全 文 ：文章编号:1000-2375(2006)04-0411-03
中华雪胆中总皂甙和齐墩果酸的含量测定
李路军 ,喻世涛 ,刘维雷 ,陈　勇
(湖北大学 中药生物技术湖北省重点实验室 , 湖北 武汉 430062)
摘　要:为建立中华雪胆中总皂甙和齐墩果酸的含量测定方法 , 分别采用比色法和高效液相色谱法测定
中华雪胆中的总皂甙和齐墩果酸的含量 , 测得中华雪胆中总皂甙的含量为 2.53 %, 总齐墩果酸的含量为
1.15 %,游离型齐墩果酸的含量为 0.010 5 %,该方法操作简便 、结果可靠 ,可用作中华雪胆中总皂甙和齐墩果酸
的含量测定.
关键词:中华雪胆;总皂甙;齐墩果酸;高效液相色谱;比色法
中图分类号:R927.2　　文献标志码:A
收稿日期:2005-12-26
基金项目:湖北省中药生物技术重点实验室开放基金项目(No.:2005-0102)资助
作者简介:李路军(1974-　),男 ,硕士 ,助教;陈勇 ,通讯作者
中华雪胆[ Hemsleya chinensis Cogn.]为葫芦科雪胆属植物中华雪胆的干燥块根 ,具有清热 ,解毒 ,消
肿 ,止痛之功.广泛应用于各种炎症 ,如肝炎 ,气管炎 ,胰腺炎 ,子宫颈炎等[ 1 ,2] .中华雪胆的主要化学成
分以皂甙类为主 ,其甙元主要是齐墩果酸 ,现代研究表明齐墩果酸具有降低谷丙转氨酶 、促进细胞再生 、
防止肝硬化 、抗炎等作用 ,是治疗肝炎的有效成分.目前 ,对雪胆中的齐墩果酸含量测定有用光密度计法
和比色法[ 3] ,本文用比色法测定中华雪胆中总皂甙的含量 ,并首次用高效液相色谱法测定中华雪胆中总
齐墩果酸和游离型齐墩果酸的含量 ,具有准确 、灵敏 、快捷的特点.
1　仪器与试剂
Agilent1100 系列高效液相色谱仪 ,DAD-G1315B二极管阵列检测器 ,UV-1601型可见-紫外分光
光度计(日本岛津公司),pHS-3C 数字酸度计(上海雷磁仪器厂生产),齐墩果酸对照品(购自中国药品
生物制品检定所 ,批号0709-9803).甲醇 、乙腈均为色谱纯 ,香草醛 、醋酸铵以及其它试剂均为分析纯.
中华雪胆采购于成都市西南偏冷药材行 ,经本院王万贤教授鉴定为中华雪胆的干燥块根.
2　方法与结果
2.1　总皂甙的含量测定
2.1.1　标准曲线的制备　精密称取齐墩果酸对照品 18.65 mg , 置于 10mL容量瓶中 ,用甲醇溶解并稀
释至刻度 ,作为对照品母液.精密吸取该母液 1.0 mL 于 25mL容量瓶用甲醇稀释至刻度作为对照品溶
液 ,精密吸取该对照品溶液1.2 ,1.4 ,1.5 ,1.6 ,1.8 , 2.0mL 置具塞试管中 ,在水浴中挥干甲醇 ,精密加入
新鲜配置的5 %香草醛—冰醋酸溶液 0.4 mL ,高氯酸 1.0mL ,加塞 ,摇匀 ,于 60 ℃水浴中加热 15 min ,取
出 ,冷却至室温 ,精密加入冰醋酸 10mL ,摇匀.以相同试剂作空白对照 ,于 549 nm处测定吸光度 ,以吸光
度为 Y 轴 ,质量为 X 轴 ,绘制标准曲线.回归方程:Y =0.004 2 X -0.069 4 ,相关系数 r =0.998 9 ,线性
范围:89.28 ～ 148.80μg.
2.1.2　供试品溶液的制备及测定[ 4] 　精密称定干燥的中华雪胆药材粉末 1 g ,加 70 %乙醇 15 mL 回流
提取 3次 ,每次 1.5 h ,过滤 ,合并滤液.回收溶剂 ,用适量水溶解.依次用石油醚脱脂 ,正丁醇萃取 ,取正
丁醇萃取液挥干溶剂 ,再加 95 %乙醇适量溶解 ,定容于 100 mL 容量瓶中 ,作为供试品溶液.精密吸取
第 28 卷第 4期
2006年 12月
湖北大学学报(自然科学版)
Journal of Hubei University(Natural Science)
　Vol.28　No.4　
Dec., 2006
0.4 mL ,按标准曲线制备项下方法进行测定.根据回归方程 ,计算其总皂苷的含量 ,结果见表 1.
表 1　总皂甙的含量测定结果
浓度/(mg·L-1) 结果/ % 平均值/ %
235.02 2.35
总皂甙 271.15 2.71 2.53
252.21 2.52
表 2　回收率试验(n=3)
样品中齐墩
果酸的量/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/ %
平均回
收率/ %
RSD
/ %
3.52 1.50 4.99 98.0
3.52 3.00 6.50 99.3 98.9 0.8
3.52 4.50 8.00 99.5
表 3　总齐墩果酸和游离齐墩果酸在中华雪胆中所占比例
浓度/(mg·L-1) 结果/ % 平均值/ %
575.05 1.1501
总齐墩果酸 573.60 1.1472 1.1503
581.55 1.1631
262.50 0.0105
游离齐墩果酸 267.50 0.0107 0.0105
260.05 0.0104
2.1.3　回收率试验　精密称定干燥的
雪胆药材粉末 0.1 g ,加入适量的齐墩果
酸对照品溶液 ,照供试品制备方法处理
后进行含量测定 ,结果见表 2.
2.2　齐墩果酸的含量测定
2.2.1　色谱条件　色谱柱:ODS Hyper-
sil C18柱(250mm×4.6 mm , 5μm);流动
相:甲醇-乙腈-0.1 %醋酸铵溶液(用
冰醋酸调 pH=6.42)=18∶68∶14;流速:
1.0 mL/min;检测波长:215 nm;柱温:
30 ℃;用外标法定量.
2.2.2　标准曲线的制备　取齐墩果酸
对照品溶液(1.865 g/L)0.05 、0.1 、0.15 、
0.2 、0.3 、0.4 、0.5 mL ,分别加甲醇稀释
并定容至 1.0mL 容量瓶中.精密吸取 10
μL 注入高效液相色谱仪 ,测定峰面积
值 ,以吸光度为 Y 轴 ,浓度为 X 轴 ,绘制
标准曲线.回归方程为:Y =4.036 2X -
64.617 , 相关系数 r =0.999 6 , 线性范
围:93.25 ～ 932.5μg/mL.
2.2.3　总齐墩果酸含量测定供试品溶
液的制备　准确称取中华雪胆干燥药粉
(过 60目)5.0 g ,加入 50mL 10 %的硫酸在水浴上加热保持微沸 4 h ,放冷 ,过滤 ,残渣用水洗至中性[ 5] ,
烘干 ,加入 150mL氯仿进行索氏提取 4 h ,回收氯仿 ,用甲醇溶解 ,并转移至 100mL 容量瓶中稀释至刻
度 ,摇匀.
2.2.4　游离型齐墩果酸含量测定供试品溶液的制备　准确称取中华雪胆干燥药粉(过 60目)25.0 g ,加
入150mL氯仿进行索氏提取 4 h ,回收氯仿 ,用甲醇溶解 ,并转移至10mL容量瓶中稀释至刻度 ,摇匀.
2.2.5　精密度试验　取齐墩果酸标准品溶液(1.865 g/L),连续重复进样 5次 ,测定齐墩果酸峰面积 ,计
算得其 RSD为 1.37 %.
2.2.6　重现性试验　精密称取同一批中华雪胆 5份 ,制备供试品溶液 ,依上述方法测定齐墩果酸峰面
积 ,计算得其 RSD为 1.98 %.
2.2.7　稳定性试验　取中华雪胆供试品溶液 ,分别在 0 、2 、4 、6 、8 h进样测定 ,计算得齐墩果酸峰面积的
RSD为 1.12 %.表明本品供试品溶液在 8 h内稳定.
2.2.8　回收率试验　精密称取已知含量的中华雪胆 5份 ,每份 0.1 g(含齐墩果酸约为1.15mg),分别精
密加入 1.15mg 齐墩果酸对照品 ,制备供试品溶液 ,进样测定峰面积 ,计算加样回收率 ,结果齐墩果酸平
均回收率为99.6 %,RSD为 1.74 %.
2.2.9　样品测定　取样品 6 份 ,分别制备成供试品溶液 ,进样测定 ,根据标准曲线计算齐墩果酸的浓
度 ,换算成总齐墩果酸和游离型齐墩果酸占中华雪胆药材的质量分数.结果见表 3 ,色谱图见图1.
3　讨论
考察比较了不同系统 ,不同比例流动相下齐墩果酸的分离情况 ,结果表明 , 选用甲醇 -乙腈-
0.1 %醋酸铵溶液(用冰醋酸调 pH=6.42)=18∶68∶14较为适宜 ,在此条件下 ,齐墩果酸与其它组分能达
到基线分离.pH对峰形影响较大 ,醋酸铵溶液的浓度高于 0.1 %,则基线噪音较大 ,且基线不稳 ,容易上
412 湖北大学学报(自然科学版) 第 28 卷
图 1　齐墩果酸标准品及中华雪胆提取物HPLC 图谱
A 标准品　B 中华雪胆酸解后提取物　C 中华雪胆未经酸解提取物
飘 ,低于 0.1 %,则出峰时间延长.
齐墩果酸甲醇液 λmax为 207 nm ,在此检测波长下 ,流动相中甲醇的紫外吸收干扰较大 ,基线不稳.分
别考察以 207 nm ,210 nm ,215 nm作为测定波长 ,结果表明 215 nm作为检测波长 ,基线平稳 ,极大增加检
测的灵敏度 ,与文献报道结果一致[ 6～ 7] .
分别比较了氯仿索氏提取 、氯仿超声提取 、乙醇回流提取和乙醇索氏提取 4种提取方法 ,对同一酸
解样品 ,4种提取方法所得总齐墩果酸含量分别为1.150 3 %, 0.872 5 %, 0.731 8 %,0.892 7 %,可见用
氯仿索氏提取方法提取齐墩果酸较为完全.
中华雪胆中游离型齐墩果酸很少 ,结合型的齐墩果酸占总齐墩果酸的 99 %以上 ,可见中华雪胆中
的齐墩果酸主要以皂甙的形式存在.
参考文献:
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Determination of total saponins and oleanolic acid in Hemsleya chinensis Cogn.
LI Lu-jun ,YU Shi-tao ,LIU Wei-lei ,CHEN Yong
(Hubei Province Key Lab of Bio-Technology of Traditional Chinese Medicine , Hubei University , Wuhan 430062 , China)
Abstract:To establish a method for determination of total saponins and oleanolic acid in Hemsleya chinensis
Cogn.the content of total saponins and oleanolic acid were determinated by colorimetry method and HPLC method
respectively.The results were as follows:2.53 %for total saponins , 1.15 % for total oleanolic acid , and 0.010 5
%for dissociative oleanolic acid.The developed method provides a simple and accurate way in detecting the total
saponins and oleanolic acid in Hemsleya chinensis Cogn.
Key words:Hemsleya chinensis Cogn.;total saponins;oleanolic acid;HPLC method;colorimetry
(责任编辑　游　俊)
413第 4期 李路军等:中华雪胆中总皂甙和齐墩果酸的含量测定