全 文 ：第 11卷第 3期
2 0 0 5 年 9 月
分析测试技术与仪器
ANALYSIS AND TEST ING TECHNOLOGY AND INST RUMENTS
Volume 11 Numbe r 3
　 　　　Sep. 2005
分析测试新成果(178 ～ 181)
GC-MS同时测定番石榴叶中的
齐墩果酸和熊果酸
黄建林1 ,张展霞2
(1. 湖北大学 化学与材料科学学院 , 湖北 武汉　430062;　2. 中山大学 化学与化学工程学院 ,广东 广州　510275)
摘　要:建立了测定番石榴叶中齐墩果酸和熊果酸的气相色谱- 质谱(GC-MS)方法 .以双(三甲硅烷)三氟乙酰胺
(BS TFA)为衍生化试剂 , 将齐墩果酸和熊果酸制成三甲基硅烷衍生物后 , 在 DB-5 MS 毛细管柱上进行分离.柱升
温程序为:柱初温 100 ℃,恒温保持 2 min , 以 10 ℃/min的速度升温至 300 ℃, 保持 14 min. 通过与标准样品对照
比较保留时间和质谱确认样品中齐墩果酸和熊果酸的色谱峰. 以峰面积进行定量测定 , 齐墩果酸和熊果酸的线性
范围分别为 4. 1～ 102 μg /mL 和 4. 7～ 114 μg /mL , 回收率分别为 77. 1%和 89. 4%, 6 次平行测定的相对标准偏差
分别为 3. 7%和 3. 5%.
关键词:番石榴叶;齐墩果酸;熊果酸;双(三甲硅烷)三氟乙酰胺衍生化
中图分类号:O657. 33 文献标识码:B 文章编号:1006-3757(2005)03-0178-04
　　番石榴叶是传统的药用植物 ,我国及其它亚热
带国家民间常用番石榴叶及其提取物治疗肠胃炎 、
痢疾 、糖尿病等疾病[ 1 , 2] . 番石榴叶中含有齐墩果酸
和熊果酸[ 3] ,但未见有测定番石榴叶中齐墩果酸和
熊果酸含量的报道. 齐墩果酸和熊果酸具有抗炎 、镇
静 、防肿瘤等作用 ,对链脲佐菌素造成的糖尿病大鼠
有降糖作用 ,是治疗急性黄疸性肝炎和迁延慢性肝
炎的有效药物[ 4 , 5] .
齐墩果酸和熊果酸分子中同时含有羟基和羧
基 ,挥发性差 ,不适和直接用气相色谱法进行测定.
闫花丽[ 6] 等以重氮甲烷为衍生化试剂将齐墩果酸和
熊果酸制成易气化的甲酯衍生物 ,然后采用气相色
谱法并以氢焰检测器进行检测 ,对夏枯草中的齐墩
果酸和熊果酸进行了定量分析. 重氮甲烷与羧基的
反应简单 、快速 、产率高 ,但重氮甲烷需在实验室制
备 ,且毒性大 ,活性高 ,易分解甚至爆炸[ 7] .
本文以双(三甲硅烷)三氟乙酰胺(BS TFA)为
衍生化试剂将齐墩果酸和熊果酸制成三甲基硅烷衍
生物 ,应用气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术 ,对番
石榴叶中的齐墩果酸和熊果酸进行了定性和定量测
定 ,方法简便 、快速 、准确.
1　实验部分
1. 1　仪器与试剂
HP 6890 GC /5973 M S 气相色谱-质谱联用仪
(惠普 , 美国). M ARSX 微波加速溶剂萃取仪
(CEM ,美国).
齐墩果酸(中国药品生物制品检定所 ,北京).熊
果酸 ,双(三甲硅烷)三氟乙酰胺(BS TFA)(Sigma ,
美国). 分析纯甲醇(广州化学试剂厂). 番石榴叶采
自中山大学校园 ,洗净 、晾干 、粉碎 、过筛后 ,置干燥
器中避光保存备用.
1. 2　分析样品制备
称取 0. 500 0 g 60 ～ 80 mesh干燥的番石榴叶置
于微波萃取罐中 ,加 10 mL甲醇 ,将密闭的萃取罐置
于微波萃取仪内 , 80 ℃加热 10 min.待萃取罐冷却
后 ,过滤 ,残渣用甲醇清洗 2 ～ 3次 ,合并滤液和洗涤
液 ,定容至 10 mL.取 20 μL 萃取液至 2 mL 样品瓶
中 ,用N2 气吹干后 ,加30μL BS TFA ,盖紧盖子 ,振摇
0. 5 min , 于70 ℃加热 30 min进行衍生化.
1. 3　GC-MS分析条件
DB-5 M S弹性石英毛细管柱(30 m ×0. 25 mm
收稿日期:2005-03-09;　修订日期:2005-06-13.
基金项目:广东省重大项目(A301020301).
作者简介:黄建林(1961 -),女 ,博士 ,研究方向为药用植物分析.
×0. 25μm).进样口温度 280 ℃. 高纯氦气为载气 ,
流速 1. 0 mL /min. 柱初温 100 ℃,恒温保持 2 min ,
以 10 ℃/min 的速度升温至 300 ℃,保持 14 min.
进样量 1μL. EI 电离源 ,电子能量 70 eV ,扫描范围
40 ～ 700 u ,四级杆温度 150 ℃,离子源温度 230 ℃,
GC-MS 接口温度 280 ℃.
2　结果与讨论
2. 1　齐墩果酸和熊果酸色谱峰的确定
齐墩果酸和熊果酸标样及番石榴叶提取物的总
离子色谱如图 1所示. 与标样对照比较保留时间 ,可
以判断试样色谱图中保留时间为 29. 690 min的色
谱峰对应的物质是齐墩果酸 ,30. 681 min 的色谱峰
对应的则是熊果酸. 进一步比较标样和试样对应成
分的质谱图 ,确定上述推测结果是正确的. 图 1显
示 ,齐墩果酸和熊果酸之间 、齐墩果酸和熊果酸与各
自相邻的其它成分之间均获得了完全的分离.
如图 2所示 ,齐墩果酸的 BSTFA 衍生物的分
子离子(m/z =600)通过 RDA 裂解得到 m /z 分别
为 320 、203 、189和 133的碎片离子.
图 1　标准样品(a)和试样(b)的总离子色谱图
Fig. 1　Total ion current chromatograms
of the standards(a) and sample (b)
图 2　齐墩果酸的主要质谱碎片
Fig. 2　Key mass spectral fragments of oleanolic acid
　　齐墩果酸和熊果酸是差向异构体 ,所以两者的
质谱非常相似 ,具有共同的主要碎片离子 ,只是在碎
片离子的相对强度上存在差异 ,如图 3所示.
2. 2　衍生化条件的选择
BSTFA 的衍生化作用强 ,可同时使齐墩果酸
和熊果酸分子中的羧基和羟基硅烷化. 将 BSTFA
与番石榴叶萃取物的吡啶溶液或被氮气吹干的萃取
物混合 ,于 70 ℃加热 60 min ,实验结果显示 , BS T-
FA 与干燥的试样直接反应 ,硅烷化的效果更好.
BSTFA用量分别为 30 、50和 100 μL 时 ,测得衍生
179第 3 期 黄建林 , 等:GC-MS 同时测定番石榴叶中的齐墩果酸和熊果酸
化的齐墩果酸和熊果酸的含量基本一致 , 因此 ,
BSTFA 用量定为 30 μL. 另外 ,在 70 ℃使样品和
BSTFA 分别反应 30 min和 60 min ,然后进样 ,齐墩
　　　
图 3　齐墩果酸(a)和熊果酸(b)的质谱
Fig. 3　Electron impact
mass spectra of oleanolic acid(a) and ursolic acid(b)
果酸和熊果酸的峰面积并不随衍生化时间的变化而
变化 ,说明在 70 ℃加热 30 min 即可使衍生化反应
进行完全.
2. 3　线性方程及相关系数
齐墩果酸浓度(COA)在 4. 1 ～ 102 μg /mL 范围
内与峰面积呈线性关系 ,线性方程为:A rea = 1. 6
×106 COA - 6. 5 ×104(r = 0. 9998). 熊果酸浓度
(CUA)在 4. 7 - 114 μg /mL 范围内与峰面积呈线性
关系 ,线性方程为:Area = 2. 0×106 CUA - 7. 4×
10
4(r =0. 9995).
2. 4　精密度试验
将已衍生化的试样溶液连续进样 6次 ,测定齐
墩果酸和熊果酸的峰面积 ,计算得到齐墩果酸和熊
果酸 6次峰面积测定的相对标准偏差(RSD)分别
为 2. 1%和 2. 3%.
2. 5　样品测定
按照 1. 2方法平行制备 6份番石榴叶样品溶
液 ,分别取 1 μL注入色谱柱 ,测定齐墩果酸和熊果
酸的峰面积 ,根据线性方程计算番石榴叶中齐墩果
酸和熊果酸的含量 ,测定结果列于表 1.
2. 6　加标回收实验
将一定量的齐墩果酸和熊果酸标样加至两种酸
含量已知的番石榴叶中 ,分别按 1. 2 和 1. 3方法进
行提取和测定 ,平行试验六次 ,平均回收率和相对标
　　　
表 1　齐墩果酸和熊果酸的含量
Table 1　Content of oleanolic and ursolic acid
化合物 齐墩果酸 熊果酸
1 0. 84 2. 87
2 0. 82 2. 80
3 0. 76 2. 59
4 0. 82 2. 79
5 0. 82 2. 79
6 0. 79 2. 65
平均含量 /(mg /g) 0. 81 2. 75
RSD /%(n=6) 3. 5 3. 8
表 2　齐墩果酸和熊果酸的回收率
Table 2　Recovery of oleanolic and ursolic acid
化合物 加入量 /(mg /g)
测得量 /
(mg /g)
回收量 /
(mg /g)
回收率
/%
RSD /%
(n=6)
齐墩果酸 0. 48 1. 18 0. 37 77. 1 3. 7
熊果酸 1. 32 3. 93 1. 18 89. 4 3. 5
准偏差列于表 2.
参考文献:
[ 1] 　全国中草药汇編编写组. 全国中草药汇編[ M ] . 北
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in the db /db mouse and on the postprandial blo od
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[ 3] 　Arthur H R , H ui W H . T riterpene acids fr om the
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[ 6] 　闫花丽 , 赵陆华 , 朱丹妮. 衍生化气相色谱法测定夏
枯草中齐墩果酸和熊果酸的含量[ J] . 中国中药杂
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[ 7] 　周良模. 气相色谱新技术[ M] . 北京:科学出版社 ,
1994. 335-348.
180 分析测试技术与仪器 第 11 卷
The Simultaneous Determination of Oleanolic and Ursolic Acid in
Guava Leaves by Gas Chromatography-Mass Spectrometry
HUANG Jian-lin1 ,ZHANG Zhan-xia2
(1. School o f Chemist ry and Material , Hubei Universi ty , Wuhan 430062 , China;
2. School of Chemist ry and Chemical Engineering , Zhong shan University , Guangzhou 510275 , China)
Abstract:A gas chromatog raphic-mass spectrometric method fo r dete rm ining o leanolic and ursolic acid has
been developed. T rime thylsi ly l de riv atives o f the acids w ere prepared w ith bis(t rime thylsi ly l)trif luo roacet-
amide (BS TFA) fo r gas-chromato graphic separation on a DB-5 M S capil lary co lumn. The temperature pro-
g ram comprised tw o phases:init ially the temperature w as set at 100 ℃ fo r 2 m in. It was then ramped to
300 ℃ at a rate of 10 ℃/min and held fo r 14 min. o leanolic acid and urso lic acid w ere comfi rmed by com-
parison of both mass spect ra and GC retent ion time w ith the standards. T he quant itat ive analysis w as
based on the peak a rea. Excellent lineari ty w as obtained ove r the range 4. 1 ～ 102 μg /mL fo r oleano lic acid
and 4. 7 ～ 114μg /mL fo r ur solic acid respectively . The recovery of the spiked oleano lic and ur solic acid w as
77. 1% and 89. 4% respectively w ith acceptable RSD.
Key words:guava leaves;oleano lic acid;ursolic acid;bis(t rime thylsi ly l)trf luoroacetamide) derivative
Classi fying number:O657. 33
181第 3 期 黄建林 , 等:GC-MS 同时测定番石榴叶中的齐墩果酸和熊果酸