全 文 ：易县栽培西陵知母菝葜皂苷元含量的研究
田怡涛 1 ,陈千良1, 2＊ ,倪士峰1 ,王文全 3 ,刘建勇 4 ,尹玉山 4
(1.西北大学西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室 ,陕西西安 710069;2.陕西省生物医药重点实验室 ,陕西西安 710069;3.北京中医
药大学中药学院 ,北京 100102;4.河北省易县科学技术局 ,河北易县 074200)
摘要　[目的 ]考察易县栽培知母药材中菝葜皂苷元含量 ,了解其质量状况。 [方法] 采用高效液相蒸发光检测技术 ,内标法定量测定菝
葜皂苷元含量。采用KromasilC18柱为固定相;流动相为甲醇 ,流速 1ml/min。蒸发光散射检测器漂移管温度 50℃,蒸发温度 70℃,以
N2 为雾化气 ,压力 1.03×105 Pa。 [结果] 菝葜皂苷元在 0.024 9～ 0.498 0mg/ml内 ,进样量的对数值与对照品峰和内标峰面积比值的对数成良好线性关系(r=0.999 5)。平均回收率为 96.3%, RSD为 2.1%。测定结果表明 ,易县栽培知母的菝葜皂苷元含量均超过 1%,
最高者接近 2%,平均值为 1.46%。 [结论]易县栽培知母有效成分含量较高 ,与野生知母没有明显差异 ,质量普遍较好。
关键词　易县;栽培知母;菝葜皂苷元;含量
中图分类号　S567.23+9　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2010)26-14320-02
StudyonContentofSarsasapongenininCultivatedAnemarrhenaRhizomefromYiCounty
TIANYi-taoetal　(ResourceBiologyandBiotechnologyKeyLaboratoryofEducationMinistryinWesternChina, NorthwestUniversity,
Xian, Shaanxi710069)
Abstract　[ Objective] ThecontentofsarsasapongeninincultivatedAnemarrhenarhizomefromYiCountywasstudiedtoinvestigateitsquali-
ty.[ Method] Withcholesterolasinternalstandard, KromasilC18 columnwasused.Mobilephasewasmethanolwiththeflowrateof1ml/min.
Thetemperatureofthedrifttubeandevaporationwas50and70℃respectively.Thegaspressurewas1.03×105 Pa.[ Result] Therewasgood
linearityintherange0.0249-0.498mg/mlofsarsasapongenin, r=0.999 5.Theaveragerecoverywas96.3%withRSDof2.1%.Thecon-
tentofsarsasapongeninincultivatedAnemarrhenarhizomefromYiCountywerealabove1%.Thehighestwasnear2%.Theaveragecontent
was1.46%.[ Conclusion] ThecontentofactiveconstituentincultivatedAnemarrhenarhizomefromYiCountyarehigh, havingnonotable
diferencewithwildsamples.Thesamplesalhavegoodqualityrelatively.
Keywords　YiCounty;CultivatedAnemarrhena;Sarsasapongenin;Content
基金项目　国家 “十五 ”重大科技专项(2001BBA701A62-13);西北大学
科研启动项目(OKYQDF159);陕西省自然科学基金项目
(SJ08ZT02-4)。
作者简介　田怡涛(1985-),男 ,陕西西安人 ,讲师 ,研究方向:生物技
术及应用。 ＊通讯作者 ,博士 ,讲师 , 从事中药资源研究 , E-
mail:cql999999@ 126.com。
收稿日期　 2010-06-07
　　知母为百合科知母属多年生草本植物知母(Anemarhena
asphodeloidesBge.)的干燥根茎 ,是中国药典 1部收载的临床
常用重要中药 ,具有清热泻火的功能 [ 1] 。知母中所含的甾体
皂苷是其有效成分 ,水解后主要是菝葜皂苷元 ,因此菝葜皂
苷元含量是衡量知母药材质量的重要指标 [ 2-5] 。河北易县
是知母的道地产区 ,所产知母以质量优良 、疗效好而被称作
“西陵知母 ”[ 6] 。在野生药材资源日益减少 、不能满足需求的
情况下 ,河北易县已有大规模人工栽培 ,栽培品已经成为道
地 “西陵知母 ”的重要组成部分。为了解人工栽培西陵知母
药材的质量状况 ,确定规范化种植西陵知母的最佳栽培地
点 ,笔者采用高效液相内标法测定易县不同乡镇所栽培的知
母中菝葜皂苷元含量 ,研究其变异情况。
1　材料与方法
1.1　材料　菝葜皂苷元对照品购自中国药品生物制品检
定所(批号:110744-200306,供含量测定用);内标物胆固醇
购自生工公司 , HPLC蒸发光检测 ,纯度 >99%。娃哈哈纯
净水 ,色谱纯甲醇(FISHER),其余试剂均为分析纯。药材
样品为易县各乡镇栽培。所有样品均经北京中医药大学中
药学院刘春生教授鉴定为 AnemarhenaasphodeloidesBung.
的干燥根茎 ,留样药材存于北京中医药大学中药学院中药
生药系标本室 。
1.2　样品取样和处理方法　在不同地块平行取药材样品 。
随机在多点挖取数株知母 ,去掉地上部分 、须根后的根茎总
鲜重不少于 1 kg。根茎用湿润毛刷刷去泥土 ,快速切片后混
匀 ,晾晒或低温烘干 ,粉碎。
1.3　测定方法　采用高效液相蒸发光散射检测技术 ,内标
法定量测定知母药材中菝葜皂苷元含量 [ 7] 。
1.3.1　色谱条件。色谱柱:KromasilC18柱(250.0 mm×4.6
mm, 5 μm,大连依利特)。流动相:甲醇 ,流速 1 ml/min。柱
温为 30 ℃。蒸发光散射检测器漂移管温度为 50 ℃,蒸发温
度为 70 ℃,氮气为雾化气 ,压力为 15 Pa。在该条件下 ,色谱
图如图 1,菝葜皂苷元保留时间为 11.0 min,内标胆固醇保留
时间为 27 min。
注:1.菝葜皂苷元;2.胆固醇(内标)。
Note:1.sarsasapogenin;2.cholesterol(internalstandard).
图 1　菝葜皂苷元对照品和内标色谱
Fig.1　Chromatographofsarsasapogeninandinternalstandard
1.3.2　对照品溶液的制备和工作曲线的绘制。精密称取适
量菝葜皂苷元于 10ml容量瓶中 ,甲醇溶解定容 ,配成浓度为
0.996 mg/ml对照品溶液。精密称取适量胆固醇于 500ml容
量瓶中 ,甲醇溶解定容 ,配成浓度为 1.026 mg/ml内标溶液。
责任编辑　刘月娟　责任校对　况玲玲安徽农业科学 , JournalofAnhuiAgri.Sci.2010, 38(26):14320-14321, 14324
DOI :10.13989/j.cnki.0517-6611.2010.26.112
分别精确吸取上述菝葜皂苷元对照溶液 50、100、200、500、
1 000 μl于 2 ml容量瓶中 ,再给各瓶中精确加入上述内标溶
液 200 μl,加甲醇至刻度 ,作为系列对照。精密吸取以上系
列标准液 10μl注入液相色谱仪中 ,记录色谱图 ,测定菝葜皂
苷元峰面积(As)和胆固醇峰面积(Ai)。以菝葜皂苷元的进
样质量的对数值 lgMs为横坐标 ,以菝葜皂苷元和胆固醇峰
面积之比的对数值 lg(As/Ai)为纵坐标进行回归。由图 2可
知 ,菝葜皂苷元含量在 0.024 9 ～ 0.498 0mg/ml时 ,进样量的
对数值与对照品峰面积和内标峰面积比值的对数成良好线
性关系。
图 2　菝葜皂苷元与内标的线性关系
Fig.2　Linearchartofsarsasapogeninandinternalstandard
1.3.3　供试品溶液的制备。精密称取药材粉末(过 50目筛)
0.5 g,于 25ml容量瓶中 ,加入乙醇浸泡过夜。超声波振荡 40
min,取出放凉后乙醇定容。过滤 ,取续滤液 10ml于烧瓶中 ,蒸
干 ,加入浓盐酸 1.5 ml、水 10ml,水蒸气回流水解 2h。水解液
放凉后 ,滴加浓度 40%NaOH溶液至由黄色突变为橙红色 。
用氯仿 30 ml萃取 2次 ,合并萃取液 ,回收氯仿至干 。残渣用
甲醇溶解 ,转移至 10ml容量瓶中 ,加入上述胆固醇内标溶液
1 ml,甲醇定容后用 0.45 μm滤膜过滤即得供试液 。
2　结果与分析
2.1　易县栽培知母菝葜皂苷元的含量　吸取供试品溶液 10
μl,注入液相色谱仪测定 ,根据工作曲线计算含量。药材样
品色谱图见图 3。
注:A.菝葜皂苷元;IS.胆固醇(内标)。
Note:A.sarsasapogenin;IS.cholesterol(internalstandard).
图 3　西陵知母药材样品色谱
Fig.3　ChromatographofXilingZhimusample
　　吸取同一份供试品溶液(坡仓苑岗栽培)重复进样 6次 ,
计算菝葜皂苷元含量 ,平均值为 1.10%, RSD为 1.93%,表明
精密度良好。取同一供试液(坡仓苑岗栽培)分别在 1、2、3、
6、8 h注入液相色谱仪测定 ,计算菝葜皂苷元含量 ,平均值为
1.09%, RSD为 2.13%,表明供试品在 8 h内稳定性良好。精
密称取同一知母药材粉末 5份(富岗龙门沟栽培),按照上述
方法测定 ,菝葜皂苷元含量平均值为 1.36, RSD为 3.1%,说
明该方法的重现性较好。采用加样法进行回收率考察。精
密称取 0.1g药材粉末 6份(含量 0.53%),分别精密加入菝
葜皂苷元对照品溶液(1.13 mg/ml)0.5 ml,按照上述方法制
备供试液并测定 。采用加样法 ,计算回收率。平均回收率为
96.3%, RSD为 2.1%,表明该方法回收率良好。
　　为了进行对比 ,对在道地西陵知母产地易县采集到的距
离较远的 2个野生知母样品菝葜皂苷元含量进行了测定 ,其
结果见表 1。
表 1　易县野生知母菝葜皂苷元含量
Table1　ContentofsarsasapongenininwildsamplesfromYiCounty
来源
Source
菝葜皂苷元∥%
Sarsasapongenin
采集时间
Samplingdate
状况
Status
大碾子沟 1.40 2005-10 野生 ,海拔约 800m
独立石 1.79 2005-10 野生 ,海拔约 800m
　　甾体皂苷是知母的主要有效成分。总皂苷含量是药材
质量评价的指标 。知母皂苷水解后的主要苷元是菝葜皂苷
元 ,所以测定药材中菝葜皂苷元含量就成为衡量总皂苷的标
准。 2005版中国药典就是以菝葜皂苷元含量来判断药材优
劣 ,含量在 1%以上才算合格 [ 8] 。由表 2可知 ,易县栽培知母
的菝葜皂苷元含量均超过 1%,最低为大台栽培的 ,含量
1.03%;最高者为上围场栽培的 ,含量 1.91%,接近 2%;13
个栽培样品菝葜皂苷元含量平均值为 1.46%。这说明易县
栽培知母中有较高含量的总皂苷 ,质量普遍较好。
表 2　易县栽培知母菝葜皂苷元含量
Table2　ContentofsarsasapongeninincultivatedsamplesfromYi
County
序号
No.
栽培点Cultivatedsites
菝葜皂苷元∥%Sarsasa-pongenin
采集时间Samplingdate
状况
Status
1 柳树渠 1.50 2005-10-03山地半野生栽培 ,海拔约 550m
2 上围场 1.91 2005-10-05平地集约栽培 ,海拔约 400m
3 坡仓林场 1.29 2005-10-05山地半野生栽培 ,海拔约 450m
4 墨斗店 1.83 2005-10-03山地半野生栽培 ,海拔约 450m
5 田岗 1.89 2005-10-04平地集约栽培 ,海拔约 400m
6 大台 1.03 2005-10-03山地半野生栽培 ,海拔约 550m
7 河西 1.14 2005-10-04平地集约栽培 ,海拔约 200m
8 双河庄 1.56 2005-10-03平地集约栽培 ,海拔约 300m
9 苑岗 1.10 2005-10-04平地集约栽培 ,海拔约 450m
10 龙门沟 1.36 2005-10-04山地半野生栽培 ,海拔约 750m
11 杏树台 1.33 2005-10-05山地半野生栽培 ,海拔约 450m
12 北白虹 1.71 2005-10-06平地集约栽培 ,海拔约 400m
13 三尖坨 1.39 2005-10-03山地半野生栽培 ,海拔约 500m
2.2　易县栽培和野生知母菝葜皂苷元含量的比较　总皂苷含
量可以通过菝葜皂苷元含量反映。因此 ,菝葜皂苷元含量是对
比栽培和野生西陵知母的首要指标。将 13个栽培知母与 2个
野生知母作为 2组对菝葜皂苷元含量进行比较。由表 3可知 ,
易县栽培知母菝葜皂苷元含量平均值虽然略低于野生西陵知
母 ,但是菝葜皂苷元含量与野生知母间不存在差异。
3　结论与讨论
知母中皂苷是甾体皂苷 ,没有紫外吸收。高效液相测定
(下转第 14324页)
1432138卷 26期　　　　　　　　　　　　　　　　　田怡涛等　易县栽培西陵知母菝葜皂苷元含量的研究
表 2　不同 pH值条件下羊耳菊提物对甲型副伤寒沙门氏菌抑菌效果
Table2　EffectsofdifferentpHvaluesonantibacterialactivityofInula
cappaextractsagainstS.paratyphi
pH值
pHvalue
对照∥cfu/ml
Control
试验组菌落形成单位cfu/mlUnit
抑菌率∥%Inhibitionrate
5 289 83 71.3
6 +++ 0 100.0
7 +++ 0 100.0
8 105 0 100.0
9 485 96 80.2
　注:+++表示菌落数太多 ,难以记数。
　Note:+++standsfortoomanystrains, itishardtocount.
3　结论与讨论
羊耳菊提取物对金黄色葡萄球菌和甲型副伤寒沙门氏
菌的 MBC/MIC相等 ,均为 2,其比值比较小 ,可见羊耳菊提
取物为杀菌剂 [ 3] 。羊耳菊提取物对金黄色葡萄球菌最佳抗菌
浓度为 4 MIC,羊耳菊提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌作用表
明 ,在浓度 2 MIC以上的抗菌效果并不随浓度提高而显著提
高 ,由此可知 ,羊耳菊提取物对金黄色葡萄球菌的杀菌作用表
现为时间依赖关系。羊耳菊提物对甲型副伤寒沙门氏菌最佳
作用浓度为 16 MIC。不同浓度对甲型副伤寒沙门氏菌其抗菌
效果与药液浓度呈正相相关 ,并且表现出时间依赖型。在 2
MIC、4 MIC、16MIC这 3个浓度下 ,把细菌全部杀死的时间分
别出现在 16、12、5h,并且后面时间段并未出现重新生长现象。
对中草药的传统研究一般都停留在检测 MIC和 MBC,
但 MIC和 MBC不能反映抗菌药体外抗菌活性随时间变化的
过程 ,该文主要在体外研究了抗菌药的量效随时间变化的关
系 ,这为临床用药提供了科学依据 [ 3] 。
参考文献
[ 1] 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志(第 75卷)[ M].北
京:科学出版社 , 1985:271.
[ 2] 中国医学科学院药用植物资源开发研究所等.中药志(Ⅳ)[M].2版.
北京:人民卫生出版社, 1988:368.
[ 3] 童明庆.抗菌药的 PK/PD理论与抗菌药的药效研究 [ J].药品评价,
2004, 1(1):55-59.
[ 4] ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute/NCCLS.Performancestand-
ardsforantimicrobialsusceptibilitytesting, Fifteenthinformationalsupple-
ment.CLSI/NCCLSdocumentM100-S15 [ J].ClinicalandLaboratory
StandardsInstituteWaynePennsylvania, 2005, 25(1):1-167.[ 5] TAMVINCENTH, SCHILLINGAMYN, MICHAELNIKOLAOU.Model-
lingtime-kilstudiestodiscernthepharmacodynamicsofmeropenem[J] .
JournalofAntimicrobialChemotherapy, 2005, 55:699-706.
[ 6] JIGNAPAREKH, DARASHANAJADEJA, SUMITRACHANDA.Eficacy
ofaqueousandmethanolextraxtsofsomemedicinalplantsforpotentialan-
tibacterialaxtivity[J].TurkJBiol, 2005, 29:203-210.
[ 7] 姚淑敏 ,卢元芳.银杏叶提取物抗菌作用研究[ J].食品科学, 1999(9):
55-56.
(上接第 14321页)
菝葜皂苷元选用蒸发光散射检测器 。它是目前较好的通用
型检测器 ,比视差折光检测器灵敏度高 ,而且可以用梯度洗
脱的分离条件 。该试验选用胆固醇作为内标 ,建立了测定菝
葜皂苷元含量的内标法。采用内标法 ,避免了用外标法时对
照品分析与样品分析 2个过程间仪器状态的波动而造成的
定量误差。工作曲线建立之后 ,测定时只需分析样品溶液就
可定量 ,从而提高测定的准确性。试验中通过反复优化 ,确
定了蒸发光检测器合适的雾化温度和蒸发温度 ,提高了检测
的灵敏度和图谱的质量 ,保证了良好的检测 。
表 3　野生和栽培西陵知母菝葜皂苷元含量比较
Table3　Comparationofsarsasapongenincontentbetweenwildand
cultivatedXilingzhimu
类别
Types
样品个数
Samples
平均值∥%
Mean RSD∥%
野生 Wild 2 1.60 17.3
栽培 Cultivated 13 1.47 20.4
　　由于野生资源不断减少 ,依靠规范化种植生产是保证中
药材供应的根本途径。目前市场上知母药材中野生和栽培
的并存。多数中药材的栽培品与野生道地药材质量有一定
的差异。栽培实践证明 ,野生道地药材的原产地适合该种药
材的种植 ,所生产的人工药材与野生道地药材质量间差异较
小 ,即道地药材的野生原产地有规范化栽培生产的最佳适宜
性 。研究表明 ,西陵知母也遵循这样的规律 。易县栽培品与
野生差异较小 ,质量优于其他来源的知母 ,已逐渐成为道地
西陵知母的组成部分。易县地处太行山区 ,有广大的丘陵山
地 ,不适合大面积的粮食生产。而知母生命力强 ,耐干旱贫
瘠 ,适应山地丘陵。采取半野生种植 ,只需春季将知母苗移
栽山地 ,无需人工灌溉 ,基本不需要后期的管理 ,在半野生环
境下生长 ,生产成本较低。易县栽培知母已经形成规模 ,在
易县出产知母中占有较高比例。近年来随着知母药材市场
价格的提高 ,半野生化栽培生产知母药材已经成为当地群众
致富的一条好途径。
参考文献
[ 1] 肖培根 ,李大鹏,杨世林.新编中药志 [ M].北京:化学工业出版社,
2002:596.
[ 2] AKIRAN, OSAMUT, MASAKOI, etal.Screeningtestforplateletaggrega-
tioninhibitorinnaturalproducts, theactiveprincipleofAnemarhenaerhi-
zoma[J] .YakugakuZassihi, 1988, 108(6):555.
[ 3] NKASHIMAN,KIMURAI, KIMURAM.Isolationofpseudoprototimo-sap-
oninAⅢ fromrhizomesofAnemarrhenaasphodeloidesanditshypoglycemicactivityinstreptozotocin-induceddiabeticmice[ J].JNatProd, 1993, 56
(3):345.
[ 4] 王卫东 ,程祖珏 ,邵卫中.知母皂苷对体外培养成年大鼠海马神经前体
细胞增殖的影响 [ J].江西医药 , 2004, 39(2):96.
[ 5] 陈锐群 ,余竹元 ,张夏英 ,等.知母皂苷元是 Na+、K+-ATP酶的抑制剂
[ J].生物化学与生物物理学报 , 1982, 14(2):159.
[ 6] 江苏新医学院.中药大辞典 [ M].上海:上海科学技术出版社 , 1986:
1366.
[ 7] 陈千良 ,王文全 ,马长华 ,等.HPLC-ELSD内标法测定知母药材中菝葜皂苷元含量 [ J].药物分析杂志 , 2008, 28(3):350-353.
[ 8] 国家药典委员会.中国药典.2005一部 [ M].北京:化学工业出版社,
2005:148.
14324 　　　　　　　　　　安徽农业科学　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　2010年