全 文 ：江西农业学报　2010, 22(8):138 ～ 139ActaAgriculturaeJiangxi
垂花香薷挥发油鸡胚接种抗鸡新城疫病毒的研究
张步彩 ,周广生
　 　收稿日期:2010-05-18
作者简介:张步彩(1971─),男 ,江苏盐城人,讲师 ,硕士 ,从事动物疫病的教学与研究工作。
(江苏畜牧兽医职业技术学院 ,江苏泰州 225300)
摘　要:用鸡胚培养法和血凝试验 , 测定了中药垂花香薷挥发油对鸡新城疫病毒的抑制作用。试验结果表明:垂花香薷
挥发油对鸡胚无毒性作用;垂花香薷挥发油与病毒同时接种鸡胚 ,能完全抑制鸡新城疫病毒在鸡胚中的增殖。
关键词:垂花香薷挥发油;鸡新城疫病毒;鸡胚接种;血凝试验
中图分类号:S858.31　文献标识码:A　文章编号:1001-8581(2010)08-0138-02
StudyonVolatileOilofElsholtziapendulifloraagainstNewcastle
DiseaseVirusinSPFChickenEmbryo
ZHANGBu-cai, ZHOUGuang-sheng
(JiangsuColegeofAnimalHusbandryandVeterinary, Taizhou225300, China)
Abstract:SPFchickenembryocultureandhemagglutinationtestwereusedtoevaluatetheinhibitoryeffectofChinesetradition
medicinevolatileoilofElsholtziapendulifloraonNewcastlediseasevirus.TheresultshowedthatthevolatileoilofElsholtziapenduli-
florahadnoside-effectonSPFchickenembryo.SynchronouslyinoculatingSPFchickenembryowiththevolatileoilofElsholtziapen-
dulifloraandvirusalantoicfluidcouldcompletelyinhibitthereproductionofNewcastlediseasevirusinSPFchickenembryo.
Keywords: Volatile oilofElsholtzia penduliflora; Newcastle disease virus; SPF chicken embryo inoculation;
Hemagglutinationtest
　　鸡新城疫是由新城疫病毒引起的一种急性、热性、高
度接触性传染病 ,常呈败血症经过 ,具有很高的发病率和
死亡率 ,是目前危害养鸡业比较严重的传染病之一[ 1] 。
几十年来 ,本病主要以预防接种来控制流行 ,免疫效果也
比较好 ,但由于有时免疫程序不正确、疫苗保管不当等多
种原因 ,往往导致免疫失败而发病 [ 2] 。鸡新城疫发生后 ,
抗生素、磺胺类药品均无治疗作用 ,利巴韦林对鸡新城疫
病毒有一定作用 ,但效果不太理想 ,严重制约了养禽业的
发展[ 3] 。为了探讨中药垂花香薷挥发油对鸡新城疫的
治疗效果 ,为临床应用提供理论依据 ,笔者特进行了垂花
香薷挥发油抗新城疫病毒的体外抑制试验 [ 4] 。现将结
果初报如下。
1　材料与方法
1.1　试验材料
1.1.1　试验鸡胚　SPF鸡胚 ,购自山东省农业科学院家
禽研究所。
1.1.2　新城疫毒株　国内标准强毒株 F48E9 ,由哈尔滨
兽医研究所提供。
1.1.3　药品　中药垂花香薷 2000 g用水浸泡 ,蒸馏 ,搜
集蒸馏液 2000 mL,蒸馏液重蒸馏一次 ,搜集挥发油 500
mL,装瓶灭菌备用。垂花香薷挥发油由江苏畜牧兽医职
业技术学院研制。利巴韦林注射剂由济南利民制药有限
公司生产 ,配成 0.05 g/mL浓度 。生理盐水注射液由安
徽双鹤药业有限责任公司生产。
1.1.4　1%鸡红细胞悬液的制备　无菌采鸡血 ,加抗凝
剂 ,离心去血浆 ,沉淀用生理盐水洗涤 3次 ,每次 2000 r/
min,离心 10 min,然后去掉上清液 ,红细胞用生理盐水配
成 1%的红细胞悬液。
1.2　试验分组　取 10日龄鸡胚 120枚 ,随机分成两组:
第一组药物毒性试验又分为 5小组 ,每小组 4枚鸡胚 ,重
复 3次;第二组垂花香薷挥发油对鸡新城疫病毒增殖的
抑制作用测定试验又分为 4小组 ,每小组 15枚鸡胚。
1.3　试验方法
1.3.1　半数致死量测定　将病毒尿囊液稀释不同倍数 ,
接种 SPF鸡胚 ,得出胚胎半数致死量。经过测定 ,鸡胚
病毒尿囊液半数致死量的稀释度为 1∶10000000,正式试
验接种稀释度用 1∶5000000的尿囊液。
1.3.2　药物毒性试验　将中药垂花香薷挥发油用生理
盐水分别作 2倍、3倍、5倍稀释 ,将挥发油原液及不同浓
度的药液分别接种于 4枚 10日龄鸡胚的尿囊液中 ,每只
0.2mL,置 37℃恒温箱孵育 72 h,每天观察存活情况 ,鸡
胚全部存活的最高药物浓度为正式试验的起始浓度 。同
时设生理盐水对照组 。
1.3.3　垂花香薷挥发油对鸡新城疫病毒增殖的抑制作
用测定　测定方法见表 1,病毒尿囊液接种浓度参照
1.3.1,中药垂花香薷挥发油接种浓度参照 1.3.2。
上述鸡胚在 37℃恒温箱中孵育 ,每天照蛋 2 ～ 3次 ,弃去
24h内死胚 。收取 24 ～72h死胚和 72 h活胚尿囊液 ,低
温保存备用。以血凝(HA)试验检测每组鸡胚尿囊液的
病毒滴度。
表 1　垂花香薷挥发油对鸡新城疫病毒增殖的
抑制作用测定试验鸡胚分组情况
组别 数量(枚) 　　　　　　处理
试验Ⅰ组 15 接种病毒尿囊液 0.1mL,垂花香薷挥发
油 0.2mL。
试验Ⅱ组 15 接种病毒尿囊液 0.1mL,西药利巴韦林 0.2mL。
试验Ⅲ组 15 接种病毒尿囊液 0.1mL,生理盐水 0.2mL。
空白对照组 15 不接种病毒尿囊液 ,不给药。
上述鸡胚在 37℃恒温箱中孵育 ,每天照蛋 2 ～3次 ,
弃去 24 h内死胚。收取 24 ～ 72h死胚和 72 h活胚尿囊
液 ,低温保存备用。以血凝(HA)试验检测每组鸡胚尿
囊液的病毒滴度。
2　结果与讨论
2.1　结果
2.1.1　挥发油毒性实验　试验结果显示 ,接种各浓度挥
发油的鸡胚在 24、48及 72 h后均无死亡 ,故用原液挥发
油为正式试验的起始浓度 。
2.1.2　垂花香薷挥发油对鸡新城疫病毒增殖的抑制作
用　第Ⅰ组鸡胚在 24 ～ 72h死亡 4枚 ,至 72h存活 11枚 ,
鸡胚发育正常 ,无出血 。收集 4枚死亡鸡胚与 11枚存活
鸡胚尿囊液 , HA滴度为 0;第Ⅱ组鸡胚在 24 ～ 72 h死亡
10枚 ,至 72 h存活 5枚 ,鸡胚发育不良 ,全身弥漫性出
血 。收集 10枚死胚尿囊液与 5枚存活的鸡胚尿囊液 ,
HA滴度为 5log2;第Ⅲ组鸡胚在 24 ～ 72 h内死亡 15枚 ,
鸡胚发育不良 ,全身弥漫性出血 。收集 15枚鸡胚尿囊
液 , HA滴度为 7log2;第Ⅳ组(CK)在 72h内无鸡胚死亡 ,
鸡胚发育正常 ,无出血。收集所有活胚尿囊液 , HA滴度
为 0(见表 2)。
2.2　讨论　鸡新城疫是由新城疫病毒感染引起的传染
病 ,由于疫苗的广泛应用 ,使该病多以慢性或散发为特
点 。鸡新城疫发病后 ,目前还无有效疗法。用中药治疗
畜禽病毒性传染病 ,已有很多成功经验 ,但用垂花香薷挥
发油治疗鸡新城疫未见报道。本试验填补了该方面研究
的空白。
表 2　垂花香薷挥发油对鸡新城疫病毒
增殖的抑制作用测定结果
组别 死胚数(24～ 72h)
活胚数
(72h) HA滴度
试验Ⅰ组
试验Ⅱ组
试验Ⅲ组
空白对照组
4＊＊
10＊
15
0
11＊＊
5＊
0
15
0＊＊
5log2＊
7log2
0
　注:同列数字后标 “＊”表示与试验Ⅲ组比较差异显著(P<0.05),同
列数字后标“＊＊”表示与试验Ⅲ组比较差异极显著(P<0.01)。
本试验用的垂花香薷中药 ,是唇形科香薷属植物
ElshalziapmduliforaW.W.Snith的全草 ,生于海拔 1100
～ 2400 m的湿润肥沃土壤、山谷边、开矿山坡 、荒地、林
缘或灌丛间 [ 5] 。分布于云南东南部 、南部或西部等地。
全草含挥发油 0.68%,由 24种挥发油成分组成 ,其中 1,
8-桉叶素(1, 8-cineole)相对含量占 71.71%[ 6] 。现代
药学研究表明 ,垂花香薷挥发油有抗炎、抗菌、抗病毒等
作用 。现代医学对垂花香薷挥发油应用研究较少 ,而动
物医学对垂花香薷挥发油研究得更少 [ 7] 。本试验应用
垂花香薷挥发油对人工接种新城疫病毒的鸡胚 ,进行体
外抑制试验 ,取得了很好的效果 。
参考文献:
[ 1] 卢卫红 ,司兴奎 ,张济培 ,等.雏鸡新城疫病毒后机体抗氧化功
能的变化 [J].中国预防兽医学报 , 2009(3):179～ 182.
[ 2] .孙淑红 ,崔治中.鸡胚中新城疫强毒的分离、鉴定与生物学特
性研究 [ J].畜牧兽医学报 , 2007(7):741～ 743.
[ 3] 程太平 ,师丽敏.3种血清学试验检测鸡血清中鸡新城疫抗体
的比较研究 [ J].江苏农业科学 , 2007(2):128～ 130.
[ 4] 梁宏志.黑龙江鸡新城疫的流行现状及防制 [ J] .黑龙江畜牧
兽医 , 2005(7):85.
[ 5] 宋立人 ,吴贻谷 ,胡烈 ,等.中华本草 [ M] .上海:上海科学技术
出版社 , 1999:41～ 42.
[ 6] 张庆芝 ,普春霞 ,孙姣 ,等.垂花香薷的生物学研究 [ J].云南中
医中药杂志 , 2008(9):20～ 22.
[ 7] 张子梅.黄药的鉴别应用分析 [ J] .陕西中医 , 2004(1):69
～ 70.
139　8期　　　　　　　　　　　张步彩等:垂花香薷挥发油鸡胚接种抗鸡新城疫病毒的研究