作 者 ：陈晓亮
期 刊 ：湖南师范大学 2011年 08期 页码：83
关键词：刺糖多孢菌；嗜热脂肪酶；基因克隆；基因表达；生物柴油；
摘 要 ：本研究利用PCR从刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa)S08-4中扩增两个类似为脂肪酶的基因：ORF154(828bp)和ORF454(825 bp)。将两基因的终止密码子TGA突变为CTC,通过NdeⅠ和XhoⅠ酶切位点克隆到表达载体pET30a(+)上,转化大肠杆菌(Escherichia coli) BL21(DE3), IPTG诱导表达在羧基端带有纯化标签His6-Tag的融合蛋白,其表观分子量分别为32 kDa和33 kDa,且蛋白以有活性的可溶性形式存在。将表达的目的蛋白通过Co2+亲和层析纯化,并通过Vivaspin 2 Polyethersulfon...