全 文 ：HPLC法测定棉团铁线莲中齐墩果酸的含量
关颖丽 1 ,杨荣艳2 ,张海峰 1　
(1.通化师范学院制药与食品科学系 ,吉林通化 134002;2.吉林省四平市食品药品检验所 ,吉林四平 136001)
摘要　[目的 ]采用HPLC法测定棉团铁线莲(Clematishexapetala)根及茎叶中齐墩果酸含量 ,为进一步开发棉团铁线莲药用资源提供理
论依据。 [方法]色谱柱为 YW-C18柱(4.6mm×150.0mm, 5μm);流动相为甲醇-水(V∶V=90∶10);检测波长为 220nm;进样量为 10
μl;流速为 1.0ml/min;柱温为 25℃。 [结果]棉团铁线莲根中齐墩果酸的含量为 0.175 2%,茎叶中齐墩果酸的含量为 0.096 3%。 [结
论] 该方法简单 、快速、准确 ,可用于棉团铁线莲中齐墩果酸的含量测定;同时该研究为评价棉团铁线莲茎叶的药用价值提供了参考 ,为
进一步开发棉团铁线莲药用资源和质量控制提供了科学依据。
关键词　棉团铁线莲;齐墩果酸;HPLC法
中图分类号　S567　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2011)02-00768-02
DeterminationofOleanolicAcidinRootsandStem-LeafofClematishexapetalabyHPLC
GUANYing-lietal　(DepartmentofPharmaceuticsandFoodScience, TonghuaTeachersColege, Tonghua, Jilin134002)
Abstract　[ Objective] Todeterminethecontentofoleanolicacidinrootsandstem-leafofClematishexapetala, soastoprovidetheoretical
evidenceforthefurtherdevelopmentofClematishexapetalaresources.[ Method] HPLCconditionswereasfolows:YW-C18 column(4.6mm
×150mm, 5 μm), mobilephaseofmethanol-water(V∶V=90∶10), detectionwavelengthof220nm, samplingamountof10μl, flowrateof
1.0ml/minandcolumntemperatureof25 ℃.[ Result] Thecontentofoleanolicacidinrootsandstem-leafofClematishexapetalawere
0.175 2%andwas0.096 3% respectively.[ Conclusion] Simpleandrapidinoperationsandaccurateindetermination, themethodestab-
lishedinthisstudyisfavorableforthedeterminationofoleanolicacidinClematishexapetala, Thiscaseprovidesreferencefortheassessment
ofthemedicinalvalueofstemsandleavesfromClematishexapetala, andofersscientificbasisforthefurtherdevelopmentandqualitycontrol
ofClematishexapetalaresources.
Keywords　 Clematishexapetala;Oleanolicacid;HPLC
作者简介　关颖丽(1974-),女 ,吉林通化人 ,副教授 ,硕士 , 从事生药
有效成分的分离鉴定及生物活性研究 , E-mail:guanyingli
7151@126.com。
收稿日期　 2010-09-30
　　棉团铁线莲(Clematishexapetala)别名山蓼 、棉花团 、山
辣椒秧 ,为毛茛科铁线莲属多年生草质藤本植物 ,主产于我
国黑龙江 、吉林 、辽宁 、河北 、山西 、陕西 、甘肃东部和山东等
地 [ 1] 。 《中国药典 》2005年版 [ 2]将其根及根茎作为威灵仙的
正品药材应用 ,主要用于治疗风湿痹痛 、关节不利等症 。研
究表明 ,铁线莲属植物中含有多种类型的化学成分 [ 3] ,其中
主要有效成分为三萜皂苷类 ,其皂苷元主要为齐墩果
酸 [ 4-5] 。目前 ,对棉团铁线莲根的化学成分研究已有报
道 [ 6] ,但至今尚未见对其茎叶中化学成分的研究报道。为
此 ,笔者采用 HPLC法对棉团铁线莲的根及茎叶中齐墩果酸
的含量进行测定 ,并对测定方法进行研究 ,以期为进一步开
发棉团铁线莲药用资源提供理论依据。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　研究对象。棉团铁线莲 2009年 9月采自吉林通化
市 ,经通化师范学院于俊林教授分类鉴定。
1.1.2　主要试剂。齐墩果酸标准品(批号:110709-200304),
由中国药品生物制品检定所提供;甲醇为市售色谱纯或分析
纯;其他试剂均为市售分析纯;超纯水 。
1.1.3　主要仪器。Agilent1100型高效液相色谱仪(包括
1100四元泵 、柱温箱 、二级管阵列检测器和 Agilent化学工作
站),由美国 Agilent公司生产;CP225D电子天平 ,由 sartoris
公司生产。
1.2　方法
1.2.1　色谱条件。色谱柱为 YW-C18柱(4.6 mm×150.0
mm, 5 μm);流动相为甲醇 -水(V∶V=90∶10);检测波长为
220nm;进样量为 10 μl;流速为 1.0ml/min;柱温为 25 ℃。
1.2.2　供试品溶液的制备。将棉团铁线莲采后洗净 ,阴干 ,
将其根 、茎叶分别粉碎过 60目筛 ,备用。精密称取棉团铁线
莲根 、茎叶粉末各 5.0 g,分别置于具塞容量瓶中 ,加入 30 ml
乙醚超声处理 15min,过滤。在药渣中加入 30 ml水饱和正丁
醇 ,超声提取 15 min,过滤 ,重复 2次 ,合并滤液。分别将滤液
置于分液漏斗中 ,加入 2倍量蒸馏水 ,摇匀 ,静置分层(取上
层),回收浓缩正丁醇层。将正丁醇浓缩物分别加水稀释至 50
ml,再加入盐酸 ,使浓度为 10%,加热保持微沸 30 min(保持水
分)。酸水解液用等倍量乙酸乙酯萃取 3次 ,回收乙酸乙酯 ,残
渣用甲醇溶解 ,定容至 5ml,即得供试品溶液。
1.2.3　方法学考察。
1.2.3.1　线性关系考察。精密称取齐墩果酸标准品 20.520 0
mg,用甲醇溶解并定容至 100 ml。分别精密吸取标准液 1.0、
2.0、3.0、4.0、5.0 ml置于 10 ml的容量瓶中 ,加甲醇定容至
刻度 ,摇匀 ,分别进样。以峰面积为纵坐标(y),标准品浓度
为横坐标(x)计算回归方程 ,考察线性关系。
1.2.3.2　精密度考察。精密吸取标准品溶液 10 μl,重复进
样 5次 ,测定峰面积 ,计算得峰面积相对标准偏差(RSD)值。
1.2.3.3　稳定性考察。取棉团铁线莲根药材粗粉按
“1.2.2”制备成样品 ,在室温下保存 ,分别于第 0、2、4、8、12 h
测定 ,计算峰面积 RSD值。
1.2.3.4　重现性考察。取棉团铁线莲根样品 5份 ,分别按
“1.2.1”中色谱条件测定 ,计算样品中齐墩果酸峰面积
RSD值。
1.2.3.5　加样回收率试验 。精密称定 5.0 g棉团铁线莲根
样品各 5份 ,分别按供试品溶液方法制备。精密吸取样品液
1ml,在每份中加入齐墩果酸标准品 0.205 2 mg/ml各 1 ml,
责任编辑　刘群燕　责任校对　况玲玲安徽农业科学 , JournalofAnhuiAgri.Sci.2011, 39(2):768-769
DOI :10.13989/j.cnki.0517-6611.2011.02.096
进样分析 ,计算平均回收率和 RSD值。
1.2.4　样品含量测定。分别取棉团铁线莲根 、茎叶供试品
溶液进行 HPLC测定 ,进样量均为 10μl,平行进样 3次 ,计算
齐墩果酸含量 。
2　结果与分析
2.1　方法学考察结果
2.1.1　线性关系。由图 1可知 ,齐墩果酸标准品在 5 ～6 min
出峰 ,计算得回归方程为 y=242 08x-126.8, r=0.999 1。结
果表明 ,齐墩果酸在 0.205 2 ～ 1.026 0mg/ml范围内与峰面
积呈良好的线性关系。
图 1　齐墩果酸标准品HPLC色谱图
Fig.1　HPLCchromatogramofstandardoleanolicacid
2.1.2　精密度。计算得峰面积 RSD值为 0.58%,表明仪器
精密度良好。
2.1.3　稳定性。计算得峰面积 RSD值为 0.89%,表明齐墩
果酸在 12 h内稳定。
2.1.4　重现性。计算得 RSD值为 1.51%,表明样品处理过
程和测定方法均有良好的重现性。
2.1.5　回收率。计算齐墩果酸平均回收率为 99.8%, RSD
值为 1.12%。
2.2　样品测定结果　棉团铁线莲根 、茎叶中齐墩果酸测定结
果如图 2、3所示。计算得棉团铁线莲根中齐墩果酸的平均含
量为 0.175 2%,茎叶中齐墩果酸的平均含量为 0.096 3%。
3　结论与讨论
齐墩果酸为棉团铁线莲所含的主要皂苷元 ,其含量的测
定在一定程度上能反映药材的质量。研究表明 [ 6] ,不同产地
的棉团铁线莲中齐墩果酸的含量也不同 ,河北产的棉团铁线
莲齐墩果酸含量较高 ,辽宁产的较低 。该试验结果表明 ,吉
林通化地区所产的棉团铁线莲齐墩果酸含量也较低 ,其中棉
团铁线莲的茎叶中齐墩果酸含量略低于根 。该测定方法操
图 2　棉团铁线莲根的 HPLC色谱图
Fig.2　HPLCchromatogramsoftherootsofClematishexapetala
图 3　棉团铁线莲茎叶的 HPLC色谱图
Fig.3　HPLCchromatogramofthestemsandleavesofClematis
hexapetala
作简单 、灵敏 、重现性好 ,可用于棉团铁线莲中齐墩果酸的含量
测定。该研究为评价棉团铁线莲茎叶药用价值提供了参考 ,为
进一步研究开发其药用资源和质量控制提供了科学依据。
参考文献
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76939卷 2期　　　　　　　　　　　　　　　　关颖丽等　HPLC法测定棉团铁线莲中齐墩果酸的含量