全 文 ：烟草赤星病菌拮抗性大豆根瘤内
生菌的筛选及抑制作用
赵龙飞∗　 徐亚军　 侯怡婷　 邹艳慧　 李亚楠　 杨志华　 李小雨　 张梦瑶
（河南省高校植物与微生物互作重点实验室 ／商丘师范学院生命科学学院， 河南商丘 ４７６０００）
摘　 要　 以烟草赤星病菌为供试病原菌，采用对峙法、代谢液培养法对分离自大豆根瘤的内
生细菌进行抑菌筛选，对筛选菌株作用的病原菌菌丝进行显微观察，研究筛选菌株细胞培养
特征及生理生化特性、１６Ｓ ｒＤＮＡ测序序列、系统发育，以及进行温室接种防病试验．结果表明：
大豆根瘤内生菌经初筛、复筛，对烟草赤星病菌抑菌率 ４２％以上的有 ７株菌，分别属于芽孢杆
菌属、假单胞菌属、中华根瘤菌属和寡养单胞菌属．显微观察表明，在拮抗性内生菌作用下病
原菌菌丝末端出现明显畸形，呈珊瑚状分枝、球状膨大等；代谢液试验表明，内生菌对病原菌
的抑制作用主要是内生菌代谢产生的胞外物质在发挥作用；对峙试验表明，芽孢杆菌可迅速
形成生物薄膜，有效阻碍病原菌丝生长和延伸．盆栽防病试验表明，拮抗性内生菌处理下烟草
病情指数显著低于对照，表明筛选菌株可作为烟草赤星病的生防菌株资源．
关键词　 烟草赤星病菌； 根瘤内生菌； １６Ｓ ｒＤＮＡ测序； 系统发育； 生物防治
Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｓｏｙｂｅａｎ （Ｇｌｙｃｉｎｅ
ｍａｘ） ｎｏｄｕｌｅｓ ａｇａｉｎｓｔ Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｌｏｎｇｉｐｅｓ． ＺＨＡＯ Ｌｏｎｇ⁃ｆｅｉ∗， ＸＵ Ｙａ⁃ｊｕｎ， ＨＯＵ Ｙｉ⁃ｔｉｎｇ， ＺＯＵ
Ｙａｎ⁃ｈｕｉ， ＬＩ Ｙａ⁃ｎａｎ， ＹＡＮＧ Ｚｈｉ⁃ｈｕａ， ＬＩ Ｘｉａｏ⁃ｙｕ， ＺＨＡＮＧ Ｍｅｎｇ⁃ｙａｏ （Ｈｅｎａｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏ⁃
ｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｐｌａｎｔ⁃Ｍｉｃｒｏｂｅ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ／ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｓｈａｎｇｑｉｕ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｓｈａｎｇｑｉｕ
４７６０００， Ｈｅｎａｎ， Ｃｈｉｎａ） ．
Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｕｓｉｎｇ Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｌｏｎｇｉｐｅｓ ａｓ ｔｅｓｔｅｄ ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｇｅｎ， ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｓｏｙ⁃
ｂｅａｎ ｎｏｄｕｌｅｓ ｗｅｒｅ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔｓ ｂｙ ｃｏｎｆｒｏｎｔａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ｌｉｑｕｉｄ ｃｕｌｔｕｒｅ
ｍｅｔｈｏｄｓ． Ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｈｙｐｈａｅ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃ ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ， ａｎｄ ｔｈｅ ｓｃｒｅｅｎｅｄ
ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ ｂｙ ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ， ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｔｅｓｔｓ， １６Ｓ ｒＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎ⁃
ｃｉｎｇ， ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｔｒｉａｌｓ ｉｎ ｇｒｅｅｎｈｏｕｓｅ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｓｅｖｅｎ
ｏｆ ｔｈｅ ｅｎｄｏｐｈｙｔｅｓ ｅｘｅｒｔｅｄ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ４２％ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｅｃｏｎｄ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ．
Ｔｈｅｓｅ ｓｔｒａｉｎｓ ｂｅｌｏｎｇｅｄ ｔｏ ｇｅｎｕｓ Ｂａｃｉｌｌｕｓ， Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ， Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ａｎｄ Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ， ｒｅ⁃
ｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃ ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ａｆｆｅｃｔｅｄ ｈｙｐｈａｅ ｅｎｄｓ ｏｆ Ａ． ｌｏｎｇｉｐｅｓ ａｐｐｅａｒ ｄｅ⁃
ｆｏｒｍｉｔｙ ｏｆ ｃｏｒａｌｌｉｎｅ ｂｒａｎｃｈ， ｓｐｈｅｒｉｃａｌ ｅｘｐａｎｓｉｏｎｓ ａｎｄ ｓｏ ｏｎ． Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｍｅｔａｂｏ⁃
ｌｉｔｅｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ａｇａｉｎｓｔ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｆｕｎｇｕｓ ｐｌａｙｅｄ ａｎ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ
ｒｏｌｅ ｍａｉｎｌｙ ｂｙ ｂａｃｔｅｒｉａ ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ． Ｃｏｎｆｒｏｎｔａｔｉｏｎ ｔｅｓｔｓ ｓｕｇｇｅｓｔｅｄ ｔｈａｔ ｅｎｄｏ⁃
ｐｈｙｔｉｃ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｒａｐｉｄｌｙ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｉｏｆｉｌｍ ｔｏ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ ｈｉｎｄｅｒ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ ｏｆ ｐａｔｈｏｇｅｎ
ｈｙｐｈａｅ． Ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎｄｅｘ ｏｆ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ
ｌｏｗｅｒｅｄ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ， ｓｕｇｇｅｓｔｉｎｇ ｉｔ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｕｔｉｌｉｚｅｄ ａｓ ａ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｒｅｓｏｕｒｃｅ
ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ｔｏｂａｃｃｏ ｂｒｏｗｎ ｓｐｏｔ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｌｏｎｇｉｐｅｓ； ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ｏｆ ｒｏｏｔ ｎｏｄｕｌｅｓ； １６Ｓ ｒＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ； ｐｈｙ⁃
ｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ； ｂｉｏｃｏｎｔｒｏｌ．
本文由国家自然科学基金项目（Ｕ１２０４３０１）和河南省高校青年骨干教师项目（２０１２ＧＧＪＳ１６６）资助 Ｔｈｉｓ ｗｏｒｋ ｗａｓ ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｎａｔｕｒａｌ
Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｈｉｎａ （Ｕ１２０４３０１） ａｎｄ ｔｈｅ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｃａｄｒｅ Ｔｅａｃｈｅｒ ｏｆ Ｈｅｎａｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ （２０１２ＧＧＪＳ１６６）．
２０１５⁃０９⁃１７ Ｒｅｃｅｉｖｅｄ， ２０１６⁃０２⁃１０ Ａｃｃｅｐｔｅｄ．
∗通讯作者 Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ． Ｅ⁃ｍａｉｌ： ｈｎｚｈａｏｌｏｎｇｆｅｉ＠ １６３．ｃｏｍ
应 用 生 态 学 报　 ２０１６年 ５月　 第 ２７卷　 第 ５期　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 ｈｔｔｐ： ／ ／ ｗｗｗ．ｃｊａｅ．ｎｅｔ
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｅｃｏｌｏｇｙ， Ｍａｙ ２０１６， ２７（５）： １５６０－１５６８　 　 　 　 　 　 　 　 　 ＤＯＩ： １０．１３２８７ ／ ｊ．１００１－９３３２．２０１６０５．０２４
　 　 烟草赤星病是烟草栽培过程中主要病害之一，
病菌以菌丝体形式在植株上越冬，产生分生孢子并
通过气流传播、侵染，遇降雨偏多、湿度较大环境此
病害就快速蔓延、传染，造成烟草品质和产量下降，
给烟农带来重大经济损失［１］ ．目前，国内防治烟草赤
星病主要依赖于化学药剂，长期依赖化学药剂不仅
导致农业残留超标、病原菌产生抗性，而且会带来环
境污染、破坏生态平衡．由于烟草是我国重要经济作
物，对烟叶品质和外观都有严格要求，防治措施的改
进和提高是栽培过程面临的一项挑战，也是生物防
治在烟草上进行综合治理的发展方向．因此，研究和
开发一种环保有效的生物防治剂是微生物学、植物
保护学、生态学亟待解决的问题．
植物内生细菌是一类在其生活史某一阶段或全
部阶段生活于植物组织细胞间隙或细胞内、不引起
宿主发生明显致病性变化的一类细菌群体．它具有
定殖效果好、受环境影响小的优点，作用更稳定持
久．由于内生菌受植物组织保护、生存环境相对稳
定，内生菌对宿主发挥着重要功能，如产生植物生长
激素、抗生素、毒素类物质，提高植物抗病、抗逆能
力；产生铁载体，占据营养空间，抑制病原菌生长
等［２］ ．因此，利用内生细菌防治病害具有广泛的应用
潜能．目前，已报道内生细菌类群中，大多数为土壤
微生物种类，其中固氮菌属（Ｄｉａｚｏｔｒｏｐｈｉｃｕｓ）、芽孢杆
菌属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、假单胞菌属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、土壤杆
菌属（ Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、泛菌属 （Ｐａｎｔｏｅａ）等较为常
见［３］，而利用植物内生菌防治植物病害已成为生物
防治的热点．研究发现，大豆根瘤内生菌和根瘤菌共
处于根瘤微环境，二者和宿主互惠互利，具有固氮、
促生、抗逆、抗病等优点，且有易入侵、易定殖特
性［４－６］ ．但目前，关于大豆根瘤内生菌抑制烟草赤星
病菌的研究尚未见报道．在前期工作中，我们分离和
保藏了采自河南省部分地区的大豆根瘤内生菌样
品，分析其溶磷性、促生等特性［７］，本试验进一步筛
选大豆根瘤内生菌资源来抑制烟草赤星病菌，初步
探讨其抑菌机理，该工作对抑制病害的发生、研发生
物防治剂、维持生态平衡具有重要意义．
１　 材料与方法
１􀆰 １　 供试菌株和培养基
烟草赤星病菌（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｌｏｎｇｉｐｅｓ）ＡＡ１０３，具较
强致病力，由西北农林科技大学生命科学学院惠赠，
根瘤内生菌分离自河南省不同地区采集的大豆
根瘤．
供试培养基为 ＹＭＡ 培养基［７］ 和 ＰＤＡ 培养
基［８］ ．
１􀆰 ２　 大豆根瘤内生菌的分离、纯化和保藏
采用平板划线法将消毒过的大豆根瘤夹碎，挤
出汁液，涂抹在 ＹＭＡ培养基表面，对单菌落经反复
划线、分离，经染色、镜检获得纯菌株．将其保藏到培
养基斜面短期保藏或甘油管保藏于 － ８０ ℃ 冰
箱［９－１０］ ．
１􀆰 ３　 烟草赤星病菌拮抗性内生菌的初筛
在无菌条件下将烟草赤星病菌菌饼接种于
ＰＤＡ平板中央，置于恒温培养箱 ３０ ℃培养 ２ ｄ，在
菌饼周围距边缘 ２．５ ｃｍ 处均匀地接种 ５ 株不同内
生菌，接菌量为 ３０ μＬ菌悬液，先置于培养箱培养 １
ｈ后再倒置于培养箱中 ３０ ℃培养 ３ ｄ，以只接病原
菌不接内生菌的平板作为对照．观察并测量受抑制
病菌菌落半径和对照菌落直径大小，受抑制病菌菌
落半径为病菌菌落圆心至受抑制病菌菌落边缘间的
最短距离．每隔 ２４ ｈ 测量对照和处理组菌落半径大
小，测量 ３次，采用抑菌率＝（对照菌落直径－处理菌
落直径） ／对照菌落直径×１００％计算抑制率［１０］ ．
１􀆰 ４　 烟草赤星病菌拮抗性内生菌的复筛
复筛方法与初筛基本类似，差别在于：病原菌培
养 ２ ｄ后，把内生菌制成的菌悬液调整 ＯＤ６００值为
０􀆰 ８～ １，用移液器吸取 ３０ μＬ 菌悬液接种于菌饼边
缘，每个菌饼边缘接 ３株同种内生菌，在培养箱中培
养 １ ｈ后于 ３０ ℃下倒置培养，每天观察并记录受抑
制病菌菌落直径和对照菌落直径大小，计算抑菌率．
以接种等量无菌水的病原真菌菌落作为对照，每处
理 ３次重复．
１􀆰 ５　 拮抗菌株代谢液的抑菌活性测定
取 １ ｍＬ活化的抑菌活性菌株接种到装有 ２００
ｍＬ ＹＭ液体培养基的锥形瓶中，３０ ℃ １２０ ｒ·ｍｉｎ－１
恒温震荡培养 ７ ｄ 后，８０００ ｒ·ｍｉｎ－１离心 １０ ｍｉｎ 后
收集上清，在无菌条件使用 ０．２２ μｍ 细菌微孔滤膜
过滤上清液除菌，滤液用于代谢产物活性测定．取 １０
ｍＬ滤液与 １５０ ｍＬ灭菌冷却至 ６０ ℃的 ＰＤＡ培养基
混合均匀制成平板，以添加等量无菌水代替滤液的
平板作为对照，将直径为 ０．５ ｃｍ生长旺盛的植物病
原菌菌饼接种在平板上．每处理 ３ 次重复，置于 ３０
℃恒温培养 ５ ｄ，测量处理和对照菌落直径，计算抑
菌率．
１􀆰 ６　 受抑制病原菌菌丝的显微观察
培养 ４８ ｈ 后把复筛受抑制病原菌菌落置于倒
置显微镜的载物台上，观察受抑制病原菌菌丝和对
１６５１５期　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 赵龙飞等： 烟草赤星病菌拮抗性大豆根瘤内生菌的筛选及抑制作用　 　 　 　 　
照菌丝间形态变化，拍照并记录观察结果．
１􀆰 ７　 筛选菌株的培养特征及生理生化测试
对筛选拮抗性菌株进行菌落、细胞以及生理生
化等表型特征测定，方法参见文献［１１］．
１􀆰 ８　 １６Ｓ ｒＤＮＡ 序列测定及系统发育分析
采用 ＣＴＡＢ法提取内生菌基因组 ＤＮＡ，以基因
组 ＤＮＡ为模板，进行 １６Ｓ ｒＤＮＡ扩增［３］，所用正向引
物 Ｐ１： ５′⁃ＣＧＧＧＡＴＣＣＡＧＡＧＴＴＴＧＡＴＣＣＴＧＧＣＴＣＡＧ⁃
ＡＡＣＧＡＡＣＧＣＴ⁃３′，反向引物 Ｐ２： ５′⁃ＣＧＧＧＡＴＣＣＴ⁃
ＡＣＧＧＣＴＡＣＣＴＴＧＴＴＡＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＣ⁃３′，分别对应
大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ） １６Ｓ ｒＲＮＡ 基因序列上
８～３７和 １４７９ ～ １５０６ ｂｐ 位置，目的片段大小约 １５００
ｂｐ，获得序列提交 ＧｅｎＢａｎｋ．使用 ＣｌｕｓｔａｌＸ １􀆰 ８１ 软件
进行序列比对，Ｂｉｏｅｄｉｔ ４． ８． ４ 进行手工纠正，使用
ＴＲＥＮＣＯＮＷ软件以 Ｎｅｉｇｈｂｏｒ⁃ｊｏｉｎｉｎｇ 方法构建系统
发育树，用 Ｂｏｏｔｓｔｒａｐ 重复 １０００ 次进行可信度评估．
用 ＤＮＡＭＡＮ ６．０进行序列相似性分析．
１􀆰 ９　 接种内生细菌对烟草赤星病的防治效果试验
烟草长至第 １２片真叶展开后，活化筛选菌株后
制成菌悬液（浓度 ６×１０８ ｃｆｕ·ｍＬ－１），喷洒在烟苗
上，以叶面布满雾点为宜．每菌株重复 ３ 次，每重复
处理 ５ 株烟苗，置于 ２５ ℃保湿培养．２４ ｈ 后悬滴法
接种，病菌 ＡＡ１０３ 孢子含量为 １×１０６ 个·ｍＬ－１的
悬液．每株接种在第 ４片真叶到倒数第 ４ 片真叶上，
每叶接种 １０滴，每滴 ３０ μＬ，置于 ２５ ～ ２８ ℃保湿培
养 ７ ｄ．用无菌水代替内生菌悬液接种的苗子为对照
组（ＣＫ）．严重程度分级标准如下：０级，无病症，不致
病，叶色油绿；１级，病斑有针尖大小，０ ～ ０．５ ｍｍ，叶
色绿色，病斑微泛黄；２ 级，病斑直径 ０．５ ～ ２ ｍｍ，叶
色黄绿，有褐色小斑；３ 级，病斑直径 ２ ～ ５ ｍｍ，叶色
泛黄色褐斑明显；４级，病斑直径 ５ ｍｍ以上，叶色局
部黄色发白，病斑周围枯死．病情指数 ＝∑（该级叶
数×病害等级） ／ （调查叶数×最严重等级） ×１００；防
治效果＝［（对照病情指数－处理病情指数） ／对照病
情指数］×１００％．７ ｄ 后统计各菌株的叶片接种点发
病率、发病严重度和病情指数．
利用 ＳＰＳＳ １７． ０ 软件对数据进行统计分析．采
用双因素随机方差分析（ｔｗｏ⁃ｗａｙ ＡＮＯＶＡ）和最小显
著差数法（ＬＳＤ）分析菌落直径和对照菌落直径对抑
菌率的影响，显著性水平设定为 α＝ ０．０５．
２　 结果与分析
２􀆰 １　 拮抗性大豆根瘤内生菌的初筛
共获得 ２７６株内生细菌，经初筛对烟草赤星病
菌有抑制作用的内生菌共 ５４ 株，其中抑菌率大于
３０％有 ２３株（表 １），占分离菌株 ８．３％．其中，对烟草
赤星病菌抑制率最大者为菌株 ＤＤ１７４（５７．３％）；其
次为 ＤＤ１７９，抑菌率为 ５０．０％；抑制率最小菌株为
ＤＤ１６８（３０．５％）．可见，不同大豆根瘤内生菌对烟草
赤星病菌抑制效果不同．
２􀆰 ２　 对烟草赤星抑制作用大豆根瘤内生菌的复筛
对初筛获得的 ２３ 株有抑制作用的根瘤内生菌
进行复筛，其中抑菌现象仍较明显的有 ７ 株．由表 ２
可知，大豆根瘤内生菌对烟草赤星病原菌抑菌率
（７２ ｈ）均达到 ４２％以上，其中对病原菌抑制率最大
的菌株为 ＤＤ１７４，抑菌率为 ６２．３％．抑制率最小菌株
为 ＤＤ００７，其抑菌率为 ４２．３％．统计分析表明，菌株
间对病原菌的抑菌率呈显著差异．复筛与初筛结果
基本一致，印证了不同大豆根瘤内生菌对烟草赤星
病原菌抑制作用存在差异性，且培养 ７２ ｈ 抑菌效果
较好．
在复筛过程中，菌株 ＤＤ１７４、ＤＤ１７９ 对病原菌
的抑制情况如图 １所示．随时间的延长，对照组烟草
赤星病原菌菌落逐渐变大，且菌落圆整（图 １Ａ）；但
处理组烟草赤星病原菌落变化不明显，并在病原菌
菌落周围的培养基表面形成一层湿润菌膜（包含次
生代谢产物）（图 １Ｂ、Ｃ箭头所示），对烟草赤星病菌
产生抑制作用．
２􀆰 ３　 拮抗菌株代谢液活性
根据平板复筛结果，对复筛菌株进行内生菌代
表 １　 内生菌对烟草赤星病原菌的抑制作用初筛结果
Ｔａｂｌｅ １　 Ｆｉｒｓｔ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｅｎｄｏ⁃
ｐｈｙｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ａｇａｉｎｓｔ Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｌｏｎｇｉｐｅｓ ＡＡ１０３ （ ７２ ｈ，
ｍｅａｎ±ＳＤ）
菌株
Ｓｔｒａｉｎ
菌落直径
Ｃｏｌｏｎｙ
ｄｉａｍｅｔｅｒ
（ｃｍ）
抑菌率
Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ
ｒａｔｅ
（％）
菌株
Ｓｔｒａｉｎ
菌落直径
Ｃｏｌｏｎｙ
ｄｉａｍｅｔｅｒ
（ｃｍ）
抑菌率
Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ
ｒａｔｅ
（％）
ＣＫ ２．６２±０．０１ － ＤＤ０１２ １．６１±０．０１ ３８．６±０．０ｆ
ＤＤ１７４ １．１２±０．０１ ５７．３±０．０ａ ＤＤ２３０ １．６３±０．０１ ３７．８±０．２ｆ
ＤＤ１７９ １．３１±０．０２ ５０．０±０．９ｂ ＤＤ２５４ １．６３±０．０１ ３７．８±０．１ｆ
ＤＤ２０１ １．３２±０．０１ ４９．６±０．１ｂ ＤＤ２５５ １．６４±０．０１ ３７．４±０．０ｆ
ＤＤ０２９ １．３４±０．０１ ４８．９±０．８ｃ ＤＤ１７６ １．７３±０．０１ ３４．０±０．１ｆ
ＤＤ０５２ １．３６±０．０１ ４８．１±０．４ｃ ＤＤ２９５ １．７３±０．０１ ３４．０±０．１ｇ
ＤＤ１６６ １．４３±０．０１ ４５．４±０．４ｄ ＤＤ２９７ １．７３±０．０１ ３４．０±０．１ｇ
ＤＤ００７ １．４９±０．０２ ４２．１±０．８ｅ ＤＤ２５３ １．７７±０．０１ ３２．４±０．１ｇ
ＤＤ２５２ １．５２±０．０１ ４２．０±１．８ｅ ＤＤ０１１ １．７７±０．０１ ３２．４±０．１ｇ
ＤＤ１７０ １．６１±０．０１ ３８．６±０．１ｆ ＤＤ２３４ １．８１±０．０１ ３０．９±０．１ｇｈ
ＤＤ３０７ １．６１±０．０１ ３８．６±０．８ｆ ＤＤ０５６ １．８２±０．０２ ３０．５±０．１ｈ
ＤＤ３０９ １．６１±０．０１ ３８．６±０．３ｆ ＤＤ１６８ １．８２±０．０１ ３０．５±０．１ｈ
ＣＫ： 对照 Ｃｏｎｔｒｏｌ． 同列数据不同字母表示差异显著（Ｐ＜０．０５）Ｄｉｆｆｅ⁃
ｒｅｎｔ ｓｍａｌｌ ｌｅｔｔｅｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｃｏｌｕｍｎ ｍｅａｎｔ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ａｔ ０．０５
ｌｅｖｅｌ． 下同 Ｔｈｅ ｓａｍｅ ｂｅｌｏｗ．
２６５１ 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 应　 用　 生　 态　 学　 报　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 ２７卷
表 ２　 大豆根瘤内生菌对烟草赤星的抑制作用复筛结果
Ｔａｂｌｅ ２　 Ｓｅｃｏｎｄ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ａｇａｉｎｓｔ Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｌｏｎｇｉｐｅｓ ＡＡ１０３
菌株
Ｓｔｒａｉｎ
２４ ｈ菌落直径
Ｃｏｌｏｎｙ ｄｉａｍｅｔｅｒ
ａｔ ２４ ｈ （ｃｍ）
２４ ｈ抑菌率
Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｅ
ａｔ ２４ ｈ （％）
４８ ｈ菌落直径
Ｃｏｌｏｎｙ ｄｉａｍｅｔｅｒ
ａｔ ４８ ｈ （ｃｍ）
４８ ｈ抑菌率
Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｅ
ａｔ ４８ ｈ （％）
７２ ｈ菌落直径
Ｃｏｌｏｎｙ ｄｉａｍｅｔｅｒ
ａｔ ７２ ｈ （ｃｍ）
７２ ｈ抑菌率
Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｅ
ａｔ ７２ ｈ （％）
ＣＫ ３．５１±０．０２ － ４．８８±０．０１ － ６．１２±０．０１ －
ＤＤ１７４ ２．６１±０．０３ ２５．６±０．０２ａ ３．４４±０．０１ ２９．５±０．０３ａ ２．３１±０．０２ ６２．３±０．０１ａ
ＤＤ１７９ ２．７４±０．０１ ３５．３±０．０１ｂ ２．４３±０．０２ ５０．２±０．０１ｂ ２．４５±０．０１ ６０．０±０．０１ｂ
ＤＤ２０１ ２．８４±０．０１ １９．１±０．０３ｃ ２．８６±０．０１ ４１．４±０．０１ｃ ２．６２±０．０１ ５７．２±０．０１ｃ
ＤＤ０２９ ２．８４±０．０３ １９．１±０．０３ｄ ２．９１±０．０３ ４０．４±０．０１ｄ ２．７８±０．０２ ５４．６±０．０２ｄ
ＤＤ０５２ ２．２７±０．０２ ２１．９±０．０１ｅ ２．９２±０．０１ ４０．２±０．０１ｅ ３．２６±０．０２ ４６．７±０．０１ｅ
ＤＤ１６６ ２．８６±０．０１ １８．５±０．０１ｆ ２．９１±０．０２ ４０．４±０．０１ｄ ３．４５±０．０２ ４３．６±０．０１ｆ
ＤＤ００７ ３．０１±０．０２ １４．３±０．０２ｇ ３．１８±０．０１ ３４．８±０．０２ｆ ３．５３±０．０２ ４２．３±０．０１ｇ
图 １　 内生菌对烟草赤星病菌的拮抗作用（培养 ７２ ｈ）
Ｆｉｇ．１　 Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ａｇａｉｎｓｔ Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｌｏｎｇｉｐｅｓ ＡＡ１０３ ａｆｔｅｒ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ７２ ｈｏｕｒｓ．
Ａ： 对照 ＣＫ； Ｂ： ＤＤ１７４； Ｃ： ＤＤ１７９． 下同 Ｔｈｅ ｓａｍｅ ｂｅｌｏｗ．
谢液抑制病原菌活性测定试验．从表 ３ 可以看出，使
用代谢液处理培养基上病原菌 ２４ ｈ 最大抑制率达
３７．２％，其他菌株在 ２２．２％以上；培养 ４８ ｈ 时最大抑
菌率为 ６１．５％，其他菌株在 ３４．０％以上．培养 ７２ ｈ 最
大抑菌率为 ６２．６％，其他菌株在 ４１．３％以上．菌株代
谢液间对病原菌的抑菌率呈显著差异．表明内生菌
代谢液对病原菌是逐步发挥抑菌作用的，在接种 ７２
ｈ的抑制效果较好．和复筛抑制率的结果基本一致，
进一步说明内生菌对病原菌抑制作用主要是菌体代
谢产生的胞外产物在发挥作用．
２􀆰 ４　 受抑制病原菌菌丝的显微观察
观察可知，对照病原菌菌丝粗细均匀，颜色一致
（图 ２Ａ）．在 ＤＤ１７４作用下，病原菌菌丝成为结节状
（图 ２Ｂａ），菌丝末端逐渐变细，且其上有斑点，有菌
丝弯曲（图 ２Ｂｂ、ｃ），并相互缠绕（图 ２Ｂｄ）；ＤＤ１７９作
用下菌丝变得畸形，分支多且短，呈毛发状，且菌丝
透明状（图 ２Ｃｅ）；ＤＤ２０１ 作用菌丝，多形成瘤状结
（图２Ｄｆ），菌丝畸形（图２Ｄｇ），有菌丝相互缠绕（图
表 ３　 复筛菌株代谢液对烟草赤星病菌 ＡＡ１０３的拮抗作用
Ｔａｂｌｅ ３　 Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｓｅｃｏｎｄ ｓｃｒｅｅｎｅｄ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ａｇａｉｎｓｔ Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｌｏｎｇｉｐｅｓ ＡＡ１０３
菌株
Ｓｔｒａｉｎ
菌落直径
Ｃｏｌｏｎｙ ｄｉａｍｅｔｅｒ
（ｃｍ）
２４ ｈ抑菌率
Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｅ
ａｔ ２４ ｈ （％）
菌落直径
Ｃｏｌｏｎｙ ｄｉａｍｅｔｅｒ
（ｃｍ）
４８ ｈ抑菌率
Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｅ
ａｔ ４８ ｈ （％）
菌落直径
Ｃｏｌｏｎｙ ｄｉａｍｅｔｅｒ
（ｃｍ）
７２ ｈ抑菌率
Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｅ
ａｔ ７２ ｈ （％）
ＣＫ ３．６０±０．０３ － ５．２０±０．０１ － ６．１０±０．０２ －
ＤＤ１７４ ２．２６±０．０１ ３７．２±０．０１ａ ２．００±０．０１ ６１．５±０．０１ａ ２．２８±０．０１ ６２．６±０．０１ａ
ＤＤ１７９ ２．２７±０．０１ ３６．９±０．０１ｂ ２．５８±０．０１ ５０．４±０．０１ｂ ２．３７±０．０１ ６１．２±０．０１ｂ
ＤＤ２０１ ２．５４±０．０１ ２９．４±０．０１ｃ ３．０１±０．０２ ４２．１±０．０１ｃ ２．６４±０．０１ ５６．７±０．０１ｃ
ＤＤ０２９ ２．６８±０．０１ ２５．６±０．０１ｄ ３．０７±０．０１ ４１．０±０．０１ｄ ２．８３±０．０１ ５３．６±０．０１ｄ
ＤＤ０５２ ２．７３±０．０１ ２４．２±０．０１ｅ ３．２３±０．０１ ３７．９±０．０１ｅ ３．１７±０．０１ ４８．０±０．０１ｅ
ＤＤ１６６ ２．６８±０．０１ ２５．６±０．０１ｄ ３．３０±０．０１ ３６．５±０．０１ｆ ３．３３±０．０１ ４５．４±０．０２ｆ
ＤＤ００７ ２．８０±０．０１ ２２．２±０．０１ｆ ３．４３±０．０１ ３４．０±０．０１ｇ ３．５８±０．０１ ４１．３±０．０１ｇ
３６５１５期　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 赵龙飞等： 烟草赤星病菌拮抗性大豆根瘤内生菌的筛选及抑制作用　 　 　 　 　
图 ２　 受抑制作用病原菌菌丝显微变化
Ｆｉｇ．２　 Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃ ｐｈｏｔｏｇｒａｐｈｙ ｏｆ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｈｙｐｈａｅ ｏｆ Ａｌｔｅｒｎａ⁃
ｒｉａ ｌｏｎｇｉｐｅｓ （７２ ｈ， ×２００）．
Ｄ： ＤＤ２０１．
Ｄｈ），菌丝末端变得透明，形成球状膨大（Ｄｉ）．
２􀆰 ５　 筛选菌株的培养特征及生理生化特性
筛选菌株经 ７２ ｈ培养，菌落及菌体特征见图 ３、
表 ４．菌落多呈乳白色、湿润，其中 ＤＤ０２９、ＤＤ０５２、
ＤＤ１６６菌落较湿润．理化特性试验结果表明（表 ４），
７株菌对接触酶、ＶＰ 试验、Ｄ⁃葡萄糖产酸反应、肉汤
反应结果均为阳性；Ｌ⁃阿拉伯糖产酸只有 ＤＤ０５２ 反
应阳性；Ｄ⁃甘露醇除 ＤＤ１７４、ＤＤ００７ 外其余菌株反
应均为阳性；木糖试验只有 ＤＤ１７４、ＤＤ１７９、ＤＤ００７
为阴性，淀粉酶反应 ＤＤ２０１、ＤＤ０２９、ＤＤ００７ 均为阴
性 ，苯丙氨酸脱氨酶反应只有ＤＤ０５２为阳性，卵黄
磷脂酶、酪氨酸水解 ＤＤ２０１、ＤＤ０２９、ＤＤ０５２ 均为阴
性反应，硝酸还原酶除 ＤＤ２０１、ＤＤ０２９ 外均为阳性
反应，酪素分解除 ＤＤ０５２ 外其余均为阳性，柠檬酸
盐利用 ＤＤ２０１、ＤＤ０２９ 为阴性．菌体均成杆状，大小
为（０．６ ～ １．０） ×（１．５ ～ ５．０） μｍ．经革兰氏染色，除
ＤＤ０５２外其余均为革兰氏阳性，二分裂繁殖方式．菌
体 ＤＤ１７４、ＤＤ１７９、ＤＤ００７ 有芽孢．结合菌体培养特
征和生理生化反应特性，ＤＤ０２９、ＤＤ２０１ 符合假单胞
菌属 Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ 特征，ＤＤ１７４、ＤＤ１７９、ＤＤ００７ 符合
芽孢杆菌属 Ｂａｃｉｌｌｕｓ 特征，ＤＤ０５２ 和 ＤＤ１６６ 分别
符合中华根瘤菌属 Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ、寡养单胞菌属
Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ特征．
２􀆰 ６　 １６Ｓ ｒＤＮＡ序列测定及系统发育分析
获得 ７ 株菌的 １６Ｓ ｒＤＮＡ 序列，片段大小均
１５００ ｂｐ，获得序列号为 ＫＴ２１６６１５ ～ ＫＴ２１６６２０、
ＫＦ８４３７１７．在 ＮＣＢＩ 数据库中搜索与其具有较高相
似性的参比菌株，构建系统发育树（图 ３）和进行序
列相似性分析．由图 ４ 可知，系统发育树整体分为 ４
个主分支和一个边缘支（大肠杆菌 Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ
Ｕ５ ／ ４１Ｔ），４个主分支分布 ４属，即芽孢杆菌属 Ｂａｃｉｌ⁃
ｌｕｓ、中华根瘤菌属 Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ、寡养单胞菌属
Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ 和假单胞菌属 Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ．菌株
ＤＤ００７、ＤＤ１７４、ＤＤ１７９ 和模式株形成了分支Ⅰ，其
中菌株 ＤＤ００７ 与死谷芽孢杆菌 Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｖａｌｌｉｓｍｏｒｔｉｓ
ＤＳＭ １１０３１Ｔ（ＡＢ０２１１９８）位于同一系统发育分支上，
二者具有最大相似率，达 １００％；ＤＤ１７４ 与模式菌株
海洋沉淀芽孢杆菌 Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｏｃｅａｎｉｓｅｄｉｍｉｎｉｓ Ｈ２Ｔ
（ＧＱ２９２７７２）具有最大相似率（９９．６％）；ＤＤ１７９与模
图 ３　 筛选菌株菌落形态及菌体显微照片
Ｆｉｇ．３　 Ｃｏｌｏｎｙ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃ ｐｈｏｔｏｇｒａｐｈｙ ｏｆ ｓｃｒｅｅｎｅｄ ｓｔｒａｉｎｓ．
４６５１ 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 应　 用　 生　 态　 学　 报　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 ２７卷
表 ４　 筛选菌株的理化特性
Ｔａｂｌｅ ４　 Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｓｃｒｅｅｎｅｄ ｓｔｒａｉｎｓ
项目 Ｉｔｅｍ ＤＤ１７４ ＤＤ１７９ ＤＤ２０１ ＤＤ０２９ ＤＤ０５２ ＤＤ１６６ ＤＤ００７
接触酶 Ｃａｔａｌａｓｅ ｔｅｓｔ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
Ｖ⁃Ｐ 试验 Ｖ⁃Ｐ ｔｅｓｔ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
Ｄ⁃葡萄糖产酸 Ｄ⁃ｇｌｕｃｏｓｅ ａｃｉｄ ｙｉｅｌｄ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
Ｌ⁃阿拉伯糖产酸 Ｌ⁃Ａｒａｂ ｓｕｇａｒ ａｃｉｄ ｙｉｅｌｄ － － － － ＋ － －
Ｄ⁃甘露醇 Ｄ⁃ｍａｎｎｉｔｏｌ － ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ －
木糖 Ｘｙｌｏｓｅ － － ＋ ＋ ＋ ＋ －
肉汤 Ｂｒｏｔｈ （ｐＨ ５．０） ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
淀粉酶 Ａｍｙｌａｓｅ ＋ ＋ － － ＋ ＋ －
苯丙氨酸脱氨酶 Ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅｄｅａｍｉｎａｓｅ － － － － ＋ － －
卵黄磷脂酶 Ｌｅｃｉｔｈｉｎａｓｅ ＋ ＋ － － － ＋ ＋
硝酸还原酶 Ｎｉｔｒａｔｅ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ ＋ ＋ － － ＋ ＋ ＋
酪素分解 Ｃａｓｅｉｎ ｄｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋
柠檬酸盐利用 Ｃｉｔｒａｔｅ ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ＋ ＋ － － ＋ ＋ ＋
酪氨酸水解 Ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅ ＋ ＋ － － － ＋ ＋
菌体形状 Ｓｔｒａｉｎ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ 杆状 Ｒｏｄ 杆状 Ｒｏｄ 杆状 Ｒｏｄ 杆状 Ｒｏｄ 杆状 Ｒｏｄ 杆状 Ｒｏｄ 杆状 Ｒｏｄ
菌体大小
Ｓｔｒａｉｎ ｓｉｚｅ （μｍ）
１．０×
（３．０～４．０）
１．０×
（２．０～３．０）
１．０×
（２．０～５．０）
０．６×
（２．０～５．０）
（０．８～１．０）×
（２．０～３．０）
１．０×
（２．０～４．０）
１．０×
（１．５～３．０）
革兰氏染色 Ｇｒａｍ ｓｔａｉｎ Ｇ＋ Ｇ＋ Ｇ＋ Ｇ＋ Ｇ－ Ｇ＋ Ｇ＋
芽孢有无 Ｓｐｏｒｅ ｆｏｒｍｉｎｇ ＋ ＋ － － － － ＋
＋： 阳性 Ｐｏｓｉｔｉｖｅ； －： 阴性 Ｎｅｇａｔｉｖｅ．
式菌株苏云金芽孢杆菌 Ｂ． ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ＡＴＣＣ１０７９２Ｔ
（ＡＦ２９０５４５）具有最大相似率，达 ９９．９％．结合菌体培
养特征、生理生化特性及系统发育地位，菌株
ＤＤ００７、ＤＤ１７４、ＤＤ１７９分别最相似于 Ｂ． ｖａｌｌｉｓｍｏｒｔｉｓ、
Ｂ． ｏｃｅａｎｉｓｅｄｉｍｉｎｉｓ、 Ｂ． ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ．菌株 ＤＤ０５２ 和
模式株形成了分支Ⅱ ，其中 ＤＤ０５２ 和模式菌株
费氏中华根瘤菌 Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｆｒｅｄｉｉ ＵＳＤＡ ２０５Ｔ
（Ｄ１４５１６）位于同一系统发育分支上，二者具有最大
相似率，达 １００％，结合菌体培养特征、生理生化特
性及系统发育地位，菌株 ＤＤ０５２ 最相似于 Ｓ． ｆｒｅｄｉｉ．
菌株 ＤＤ１６６和模式菌株形成分支Ⅲ，其中 ＤＤ１６６和
模式菌株嗜麦芽寡养单胞菌 Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ ｍａｌｔｏ⁃
ｐｈｉｌｉａ ＬＭＧ９５８Ｔ（Ｘ９５９２３）位于同一分支上，二者具
有最大相似率，达 ９９．４％，结合菌体培养特征、生理
生化特性及系统发育地位，菌株 ＤＤ１６６ 最相似于 Ｓ．
ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ．菌株 ＤＤ０２９、ＤＤ２０１ 和模式株形成了分
支Ⅳ，其中 ＤＤ０２９ 和模式菌株蒙氏假单胞菌 Ｐｓｅｕｄｏ⁃
ｍｏｎａｓ ｍｏｎｔｅｉｌｉｉ ＣＩＰ １０４８３３Ｔ（ＡＦ０６４４５８）位于同一分
支上，二者具有最大相似率，达 ９９．４％；ＤＤ２０１ 与模
式菌株台湾假单胞菌 Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｔａｉｗａｎｅｎｓｉｓ ＩＡＭ
１５６８Ｔ（Ｄ８４００４）位于同一分支上，二者具有最大相
似率，达 ９９．３％．结合菌体培养特征、生理生化特性
及系统发育地位，菌株 ＤＤ０２９、ＤＤ２０１ 分别初步最
相似于 Ｐ． ｍｏｎｔｅｉｌｉｉ、Ｐ． ｔａｉｗａｎｅｎｓｉｓ．
２􀆰 ７　 接种拮抗性内生菌对烟草幼苗的控病效果
盆栽试验表明，７ ｄ时对照组出现明显病状（图
５），叶色大面积发黄，叶片表面出现不规则突起，且
有赤星病斑出现，大部分病斑大小在 ２～４ ｍｍ，发病
率为 ８８．３％．而内生菌处理组，只有部分叶片的接种
点变黄，整片仍然为绿色，发病程度相对较轻．由表 ５
可知，菌株 ＤＤ１７４和 ＤＤ１７９处理的植株整体上发病
率和病情指数均降低，植株发病率均小于 ３０％，防
治效果均在 ７０％以上．另外，ＤＤ１７４处理植株叶片呈
绿色，病斑大小在 ０．５ ｍｍ以下，病斑面积不再扩大，
生长趋向正常；ＤＤ００７ 处理植株部分叶片局部感病
处黄色发白，病斑处出现枯死．而对照组叶片大部分
大面积泛黄，病斑面积扩大，病斑处呈褐色，植株生
长受到严重影响．整体上，拮抗性内生菌菌株处理组
的病情指数和防治效果与对照相比差异显著，可作
表 ５　 拮抗内生菌在烟草幼苗上对赤星病的防治效果
Ｔａｂｌｅ ５　 Ｃｏｎｔｒｏｌ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ｅｎｄｏｐｈｙｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ
ａｇａｉｎｓｔ ｔｏｂａｃｃｏ ｂｒｏｗ ｓｐｏｔ （ｍｅａｎ±ＳＤ）
菌株
Ｓｔｒａｉｎ
发病率
Ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ
（％）
病情指数
Ｄｉｓｅａｓｅ
ｉｎｄｅｘ
防治效果
Ｃｏｎｔｒｏｌ ｅｆｆｅｃｔ
（％）
ＣＫ ８８．３±０．０１Ａ ６２．８±０．０１Ａ －
ＤＤ１７４ ２７．７±０．０１Ｂ １６．３±０．０１Ｂ ７４．１±０．０１Ａ
ＤＤ１７９ ２９．０±０．０１Ｃ １８．３±０．０１Ｃ ７０．９±０．０１Ｂ
ＤＤ２０１ ３０．２±０．０１Ｄ １９．８±０．０１Ｄ ６８．４±０．０１Ｃ
ＤＤ０２９ ３４．７±０．０２Ｅ ２１．９±０．０１Ｅ ６５．１±０．０１Ｄ
ＤＤ０５２ ３５．９±０．０１Ｆ ２２．６±０．０１Ｆ ６４．０±０．０２Ｅ
ＤＤ１６６ ３９．７±０．０１Ｇ ２４．７±０．０１Ｇ ６０．７±０．０１Ｆ
ＤＤ００７ ３９．２±０．０２Ｇ ２４．８±０．０１Ｈ ６０．６±０．０１Ｇ
同列不同大写字母表示差异显著（Ｐ＜０．０１） Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃａｐｉｔａｌ ｌｅｔｔｅｒｓ ｉｎ
ｔｈｅ ｓａｍｅ ｃｏｌｕｍｎ ｓｈｏｗｅｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ａｔ ０．０１ ｌｅｖｅｌ．
５６５１５期　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 赵龙飞等： 烟草赤星病菌拮抗性大豆根瘤内生菌的筛选及抑制作用　 　 　 　 　
图 ４　 筛选菌株的 １６Ｓ ｒＤＮＡ序列的系统发育树
Ｆｉｇ．４　 Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅ ｏｆ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｓｔｒａｉｎｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ １６Ｓ ｒＤＮＡ
ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ．
Ⅰ： 芽孢杆菌属 Ｂａｃｉｌｌｕｓ； Ⅱ： 中华根瘤菌属 Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ； Ⅲ： 寡养
单胞菌属 Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ； Ⅳ： 假单胞菌属 Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ．
图 ５　 拮抗性菌株悬液对烟草赤星的病防治效果
Ｆｉｇ．５　 Ｃｏｎｔｒｏｌ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ｓｔｒａｉｎｓ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ａｇａｉｎｓｔ
ｔｏｂａｃｃｏ ｂｒｏｗ ｓｐｏｔ．
为烟草赤星的生防菌株资源．
３　 讨　 　 论
利用微生物间的拮抗作用防治植物病害国内已
有较多研究［８，１２－１４］ ．但从豆科根瘤特殊微环境筛选
拮抗性菌株还较为少见．这一研究将为烟草赤星病
防治提供新的思路．本研究从大豆根瘤中分离 ２７６
株菌，经复筛和代谢液验证，筛选出 ７株对烟草赤星
病菌有较强抑制作用的菌株，其中 ＤＤ１７４ 抑菌率最
高，达 ６２． ３％．但 ＤＤ００７ 对烟草赤星的抑制率为
４１．０％，说明不同根瘤内生菌对病原菌抑制率不同，
这可能与大豆根瘤内生菌生长所处环境有关［６］，如
土壤盐碱性等，这些因素都可能通过影响内生菌生
长代谢而影响对病原菌的抑制作用．也与大豆根瘤
生长时期有关，如处于代谢旺盛期的根瘤，其产生的
次生代谢产物相对较多，会影响内生菌的代谢物对
病原菌的抑制作用［１５］ ．试验证明，大豆根瘤部分内
生菌对烟草赤星病菌有显著抑制作用．显微观察发
现，菌株 ＤＤ１７４和 ＤＤ１７９对烟草赤星菌具有较强的
抑制效果，复筛平板试验表明，内生菌生长速度快，
在培养基表面快速形成生物薄膜，占据营养空间，可
能导致病原真菌因缺乏营养而使菌丝生长受抑制．
代谢液活性试验表明，在培养过程中内生菌产生了
胞外代谢物质［１６］，无菌滤液培养基有效阻碍了病原
菌菌丝的正常生长和发育，从而抑制病原真菌的蔓
延和传染，具体的代谢产物有待进一步生化分析．易
龙等［１７］研究发现，内生菌 Ｉｔｂ６２ 无菌滤液对赤星病
菌丝生长和孢子萌发有很强的抑制作用．镜检发现，
菌丝形态受到明显影响，菌丝膨大呈结节状，成畸形
菌丝，并且破裂、消解．在温室中进行盆栽防病试验，
防治效果为 ５２．３％～７５．８％［１８］ ．而本研究盆栽防治效
果最高的是菌株 ＤＤ１７４（达 ７４．１％），其余 ６ 株防治
效果均在 ６０．６％以上．
芽孢杆菌属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）是被最普遍报道的植物
生长促生根际细菌（ＰＧＰＲ），芽孢杆菌能够产生次
生代谢产物（如多肽类物质、多种胞外水解酶和抗
菌物质），对植物病原菌具有较强抑菌活性［１９－２０］ ．本
试验中筛选的 ＤＤ００７、ＤＤ１７４、ＤＤ１７９ 均属于芽孢杆
菌属，可在逆境中产生特殊休眠结构芽孢，有助于该
类细菌在高温、盐碱和干旱等不良条件环境中长期
存在，待条件适宜时芽孢快速萌发并分裂形成大量
个体，成为优势种群，发挥生防作用．筛选菌株
ＤＤ１７４室内盆栽防治效果为 ７４．１％．易龙等［２１］、王
静等［２２］从烟草叶片分离出内生菌 Ａｔａ２８（枯草芽孢
６６５１ 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 应　 用　 生　 态　 学　 报　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 ２７卷
杆菌），盆栽试验控病防治效果为 ７５．２％；短小芽孢
杆菌 ＡＲ０３的无菌滤液能有效抑制赤星病菌菌丝生
长，菌丝隔间变短、肿胀且集结成团，内含物聚集，菌
丝顶端生长膨大畸形，减少孢子萌发或产生畸形芽
管，具备开发生防资源的潜质．假单胞菌属（Ｐｓｅｕｄｏ⁃
ｍｏｎａｓ）是植物内生菌的重要类群，具有营养需求简
单、繁殖快、竞争定殖力强等特点．多数具有拮抗或
促生作用，它的生防作用一直是研究的热点［１４］ ．本
试验筛选出的 ＤＤ０２９和 ＤＤ２０１属于假单胞菌，无论
对峙平板培养或是代谢液处理对烟草赤星病菌均表
现出较强的抑菌效果．李洪林［２３］研究发现，用荧光
假单胞菌 Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ ＰＦ７⁃５发酵滤液处
理后，烟草赤星病菌菌丝的生长发育受到明显抑制，
菌丝粗细不均，部分菌丝壁溃解，细胞质浓缩，菌丝
扭曲变形，同时烟草赤星病病菌孢子萌发受到抑制．
显微分析表明，内生菌 Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｐ２ 作用于病原
菌主要表现为诱导其细胞壁加厚、原生质囊泡和真
菌菌丝分支浓缩［２４］ ．主要机理是内生菌产生抗真菌
挥发性活性化合物（二甲基二硫醚和二甲基三硫
醚），可抑制菌丝，同时也产生蛋白酶和铁载体．
综上所述，经大豆根瘤内生细菌初筛、复筛，对
烟草赤星病菌抑菌效果＞４２％的有 ７株内生菌，代谢
液对病原菌抑制作用主要是内生菌代谢产生的胞外
物质在发挥作用．结合菌株培养特征和 １６Ｓ ｒＤＮＡ序
列鉴定，筛选菌株属于 ４属 ７种，表现出拮抗性大豆
根瘤内生菌的种属多样性．显微观察表明，烟草赤星
病菌受抑制作用菌丝生长受阻，菌丝发生畸形．盆栽
防病试验表明，拮抗性内生菌的防治效果显著，可作
为烟草赤星病的生防菌株资源．
参考文献
［１］　 Ｚｈａｏ ＬＦ， Ｄｅｎｇ ＺＳ， Ｙａｎｇ ＷＱ， ｅｔ ａｌ． Ｄｉｖｅｒｓｅ ｒｈｉｚｏｂｉａ
ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｓｏｐｈｏｒａ ａｌｏｐｅｃｕｒｏｉｄｅｓ ｇｒｏｗｎ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ Ｌｏｅｓｓ Ｐｌａｔｅａｕ ｉｎ Ｃｈｉｎａ． Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ａｎｄ
Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ， ２０１０， ３３： ４６８－４７７
［２］　 Ｓｈｉ Ｊ⁃Ｙ （石晶盈）， Ｃｈｅｎ Ｗ⁃Ｘ （陈维信）， Ｌｉｕ Ａ⁃Ｙ
（刘爱媛）． Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｅｎｄｏｐｈｙｔｅｓ ａｎｄ
ｔｈｅｉｒ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｐｌａｎｔ ｄｉｓｅａｓｅｓ． Ａｃｔａ Ｅｃｏｌｏｇｉｃａ
Ｓｉｎｉｃａ （生态学报）， ２００６， ２６（７）： ２３９５－ ２４０１ （ ｉｎ
Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［３］　 Ｚｈａｏ ＬＦ， Ｘｕ ＹＪ， Ｓｕｎ Ｒ， ｅｔ ａｌ． Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａ⁃
ｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｐｌａｎｔ ｇｒｏｗｔｈ ｐｒｏｍｐｔｅｒ
Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ ｓｔｒａｉｎ ＭＱ２３ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｓｏｐｈｏｒａ ａｌｏｐｅ⁃
ｃｕｒｏｉｄｅｓ ｒｏｏｔ ｎｏｄｕｌｅｓ． Ｂｒａｚｉｌｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，
２０１１， ４２： ５６７－５７５
［４］　 Ｋｕｋｌｉｎｓｋｙ⁃Ｓｏｂｒａｌ Ｊ， Ａｒａúｊｏ ＷＬ， Ｍｅｎｄｅｓ Ｒ， ｅｔ ａｌ． Ｉｓｏ⁃
ｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｏｙｂｅａｎ⁃ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｂａｃｔｅｒｉａ
ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ｐｌａｎｔ ｇｒｏｗｔｈ ｐｒｏｍｏｔｉｏｎ． Ｅｎｖｉｒｏｎ⁃
ｍｅｎｔａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ， ２００４， ６： １２４４－１２５１
［５］　 Ｔａｇｈａｖｉ Ｓ， Ｂａｒａｃ Ｔ， Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ Ｂ， ｅｔ ａｌ． Ｈｏｒｉｚｏｎｔａｌ
ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｔｏ ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ｆｒｏｍ
ｐｏｐｌａｒ ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｐｈｙｔｏｒｅｍｅｄｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｏｌｕｅｎｅ． Ａｐｐｌｉｅｄ ａｎｄ
Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ， ２００５， ７１： ８５００－８５０５
［６］　 Ｚｈａｏ Ｌ⁃Ｆ （赵龙飞）． Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｎ ｒｅｓｏｕｒｃｅ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ
ｓｏｙｂｅａｎ （Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ （Ｌ．） Ｍｅｒｒ） ｎｏｄｕｌｅ ｅｎｄｏｐｈｙｔｅｓ ｉｎ
Ｃｈｉｎａ． Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ （广东农业科
学）， ２０１４（９）： １５－１９ （ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［７］　 Ｚｈａｏ Ｌ⁃Ｆ （赵龙飞）， Ｘｕ Ｙ⁃Ｊ （徐亚军）， Ｃａｏ Ｄ⁃Ｊ （曹
冬建）， ｅｔ ａｌ． Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ， ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ， ｐｈｙｌｏｇｅｎｙ ａｎｄ
ｇｒｏｗｔｈ ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ ｏｆ ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉａ ｉｓｏ⁃
ｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｓｏｙｂｅａｎ ｒｏｏｔ ｎｏｄｕｌｅｓ． Ａｃｔａ Ｅｃｏｌｏｇｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ
（生态学报）， ２０１５， ３５（１３）： ４４２５ － ４４３５ （ ｉｎ Ｃｈｉ⁃
ｎｅｓｅ）
［８］　 Ｘｕ Ｙ⁃Ｊ （徐亚军）， Ｚｈａｏ Ｌ⁃Ｆ （赵龙飞）， Ｃｈｅｎ Ｐ （陈
普）， ｅｔ ａｌ． Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ， ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ
ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｇｅｎ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ｅｎｄｏｐｈｙｔｅｓ ｆｒｏｍ ｗｉｌｄ Ａｒｔｅｍｉ⁃
ｓｉａ ａｒｇｙｉ． Ａｃｔａ Ｅｃｏｌｏｇｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ （生态学报）， ２０１３， ３３
（１２）： ３６９７－３７０５ （ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［９］　 Ｍａ Ｙ， Ｍａｎｉ Ｒ， Ｙｏｎｇ ＭＬ， ｅｔ ａｌ． Ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｎｄｏ⁃
ｐｈｙｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ｏｎ ｈｏｓｔ ａｎｄ ｎｏｎ⁃ｈｏｓｔ ｐｌａｎｔｓ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ
ｐｌａｎｔ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ Ｎｉ ｕｐｔａｋｅ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈａｚａｒｄｏｕｓ Ｍａｔｅ⁃
ｒｉａｌｓ， ２０１１， １９５： ２３０－２３７
［１０］　 Ｍｉｌｌｅｒ ＫＩ， Ｑｉｎｇ Ｃ， Ｓｚｅ ＭＹ， ｅｔ ａｌ． Ｃｕｌｔｕｒａｂｌｅ ｅｎｄｏ⁃
ｐｈｙｔｅｓ ｏｆ ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｐｌａｎｔｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ ｔｈｅｉｒ
ｂｉｏａｃｔｉｖｉｔｙ． Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｅｃｏｌｏｇｙ， ２０１２， ６４： ４３１－４４９
［１１］　 Ｇａｒｒｉｔｙ ＧＭ， Ｂｅｌｌ ＪＡ， Ｌｉｌｂｕｒｎ ＴＧ． Ｂｅｒｇｅｙ’ ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ
Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ： Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ，
２００４
［１２］　 Ｍａ Ｇ⁃Ｈ （马冠华）， Ｚｈｏｕ Ｃ⁃Ｙ （周常勇）， Ｘｉａｏ Ｃ⁃Ｇ
（肖崇刚）． Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｉｓｏ⁃
ｌａｔｅ Ｉｔｂ５７ ｆｒｏｍ ｔｏｂａｃｃｏ ｐｌａｎｔ ａｎｄ ｉｔｓ ｃｏｎｔｒｏｌ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｎ
ｔｏｂａｃｃｏ ｂｌａｃｋ ｓｈａｎｋ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｎｉｃｏｔｉａｎ⁃
ｎａｅ． Ａｃｔａ Ｐｈｙｔｏｐｈｙｌａｃｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ （植物保护学报 ），
２０１０， ３７（２）： １４８－１５２ （ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１３］　 Ｗｈｉｐｐｓ ＪＭ． Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｂｉｏｃｏｎｔｒｏｌ ｉｎ ｔｈｅ
ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｂｏｔａｎｙ， ２００３， ５６：
４８７－４５１
［１４］　 Ｚｈａｏ Ｌ⁃Ｆ （赵龙飞）， Ｘｕ Ｙ⁃Ｊ （徐亚军）， Ｌａｉ Ｘ⁃Ｈ （赖
心河）， ｅｔ ａｌ． Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ
ｆｒｏｍ ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｐｌａｎｔ Ｉｌｅｘ ｃｏｒｎｕｔａ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｇｅｎ⁃
ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔ． Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｅｃｏｌｏｇｙ （应
用生态学报）， ２０１５， ２６（５）： １５５３ － １５６２ （ ｉｎ Ｃｈｉ⁃
ｎｅｓｅ）
［１５］　 Ｘｕ Ｙ⁃Ｊ （徐亚军）， Ｚｈａｏ Ｌ⁃Ｆ （赵龙飞）． Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｉｎ⁃
ｈｉｂｉｔｏｒｙ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔ ｆｒｏｍ ｆｉｅｌｄ Ａｒｔｅｍｉｓｉａ ａｒｇｙｉ
ｔｏ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ． Ｊｉａｎｇｓｕ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ （江苏
农业科学）， ２０１２， ４０（４）： ３０６－３０８ （ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１６］　 Ｃｏｍｐａｎｔ Ｓ， Ｄｕｆｆｙ Ｂ， Ｎｏｗａｋ Ｊ， ｅｔ ａｌ． Ｕｓｅ ｏｆ ｐｌａｎｔ
ｇｒｏｗｔｈ⁃ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉａ ｆｏｒ ｂｉｏｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｐｌａｎｔ ｄｉｓｅａ⁃
ｓｅｓ： Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ， ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ａｃｔｉｏｎ， ａｎｄ ｆｕｔｕｒｅ ｐｒｏｓ⁃
ｐｅｃｔｓ． Ａｐｐｌｉｅｄ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ， ２００５，
７１： ４９５１－４９５９
［１７］　 Ｙｉ Ｌ （易　 龙）， Ｘｉａｏ Ｃ⁃Ｇ （肖崇刚）， Ｍａ Ｇ⁃Ｈ （马冠
华）， ｅｔ ａｌ． Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆ ｂｅｎｅｆｉｃｉａｌ ｅｎｄｏ⁃
ｐｈｙｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ｔｏ ｃｏｎｔｒｏｌ ｔｏｂａｃｃｏ ｂｒｏｗｎ ｓｐｏｔ． Ａｃｔａ Ｍｉ⁃
７６５１５期　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 赵龙飞等： 烟草赤星病菌拮抗性大豆根瘤内生菌的筛选及抑制作用　 　 　 　 　
ｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ （微生物学报）， ２００４， ４（１）： １９－
２２ （ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１８］　 Ｙｉ Ｌ （易　 龙）， Ｘｉａｏ Ｃ⁃Ｇ （肖崇刚）． Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆ ａｎ⁃
ｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ｆｏｒ ｂｉｏｃｏｎｔｒｏｌ ａｇａｉｎｓｔ ｔｏｂａｃｃｏ ｂｒｏｗｎ
ｓｐｏｔ． Ａｃｔａ Ｐｈｙｔｏｐｈｙｌａｃｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ （植物保护学报），
２００４， ３１（１）： ６３－６８ （ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１９］　 Ｌｉｍ ＨＳ， Ｋｉｍ ＹＳ， Ｋｉｍ ＳＤ． Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｔｕｔｚｅｒｉ ＹＰＬ⁃１
ｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ａｇａｉｎｓｔ
Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｏｌａｎｉａｎ ａｇｅｎｔ ｏｆ ｐｌａｎｔ ｒｏｏｔ ｒｏｔ． Ａｐｐｌｉｅｄ ａｎｄ
Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ， １９９１， ５７： ５１０－５１６
［２０］　 Ｖｉｖｉａｎａ Ｙ， Ｈｏｕｄａ Ｚ， Ｉｎｍａｃｕｌａｄａ Ｖ， ｅｔ ａｌ． Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｐｅａｃｈ ｂｒｏｗｎ ｒｏｔ （Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ ｓｐｐ．） ｂｙ Ｂａｃｉｌｌｕｓ
ｓｕｂｔｉｌｉｓ ＣＰＡ⁃８ ｉｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｆｅｎｇｙｃｉｎ⁃ｌｉｋｅ
ｌｉｐｏｐｅｐｔｉｄｅｓ． Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，
２０１２， １３２： ６０９－６１９
［２１］　 Ｇａｏ Ｌ⁃Ｌ （高玲玲）， Ｃｈｅｎ Ｘ⁃Ｌ （陈小龙）， Ｊｉａｎｇ Ｔ （蒋
涛）， ｅｔ ａｌ． Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｎｉ⁃
ｔｒｏｇｅｎ⁃ｆｉｘｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉａ ｉｎ ｒｉｃｅ ｗｉｔｈ ａｎｔｉｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｆｕｎｃ⁃
ｔｉｏｎｓ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｕａｚｈｏｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ （华中
农业大学学报）， ２０１２， ３１（５）： ５５３ － ５５７ （ ｉｎ Ｃｈｉ⁃
ｎｅｓｅ）
［２２］　 Ｙｉ Ｌ （易　 龙）， Ｍａ Ｇ⁃Ｈ （马冠华）， Ｙａｎｇ Ｓ⁃Ｙ （杨水
英）， ｅｔ ａｌ． Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ
Ａｔａ ２８ ａｎｄ ｉｔｓ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｔｏｂａｃｃｏ ｂｒｏｗｎ ｓｐｏｔ． Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ （Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ） （西南大学学
报： 自然科学版）， ２００７， ２９（３）： １００－１０３ （ ｉｎ Ｃｈｉ⁃
ｎｅｓｅ）
［２３］　 Ｗａｎｇ Ｊ （王　 静）， Ｔｉａｎ Ｈ （田　 华）， Ｋｏｎｇ Ｆ⁃Ｙ （孔
凡玉）， ｅｔ ａｌ． Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｕｍｉｌｕｓ ＡＲ０３ ｏｎ Ａｌ⁃
ｔｅｒｎａｒｉａ ａｌｔｅｒｎａｔａ ａｎｄ Ｅｒｙｓｉｐｈｅ ｃｉｃｈｏｒａｃｅａｒｕｍ ｏｎ ｔｏｂａｃ⁃
ｃｏ． Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｅｃｏｌｏｇｙ （应用生态学
报）， ２０１５， ２６（１０）： ３１６７－３１７３ （ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［２４］　 Ｌｉ Ｈ⁃Ｌ （李洪林）． Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ
ａｎｄ Ｂｉｏｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ａｌｔｅｒｎａｔａ． Ｍａｓｔｅｒ Ｔｈｅｓｉｓ．
Ｄａｑｉｎｇ： Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ Ｂａｙｉ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， ２００８
（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［２５］　 Ｚｈａｎｇ Ｚ， Ｙｕｅｎ ＧＹ． Ｔｈｅ Ｒｏｌｅ ｏｆ Ｃｈｉｔｉｎａｓｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ
Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ ｓｔｒａｉｎ Ｃ３ ｉｎ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ Ｂｉｐｏｌａｒｉｓ ｓｏｒｏｋｉｎｉａｎａ． Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ， ２０００，
９０： ３８４－３８９
作者简介　 赵龙飞，男，１９７８ 年生，博士， 副教授． 主要从事
植物内生菌资源研究． Ｅ⁃ｍａｉｌ： ｈｎｚｈａｏｌｏｎｇｆｅｉ＠ １６３．ｃｏｍ
责任编辑　 肖　 红
赵龙飞， 徐亚军， 侯怡婷， 等． 烟草赤星病菌拮抗性大豆根瘤内生菌的筛选及抑制作用． 应用生态学报， ２０１６， ２７（５）： １５６０－
１５６８
Ｚｈａｏ Ｌ⁃Ｆ， Ｘｕ Ｙ⁃Ｊ， Ｈｏｕ Ｙ⁃Ｔ， ｅｔ ａｌ． Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｓｏｙｂｅａｎ （Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ）
ｎｏｄｕｌｅｓ ａｇａｉｎｓｔ Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｌｏｎｇｉｐｅｓ． Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｅｃｏｌｏｇｙ， ２０１６， ２７（５）： １５６０－１５６８ （ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ）
８６５１ 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 应　 用　 生　 态　 学　 报　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 ２７卷