ ｖｉｎｅ ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ ｓｔａｇｅ． Ｔｈｅ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｂｒｏｔｈ ｏｆ ｓｔｒａｉｎ ＪＣＬ１４３ ｓｈｏｗｅｄ
ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｄｅｇｒｅｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｃｏｌｏｎｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｔｈｅ ｔｈｒｅｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｆｕｎｇｉ ｔｅｓｔｅｄ， ａｎｄ
ｒｅａｃｈｅｄ ６３．３％ ｏｆ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｒａｔｅ ｏｆ ｃｏｌｏｎｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｔｏ Ｓ． ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ． Ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ
ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｂｒｏｔｈ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｗｉｔｈ ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ， ｗａｓ ｌｉａｂｌｅ ｔｏ ｄｅｃｒｅａｓｅ ｔｏ ａｌｋａ⁃
ｌｉｎｅ ｐＨ ｔｈａｎ ａｃｉｄ ｐＨ， ａｎｄ ｓｔａｂｌｅ ｔｏ ｐｒｏｔｅａｓｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ Ａ． ｔｅｒｒｅｕｓ ｉｓ ａｎ
ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｆａｃｔｏｒ ｉｎ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐｌａｎｔ ｓｏｉｌ⁃ｂｏｒｎｅ ｄｉｓｅａｓｅｓ， ａｎｄ ｓｔｒａｉｎ ＪＣＬ１４３ ｗｉｔｈ ｓｔａｂｌｅ ｄｉｓｅａｓｅ
ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｓ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｉｎ ｂｉｏｃｏｎｔｒｏｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ ｆｕｎｇｉ； Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｔｅｒｒｅｕｓ； ｓｏｉｌ⁃ｂｏｒｎｅ ｄｉｓｅａｓｅ； ｃｕｃｕｍｂｅｒ； ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｏｎ⁃
ｔｒｏｌ．
应 用 生 态 学 报　 ２０１５年 １２月　 第 ２６卷　 第 １２期　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｅｃｏｌｏｇｙ， Ｄｅｃ． ２０１５， ２６（１２）： ３７５９－３７６５
　 　 土壤中存在着大量的各种微生物．它们在土壤
的碳、氮循环和维持土壤生态环境方面起重要作用．
由于植物根系的凋亡细胞及分泌物为微生物提供营
养，因此植物根际的微生物更为活跃，它们和植物生
长关系密切．根际微生物具有丰富的多样性，已经知
道部分微生物有固氮、解磷、解钾、促进植物生长的
作用，还有些微生物则可抑制土传病原微生物和提
高植物抗病能力．Ｙｏｓｈｉｔａｋａ等［１］研究表明，在抗病番
茄根际土壤中微生物多样性高于发病土壤．王茹华
等［２］研究发现，根际微生物（尤其真菌）与植物抗土
传病害关系密切． Ｌａｚａｒｏｖｉｔｓ［３］报道了通过调整土壤
微生物生态控制马铃薯土传病害，李胜华等［４］报道
了调控土壤中微生物多样性对防治番茄土传病害有
重要的影响．很多研究表明，植物根际微生物群落结
构与土传病害的发生有密切关系，并且通过调节植
物根际的微生物群落结构可能控制和减轻植物土传
病害的发生［５］ ．然而，由于植物根际微生物的多样性
增加了相关研究的复杂性，对于根际微生物在控制
植物土传病害方面的了解还很少，尤其对除了菌根
真菌外的根际真菌在控制植物土传病害方面的作用
知道的更少．同时，由于近年来设施农业的发展，连
作造成了土传病害危害加剧，为防治病害而加大了
化学农药的施用，不仅增加了成本，更造成了环境污
染和农产品的农药残留加大或超标，寻求植物土传
病害的安全、经济、有效的防治方法成为设施农业生
产亟待解决的问题．笔者在对瓜类植物内生真菌和
根际真菌研究过程中，发现部分菌株对供试的土传
病原真菌具有较强拮抗作用．本文报道了根际真菌
对黄瓜土传病害抑制作用研究的部分结果，以为相
关研究和开发提供基础和参考．
１　 材料与方法
１􀆰 １　 供试菌株
１􀆰 １􀆰 １根际真菌 　 供试的 １６ 株真菌菌株均用稀释
分离法，分离自 ２００６ 年 １０—１１ 月采自北京通州和
海淀地区的根际土样．其中 ９ 株分离自北京市通州
区大运河蔬菜基地的健康黄瓜根际土样，３ 株分离
自北京市海淀区巨山农场四分场的健康黄瓜根际土
样，４ 株分离自北京市海淀区巨山农场四分场的健
康菜豆植株根际土样．
１􀆰 １􀆰 ２土传病原真菌　 选择瓜类植物常见的 ３ 种土
传病原真菌：黄瓜枯萎病菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ．
ｓｐ． ｃｕｃｕｍｅｒｉｎｕｍ，菌株编号 ＡＣＣＣ ３７４３８）、立枯病菌
（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ，菌株编号 ＡＣＣＣ ３６１２４）和菌核
病菌 （Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ， 菌 株 编 号 ＡＣＣＣ
３６０８１），菌株均由中国农业微生物菌种保藏管理中
心提供．
１􀆰 ２　 供试培养基
马铃薯葡萄糖琼脂培养基（ＰＤＡ）、马铃薯葡萄
糖液体培养基（ＰＤ）、查氏琼脂培养基（ＣＺＡ）和查氏
酵母膏琼脂培养基（ＣＹＡ）的配制参照文献［６］的方
法，其中 ＣＹＡ 是在 ＣＺＡ 的配方基础上每 １０００ ｍＬ
培养基加入酵母浸膏 ５ ｇ配制而成．
玉米粉蛭石培养基：将玉米粉、蛭石（体积比为
１ ∶ ４）用大约 ０．６倍体积的水拌匀，以用手抓能从指
缝挤出水但不会滴下为宜，采用 ２５０ ｍＬ 三角瓶分
装，每瓶 １２０ ｇ，１２１ ℃高压蒸汽灭菌 １ ｈ，２４ ｈ 后再
灭菌一次，备用．
１􀆰 ３　 对峙培养
将保藏的根际真菌和 ３种病原真菌分别转接到
ＰＤＡ平板上，待菌落生长至半个平板大小，用打孔
器在菌落边缘生长旺盛区域取直径 ５ ｍｍ 的菌饼，
在预先制备好的直径 ９ ｃｍ的 ＰＤＡ平板中央相对两
侧相距 ４ ｃｍ处分别放置一块病原真菌菌饼和一块
根际真菌菌饼，以只接病原真菌的平板为对照，每个
病原真菌和根际真菌组合做 ３个平板，于 ２８ ℃恒温
培养箱中培养．每天观察菌落生长情况，当病原真菌
停止生长时或对照平板上菌落长满平板时，测量对
峙培养中病原真菌与根际真菌相对方向菌落的半径
和对照平板上菌落的半径以及抑菌带宽度，统计病
原真菌的菌落生长抑制率．菌落生长抑制率 ＝ （对照
病原真菌菌落半径－对峙培养病原真菌菌落半径） ／
对照病原真菌菌落半径×１００％
１􀆰 ４　 菌株 ＪＣＬ１４３的鉴定
１􀆰 ４􀆰 １形态特征观察 　 将菌株 ＪＣＬ１４３ 接种在 ＰＤＡ
平板上活化，然后参照文献［７］方法分别转接至查
氏琼脂培养基和查氏酵母膏琼脂培养基上，于 ２５ ℃
下培养，在光学显微镜下观察菌丝、孢子、孢子梗等
的形态．参考文献［７－９］进行鉴定．
１􀆰 ４􀆰 ２ ＤＮＡ序列比对　 用 ＣＴＡＢ法提取菌株 ＪＣＬ１４３
总 ＤＮＡ［１０］，用 ２ 对真菌通用引物［１１］ ＩＴＳ４ ／ ＩＴＳ５ 和
Ｂｔ２ａ ／ Ｂｔ２ｂ进行 ＰＣＲ扩增，ＰＣＲ产物经检测合格后，
送交北京三博远志生物测序公司进行序列测定，所
测得的序列登录 ＧｅｎＢａｎｋ（ＮＣＢＩ）（ｈｔｔｐ： ／ ／ ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．
ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ ／ ）进行 ＢＬＡＳＴ比对．
１􀆰 ５　 盆栽接种试验
１􀆰 ５􀆰 １黄瓜种子催芽 　 将‘津研 ２ 号’黄瓜种子用
２％的 ＮａＣｌＯ处理 １５ ｍｉｎ，无菌水冲洗 ３～４ 次，再用
０６７３ 应　 用　 生　 态　 学　 报　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 ２６卷
无菌水浸泡 ４ ｈ，放置于铺有无菌滤纸的平板上，保
湿，２５ ℃恒温培养箱催芽．
１􀆰 ５􀆰 ２菌种准备　 预先将根际真菌菌株 ＪＣＬ１４３ 和 ３
种病原真菌分别接种在 ＰＤＡ平板上，待菌落长到约
半皿大小，用直径 ７ ｍｍ 的打孔器打取菌饼．菌株
ＪＣＬ１４３和菌核病菌的培养用玉米粉蛭石培养基，每
个装有玉米粉蛭石培养基的 ２５０ ｍＬ 三角瓶中接种
菌饼 ４ 块，２５ ℃培养 １０ ｄ 左右待菌丝长满后备用．
黄瓜枯萎病菌和立枯病菌的培养用 ＰＤ 培养基，每
个装有 ＰＤ 培养基的 ２５０ ｍＬ 三角瓶中接种菌饼 ４
块，２５ ℃ １６０ ｒ·ｍｉｎ－１震荡培养 １０ ｄ备用．
１􀆰 ５􀆰 ３对黄瓜苗期 ３种病害的抑制试验　 待催芽的
黄瓜种子露白，每盆 １ 粒播种于口径 １０ ｃｍ、高 ８．５
ｃｍ的花盆中，基质用购买的黄瓜育苗基质，分为灭
菌（Ｓ）和不灭菌（Ｎ）处理．将用玉米粉蛭石培养基培
养好的 ＪＣＬ１４３ 菌种捣碎、混匀，播种时每盆 ３ ｇ 覆
盖接种于黄瓜种子上，对照覆盖等量的灭菌玉米粉
蛭石培养基，再盖上一薄层基质．待黄瓜生长到第一
片真叶展叶期接种病原真菌．每种病菌接种 １０ 盆黄
瓜苗，重复 ３次，共 ３０盆．
黄瓜枯萎病菌接种：将 ＰＤ 培养好的枯萎病菌
用 ４层纱布过滤除去菌丝体，用血球计数板检测滤
液中孢子浓度，用无菌水配成 １０６个·ｍＬ－１孢子悬
液，每株 ７０ ｍＬ，用灌根法分早晚两次接种［１２］ ．
立枯病菌接种：将 ＰＤ 培养基培养的立枯病菌
用纱布过滤除去液体培养基，称量菌丝体质量，加少
量石英砂用研钵研磨，将研碎的菌丝片段按每 １ ｇ
菌丝体加 １０ ｍＬ无菌水制成菌丝悬液．接种时，在黄
瓜苗两侧 ２ ｃｍ 处用小勺柄伤根，灌根接种菌丝悬
液，每株苗 １５ ｍＬ．
菌核病菌接种：将用玉米粉蛭石培养基培养好
的菌核病菌菌种捣碎混匀，每株黄瓜苗接种 ３ ｇ 于
茎基部，盖上基质．
黄瓜苗接种病原真菌后置于温室中培养，白天
温度 ２８ ℃左右，夜间温度 ２０ ℃左右，１１ ｄ后逐株观
察统计黄瓜苗的发病等级．
１􀆰 ５􀆰 ４对黄瓜伸蔓期枯萎病的抑制试验　 将自然土
（取自中国农业科学院作物科学研究所试验田）和
购买的未灭菌的黄瓜育苗基质按体积比 ２ ∶ １ 混合
均匀装盆，每盆用 １０６个·ｍＬ－１枯萎病菌孢子悬液
７０ ｍＬ洒于土面接种，２４ ｈ 后每盆播种露白的黄瓜
种子 １ 粒，每盆用 ３ ｇ 预先培养好的捣碎混匀的
ＪＣＬ１４３菌种覆盖接种，以等量的灭菌玉米粉蛭石培
养基覆盖为对照．接种 ＪＣＬ１４３和未接种对照各 ３０盆．
黄瓜苗置于温室中培养，白天温度 ２８ ℃左右，夜间温
度 ２０ ℃左右， 约 ４５ ｄ 后黄瓜处于伸蔓期，统计发病
株数及发病等级．整个试验于不同时间重复两次．
１􀆰 ６　 病情分级和数据统计
黄瓜枯萎病的病情分为 ５ 级［１３］ ．０ 级：无病症；１
级：胚轴或子叶出现轻微病症，但生长正常；２ 级：胚
轴或子叶出现明显坏死斑，或一片子叶黄化，影响生
长；３级：两片子叶黄化，或一片子叶枯死；４级：两片
子叶生长僵化，植株部分萎蔫、倒伏或枯死；５ 级：植
株萎蔫、倒伏或枯死．
黄瓜立枯病的病情分为 ４ 级［１４］ ． ０ 级：生长正
常，无病症；１级：初现病斑，基部茎秆出现水渍状病
斑；２ 级：病斑扩大，茎基部萎缩；３ 级：病斑继续扩
大，茎基部完全萎缩；４级：植株死亡．
黄瓜菌核病的病情分为 ４ 级［１５］ ．０ 级：无病症；１
级：茎基或根部稍显病斑或稍变色；２ 级：１ ／ ３ 或 １ ／ ２
茎基或根部出现病斑或变色腐烂；３ 级：全茎或根部
被病斑环绕、变色、腐烂；４级：黄瓜苗萎蔫枯死．
发病率＝发病株数 ／调查总株数×１００％
病情指数 ＝∑（病级株树×病级代表值） ／株数
总和×最高病级的代表值×１００
相对防效 ＝ （对照病情指数－处理病情指数） ／
对照病情指数×１００％
１􀆰 ７　 菌株 ＪＣＬ１４３发酵液抑菌活性测定
１􀆰 ７􀆰 １发酵液制备　 用直径 ７ ｍｍ 的打孔器从菌株
ＪＣＬ１４３的 ＰＤＡ 平板菌落边缘旺盛生长区域取菌饼
３块，接种于装有 ５０ ｍＬ ＰＤ 培养基的 ２５０ ｍＬ 三角
瓶中，２５ ℃１６０ ｒ·ｍｉｎ－１震荡培养 ３ ｄ，按 ５％（Ｖ ∶
Ｖ）的比例接种于装有 ２００ ｍＬ ＰＤ 培养基的 ５００ ｍＬ
三角瓶，同样条件培养 ７ ｄ，８ 层纱布过滤除去菌丝
体，滤液经 ４ ℃ １００００ ｒ·ｍｉｎ－１离心 １０ ｍｉｎ，取上清
液，用 ０．２２ μｍ无菌滤膜过滤得无菌发酵液［１６］，于 ４
℃冰箱保存备用．
１􀆰 ７􀆰 ２管碟法测定抑菌活性　 每个培养皿用无菌吸
管加入底层培养基（２％的水琼脂） １０ ｍＬ，待冷凝
后，将冷却至约 ５０ ℃的 ＰＤＡ 培养基约 １０ ｍＬ 倒入
凝固的底层培养基表面，待冷凝后，用直径 ７ ｍｍ 的
打孔器从预先培养好的供试病原真菌 ＰＤＡ 平板菌
落上取菌饼置于平皿中央，在每个平皿上距菌饼 ２
ｃｍ等距对称放置 ４个牛津杯（６ ｍｍ×１０ ｍｍ），每个
牛津杯加 ２００ μＬ 发酵液，以加入等量无菌水为对
照．每种病原真菌做 ３ 个平皿，置于 ２５ ℃恒温培养
箱培养，３ ｄ后用十字交叉法测量菌落直径，计算菌
落生长抑制率．
１６７３１２期　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 吕　 恒等： 根际真菌对黄瓜土传病害的抑制作用　 　 　 　 　 　
菌落生长抑制率＝（对照菌落直径－处理菌落直
径） ／ （对照菌落直径－菌饼直径）×１００％
１􀆰 ８　 菌株 ＪＣＬ１４３发酵液稳定性测定
除了在热稳定性测定中用了 ３种病原真菌作为
测试菌外，在酸碱稳定性和蛋白酶处理稳定性的测
定中均只用了菌落生长较快的立枯病菌来检测发酵
液抑菌活性的变化．
１􀆰 ８􀆰 １热稳定性　 取过滤发酵液 ５份，每份 ５ ｍＬ，装
入离心管中，分别于 ６０、８０ 和 １００ ℃水浴 １ ｈ，以及
１２１ ℃高压灭菌 ３０ ｍｉｎ，以常温未处理的发酵液为
对照，待冷却后，管碟法检测抑菌活性．
１􀆰 ８􀆰 ２酸碱稳定性　 取过滤发酵液 １２０ ｍＬ，分装于
１２ 只试管，其中 １１ 管用 １ ｍｏｌ · Ｌ－１ ＨＣｌ 和 １
ｍｏｌ·Ｌ－１ ＮａＯＨ溶液将 ｐＨ值分别调节至 １、２、３、４、
５、６和 ８、９、１０、１１、１２．所有 １２ 管发酵液经室温放置
过夜，再将调过 ｐＨ 的发酵液调回到初始发酵液的
ｐＨ值，用 ｐＨ值为 ７．０的无菌水调整每份至等体积．
管碟法测定上述 １２管发酵液的抑菌活性，每管发酵
液测 ３个平板．
１􀆰 ８􀆰 ３蛋白酶处理稳定性　 取无菌发酵液于离心管
中，分别加入蛋白酶 Ｋ、胰蛋白酶和胃蛋白酶，使终
浓度为 １５ ｍｇ·ｍＬ－１，３７ ℃水浴 １ ｈ［１７］，管碟法检测
抑菌活性，每处理重复 ３次．
１􀆰 ９　 数据处理
运用 ＳＰＳＳ １７．０ 软件对数据进行统计分析，采
用 Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ６软件作图．
２　 结果与分析
２􀆰 １　 根际真菌的拮抗作用
在对峙培养中，１６株根际真菌中有 ４ 株对一种
或一种以上供试病原真菌表现出拮抗作用，它们均
产生了抑菌带，属于抗生作用类型．该 ４ 株具有拮抗
作用的真菌均分离自黄瓜根际土．其中菌株 ＪＣＬ１４３
对 ３种供试病原真菌均有拮抗作用，对黄瓜枯萎病
菌、立枯病菌和菌核病菌的菌落生长抑制率分别为
４５．２％、５４．０％和 ４７．１％，对 ３ 种菌的抑菌带宽度分
别为 ４．３、１３．０和 １６．７ ｍｍ（表 １）．
２􀆰 ２　 菌株 ＪＣＬ１４３的鉴定
２􀆰 ２􀆰 １形态学研究 　 菌株 ＪＣＬ１４３ 在查氏琼脂培养
基上生长良好，菌落质地致密，土褐色，孢子形成很
多，分生孢子头为致密的柱状，后期菌落中央稍凸
起，呈絮状，菌落反面暗黄色．菌株 ＪＣＬ１４３ 在查氏酵
母膏培养基上菌落土褐色，边缘白色，质地丝绒状，
菌落背面褐色．孢梗茎无色，１００ ～ ２５０ μｍ×４． ５ ～ ６
μｍ；顶囊近球形，直径 １１～１５ μｍ；产孢结构双层，梗
基 ５～８ μｍ×２．５～ ３．５ μｍ，瓶梗 ４．５ ～ ５．５ μｍ×２ ～ ２．５
μｍ；分生孢子球形，２～２．５ μｍ．形态学观察结果与文
献中土曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｔｅｒｒｅｕｓ）的描述相符．
２􀆰 ２􀆰 ２ ＤＮＡ 序列比对 用引物 ＩＴＳ４ 和 ＩＴＳ５ 对菌株
ＪＣＬ１４３总 ＤＮＡ 进行 ＰＣＲ 扩增得到一条约 ６００ ｂｐ
的产物，测序后得到 ５９１ ｂｐ 的 ｒＤＮＡ ＩＴＳ 序列，提交
到 ＧｅｎＢａｎｋ 得到序列登录号 ＫＲ７３２９２７．经在 Ｇｅｎ⁃
Ｂａｎｋ中进行 ＢＬＡＳＴ 比对，该序列与 ＧｅｎＢａｎｋ 中 Ａｓ⁃
ｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｔｅｒｒｅｕｓ（ＦＪ５９０５７１）的序列同源性为 １００％．用
引物 Ｂｔ２ａ和 Ｂｔ２ｂ对菌株 ＪＣＬ１４３ 总 ＤＮＡ进行 ＰＣＲ
扩增得到一条约 ５３０ ｂｐ的产物，测序后得到 ５２９ ｂｐ
的 ＤＮＡ 序列，提交到 ＧｅｎＢａｎｋ 得到序列登录号
ＫＲ７８０４８２．经在 ＧｅｎＢａｎｋ 中进行 ＢＬＡＳＴ 比对，发现
其与 Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｔｅｒｒｅｕｓ ｖａｒ． ｆｌｏｃｃｏｓｕｓ（ＦＪ４９１７１４）的同
源性为 ９９％，而 Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｔｅｒｒｅｕｓ ｖａｒ． ｆｌｏｃｃｏｓｕｓ是 Ａｓ⁃
ｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｔｅｒｒｅｕｓ的异名（ｈｔｔｐ： ／ ／ ｗｗｗ．ｓｐｅｃｉｅｓｆｕｎｇｏｒｕｍ．
ｏｒｇ ／ Ｎａｍｅｓ ／ ＳｙｎＳｐｅｃｉｅｓ．ａｓｐ？ ＲｅｃｏｒｄＩＤ＝ １９１７１９）．
综合形态学研究和 ＤＮＡ 序列比对结果将菌株
ＪＣＬ１４３鉴定为土曲霉 Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｔｅｒｒｅｕｓ．
２􀆰 ３　 菌株 ＪＣＬ１４３对黄瓜土传病害的抑制作用
２􀆰 ３􀆰 １对黄瓜苗期 ３种病害的抑制作用　 用灭菌和
不灭菌的育苗基质进行的温室盆栽试验结果表明，
接种菌株 ＪＣＬ１４３的黄瓜植株，３ 种病害的病情指数
均明显下降，对 ３种病害的相对防效均在 ７４％以上．
在用不灭菌育苗基质所做的盆栽试验中，接种菌株
表 １　 对峙培养中 ４株根际真菌对 ３种病原真菌的拮抗作用
Ｔａｂｌｅ １　 Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｆｏｕｒ ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ ｆｕｎｇａｌ ｓｔｒａｉｎｓ ａｇａｉｎｓｔ ｔｈｒｅｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｆｕｎｇｉ ｉｎ ｄｕａｌ ｃｕｌｔｕｒｅ
菌株
Ｓｔｒａｉｎ
采集地
Ｏｒｉｇｉｎ
黄瓜枯萎病菌
Ｆ． ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ． ｓｐ． ｃｕｃｕｍｅｒｉｎｕｍ
Ⅰ Ⅱ
立枯病菌
Ｒ． ｓｏｌａｎｉ
Ⅰ Ⅱ
菌核病菌
Ｓ． ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ
Ⅰ Ⅱ
ＪＣＬ１３７ 北京通州 ０ ０ ０ ０ ７２．１ ９．０
ＪＣＬ１３９ 北京通州 ０ ０ ０ ０ ６２．４ ４．７
ＪＣＬ１４３ 北京海淀 ４５．２ ４．３ ５４．０ １３．０ ４７．１ １６．７
ＪＣＬ１４４ 北京海淀 ０ ０ ０ ０ ３４．１ ５．０
Ⅰ： 菌落生长抑制率 Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｒａｔｅ ｏｆ ｃｏｌｏｎｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ （％）； Ⅱ： 抑菌带宽度 Ｗｉｄｔｈ ｏｆ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｂａｎｄ （ｍｍ）．表中 ４个菌株均分离自黄瓜根际土
Ｔｈｅ ｆｏｕｒ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｔａｂｌｅ ｗｅｒｅ ａｌｌ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ ｓｏｉｌ．
２６７３ 应　 用　 生　 态　 学　 报　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 ２６卷
表 ２　 温室盆栽试验中接种菌株 ＪＣＬ１４３对黄瓜苗期 ３种病害的抑制作用
Ｔａｂｌｅ ２　 Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｒｅｅ ｄｉｓｅａｓｅｓ ｏｆ ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｓｅｅｄｌｉｎｇ ｗｉｔｈ ｓｔｒａｉｎ ＪＣＬ１４３ ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ ｉｎ ｇｒｅｅｎｈｏｕｓｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
病害
Ｄｉｓｅａｓｅ
灭菌基质 Ｓｔｅｒｉｌｉｚｅｄ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ
处理病情指数
ＤＩ ｏｆ
ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
对照病情指数
ＤＩ ｏｆ ＣＫ
相对防效
Ｒｅｌａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ
ｅｆｆｅｃｔ （％）
不灭菌基质 Ｎｏｎ⁃ｓｔｅｒｉｌｉｚｅｄ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ
处理病情指数
ＤＩ ｏｆ
ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
对照病情指数
ＤＩ ｏｆ ＣＫ
相对防效
Ｒｅｌａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ
ｅｆｆｅｃｔ （％）
枯萎病 Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｗｉｌｔ １４．０ ５４．０ ７４．１±０．３ １６．０ ６２．０ ７４．２±０．３
立枯病 Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｒｏｏｔ ｒｏｔ １０．０ ９０．０ ８８．９±２．３ １２．５ ８７．５ ８５．７±２．３
菌核病 Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｒｏｏｔ ａｎｄ ｓｔｅｍ ｒｏｔ １０．０ ４５．０ ７７．８±０．４ ７．５ ５２．５ ８５．７±０．２
ＤＩ： Ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎｄｅｘ．
ＪＣＬ１４３对立枯病和菌核病的防效均在 ８５％以上．从
试验结果还可看出，育苗基质是否灭菌对于接种
ＪＣＬ１４３对 ３种病害的相对防效影响不大（表 ２）．
２􀆰 ３􀆰 ２对黄瓜伸蔓期枯萎病的抑制作用　 用自然土
进行的温室盆栽试验结果表明，两次重复试验的结
果差异不明显，试验结果稳定．盆栽试验中，与对照
相比，接种菌株 ＪＣＬ１４３的黄瓜植株枯萎病的发病率
平均下降了 ６３．３％，病情指数平均下降了 ４９．６，发病
程度明显降低，相对防效达 ８４． １％，说明菌株
ＪＣＬ１４３对黄瓜枯萎病有较好的抑制作用（表 ３）．
２􀆰 ４　 菌株 ＪＣＬ１４３发酵液的抑菌作用
用管碟法进行的抑菌活性测定结果表明，菌株
ＪＣＬ１４３的发酵液对 ３ 种供试病原真菌菌落生长都
有不同程度的抑制作用，以对菌核病菌的抑制作用
最强，菌落生长抑菌率达到 ６３．３％，说明发酵液中存
在对病原真菌生长具有抑制作用的代谢物（表 ４）．
２􀆰 ５　 菌株 ＪＣＬ１４３发酵液的稳定性
２􀆰 ５􀆰 １热稳定性 　 菌株 ＪＣＬ１４３ 发酵液经不同温度
处理后，抑菌活性随处理温度升高呈下降趋势． 当
发酵液经 １００ ℃处理 １ ｈ 后，与未经处理的发酵液
相比，对黄瓜枯萎病菌、立枯病菌和菌核病菌的菌落
生长抑制率分别下降了 ３４．３％、２４．４％和 ３５．３％．当
发酵液经 １２１ ℃高压灭菌 ３０ ｍｉｎ 后，抑菌活性则基
本丧失．结果表明，菌株 ＪＣＬ１４３ 发酵液中的抑菌活
性物质对高温处理具有不稳定性（图 １）．
表 ３　 温室盆栽试验中接种菌株 ＪＣＬ１４３对黄瓜伸蔓期枯萎
病的抑制作用
Ｔａｂｌｅ ３ 　 Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｕｃｕｍｂｅｒ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｗｉｌｔ ａｔ ｖｉｎｅ
ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ ｓｔａｇｅ ｗｉｔｈ ｓｔｒａｉｎ ＪＣＬ１４３ ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ ｉｎ ｇｒｅｅｎ⁃
ｈｏｕｓｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
项目
Ｉｔｅｍ
发病率
Ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ （％）
接种 ＪＣＬ１４３
ＪＣＬ１４３
ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ
对照
ＣＫ
病情指数
Ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎｄｅｘ
接种 ＪＣＬ１４３
ＪＣＬ１４３
ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ
对照
ＣＫ
相对防效
Ｒｅｌａｔｉｖｅ
ｃｏｎｔｒｏｌ
ｅｆｆｅｃｔ
（％）
试验Ⅰ Ｔｅｓｔ Ｉ ３０．０ ９６．７ ８．７ ６０．７ ８５．７
试验Ⅱ Ｔｅｓｔ ＩＩ ３３．３ ９３．３ １０．０ ５７．３ ８２．５
平均 Ａｖｅｒａｇｅ ３１．７ ９５．０ ９．４ ５９．０ ８４．１
２􀆰 ５􀆰 ２酸碱稳定性 　 菌株 ＪＣＬ１４３ 的发酵液经测定
为 ｐＨ ６．８．在酸性 ｐＨ处理下，ｐＨ值不低于 ４时立枯
病菌的菌落生长抑制率下降较为缓慢，而 ｐＨ 值低
于 ４时随处理的 ｐＨ值降低菌落生长抑制率迅速下
降，当处理的 ｐＨ 值达到 ２ 时发酵液完全失去对立
枯病菌菌落生长的抑制作用．在碱性 ｐＨ 处理下，其
对立枯病菌菌落生长的抑制作用下降较快，当处理
的 ｐＨ值为 ８时其对立枯病菌的菌落生长抑制率下
降了３６．７％（图２） ．表明菌株ＪＣＬ１４３发酵液中的抑
表 ４　 菌株 ＪＣＬ１４３发酵液对 ３种供试病原真菌菌落生长的
抑制作用
Ｔａｂｌｅ ４ 　 Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｓｔｒａｉｎ ＪＣＬ１４３ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ
ｂｒｏｔｈ ｏｎ ｔｈｅ ｃｏｌｏｎｙ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｔｈｅ ｔｈｒｅｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｆｕｎｇｉ
ｔｅｓｔｅｄ
病原真菌
Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｆｕｎｇｕｓ
菌落直径
Ｃｏｌｏｎｙ ｄｉａｍｅｔｅｒ（ｃｍ）
处理
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
对照
ＣＫ
菌落生长抑制率
Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｒａｔｅ ｏｆ
ｃｏｌｏｎｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ
（％）
黄瓜枯萎病菌
Ｆ． ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ． ｓｐ． ｃｕｃｕｍｅｒｉｎｕｍ
３．２ ４．５ ２９．６
立枯病菌
Ｒ． ｓｏｌａｎｉ
４．０ ６．４ ３６．６
菌核病菌
Ｓ． ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ
２．０ ５．４ ６３．３
图 １　 不同温度处理对菌株 ＪＣＬ１４３发酵液抑菌活性的影响
Ｆｉｇ．１ 　 Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ ｏｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ
ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｓｔｒａｉｎ ＪＣＬ１４３ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｂｒｏｔｈ ａｇａｉｎｓｔ ｃｏｌｏｎｉａｌ
ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｆｕｎｇｉ ｔｅｓｔｅｄ．
Ⅰ： 黄瓜枯萎病菌 Ｆ． ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ． ｓｐ． ｃｕｃｕｍｅｒｉｎｕｍ； Ⅱ： 立枯病菌 Ｒ．
ｓｏｌａｎｉ； Ⅲ： 菌核病菌 Ｓ． ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ．
３６７３１２期　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 吕　 恒等： 根际真菌对黄瓜土传病害的抑制作用　 　 　 　 　 　
图 ２　 不同 ｐＨ处理对菌株 ＪＣＬ１４３ 发酵液抑制立枯病菌生
长的影响
Ｆｉｇ．２　 Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐＨ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ ｏｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ
ｓｔｒａｉｎ ＪＣＬ１４３ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｂｒｏｔｈ ａｇａｉｎｓｔ ｃｏｌｏｎｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ Ｒｈｉ⁃
ｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ．
菌活性物质在 ｐＨ 中性条件下最为稳定，在偏酸性
条件下比偏碱性条件下的稳定性好，在碱性或强酸
条件下其抑菌活性迅速下降或消失．
２􀆰 ５􀆰 ３蛋白酶稳定性 　 与未经处理的发酵液相比，
分别经蛋白酶 Ｋ、胰蛋白酶、胃蛋白酶 ３７ ℃处理 １ ｈ
的菌株 ＪＣＬ１４３发酵液，对立枯病菌的菌落生长抑制
率分别下降了 ６．６％、１４．１％和 ８．５％，表明 ＪＣＬ１４３发
酵液中对立枯病菌的抑菌活性物质可能不属于蛋白
质或多肽类．
３　 讨　 　 论
根际微生物与植物有着复杂的相互关系，作物
的种类和栽培方式影响着根际微生物的种类组成和
数量，而根际微生物的种类组成和数量变化又对植
物的生长发育产生影响．有研究表明，长期连作导致
植物根际微生物多样性发生改变，有益微生物数量
减少，病原真菌数量不断累积，使根际微生态系统失
衡，从而导致病害加重，作物产量和质量降低［１８－２０］ ．
通过人工接种调节植物根部微生物群落结构，可以
减轻植物土传病害的发生，促进植物的生长［２１－２２］ ．
利用从黄瓜根际土中分离到的非致病性尖镰孢（Ｆ．
ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）来控制黄瓜枯萎病、猝倒病（Ｐｙｔｈｉｕｍ ｕｌｔｉ⁃
ｍｕｍ）等土传病害已有多篇报道［２３－２５］ ．本研究通过
平板对峙试验和温室盆栽试验，发现一株分离自黄
瓜根际土的土曲霉菌株 ＪＣＬ１４３ 对 ３ 种供试土传病
原真菌及其引起的黄瓜土传病害均有较强的抑制作
用，说明土曲霉是土壤中抑制植物土传病害的一种
重要因素．菌株 ＪＣＬ１４３在用包括自然土壤在内的不
同栽培基质的试验中表现出较稳定的抑制病害效
果，有可能通过人工接种菌株 ＪＣＬ１４３，使其在植物
根际形成一定优势，从而调节植物根际微生物群落
结构，保护植物并提高植物抗病性，因而该菌株具有
潜在的应用价值．
土曲霉是曲霉属一个常见类群，有关土曲霉分
泌纤维素酶［２６］、洛伐他汀［２７］、衣康酸［２８］等的研究报
道较多，但是少见关于土曲霉及其活性代谢产物用
于农业生产的报道．何璐等［２９］从苦参种子内分离到
一株土曲霉，发现对黄瓜枯萎病菌有抑制作用；陈正
乾等［３０］从梭鱼内脏分离到一株土曲霉，发现其对多
种细菌有抑制作用，但都没有进一步研究对植物病
害的抑制作用．本研究得到的一株土曲霉菌株
ＪＣＬ１４３不仅对 ３ 种土传病菌及其所致黄瓜病害具
有很好的抑制作用，而且其除菌后的发酵液也对 ３
种土传病菌表现出抑制作用．在对峙培养中出现明
显的抑菌带，说明菌株 ＪＣＬ１４３产生了可在培养基上
扩散的抗菌物质．对发酵液的抑菌作用和稳定性的
初步研究表明，其产生的抗菌物质可能属于次级代
谢产物．抑菌活性成分对高温处理具有不稳定性，但
在 １００ ℃以下活性下降较慢；在中性 ｐＨ 值溶液中
活性最高，对碱性 ｐＨ 值比酸性 ｐＨ 值敏感，这为后
续的进一步分离纯化提供了参考．这些研究结果也
表明，菌株 ＪＣＬ１４３ 可产生具有抗菌作用的代谢产
物，可能是该菌抑制土传病害的一个重要机制．
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Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［７］　 Ｑｉ Ｚ⁃Ｔ （齐祖同）． Ｆｌｏｒａ Ｆｕｎｇｏｒｕｍ Ｓｉｎｉｃｏｒｕｍ Ｖｏｌ． ５：
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Ｓｏｉｌ Ｆｕｎｇｉ． ２ｎｄ Ｅｄ． Ｂｅｒｃｈｔｅｓｇａｄｅｎ： Ｂｅｒｃｈｔｅｓ⁃ｇａｄｅｎｅｒ
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ｈａｉ： Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｐｒｅｓｓ， １９７９ （ｉｎ
Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１０］　 Ｗｅｉｓｉｎｇ Ｋ， Ｎｙｂｏｍ Ｈ， Ｗｏｌｆｆ Ｋ， ｅｔ ａｌ． ＤＮＡ Ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎ⁃
ｔｉｎｇ ｉｎ Ｐｌａｎｔｓ ａｎｄ Ｆｕｎｇｉ． Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ， Ｆｌｏｒｉｄａ： ＣＲＣ
Ｐｒｅｓｓ， １９９５
［１１］　 Ｋｕｓｔｅｒｓ⁃ｖａｎ Ｓｏｍｅｒｅｎ ＭＡ， Ｈａｒｍｓｅｎ ＪＡ， Ｋｅｓｔｅｒ ＨＣ， ｅｔ
ａｌ． Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ ｐｅｌＡ ｇｅｎｅ ａｎｄ ｉｔｓ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ ａｎｄ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ．
Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ， １９９１， ２０： ２９３－２９９
［１２］　 Ｗｅｎｇ Ｚ⁃Ｘ （翁祖信）． Ａ ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｍｅｔｈ⁃
ｏｄ ｏｆ ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｇａｉｎｓｔ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｗｉｌｔ：
Ｔｈｅ ｒａｄｉｃｌｅ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ． Ｃｈｉｎａ Ｖｅｇｅｔａｂｌｅｓ （中国蔬菜），
１９８５（２）： ３０－３３ （ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１３］　 Ｌｉ Ｘ⁃Ｘ （李锡香）， Ｚｈｕ Ｄ⁃Ｗ （朱德蔚）， Ｗａｎ Ｊ⁃Ｍ （万
建民）， ｅｔ ａｌ． Ｄｅｓｃｒｉｐｔｏｒｓ ａｎｄ Ｄａｔａ Ｓｔａｎｄａｒｄ ｆｏｒ Ｃｕｃｕｍ⁃
ｂｅｒ （Ｃｕｃｕｍｉｓ ｓａｔｉｖｕｓ Ｌ． ）． Ｂｅｉｊｉｎｇ： Ｃｈｉｎａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ
Ｐｒｅｓｓ， ２００５ （ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１４］　 Ｈｅ Ｚ⁃Ｑ （贺忠群）， Ｌｉ Ｈ⁃Ｘ （李焕秀）， Ｔａｎｇ Ｈ⁃Ｒ （汤
浩茹）， ｅｔ ａｌ． Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｒｂｕｓｃｕｌａｒ ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ ｆｕｎｇｉ ｏｎ
ｃｕｃｕｍｂｅｒ Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｒｏｔ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｉｃｈｕａｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ （四川农业大学学报）， ２０１０， ２８（２）： ２００－
２０４ （ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１５］　 Ｓｈｅｎｔｕ Ｘ⁃Ｐ （申屠旭萍）， Ｓｈｉ Ｙ⁃Ｊ （石一珺）， Ｙｕ Ｘ⁃Ｐ
（俞晓平）， ｅｔ ａｌ． Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｉｓｏｌａｔｅ
ｆｒｏｍ Ｉｌｅｘ ｃｏｒｎｕｔａ ａｎｄ ｉｔｓ ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ ａｇａｉｎｓｔ Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ
ｓｏｌａｎｉ． Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｅｓｔｉｃｉｄｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ （农药学学
报）， ２０１０， １２（２）： １７３－１７７ （ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１６］　 Ｌｏｎｇ Ｊ⁃Ｙ （龙建友）． Ｂａｓｉｃ Ｓｔｕｄｉｅｓ ｉｎ Ｅａｒｌｉｅｒ Ｓｔａｇｅ ｏｎ
Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｑｉｎｌｉｎｇｅｎｓｉｓ ｓｐ． ｎｏｖ． ＰｈＤ
Ｔｈｅｓｉｓ． Ｙａｎｇｌｉｎｇ： Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ Ａ＆Ｆ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， ２００７： ３８－
４４ （ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１７］　 Ｙｕ Ｊ⁃Ｑ （余佳清）， Ｚｈａｎｇ Ｚ⁃Ｂ （张志斌）， Ｌｉ Ｘ⁃Ｘ （李
希茜）， ｅｔ ａｌ． Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ
ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅ ｓｔｒａｉｎ ＦＸｊ９． Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ （植物保
护）， ２０１３， ３９（５）： １５８－１６４ （ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１８］　 Ｚｈａｎｇ Ｚ⁃Ｙ （张忠义）， Ｃｈｅｎ Ｈ （陈　 辉）， Ｙａｎｇ Ｙ⁃Ｈ
（杨延辉）， ｅｔ ａｌ． Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ ｃｒｏｐｐｉｎｇ ｏｎ ｂａｃ⁃
ｔｅｒｉａｌ ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｉｎ ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ ｓｏｉｌ ｏｆ Ｒｅｈｍａｎ⁃
ｎｉａ ｇｌｕｔｉｎｏｓａ． Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｅｃｏｌｏｇｙ （应用
生态学报）， ２０１０， ２１（１１）： ２８４３－２８４８ （ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１９］　 Ｈｕａｎｇ Ｊ⁃Ｈ （黄京华）， Ｌｕｏ Ｓ⁃Ｍ（骆世明）， Ｚｅｎｇ Ｒ⁃Ｓ
（曾任森）． Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｐｌａｎｔ ｄｉｓｅａｓｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎ⁃
ｄｕｃｅｄ ｂｙ ａｒｂｕｓｃｕｌａｒ ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ ｆｕｎｇｉ． Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｅｃｏｌｏｇｙ （应用生态学报）， ２００３， １４（５）：
８１９－８２２ （ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［２０］　 Ｍｅｎｇ Ｐ⁃Ｐ （孟品品）， Ｌｉｕ Ｘ （刘　 星）， Ｑｉｕ Ｈ⁃Ｚ （邱慧
珍）， ｅｔ ａｌ． Ｆｕｎｇａｌ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｉｔｓ ｂｉｏｌｏｇｉ⁃
ｃａｌ ｅｆｆｅｃｔ ｉｎ ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ ｓｏｉｌ ｏｆ ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｌｙ ｃｒｏｐｐｅｄ ｐｏ⁃
ｔａｔｏ． Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｅｃｏｌｏｇｙ （应用生态学
报）， ２０１２， ２３（１１）： ３０７９－３０８６ （ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［２１］　 Ｓａｌｄａｊｅｎｏ ＭＧＢ， Ｉｔｏ Ｍ， Ｈｙａｋｕｍａｃｈｉ Ｍ． Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｂｅ⁃
ｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｐｌａｎｔ ｇｒｏｗｔｈ ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ ｆｕｎｇｕｓ Ｐｈｏｍａ ｓｐ．
ＧＳ８⁃２ ａｎｄ ｔｈｅ ａｒｂｕｓｃｕｌａｒ ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ ｆｕｎｇｕｓ Ｇｌｏｍｕｓ
ｍｏｓｓｅａｅ： Ｉｍｐａｃｔ ｏｎ ｂｉｏｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｓｏｉｌ⁃ｂｏｒｎｅ ｄｉｓｅａｓｅｓ，
ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｌａｎｔ ｇｒｏｗｔｈ． Ａｕｓｔｒａｌａｓｉａｎ
Ｐｌａｎｔ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ， ２０１２， ４１： ２７１－２８１
［２２］　 Ｗｈｉｐｐｓ ＪＭ． Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｂｉｏｃｏｎｔｒｏｌ ｉｎ ｔｈｅ
ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｂｏｔａｎｙ， ２００１， ５２：
４８７－５１１
［２３］　 Ａｂｅｙｓｉｎｇｈｅ Ｓ． Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ
ｆ． ｓｐ． ｒａｄｉｃｉｓ⁃ｃｕｃｕｍｅｒｉｎｕｍ， ｔｈｅ ｃａｓｕａｌ ａｇｅｎｔ ｏｆ ｒｏｏｔ ａｎｄ
ｓｔｅｍ ｒｏｔ ｏｆ Ｃｕｃｕｍｉｓ ｓａｔｉｖｕｓ ｂｙ ｎｏｎ⁃ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ Ｆｕｓａｒｉｕｍ
ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ． Ｒｕｈｕｎａ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２００６， １： ２４－３１
［２４］　 Ｂｅｎｈａｍｏｕ Ｎ， Ｇａｒａｎｄ Ｃ， Ｇｏｕｌｅｔ Ａ． Ａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｎｏｎｐａｔｈｏ⁃
ｇｅｎｉｃ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｓｔｒａｉｎ ｆｏ４７ ｔｏ ｉｎｄｕｃｅ ｒｅｓｉｓｔ⁃
ａｎｃｅ ａｇａｉｎｓｔ Ｐｙｔｈｉｕｍ ｕｌｔｉｍｕｍ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｃｕｃｕｍｂｅｒ．
Ａｐｐｌｉｅｄ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ， ２００２， ６８：
４０４４－４０６０
［２５］　 Ｍａｎｄｅｅｌ Ｑ， Ｂａｋｅｒ Ｒ． Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｗｉｌｔ ｏｆ ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｗｉｔｈ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ ｎｏｎ⁃
ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ． Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ， １９９１，
８１： ４６２－４６９
［２６］　 Ｇａｏ Ｊ⁃Ｍ （高建民）， Ｗｅｎｇ Ｈ⁃Ｂ （翁海波）， Ｘｉ Ｙ （席
宇）， ｅｔ ａｌ． Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｎ ａ ｔｈｅｒｍｏａｃｉ⁃
ｄｏｐｈｉｌｉｃ ｆｕｎｇｕｓ ｏｆ ｈｉｇｈ⁃ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｃｅｌｌｕｌａｓｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｈａ⁃
ｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｉｔｓ ｅｎｚｙｍｅ． Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ （微生物学通
报）， ２００７， ３４（４）： ７１５－７１８ （ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［２７］　 Ａｓｋｅｎａｚｉ Ｍ， Ｄｒｉｇｇｅｒｓ ＥＭ， Ｈｏｌｔｚｍａｎ ＤＡ， ｅｔ ａｌ． Ｉｎ⁃
ｔｅｇｒａｔｉｎｇ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ａｎｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ ｐｒｏｆｉｌｅｓ ｔｏ ｄｉｒｅｃｔ
ｔｈｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｏｆ ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ⁃ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｆｕｎｇａｌ ｓｔｒａｉｎｓ．
Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， ２００３， ２１： １５０－１５６
［２８］　 Ｈｕａｎｇ Ｘ， Ｃｈｅｎ Ｍ， Ｌｕ Ｘ， ｅｔ ａｌ． Ｄｉｒｅｃｔ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ
ｉｔａｃｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｆｒｏｍ ｌｉｑｕｅｆｉｅｄ ｃｏｒｎ ｓｔａｒｃｈ ｂｙ ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ
ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｔｅｒｒｅｕｓ． Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｃｅｌｌ Ｆａｃｔｏｒｉｅｓ，
２０１４， １３（１）： １０８， Ｄｏｉ：１０． １１８６ ／ ｓ１２９３４⁃０１４⁃０１０８⁃１
［２９］　 Ｈｅ Ｌ （何　 璐）， Ｊｉ Ｍ⁃Ｓ （纪明山）， Ｌｉｕ Ｎ （刘　 娜），
ｅｔ ａｌ． Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ ｅｎｔｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｕｓ
ｆｒｏｍ Ｓｏｐｈｏｒａ ｆｌａｖｅｓｃｅｎｓ ａｎｄ ｉｔｓ ｍｉｃｒｏｂｉｏｓｔａｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ．
Ａｃｔａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｅ Ｓｈａｎｇｈａｉ （上海农业学报）， ２０１１，
２７（４）： ８３－８６ （ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［３０］　 Ｃｈｅｎ Ｚ⁃Ｑ （陈正乾）， Ｌｉｕ Ｐ⁃Ｐ （刘培培）， Ｗａｎｇ Ｙ
（王　 乂）， ｅｔ ａｌ． Ｔｈｅ ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ｐｏｌｙｋｅｔｉｄｅｓ ｏｆ Ａｓｐｅｒ⁃
ｇｉｌｌｕｓ ｔｅｒｒｅｕｓ ＯＵＣＭＤＺ⁃１９２５ ｆｒｏｍ Ｙｅｌｌｏｗ Ｒｉｖｅｒ ｄｅｌｔａ．
Ｍｙｃｏｓｙｓｔｅｍａ （菌物学报）， ２０１３， ３２（２）： ２７７ － ２８５
（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ）
作者简介　 吕　 恒，男，１９８９ 年生，硕士研究生．主要从事农
业微生物研究． Ｅ⁃ｍａｉｌ： １０３５３６１９８８＠ ｑｑ． ｃｏｍ
责任编辑　 肖　 红
５６７３１２期　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 吕　 恒等： 根际真菌对黄瓜土传病害的抑制作用