全 文 ：第 37卷第 2期
2010年 3月
浙　江　大　学　学　报(理学版)
Journal of Zhejiang University(Science Edition)
http://www.journals.zju.edu.cn/ sci V ol.37 No.2Mar.2010
收稿日期:2009-05-21.
基金项目:国家科技部“国家科技攻关计划引导项目”(2005BA741C).
作者简介:顾地周(1973-),男 ,讲师 ,主要从事长白山区珍稀濒危植物和药用植物研究.
＊通信作者(1964-),男 ,教授 ,博士 ,博士生导师 ,主要从事森林培育 、林木种子生物学等研究.
DOI:10.3785/ j.issn.1008-9497.2010.02.021
基于均匀设计法优化长白舌唇兰和
凹舌兰的高效快繁体系
顾地周1 , 高捍东2＊
(1.通化师范学院 生物系 , 吉林 通化 134002;2.南京林业大学 森林资源与环境学院 , 江苏 南京 210037)
摘　要:以长白舌唇兰和凹舌兰的茎尖为外植体 ,应用均匀设计法筛选最适合于原球茎和类原球茎诱导及类原球茎
萌发为完整植株的培养基.结果表明 ,最适合长白舌唇兰原球茎和类原球茎诱导的培养基为 N6 +TDZ0.05 mg· L-1
+NAA0.01 mg· L-1 +KT0.50 mg · L-1 , 诱导率为 92.5%;最适合凹舌兰原球茎和类原球茎诱导的培养基为
N6 +TDZ0.05 mg· L-1 +KT0.50 mg· L-1 , 诱导率为 98%;长白舌唇兰类原球茎萌发为完整植株的最佳培养基
为N6 +IAA0.01 mg· L-1 , 萌发率为 96%;凹舌兰类原球茎萌发为完整植株的最佳培养基为 N6 +IAA0.01 mg ·
L-1 +GA3 0.01 mg · L-1 , 萌发率为 94.5%.以类原球茎的切片为材料进行类原球茎快繁的结果表明 ,在 30 ～ 40 d
的一个培养周期内 ,增殖倍数达 100 以上 , 成功建立了两种兰的高效快繁体系.同时对不同阶段培养材料的形态结
构及超微结构的观察证明了两种兰的类原球茎发生发育过程.
关　键　词:长白舌唇兰;凹舌兰;均匀设计;原球茎;类原球茎
中图分类号:S 722　　　　文献标志码:A　　　　文章编号:1008-9497(2010)02-221-06
GU Di-zhou1 , GAO Han-dong2＊(1.Department o f Biology , Tonghua Normal University , Tonghua 134002 , J i lin
Province , China;2.College o f Forest Resources and Env ironment , Nan jing Forestry University , Nan jing
210037 , China)
Uniform design methods for high ef ficient micropropagat ion of Platanthera mandarinorum Rchb.f.var.cornu-bovis
(Nevski)Kitag.and Coelog lossum viride (L.)Hartm.Journal of Zhejiang Univer sity(Science Edition), 2010 , 37
(2):221-226
Abstract:The stems tip o f P latanthera mandarinorum Rchb.f.var.co rnu-bovis (Nevski)Kitag.and Coelog los-
sum v iride(L.)Hartm we re used as explants and suitable medium compositions fo r inducing pro toco rms and pro to-
co rm-like body s , proto co rm-like body s germina tion were screened thr ough unifo rm design experiments.The results
show ed tha t N 6 +TDZ0.05 mg · L -1 +NAA0.01 mg · L-1 +KT0.50 mg · L-1 was most suitable fo r P latanthera
mandarinorum w ith an induction rate of 92.5%;N6 +TDZ0.05 mg · L-1 +KT0.50 mg· L-1 was most suitable fo r
Coelog lossum viride w ith an induc tion rate o f 98%;N6 + IAA0.01 mg · L-1 w as most suitable for P latanthera
mandarinorum with a ge rmination r ate of 96%;N6 +IAA0.01 mg · L-1 + GA3 0.01 mg · L -1 w as most suitable
for Coeloglossum v iride with a ge rmination rate of 94.5%.Slices with one node we re cut f rom induced pro toco rm-
like bodys and cultured fo r propagation , and a 100-fold pro lifer ation rate was achieved within 30 ～ 40 day s.High
effective micropropaga tion system of two L ilies has been succe ssfully e stablished.The oberv ation of morphostr uc-
ture and ultra st ructure pro ved the pr ocess o f inducing and development fo r pro tocorm-like bodys of two O rchids.
Key Words:P latanthera mandarinorum Rchb.f.var.co rnu-bovis (Nevski)Kitag.;Coelog lossum v iride (L.)
Har tm;unifo rm design;pro tocorm;pro toco rm-like body
　　长白舌唇兰(Platanthera mandarinorum Rchb.
f.var.cornu-bovis(Nevski)Kitag.)和凹舌兰(Coe-
log lossum viride (L .)Hartm),分别为兰科舌唇兰
属和凹舌兰属多年生草本植物.在民间可治疗多种
疾病 ,主要功效为:块茎可做流产药 、避孕药及月经
障碍 ,幼小块茎可治阳痿 ,地上茎有发汗 、利尿及降
压作用 ,种子治癫痫等症.长白舌唇兰顶生总状花序
疏生 ,花浅黄色;凹舌兰其花淡绿色或黄绿色 ,总状
花序 ,具数花 ,均可开发为盆栽及花坛用观赏园艺植
物.另外 ,这两种兰还可作为抗寒兰花育种的种质资
源 ,是长白山区稀有植物 ,已列为省级保护植物 ,仅
零星分布于长白山国家级自然保护区内 ,开发及利
用受到限制.因其种子不易获得 ,其常规繁殖主要靠
分蘖方式 ,繁殖系数小.组培快繁主要是通过器官发
生途径由外植体分化不定芽然后再生植株 ,具有增
殖系数高等优点 ,但仍存在外植体诱导愈伤组织周
期较长 、获得无菌苗速度较慢 、且无菌苗长期连续增
殖极易发生退化和变异等缺点.而相对于器官发生
过程 ,原球茎发生途径是经历与胚发育相似的过程
形成类原球茎 ,然后萌发进而发育为完整植株.不仅
繁殖系数高 ,而且遗传稳定性强 ,可用于人工种子的
制作 ,大大提高种苗生产效率 ,并可用于遗传转化 ,
直接通过原球茎发生途径获得抗逆性强的转基因兰
植株.目前 ,国内外关于植物原球茎发生研究的报道
较多[ 1-5] ,作者在前人报道的基础上 ,研究了两种长
白山野生兰的原球茎发生体系 ,以期明确高效 、稳定
的原球茎诱导 、发育及萌发条件;同时对原球茎诱导
及其萌发过程的形态及超微结构进行研究 ,为深入
了解两种兰原球茎发生的形态学及形态调控技术提
供依据 ,为提高种苗生产率和制作兰人工种子奠定
基础.同时 ,应用均匀设计对两种兰的茎尖诱导原球
茎和类原球茎及类原球茎萌发为完整植株的培养基
进行筛选.目前 ,与两种兰同科的其他种的相关研究
已有过报道 ,但有关长白舌唇兰和凹舌兰高效快繁
的报道迄今未见.
1　材料与方法
1.1　外植体材料及其处理
6月于吉林省通化白鸡腰国家级自然保护区采
长白舌唇兰和凹舌兰两种兰的分蘖单株.在实验室
内将外层叶片剥下取内层幼嫩小茎尖 ,在超净工作
台上用 70%酒精涮洗 30 s ,用 0.5%的次氯酸钠溶
液浸泡 6 min ,无菌水冲洗 8次.用无菌滤纸吸干表
面水分 ,切除被杀菌消毒剂损伤部分并纵向切0.2～
0.5 cm 的切口后作为外植体[ 6] .
1.2　两种兰茎尖诱导类原球茎培养基的筛选
以 N 6 为基本培养基 ,添加蔗糖 50 g · L-1 ,琼
脂粉 8.5 g ·L-1 ,pH 5.9 ,温度(25±2)℃,暗培养.
将经过处理的外植体接种到附加不同浓度的 TDZ 、
IAA 、NAA 和 KT(由预试验可知浓度范围分别为
TDZ0.05 ～ 0.10 mg ·L-1 , IAA 0.03 ～ 0.07 mg·L-1 ,
NAA0.01 ～ 0.05 mg ·L-1和KT0.10 ～ 0.50 mg·L-1)
的 N 6 培养基上进行培养 ,筛选最适宜的原球茎诱
导培养基.为了提高两种兰类原球茎诱导的速度和
诱导率 ,采用均匀设计法[ 7] ,每个处理数为 30 ,选用
U10(108)均匀表(见表 1),同时考察了 TDZ 、IAA 、
NAA 和 K T 浓度交叉配比对两种兰茎尖诱导类原
球茎的影响 ,结果见表 2.
1.3　两种兰类原球茎的高效增殖体系建立
以两种兰诱导产生的类原球茎为材料 ,将整个
类原球茎切割成薄片 ,再转接到优化后的类原球茎
诱导培养基中 ,进行类原球茎增殖培养.统计增殖周
期和倍数.
1.4　两种兰类原球茎萌发为完整植株培养基的筛选
以 N 6 为基本培养基 ,添加蔗糖 20 g · L-1 ,琼
脂粉 8.5 g ·L -1 ,pH 5.9 ,温度(25±2)℃,光照强
度 1 200 lx ,光照周期 12 h ·d-1 .待类原球茎增殖
到一定数量后 ,将类原球茎逐个剥离下来 ,转接到附
加不同浓度的 IAA 和GA 3(由预试验可知浓度范围
分别为 IAA0.005 ～ 0.01 mg · L-1 , GA 30.01 ～
0.05 mg ·L -1)的 N 6 培养基中进行类原球茎萌发
为完整植株的培养 ,筛选最适宜的类原球茎萌发培
养基.为了提高两种兰类原球茎成功发育为完整植
株的速度 ,采用均匀设计法 ,每个处理数为 30 ,选用
U10(108)均匀表(见表 3),同时考察了 IAA 和 GA 3
浓度交叉配比对两种兰类原球茎萌发率的影响 ,结
果见表 4.
1.5　结果观察
用数码相机对外植体各阶段的形态变化进行拍
摄.同时 ,将不同阶段的培养物剥离或切割成 2 ～
3 mm的小块用导电胶粘在样品台上 ,将样品台放入
日立 S-3000N 型的扫描电镜上观察并拍摄.
1.6　数据分析
数据分析与处理采用均匀设计(Unifo rm Design)
软件.回归分析均采用全回归(后退法).
222 浙 江 大 学 学 报(理学版)　 第 37 卷　
2　结果与分析
2.1　两种兰茎尖诱导类原球茎培养基的筛选
表 1　U 10(104)因素及水平设计
Table 1　U 10(104)Facto rs and levels de sign
水平
Levels
因素 Factor s/(mg · L-1)
X 1 X 2 X3 X 4
1 0.05 0.03 0.01 0.10
2 0.06 0.04 0.02 0.20
3 0.07 0.05 0.03 0.30
4 0.08 0.06 0.04 0.40
5 0.09 0.07 0.05 0.50
6 0.10 0.03 0.05 0.10
7 0.08 0.04 0.04 0.20
8 0.07 0.05 0.03 0.30
9 0.06 0.06 0.02 0.40
10 0.05 0.07 0.01 0.50
　　注 X 1 为 TDZ质量浓度 , X2 为 IAA 质量浓度 , X 3 为NAA 质
量浓度 , X 4 为 KT 质量浓度
表 2　U 10(104)均匀设计实验安排及结果
Table 2　U 10(104)Unifo rm Design test plan and result
处理号
T reatment code
因素 Facto rs/(mg · L-1)
X1 X2 X3 X4
Y 1/ % Y2/ %
1 0.05 0.05 0.04 0.50 89.0 92.0
2 0.06 0.03 0.03 0.50 86.0 87.0
3 0.07 0.06 0.01 0.40 82.0 85.0
4 0.08 0.03 0.05 0.40 74.0 78.0
5 0.09 0.06 0.02 0.30 71.0 74.0
6 0.10 0.04 0.02 0.30 68.0 69.0
7 0.08 0.07 0.05 0.20 70.0 72.0
8 0.07 0.04 0.01 0.20 78.0 79.0
9 0.06 0.07 0.03 0.10 77.0 73.0
10 0.05 0.05 0.04 0.10 80.0 83.0
　　注 Y 1 ,Y 2 分别为培养 35 d的长白舌唇兰和凹舌兰类原球茎
的诱导率
表 3　U 10(102)因素及水平设计
Table 3　U 10(102)Facto rs and levels de sign
水平
Leve ls
因素 Facto rs/(mg· L-1)
x1 x 2
1 0.005 0.010
2 0.006 0.020
3 0.007 0.030
4 0.008 0.040
5 0.009 0.050
6 0.010 0.050
7 0.007 0.040
8 0.008 0.030
9 0.009 0.020
10 0.010 0.010
　　注 x1 为 IA A质量浓度 , x2 为 GA 3 质量浓度
表 4　U 10(102)均匀设计实验安排及结果
Table 4　U 10(102)Unifo rm Design test plan and result
处理号
T reatment code
因素 Facto rs/(mg· L-1)
x 1 x2
Y 3/ % Y 4/ %
1 0.005 0.040 57.0 87.0
2 0.006 0.030 64.0 89.0
3 0.007 0.010 70.0 91.0
4 0.008 0.050 81.0 90.0
5 0.009 0.020 86.0 92.0
6 0.010 0.020 92.0 93.0
7 0.007 0.050 73.0 89.0
8 0.008 0.010 78.0 92.0
9 0.009 0.030 87.0 92.0
10 0.010 0.040 90.0 93.0
　　注 Y 3 ,Y 4 分别为培养 45 d的长白舌唇兰和凹舌兰类原球茎
的萌发率
2.1.1　N 6 培养基中不同激素的浓度交叉配比对长
白舌唇兰茎尖诱导类原球茎的影响
试验所得数据(见表 2)经均匀设计软件分析处
理后(见表 5)可知 ,回归方程显著 ,对各方程项进行
显著性检验可知 ,各方程项对Y 1 影响均显著.根据
回归方程求出Y 1 的最优组合为:X1 =0.05 , X2 =0 ,
X3 =0.01 ,X 4 =0.50 ,在此组合基础上求得最优解:y
=91.9 ,此解为方程的解析解 ,需按公式Y =y±uα·s
(其中 uα为正态分布的双侧分位数 , s 为剩余标准
差)计算出优化值区间 ,估计为Y 1 =91.9(±1.15),
即 90.75%～ 93.05%.以最优组合做验证试验 ,将
长白舌唇兰茎尖接种到附加 TDZ0.05 mg · L-1 、
NAA0.01 mg · L-1和 KT0.50 mg ·L -1的 N 6 培
养基中 ,培养 18 d茎尖切口处开始出现球状突起 ,
继续培养至 30 d 球状突起转变为近鱼雷状的类原
球茎(见图 1a).类原球茎诱导率达 92.5%以上.在
估计区间内 ,且比表 2 中 10个处理的诱导率均高.
可见 ,长白舌唇兰茎尖诱导类原球茎的最佳培养基
为:N 6 +TDZ0.05 mg · L-1 +NAA0.01 mg ·L-1
+KT0.50 mg ·L -1 .
2.1.2　N 6 培养基中不同激素的浓度交叉配比对凹
舌兰茎尖诱导类原球茎的影响
试验数据(见表 2)经均匀设计软件分析处理后
(表 5)可知 ,回归方程显著.同理对各方程项进行显
著性检验可知 ,各方程项对Y 2 影响均显著.根据回
归方程求出Y 2 的最优组合为:X 1 =0.05 , X 2 =0 ,
X3 =0 , X 4 =0.50.在此组合基础上求得最优解:y =
92.1 ,按公式Y =y ±uα· s计算出优化值区间估计
为Y 2 =92.1(±8.64),即83.46%～ 100.74%.以最
223　第 2 期 顾地周 , 等:基于均匀设计法优化长白舌唇兰和凹舌兰的高效快繁体系
优组合做验证试验 , 将凹舌兰茎尖接种到附加
TDZ0.05 mg ·L-1 +K T0.50 mg ·L -1的 N 6 培养
基中 ,培养 15 d 茎尖切口处开始出现球状突起 ,继
续培养至 35 d 球状突起转变为近鱼雷状的类原球
茎(见图 1d).类原球茎诱导率达 98%以上.在估计
区间内 ,且比表 2所列 10 个处理的诱导率均高.可
见 ,凹舌兰茎尖诱导类原球茎的最佳培养基为 N 6 +
TDZ0.05 mg ·L-1 +KT0.50 mg ·L -1 .
2.2　两种兰鳞球茎的高效增殖体系建立
分别以两种兰诱导产生的类原球茎为材料 ,将
整个类原球茎在超净工作台上切割成薄片 ,再分别
转接到优化后的类原球茎诱导培养基中 ,进行类原
球茎增殖培养.培养 10 ～ 15 d后两种兰鳞球茎切片
表面球状突起 ,继续培养至 25 ～ 35 d球状突起转化
为类原球茎 ,培养至 55 d后可产生大量的类原球茎
(图 1b , e).30 ～ 40 d 为 1 个增殖周期 ,两种兰每瓶
增殖倍数平均都达 100 倍以上.随着增殖次数的增
加可适当降低生长素浓度 ,以免激素积累导致类原
球茎形态发生变化.
图 1　两种兰类原球茎诱导及萌发各阶段的形态结构
F ig.1　Morpho structur e of inducing Pro toco rm-like body s
and its g ermination in various stag es of tw o O rchids
a:长白舌唇兰的类原球茎诱导(35 d), b:长白舌唇兰的类原球茎增
殖(38 d), c:长白舌唇兰的类原球茎萌发为完整植株(20 d), d:凹舌
兰的类原球茎诱导(30 d), e:凹舌兰的类原球茎增殖(35 d), f:凹舌
兰的类原球茎萌发为完整植株(25 d)
a:Inducing Protocorm-like body s of P latanthera manda rinorum(35
d), b:Protocorm-like bodys m ult iplicat ion of P latanthera mandar i-
norum(38 d), c:Protocorm-lik e bodys germin at ion of P latanthera
manda rinorum(20 d), d:Inducing Protocorm-like bodys of Coelo-
g lossum v ir id e(30 d), e:Protocorm-like b ody s mul tiplication of
Coelog lossum vir ide(35 d), f:P rotocorm-lik e bodys germinat ion of
Coelog lossum vir ide(25 d)
2.3　两种兰类原球茎萌发为完整植株的培养基筛选
2.3.1　N 6 培养基中不同生长素的不同浓度交叉配
比对长白舌唇兰鳞球茎萌发为完整植株的
影响
试验数据(见表 4)经均匀设计软件分析处理后
(见表 5)可知 ,回归方程显著 ,对方程项 x1 进行显
著性检验可知 , x1 对Y 3 影响均显著.根据回归方程
求出Y 3 的最优组合为 x1 =0.01 , x2 =0 ,在此组合
基础上求得最优解 y =92.4 ,按公式 Y =y ±uα· s
计算出优化值区间估计为Y 3 =92.4(±5.36),即
87.04%～ 97.76%.以最优组合做验证试验 ,将长白
舌唇兰类原球茎接种到附加 IAA0.01 mg · L-1的
N 6培养基中进行萌发培养 ,培养 10 d长白舌唇兰类
原球茎上部发出 2 ～ 3片嫩叶 ,同时基部出现白色根
锥 ,20 d后类原球茎可发出5 ～ 7片翠绿色的嫩叶 ,呈
明显生长趋势 ,继续培养至 30 d类原球茎基部直接
发出 3 ～ 5条肉质的不定根(图 1c),40 d后苗高可达
5.0 cm以上 ,根长可达 3.0 cm 以上 ,根和苗的形态 、
发育均正常 ,萌发率达96%以上.在估计区间内 ,且比
表 4中所有的萌发率均高.可见 ,长白舌唇兰类原球
茎萌发的最佳培养基为:N6 +IAA0.01 mg ·L-1 .
2.3.2　N6 培养基中不同生长素的不同浓度交叉配
比对凹舌兰类原球茎萌发为完整植株的影响
试验数据(见表 4)经均匀设计软件分析处理后
(见表 5)可知 ,回归方程显著 ,对各方程项进行显著
性检验可知 ,各方程项对Y 4 影响均显著.根据回归方
程求出Y 4的最优组合为 x1 =0.01 , x2 =0.01 ,在此组
合基础上求得最优解 y =93.9 ,按公式Y =y ±uα· s
计算出优化值区间估计为Y 4 =93.9(±1.18),即
92.72%～ 95.08%.以最优组合做验证试验 ,将凹舌
兰茎尖接种到附加 IAA0.01 mg ·L-1和 GA 30.01
mg ·L-1的 N 6 培养基中 ,培养 15 d 类原球茎基部
开始出现根锥 ,25 d后类原球茎可发出 3 ～ 5片翠绿
色的嫩叶 ,继续培养至 35 d类原球茎基部直接发出
3 ～ 5 条肉质的不定根(图 1f), 45 d 后苗高可达
5.5 cm以上 ,根长可达3.0 cm 以上 ,根和苗的形态 、
发育均正常 ,萌发率达 94.5%以上.在估计区间范
围内 ,且比所有实验Y 4 值都大.可见 ,凹舌兰类原
球茎萌发为完整植株的最佳培养基为 N 6 + IAA
0.01 mg ·L -1 +GA 30.01 mg ·L -1 .
2.4　扫描电镜观察
由扫描电镜下可以观察到茎尖切口产生的球状
突起是类原球茎发生过程中类原球茎的前体 ,即原
球茎(见图 2a ,d).继续培养后球状突起转变为近鱼
雷状的球体是原球茎经发育而成的类原球茎(见图
2b , e),其表面有明显的茎尖.单一的原球茎继续发
育形成类原球茎 ,随着培养时间的延长 ,原球茎会经
过类原球茎最终萌发成完整植株(见图 2c , f),且每
个原球茎最终都能独立发育成完整的植株.
224 浙 江 大 学 学 报(理学版)　 第 37 卷　
表 5　长白舌唇兰和凹舌兰快繁各阶段的回归分析结果
Table 5　Regression analy sis result of micropropagation in various stages of Platanthera mandarinorum and Coeloglossum viride
培养阶段 cultu re stages 回归方程 复相关系数(R)
检验值
(F t) 临界值
长白舌唇兰类原球茎诱导
Induced for protocorm-like bodys of P latanthera mandar inorum Y 1 =101-376X 1-104X 3+22X 4 0.999 3 1 505 F(0.01 ,3 , 6)=9.780
凹舌兰类原球茎诱导
Induced for protocorm-like b ody s of Coelog lossum vir id e Y 2 =94.5-338X 1+29.0X 4 0.956 0 37.15 F(0.01 ,2 , 7)=9.547
长白舌唇兰类原球茎萌发
Germinat ion for protocorm-like bodys of Platanthera mandarinorum Y 3 =23+6 940 x1 0.991 6 470.0 F(0.01 ,1 , 8)=11.26
凹舌兰类原球茎萌发
Germination for protocorm-like bodys of Coelog lossum viride Y 4=83.9+1 050 x1 -44.1 x2 0.988 7 152.3 F(0.01 ,2 , 7)=9.547
　　注 显著性水平α=0.01 ,样本容量 N=10
图 2　两种兰原球茎诱导及发育各阶段组织结构扫描
电镜观察
Fig.2　Show ing scanning electron micro scopical obse rvation
of inducing Pro toco rms and its development of tw o O rchids
in different stages
a:长白舌唇兰的原球茎(×1.2k), b:长白舌唇兰的类原球茎(×
450), c:长白舌唇兰的类原球茎萌发(×50), d.凹舌兰的原球茎(×
700), e:凹舌兰的类原球茎(×50), f:凹舌兰的类原球茎萌发(×
620)
a:Protocorms of P latantheramandar inorum(×1.2k), b:Protocorm-like
bodys of P latanthera mandarinorum(×450), c:Germination of proto-
corm-lik e bodys of Platantheramandarinorum(×50), d:Protocorm s
of Coelog lossum viride(×700), e:Protocorm-like bodys of Coelo-
g lossum viride(× 50), f:Germination of protocorm-like bodys of
Coelog lossum viride(×620)
3　讨论与结论
试验结果证明 ,培养基N 6 +TDZ0.05 mg ·L-1 +
NAA0.01 mg · L-1 +K T0.50 mg · L -1和 N 6 +
TDZ0.05 mg ·L-1 +KT0.50 mg ·L -1分别对长白
舌唇兰和凹舌兰茎尖诱导类原球茎的效果最好 ,两
种兰离体培养采取茎尖再生类原球茎方式 ,速度快 、
诱导率高.两种诱导培养基中均附加 0.50 mg ·L-1
的 KT 提高了类原球茎的诱导速度和诱导率 ,从而
缩短了诱导周期 ,低于控制范围的植物生长调节物
质不能促使两种兰茎尖诱导出类原球茎 ,过高的植
物生长调节物质导致茎尖脱分化为愈伤组织而不能
直接诱导出类原球茎.这两种兰类原球茎萌发为完
整植株的培养基分别为 N 6 +IAA0.01 mg ·L-1和
N 6 +IAA0.01 mg ·L-1 +GA 30.01 mg ·L-1 ,所选
用的生长素种类相同 ,但凹舌兰需要少量的 GA 3 辅
助才能达到有效萌发 ,可能是各自萌发的机理不同
等原因 ,低于控制范围的植物生长调节物质降低了
两种兰类原球茎的萌发和生长速度 ,过高的植物生
长调节物质导致类原球茎再次产生子球和抑制萌
发 ,延缓了类原球茎的发育速度及完整植株的再生
进程[ 8-9] .类原球茎的增殖以诱导产生的类原球茎
的切片为材料 ,方法简捷 ,经济实用 ,可操作性强 ,增
殖倍数高 ,达到了高效增殖的目的.应用均匀设计法
处理和分析数据大大缩短了培养基配方的摸索周
期.类原球茎发生过程的扫描电镜观察表明 ,两种兰
类原球茎发生过程具有和胚发生相似的阶段.研究
中发现原球茎形成后与其周围组织之间产生了结构
上的隔离 ,这正是类原球茎发生的先决条件 ,且每个
原球茎最终都能萌发成完整的植株 ,具有相对的独
立性[ 10-12] .本研究初步建立了长白舌唇兰和凹舌兰
相对稳定的高效离体快繁体系 ,达到了预期目的.为
进一步完善兰科植物类原球茎发生调控体系和阐明
类原球茎发生发育机理提供了基础.
近些年来 ,欧洲等国家开发的兰花园艺栽培种
进入中国市场.我国仅少许兰品种得到半引种.长白
舌唇兰和凹舌兰系长白山区地产兰 ,都是上好的抗
寒园艺品种 ,但包括这两种兰在内的长白山区野生
兰花品种至今未得到引种和广泛用于栽培观赏及药
用价值的开发.本文结果可能对长白山区兰花的开
发利用和工厂化育苗有一定的参考意义.
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(责任编辑　涂　红)
226 浙 江 大 学 学 报(理学版)　 第 37 卷