全 文 ：第 12卷 第 4期
2 0 0 4年 l 0月
中 国 生 态 农 业 学 报
Chinese Journal of Eco—Agriculture
VO1．12 NO．4
0ct．。 2004
仔猪大肠杆菌病复合多价卵黄抗体的研制与应用
杨百亮
(天津农学院动物科学系
张勇飞 武洁梅
天津 300384)(中国农业大学农学与生物技术学院 北京 100094)
摘 要 将“K。。”、“K ”、“987P”和“F4 ”大肠杆菌接种于产蛋母鸡获得多价高免卵黄抗体，与有效中药提取物和保
护剂按一定比例混合，瞬间喷雾干燥制备的复合多价卵黄抗体干粉其抗体效价维持不变。新生仔猪攻毒及治疗试
验结果表明，大肠杆菌性腹泻发病仔猪 口服复合多价卵黄抗体干粉制剂的治愈率明显高于硫酸庆大霉素治疗的治
愈率；临床预防试验结果表明，新生仔猪 口服复合多价卵黄抗体干粉制剂对其大肠杆菌性腹泻的预防效果显著高
于疫苗，表明该制剂是安全有效的抗新生仔猪大肠杆菌性腹泻的新型生物制剂。
关键词 复合多价卵黄抗体干粉 仔猪腹泻 防治
Development and application of combined multivalent egg-yolk antibodies in passive protection of pi et diarrhea caused
by enterotoxicgenic E．coli．YANG Bai—Liang(Department of Animal Science，Tianjin Agricultural Colege，Tianjin
300384)，ZHANG Yong—Fei，WU Jie—Mei(Colege of Agronomy and Biotechnology，China Agricultural University，Bei—
jing 100094)，CJEA，2004，12(4)：207～209
Abstract A mixture of cultures of K88一，K99一，987P—and F41一piliate enterotoxigenic E．coli was used to immunize hens
to produce eggs containing antibod ies against enterotoxigenic E．coli，from which the antibodies were extracted and puri—
fied．The purified antibodies were mixed with the Chinese traditional medicine and protectives proportionally to make up
the combined multivalent chicken egg—yolk antibodies ，and then produce the powder by spray drying process．In the treat-
ment trial of infected piglets，the cure rate using the combined multivalent chicken egg—yolk antibody dry powder is higher
than that of Gentamycin．In the prevention trial，the oral administration of the combined multivalent chicken egg-yolk anti-
bodies has an higher prevention effeCt significantly than that of vaccine against enterotoxigenic Escherichia coli．It is con-
cluded that the combined multivalent chicken egg—yolk antibody powder is a new．safe and effective preparation in preven．
tion and treatment of piglet diarrhea caused by enterotoxigenic E．coli．
Key words Dry power of combined multivalent egg—yolk antibody，Piglet diarrhea ，Prevention and treatment
由肠毒素性大肠杆菌引起的新生仔猪腹泻是一种常见病和多发病，传染快且致死率高。仔猪口服高免
血清防治该病十分有效 ，但其价格昂贵且易发生过敏反应 ，而服用抗生素又易导致细菌耐药性和药物残留。
Bartz C．R．等H 研究鸡蛋卵黄抗体对哺乳动物病毒性疾病的防治效果 ，认为它是一种有前途的免疫球蛋白。
20世纪 90年代以来人们应用鸡蛋卵黄抗体防治仔猪大肠杆菌病取得满意效果H 。研究证明提纯卵黄
抗体和蛋黄液可冻干保存或喷雾干燥保存 ，抗体活性不受损失，且耐酸、耐热及性能稳定 。 。多价卵黄抗
体无毒副作用，长期使用菌株不产生耐药性。本研究将鸡蛋卵黄抗体与保护剂、中药提取物等有机结合，成
功研制出抗仔猪大肠杆菌复合免疫生物口服剂。
1 试验材料与方法
试验于2000年 10月～2001年 9月在河北省肃宁康源养殖有限公司和河北省万泰动物药业有限公司
进行 ，供试菌种为大肠杆菌“K。”、“K ”、“987P”和“F4，”标准菌株(购于中国兽药监察所)，供试动物为鸡和
猪。伊莎蛋用雏鸡在洁净养殖场隔离饲养至 5月龄，猪为同日出生、体重 1．1～1．3kg且未吃初乳的杜 ×大
×长新生仔猪，移至试验动物房人工哺乳饲养 ，用于新生仔猪攻毒及治疗试验。选用 20头杜洛克配种过且
预产期近似的长×大怀孕母猪，用于临床预防试验。制备菌毛蛋 白抗原时将大肠杆菌标准株分别接种于
Slanetz，TSA和 Minca专用培养基，37℃振荡培养 18h并经 12000g离心 30min，取沉淀悬浮于 pH7．0的
50mmol[LPBS液中，62℃水浴30min并经12000g离a,30min，取上清液用直径0．45 m微孔过滤，除去菌体
收稿日期：2003-05-23 改回日期：2003-07·03
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即为粗制纤维蛋白，在波长 595nm处测其光密度，计算其蛋白含量并调整至 5000／~g／mL、一20*(2保存备用。
将菌毛蛋白水溶液加入灭菌吐温一20至终浓度为 50g／kg，充分振荡混匀后与等体积 白油佐剂混合并充分乳
化制成多价疫苗(“K ”、“K ”、“987P”和“F 。”)。选用 5月龄伊莎蛋用鸡，胸肌分点注射免疫 ，剂量 1．0
mL／只，首免后 14d和 28d时用同一剂量加强免疫，经 3次免疫后 15d检测卵黄抗体效价，之后每 30d免疫 1
次。将免疫母鸡所产蛋(试管凝集效价>1：320)用新洁尔灭溶液消毒 ，无菌取出卵黄，加 4～6倍灭菌无离子
水，以0．1mo1／LHC1调 pH值至 5．0～5．2，再加 NaC1和PEG一6000分别至 5g／kg和35～50g／kg，搅拌后静置，
8000～15000r／min离心 10～20min，上清液加 PEG一6000至终浓度 120～140g／kg，以0．1mol／L NaOH调 pH
值至 6．8～7．4，搅拌、静置后同上离心 20～30min，沉淀溶于灭菌无离子水制成卵黄抗体液并保存备用。选
取 5种对大肠杆菌等有明显抑制作用和增强机体免疫力的中药，打(切)碎漂洗 ，冷水浸泡 2～4h，以水煎法
煎煮 40min左右，倒出药液并减压(温度 60～70℃，负压 7～8kPa)制成浓缩液。将卵黄抗体液、中药浓缩液
和抗体增效保护剂按一定 比例混合，用喷雾 干燥机 140℃进气，72℃出气，进料速度 5L／h，喷雾头转速
22000r／min，喷雾干燥成粉状即为复合卵黄抗体粉制剂。取 5份复合卵黄抗体粉制剂，加人生理盐水并还原
至干燥前体积，应用试管凝集试验检测其抗体效价的变化。选择未吃初乳的初生大白仔猪 60头并分成 6
组 ，每组 10头，采用人工哺乳方法饲养。试验组 I～V仔猪出生后 0．5h分别用“K ”、“K ”、“987P”和
“ ”株大肠杆菌混合菌悬 液攻毒，试验组 I、试验组 Ⅱ和试验组 Ⅲ发病仔猪分别 口服半剂量 (0．25
g／头·次)、推荐剂量(0．5g／头·次)和 3倍剂量(1．5g／头·次)复合卵黄抗体粉制剂，2次／d连用 5d；试验组Ⅳ发
病仔猪采用硫酸庆大霉素治疗 ，口服 8万 U／头·次、2次／d并连用 5d；试验组V发病仔猪未用任何药物治疗；
试验组Ⅵ仔猪不攻毒，且未用任何药物治疗。将 20头怀孕母猪随机分成 2组，每组 10头。第 1组为复合卵
黄抗体粉制剂预防组，出生 0．5h内吃初乳前每头新生仔猪口服复合卵黄抗体粉制剂 0．5g；第 Ⅱ组为疫苗预
防组 ，怀孕母猪在产前 40d和 20d分别用仔猪大肠杆菌灭活苗免疫接种，新生仔猪在产后 0．5h内尽快吃上
初乳。观察记录新生仔猪 14d龄内发病和死亡情况。
2 结果与分析
用多价蛋白油乳剂苗对产蛋鸡 3次免疫后 15d开始检测，30d后卵黄抗体水平升至峰值，经试管凝集检
测其抗体效价均 >1：320。测定复合卵黄抗体粉制剂卵黄抗体效价的变化结果表明，被测 5份复合卵黄抗体
干粉制剂中4份抗体滴度保持不变(1：320)，1份下降 1个滴度(1：160)。仔猪口服复合卵黄抗体粉产品标
准要求为 1g粉剂加入灭菌生理盐水 2mL后 ，其抗体效价应≥1：320。表 1表明仔猪攻毒试验后 12h左右所
有仔猪均发生中度或重度腹泻，采用推荐剂量(0．5g／头·次)和 3倍剂量(1．5g／头·次)复合卵黄抗体粉制剂
治疗的发病仔猪，当天腹泻程度明显减轻 ，3d后康复，治愈率达 100％，且应用 3倍剂量治疗仔猪未发生任何毒
副作用；半剂量(0．25g／头·次)治疗和硫酸庆大霉素(2mL／头·次)常规治疗的发病仔猪，当天腹泻程度改善不明
显，3d时开始好转，治愈率分别为 80％和 70％；未用任何药物治疗的发病仔猪 10d时全部死亡。本试验复
合多价卵黄抗体对仔猪人工感染大肠杆菌性腹泻的治愈率达 100％，高于肖驰等⋯和李学伍等 的治疗效
果，这可能与制剂制备工艺和试验对象不同有关，也可能与本研究所用制剂中包含了有效中草药和抗体增效
保 护剂有关 ，比单用抗生素治疗治愈率高30％，治疗效果 良好。复合多价卵黄抗体和疫苗对仔猪腹泻及成
表 1 复合卵黄抗体粉制剂对人工感染发病仔猪治疗效果
Tab．1 The result of treatment of piglet diarrhea with combined multivalent chicken egg-yolk antibody powder
组 别 病仔猪／头 治愈仔猪／头 治愈率／％ 组 别 病仔猪／头 治愈仔猪／头 治愈率／％
Groups No．of piglet No．of cured Cured rate Groups No．of piglet No．of cured Cured rate
with diarrhea piglet with diarrhea piglet
I 10 8 80 Ⅳ 10 7 70
I 10 10 100 V 10 0 0
Ⅲ 10 10 100 Ⅵ 10 9 90
活率的影响研究表明，新生仔猪 口服多价卵黄抗体粉制剂组 1～14d龄仔猪腹泻数与腹泻率及 14d龄成活数
与成活率分别为 10头、9．9％、97头和 96．0％，而疫苗接种怀孕母猪所产仔猪 1～14d龄腹泻数与腹泻率及
14d龄成活数与成活率分别为27头、27．6％、84头和85．7％，新生仔猪口服多价卵黄抗体比疫苗接种怀孕母
猪所产仔猪腹泻率下降 17．7％，成活率提高 10．3％，2组间差异达极显著水平(P<0．01)，其原因是由于母
猪个体体质和免疫应答存在遗传差异，初乳中的抗体水平不一致，且初乳中的抗体效价下降较快，有效保护
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第 4期 杨百亮等：仔猪大肠杆菌病复合多价卵黄抗体的研制与应用 209
时间短，加之仔猪由于各种原因摄入初乳不足等，均影响到仔猪被动免疫的可靠性。而用多价卵黄抗体直接
对仔猪进行被动免疫保护，排除了对母猪实施主动免疫可能引起的副作用和仔猪从母乳中摄取抗体量不均
衡的影响，使仔猪抵抗大肠杆菌性腹泻更加可靠 ，长期应用也不产生耐药菌株，不破坏肠道内的正常菌群 ，有
利于仔猪健康。该实验也表明卵黄抗体与菌毛蛋白抗原的亲和力远远超过母乳中的抗体和高免血清中的抗
体及高免血清中的抗体与抗原的亲合力。
3 小 结
大肠杆菌性腹泻发病仔猪口服复合多价卵黄抗体干粉制剂治愈率明显高于硫酸庆大霉素治疗的治愈
率 ，初生仔猪口服多价卵黄抗体后，仔猪腹泻率比疫苗预防的仔猪腹泻率明显下降，仔猪成活率明显提高，具
有安全、有效、使用方便和环保的优点，在预防和治疗仔猪大肠杆菌性腹泻方面应用前景广阔。
参 考 文 献
肖 驰，周淑兰，涂 志等．鸡抗猪大肠杆菌卵黄抗体的研制与应用 中国兽医科技，1998，28(4)：21～24
李学伍，张改平 ，阎玉河等．仔猪大肠杆菌多价卵黄抗体粉的特性及应用．中国兽医杂志，2000，26(10)：56～57
王 炯，龚春梅 ．鸡卵黄抗体理化特性的研究．中国生物制品学杂志，1997，10(3)：140～143
Bartz C．R．，Conkin R．H．，Tunstall C．B．，et a1．Prevention of murine rotavirus infection withchicken egg yolk immunoglobulins．Infect Dis．，
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Yokoyama H．，Hashi T．，Vmeda K ，et a1．Effect of oral egg antibody in experimental F18 Escherichia coli infection in weaned pig J Vet．
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