全 文 ：基金项目:云南省教育厅科学研究基金项目。
作者简介:叶晓雯(1945-),女,云南中医学院副教授。
薄层扫描法测定黄藁本中滇芹素 B的含量
叶晓雯 , 李云森 , 赵　庆 , 廖心荣
(云南中医学院 ,云南 昆明　650200)
摘要:目的:为黄藁本的研究提供定量依据。方法:自行提取 、分离 、纯化得到滇芹素 B , 用紫外光谱 、红外光
谱 、质谱 ,核磁共振波谱进行结构分析 ,确定化学单体滇芹素 B为对照品 。并用薄层扫描法对黄藁本中的滇芹素 B
的含量进行测定。结果:在 1.12μg-7.84μg之间线性关系良好 , r=0.9991 RSD=3.92%(n=6)。
关键词:黄藁本;滇芹素 B;薄层扫描法;含量测定
中图分类号:R284.2　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1008-987X(2004)03-0029-02
　　黄藁本(云南省习用藁本)为伞形科滇芹属植物滇芹
Sinodielsia yunanensis Wolf 的干燥根 , 主产于云南省中部和
西部 ,在云南地区作为中药藁本的习用品种。黄藁本用于治
疗风寒所致之各种头痛及风湿痹痛。黄藁本的黄藁彝族药
名为“搓纳儿” ,用于治疗上呼吸道感染 、急性或慢性肾盂肾
炎 、偏头痛等症。笔者对云南地区使用的黄藁本进行了标准
物质研究 ,并使用薄层扫描法对部分产地的黄藁本中滇芹素
B 作含量测定 , 现将研究结果报道如下。
1　材料与方法
1.1　仪器和材料
Kofler 显微熔 点测定 仪;J—20C 型旋 光色散 仪;
Italy1106 元素分析仪;BOI—RAD FIS—135 红外分光光度
计;UV—210A 型(岛津)紫外分光光度计;AUTO SPEC—
3000 质谱仪;AM —400 型 、OR×500型超导核磁共振仪;CS-
9000 型薄层扫描仪(日本岛津)、定量点样毛细管 、电子分析
天平(AEG —120 日本岛津);硅胶(100 目 ～ 200 目)、硅胶
H 、硅胶薄层 G板(青岛海洋化工厂);氧化铝(上海第二化工
厂);黄藁本购于云南省药材公司 , 产自云南省丽江永胜地
区;经鉴定为伞形科滇芹属植物滇芹 Sinodielsia yunanensis
Wolf的干燥根;对照品为自行分离得到的化学单体;用试剂
均为分析纯。
1.2　提取分离
取干燥的黄藁本根和根茎粗粉 5.0kg , 以 95%乙醇加热
回流提取(3000ml×3), 合并提取液 ,减压回收溶剂后得糖浆
状棕黑色提取物 700.0g(14%以生药计)。粗提物加水成悬
浮液后以石油醚萃取(1000ml×3)得低极性部分 498.0g
(9.98%)。取石油醚部分 200g , 经硅胶柱色谱 , 以乙酸乙
酯;石油醚(0∶1—1∶1)混合溶剂梯度洗脱 , 以 TLC 检查 , 相
同组分合并 ,收集到六个流分 , 这些流分经反复用硅胶柱色
谱 ,氧化铝柱色谱及制备性薄层色谱 , 洗脱剂以石油醚—乙
酸乙酯系统为主 ,又进一步分离得到滇芹素 B , 经波谱鉴
定 , 其结构如下:
1.3　滇芹素 B的理化常数测定和波谱数据
滇芹素 B:C15H18O2 ,为无色针状结晶(石油醚—乙酸乙
酯);理化常数测定:m.p.91℃～ 92℃, [α] 21D =-30.09(C =
0.623 , CHCl3)。元素分析:C　(78.44%),H(7.96%):计算
值 C(78.26%),H(7.83%)。 IRνKBrmax cm-1:3064 , 3043 , 2559 ,
2922 , 2850 , 1739(五元环内酯 C=O), 1642(C =C), 1438 ,
1363 , 1315 , 1094(C-O-O), 996。MS m/ z(%):230[ M + , 78] ,
215(20), 201(16), 187(14), 173(16), 159(14), 151(25), 135
(19), 120(100), 105(83), 91(46), 77(41), 67(28), 55
(48)。1H-NMR(CDCl3 , δ):5.49(1H , br.s , H-3), 4.27(1H ,
d , J=10.2Hz , H-6), 2.90(3H , br.s , H-2 , H-5), 2.78(1H , m ,
H-8), 2.06(3H , m ,H-8 , H-9), 1.86(3H , s , 15-Me), 1.74(3H ,
s , 13-Me), 1.68(3H , s , 14-Me)。 13C—NM R DEPT(CDCl3 ,
δ):δ174.2(s , 12-C =O), 163.8(s , C-7), 141.2(s , C-4),
134.2(s , C-1), 132.2(s , C-10), 126.3(d , C-3), 121.4(s , C-
11), 84.2(d , C-6), 55.5(d , C-5), 36.5(t , C-2), 31.6(t , C-9),
27.1(t , C-8), 21.6(q , Me-14), 17.7(q , Me-15), 8.0(q , Me-
13)。
1.4　方法
1.4.1　对照品溶液的制备:精密称取滇芹素 B 对照品
5.0mg 置于 5ml容量瓶中加乙酸乙酯溶解并稀释至刻度 , 以
制成 lmg/ml的对照品溶液 ,备用。
1.4.2　样品溶液的制备:　精密称定黄藁本样品约 15g 用
无水乙醇索氏提取 6h ,浓缩 , 回收乙醇。浓缩液用乙酸乙酯
定容至 l0ml的容量瓶中 ,摇匀 , 备用。
1.4.3　薄层色谱条件:展开剂系统:石油醚—乙酸乙酯(5∶1)。
·29·2004 年 9月第 6卷第 3期September.2004 , Vol.6 , No.3 湖北中医学院学报Journal of Hubei College of TCM
显色条件与显色方法:　5%的硫酸无水乙醇液显色 , 采用一
次显色喷湿后 ,用电吹风吹去板上溶剂。在 105℃烘烤至斑
点显色清晰 ,取出在薄层板上覆盖一大小相近的玻璃板 , 周
围用胶布密封。
1.4.4　薄层扫描条件:　λS=650nm　λR=380nm　SX=3
条件下进行双波长反射法锯齿扫描。
2　结果
2.1　标准曲线的绘制
精密吸取对照品溶液(1.12μg/μl)1.0μl、2.0μl、3.0μl 、
4.0μl、5.0μl 、6.0μl、7.0μl分别点于同一硅胶 G 薄层板上 , 按
上述薄层色谱条件展开 、显色 , 在薄层扫描条件下测定各斑
点峰面积积分值 ,以对照品的量为横坐标 , 斑点峰面积积分
值为纵坐标绘制标准曲线 , 求得滇芹素 B 的回归方程:y=
48269.74681x-1045.21143 　 r = 0.9991。 滇 芹 素 B 在
1.12μg～ 7.84μg 范围内 , 点样量与峰面积积分值呈良好的
线性关系 , 因标准曲线为一不通过原点的直线 ,故用外标两
点法测定 、计算样品含量。
2.2　稳定性实验结果
精密吸取标准品溶液 2.0μl , 4.0μl ,样品溶液 1.0μl点样
展开显色 ,每隔 30min 扫描测定 , 计算样品中滇芹素 B 的平
均含量为 0.204%, RSD=1.82%(n=5)。样品显色后 2.0h
内测定 ,含量稳定。
2.3　精密度试验结果
精密吸取对照品溶液 1.0μl点于两块硅胶 G 板上 , 各点
六个点 , 展开显色 ,扫描测定 , 所得数据经统计处理 , RSD=
3.92%。结果表明 , 精密度良好。
2.4　加样回收试验结果
2.4.1　板上加样回收试验:　精密吸取对照品和样品溶液 ,
点样展开 ,显色 , 扫描测定 , 处理数据后 , 计算平均加样回收
率为 97.9%, RSD=2.14%(n =6)。说明薄层扫描条件选
择适当。
2.4.2　全程加样回收试验:　精密称取样品约 15g ,标准品
5.0mg , 一同置于索氏提取器中以 2.5 项中所述方法制备加
样回收液 ,点样展开 , 显色 ,扫描测定 , 处理数据后 ,计算平均
加样回收率为 101.3%, RSD=3.22%(n=6)。说明样品溶
液配制方法及薄层扫描条件选择适当 , 分析方案准确可行。
2.5　样品含量测定
精密吸取样品溶液 1.0μl与标准液 2.0μl、4.0μl交叉点
于同一硅胶 G 板上 ,展开 , 显色 , 扫描测定 , 计算样品中滇芹
素 B 的平均含量为 0.22%。(n =8)RSD=2.89%。
3　小结
对黄藁本的化学成分中滇芹素 B提取 、分离 、纯化后 , 应
用紫外 、红外 、核磁共振(1H—NM R、13C—N)进行结构分析。
采用薄层扫描法 , 选择滇芹素 B 作为对照品 , 经方法学考察
后 ,对黄藁本中滇芹素 B的含量进行测定 ,结果在 1.12μg ～
7.84μg之间线性关系良好 , r=0.9991 , RSD=3.92%(n =
6)。本法简便 , 准确灵敏 ,重现性好 , 对黄藁本进行品质评价
和质量研究以及活性物质的筛选 , 提供了部分定量依据。
实验所用的对照品物质滇芹素 B 是自行提取 、分离 、纯
化得到的 , 采用紫外光谱 、红外光谱 、质谱 、核磁共振波谱
(1H—NMR、 13C—NM R)对其进行结构分析 , 结构确定并符
合质量标准用对照品研究技术要求[ 3] 。笔者同时考察的还
有滇芹素 A , 因其显色斑点不稳定 , 给测定带来一定难度 , 故
仅将滇芹素 B 作为该含量测定方法的对照品。
　　黄藁本样品曾分别采用丙酮和乙醇回流提取 ,但由于前
法所得提取液有混浊 , 所以采用乙醇索氏回流提取。
　　实验还考查了提取时间对样品含量的影响 , 结果表明:
在其他条件不变的前提下 , 样品含量随提取时间的延长而增
加。当提取时间达 6h 时 , 其含量能保持在0.22%左右 , 故
6h为最佳提取时间。
参考文献:
[ 1] 　李云森 ,叶晓雯 ,廖心荣,等.云南习用藁本的品种考证[ J] .中
草药 , 2001 , 32(3):16-18 , 21.
[ 2] 　廖心荣,游春 ,张庆芝 ,等.三种云南习用藁本的鉴别[ J] .云南
中医学院学报 , 1996 , 19(4):8-10 , 7.
(收稿日期:2004-01-11　　编辑:郑晓屏)
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·30· 湖北中医学院学报 2004 年第 6 卷第 3 期