全 文 ：艾纳香口腔护理液的处方筛选及其抑菌
效果研究
邹婧1，2，3，杨全1，庞玉新2，3，王凯2，3，范佐旺1，2，3，李海艳1，2，3
(1．广东药学院 中药学院，广东 广州 510006;2．中国热带农业科学院热带作物品种资源研究
所 /农业部华南作物基因资源与种质创制重点开放实验室，海南 儋州 571737;3．海南省艾纳
香工程技术研究中心，海南 儋州 571737)
摘要:目的 对艾纳香口腔护理液进行处方筛选，并对其抑菌效果及抑菌稳定性进行考察，为后期产品开
发提供理论依据。方法 以艾纳香提取物为原料，以溶液澄清度、口感、除臭效果为评价指标，采用正交
试验设计筛选最优处方。对艾纳香口腔护理液进行体外抑菌试验，并考察在 37 ℃下放置 5个月的抑菌
稳定性。结果 筛选得出的最佳溶剂为体积分数 15%的乙醇，最佳促溶剂为聚氧乙烯氢化蓖麻油。正交
试验优选得到的最佳处方为:艾纳香提取物 ∶甘油 ∶木糖醇 ∶食用香精的质量比为0．03 ∶5 ∶0．7 ∶0．02。采用
优化处方制备的艾纳香口腔护理液初始抑菌率≥90%，具有较强的抑菌作用;经 37 ℃、相对湿度＞75%
下放置 5个月后，抑菌率仍达到 80%以上。结论 本文所制得的艾纳香口腔护理液澄清透明、口感良好，
抑菌作用稳定，具有较高的潜在市场应用价值。
关键词:艾纳香提取物;口腔护理液;溶解度试验;处方筛选;抑菌作用;抑菌稳定性
中图分类号:Ｒ944．1 文献标志码:A doi:10．3969 / j．issn．1006-8783．2015．05．003
文章编号:1006-8783(2015)05-0571-05
收稿日期:2015-07-03
基金项目:国家自然科学基金项目(81374065) ;贵州省黔科合重大专项项目(2013-6011)
作者简介:邹婧(1991—) ，女，2013级硕士研究生，Email:zj602395791@ 126．com;通信作者:庞玉新(1975—) ，男，博士，副研究
员，主要从事南药资源研究与开发，电话:0898-23300268，Email:blumeachina@ 126．com;杨全(1972—) ，男，教授，主
要从事中药资源方向的研究，电话:020-39352353，Email:yangquan7208@ vip．163．com。
网络出版时间:2015-09-25 14:23 网络出版地址:http:/ /www．cnki．net /kcms /detail /44．1413．Ｒ．20150925．1423．006．html
Study on the prescription screening and bacteriostatic effects of Blumea mouthwash
ZOU Jing1，2，3，YANG Quan1，PANG Yuxin2，3，WANG Kai2，3，FAN Zuowang1，2，3，LI Haiyan1，2，3
(1． School of Traditional Chinese Medicine，Guangdong Pharmaceutical University，Guangzhou 510006，
China;2．Tropical Crops Genetic Ｒesources Institute，Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences /Key
Laboratory of Crop Gene Ｒesources and Germplasm Enhancement in Southern China，Danzhou 571737，
China;3．Hainan Provincial Engineering Ｒesearch Center for Blumea Balsamifera，Danzhou 571737，China)
Abstract:Objective To study the prescription of the Blumea mouthwash，its bacteriostatic effect and the
stability of bacteriostatic action in order to provide theoretical basis for the late product development．
Methods Blumea balsamifera extract was selected as raw material． The optimal formulation of the
mouthwash was optimized by orthogonal design，which was evaluated by clarity of solution，taste and
deodorization effect as major indexes． The bacteriostatic effects test in vitro and stability of bacteriostatic
action placed under the 37 ℃ after five months later of the mouthwash were studied． Ｒesults 15% ethanol
was selected as the optimal solvent，and ＲH40 was selected as the optimal surfactant． The optimal formulation
was obtained by the orthogonal experiment as follows:Blumea balsamifera extract ∶ glycerol ∶ xylitol ∶ edible
flavor = 0． 03 ∶ 5 ∶ 0． 7 ∶ 0． 02． The results of bacteriostatic test showed that bacteriostatic action of Blumea
mouthwash was good with an initial bacteriostatic rate above 90% and it was stable after 5 months with a
广东药学院学报
Journal of Guangdong Pharmaceutical University Oct． 2015，31(5)
bacteriostatic rate still above 80%． Conclusion The formulated mouthwash is a colorless transparent liquid
which has a good taste with stable bacteriostasis，so it is promising to have a high market application value．
Key words:Blumea balsamifera extract;mouthwash; solubility experiment;prescription screening;
bacteriostatic effects;stability of bacteriostatic
口腔为消化道的第一通道，因直接与外界接触，
是最容易滋生细菌和微生物的部位。目前，相对于
其他口腔护理产品，口腔护理液不但具有携带方便、
清除口腔异味、抑制牙菌斑等多种优点，而且还能治
疗多种口腔疾病及其并发症，如因口疾引起的睡眠
不良、精神紧张、消化不良等。在各种口腔护理液
中，含精油类的口腔护理液天然无毒，具有渗透性
强、使用后不会出现牙龈变色、菌群失调、继发感染
等优点，虽含有酒精成分，但对口腔局部无害，市场
上使用广泛。口腔护理液中的精油主要来源于植物
各个部位的提取物，它们具有良好的挥发性和独特
的芳香。这类口腔护理液因抗菌谱广、毒性低、过敏
反应少、可以联合应用，在减少牙菌斑生长过程中，
比传统口腔护理液更安全、刺激性更小，且因具有天
然芳香气味及良好口感，能提高患者顺应性，受到越
来越多消费者的青睐［1-3］。
艾纳香 Blumea balsamifera (L．)DC．为菊科艾
纳香属多年生木质草本植物，主要分布于我国海
南、贵州、广西、广东、云南等省区。植物艾纳香芳
香独特，以全草或地上部分入药，在黎族、苗族、壮
族等少数民族地区有悠久的用药历史，是一种重
要的民间药物［4-5］。艾纳香性温，味辛、苦，入肝、
肾、膀胱经，具有温中活血、调经、镇痛、祛风除湿、
祛痰止咳、治疗皮肤烧烫伤、晒后修复及透皮促渗
透等多种功效。艾纳香中主要含有挥发油和黄酮
类成分，具有较好的抑菌止痒、抗氧化、镇痛等药
理活性［6-8］。
结合上述口腔护理液在治疗口腔疾病、维护口
腔卫生的优势以及植物艾纳香的多种功效和活性，
本研究拟制备一种以艾纳香提取物为原料的艾纳香
口腔护理液，通过正交试验对其处方进行筛选，并通
过体外抑菌试验考察其抑菌效果，为后续研究提供
理论依据。
1 仪器与材料
1．1 仪器
CPA225D电子天平(北京赛多利斯科学仪器有
限公司) ;JB-3恒温定时磁力搅拌器(上海雷磁创益
仪器仪表有限公司) ;DHG-9070A 电热鼓风干燥箱
(上海一恒科学仪器有限公司) ;KQ-500DB 数控超
声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司) ;LAB
DANCEＲ S25旋涡混合器(德国 IKA Lab Dancer)。
1．2 材料
菊科植物艾纳香叶的提取物采自贵州省罗甸县
罗苏乡，经中国热带农业科学院庞玉新副研究员鉴
定为菊科植物艾纳香 Blumea balsamifera (L．)DC．叶
水蒸气蒸馏法所得的初提物;乙醇(食品级，批号:
150118-85，河南浩宇食品添加剂有限公司) ;甘油
(批号:40690388-GA，连云港友进食品添加剂技术
开发有限公司) ;聚氧乙烯氢化蓖麻油(ＲH40，批
号:32177616KO，德国 BASF SE) ;A．SAP(以大豆萃
取液作为主成分的天然有机抗菌剂，批号:110420，
福州圣德莉信息技术有限公司) ;木糖醇(食品级，
批号:13101606，山东福田药业有限公司) ;食用香精
(食品级，批号:20140926，上海华宝孔雀香精香料有
限公司)。
试验菌种为金黄色葡萄球菌［CMCC(B)26003］、
大肠埃希菌［CMCC(B)44102］、白色念珠菌［CMCC
(F)98001］及肺炎克雷伯菌［ATCC13883］，以上菌
种均由美国医学菌种保藏中心提供并经鉴定确定。
2 方法与结果
2．1 处方筛选
2．1．1 艾纳香提取物溶剂与促溶剂的筛选 因艾
纳香提取物难溶于水，故选择一定体积分数的乙醇
作为溶剂，并添加表面活性剂作为促溶剂。固定艾
纳香提取物的质量分数为 0．24%，以溶液澄清透明、
无机械杂质为评价指标，考察采用 15%、30%、40%
(体积分数，下同)的乙醇作为溶剂时，Tween 80(吐
温-80)、ＲH40(聚氧乙烯氢化蓖麻油)及 SDS(十二
烷基硫酸钠)3 种应用较广的表面活性剂完全溶解
艾纳香提取物所需的用量，结果见表 1。
由表 1可知，乙醇体积分数越高，溶解相同质量
分数艾纳香提取物所需表面活性剂的用量越小;在
相同乙醇体积分数下，溶解艾纳香提取物所需用量
最小的表面活性剂是 ＲH40;但乙醇体积分数较高
时，口感刺激性较大，综合考虑，最终选定以体积分
数 15%的乙醇作为溶剂，ＲH40为促溶剂。
275 广东药学院学报 第 31卷
表 1 采用不同体积分数乙醇作为溶剂时所需表面活性剂
的用量
Table 1 The comparison of content of surfactants in different
concentrations of ethanol
φ(乙醇)/
%
w(Tween 80)/
%
w(ＲH40)/
%
w(SDS)/
%
15 0．94 0．76 不溶
30 0．49 0．38 不溶
40 0．27 0．19 0．32
2．1．2 艾纳香口腔护理液的制备方法 将艾纳香
提取物用表面活性剂 ＲH40及适量 15%乙醇混合溶
解后，再与质量分数 0．2%的天然抑菌剂 A．SAP 及
保湿剂、甜味剂等其他添加剂按比例充分混合，再用
15%乙醇定容至 50 mL，静置、滤过、灌装，即得。
2．1．3 正交试验筛选处方 在上述溶剂与促溶剂
筛选的基础上，处方中进一步添加了保湿剂甘油、矫
味剂木糖醇等辅料。本文以口感、澄清度、除臭效果
为评价标准(随机抽取不同年龄段、不同性别的受
试者 50 例，受试者在清晨未进食、进水、抽烟，不使
用其他口腔护理产品漱口的情况下，直接使用艾纳
香口腔护理液进行漱口，用 1～5 分记分:口感，很好
5 分，较好 4分，一般 3分，不好 2分，极差 1分;澄清
度，澄清 5 分，较澄清 4 分，一般澄清 3 分，浑浊 2
分，非常浑浊 1 分;除臭效果诊断采用感观分析
法［9］，用鼻进行辨析，5 分为无气味，4 分为很难闻
到气味，3分为轻微不愉快气味，2 分为中度不愉快
气味，1分为强烈刺鼻气味) ，采用 4 因素 3 水平的
正交试验对艾纳香提取物、甘油、木糖醇及食用香精
的加入量进行筛选，因素水平见表 2，试验结果及方
差分析结果见表 3～表 4。
表 2 正交试验的因素与水平
Table 2 The factors and levels of orthogonal test m /g
水
平
因素
A
艾纳香提取物
B
甘油
C
木糖醇
D
食用香精
1 0．03 3 0．3 0．015
2 0．06 5 0．5 0．02
3 0．12 7 0．7 0．025
由表 3～表 4可知，各因素的影响大小为 A＞C＞
B＞D，即艾纳香提取物的加入量对处方的影响最大，
具有统计学意义(P＜0．05) ，其次是木糖醇加入量和
甘油加入量，影响最小的是食用香精加入量，此 3 个
因素的影响均无统计学意义。综合以上分析，确定
艾纳香口腔护理液最佳处方配比为 A1B2C3D2，即艾
纳香提取物 ∶甘油 ∶木糖醇 ∶食用香精的质量比为
0. 03 ∶5 ∶0．7 ∶0．02。
表 3 正交试验设计与结果
Table 3 Ｒesults of orthogonal test
No．
因素
A B C D
口感 澄清度
除臭
效果
总分
1 1 1 1 1 4．00 4．50 4．25 12．75
2 1 2 2 2 4．75 4．50 4．50 13．75
3 1 3 3 3 4．50 4．25 4．50 13．25
4 2 1 2 3 4．25 4．25 4．75 13．25
5 2 2 3 1 4．25 4．50 4．50 13．25
6 2 3 1 2 3．75 4．00 4．50 12．25
7 3 1 3 2 3．75 3．75 4．75 12．25
8 3 2 1 3 3．00 3．75 4．75 11．50
9 3 3 2 1 3．50 3．50 4．50 11．50
K1 13．250 12．750 12．167 12．500
K2 12．917 12．833 12．833 12．750
K3 11．750 12．333 12．917 12．667
Ｒ 1．500 0．500 0．750 0．250
表 4 正交试验方差分析结果
Table 4 Ｒesults of variance analysis
因素 偏差平方和 自由度 F值 P值
A 3．722 2 38．371 ＜0．05
B 0．431 2 4．443
C 1．014 2 10．454
D 0．097 2 1．000
误差 0．10 2
2．2 抑菌性能及稳定性考察
本文选择金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念
珠菌及肺炎克雷伯菌 4 种易引起口腔感染、炎症及
口腔溃疡的细菌，分别考察艾纳香口腔护理液对上
述 4种细菌的抑菌效果，及在 37 ℃恒温箱中、保持
相对湿度＞75%放置 5个月后的抑菌稳定性。
2．2．1 组别设置 以上述处方筛选得到的最佳配
比制备的艾纳香口腔护理液作为供试液，对照液为
生理盐水。
2．2．2 菌悬液的制备 分别将金黄色葡萄球菌、大
肠埃希菌、白色念珠菌及肺炎克雷伯菌的 24 h 斜面
培养物用 PBS 洗下，制成悬液，浊度为 1 麦氏(3×
108 cfu /mL)。
2．2．3 菌液稀释 取上述菌液 10 μL，用 10 mL 容
375第 5期 邹婧，等．艾纳香口腔护理液的处方筛选及其抑菌效果研究
量瓶定容，得到 3×105 cfu /mL菌液。
2．2．4 抑菌反应 分别取上述所得菌液 0．1 mL，加
至含有 5 mL供试液及对照液的试管内，作用时间为
2 min。分别取上述反应时间下的各溶液 0．5 mL 加
入至含 5 mL PBS 的试管内，充分混匀，称为终止反
应。分别取终止反应下的各溶液与适量 PBS 混匀，
分别稀释 1倍、5倍和 10 倍。取上述不同比例的稀
释液各 0．5 mL，至培养皿内，用放凉到 40 ～ 45 ℃的
营养琼脂培养基(细菌)或沙氏葡萄糖琼脂培养基
(真菌)15 mL作倾注，转动培养皿，使充分均匀，琼
脂凝固后翻转平板，(35±2)℃培养 24 h(白色念珠
菌为 48 h) ，作活菌菌落计数。
2．2．5 抑菌稳定性 将上述艾纳香口腔护理液在
37 ℃温箱、相对湿度＞75%条件下，放置 5 个月，重
复“2．2．4”项试验步骤，测定抑菌率，考察抑菌作用
的稳定性。根据《一次性使用卫生用品卫生标准》
规定，抑菌率计算方式为:抑菌率 =(对照样品菌落
数－供试样品菌落数)/对照样品菌落数×100%;评
价标准为:产品经 37 ℃存放 3 个月，相对湿度 ＞
75%，抑菌率为 50% ～90%表明有抑菌作用，抑菌率
≥90%表明有较强抑菌作用。
表 5分别为初始试验与放置 5个月后测得的艾
纳香口腔护理液与金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白
色念珠菌及肺炎克雷伯菌作用时间为 2 min、稀释倍
数分别为 1 倍、5 倍、10 倍下的抑菌率结果。可见，
艾纳香口腔护理液对大肠埃希菌及白色念珠菌的作
用效果稍强于金黄色葡萄球菌及肺炎克雷伯菌。另
外，该处方下的艾纳香口腔护理液与不同菌种作用
2 min，稀释倍数分别为 1 倍、5 倍、10 倍时，初始测
得的抑菌率均≥90%，在温度 37 ℃、相对湿度＞75%
下放置 5个月后的抑菌率仍达到 80%以上，表明该
艾纳香口腔护理液具有较强且稳定的抑菌作用。
表 5 艾纳香口腔护理液抑菌试验结果
Table 5 Ｒesults of bacteriostatic test of Blumea mouthwash
菌种
放置时间 /
月
不同稀释倍数下的抑菌率 /%
1倍 5倍 10倍
金黄色葡萄球菌 0 98．9 94．9 92．4
5 93．5 88．9 83．8
大肠埃希菌 0 100．0 97．9 93．3
5 96．5 92．7 84．5
白色念珠菌 0 99．9 99．8 95．6
5 95．9 94．5 89．6
肺炎克雷伯菌 0 99．3 97．8 92．1
5 95．1 90．5 81．6
图 1分别为艾纳香口腔护理液及生理盐水对照
组与金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌及肺
炎克雷伯菌的作用时间为 2 min、稀释倍数为 10 倍
时菌落生长情况的对比图，可见艾纳香口腔护理液
抑菌效果明显。
实验组 对照组
A．金黄色葡萄球菌;B．大肠埃希菌;C．白色念珠菌;D．肺炎
克雷伯菌。
图 1 艾纳香口腔护理液对 4种细菌的抑菌效果
Figure 1 The bacteriostatic effects of Blumea mouthwash on 4
kinds of bacteria
3 讨论
口腔护理液在治疗口腔疾病的同时，亦能清除
因口疾引起的多种并发症，是老人、孩子及伴有牙痛
的患者口腔卫生保障的首选［10］。本文研究的艾纳
香口腔护理液，以芳香独特的艾纳香提取物为主要
原料药，通过溶剂与促溶剂的筛选试验确定最终选
定 15%的乙醇作为溶剂，ＲH40 为促溶剂，并配以相
应的辅料及香精，采用三因素四水平正交试验法，以
口感、澄清度及除臭效果作为评价指标，对艾纳香口
腔护理液处方的用量配比进行筛选，由此筛选出的
艾纳香口腔护理液澄清透明、无机械杂质，口感良
475 广东药学院学报 第 31卷
好。研究表明，目前具有广阔市场前景的口腔护理
液为抗菌型口腔护理液［11］，本文针对金黄色葡萄球
菌、大肠埃希菌、白色念珠菌及肺炎克雷伯菌 4种细
菌对最优处方下的艾纳香口腔护理液进行抑菌试验
及抑菌稳定性考察，结果表明由该配方制得的艾纳
香口腔护理液具有较强抑菌效果，能有效减少口腔
内的有害细菌，放置 5 个月后的抑菌效果仍达到
80%以上，表明该艾纳香口腔护理液具有较稳定的
抑菌作用。
综上所述，本研究的艾纳香口腔护理液澄清透
明、无机械杂质，口感良好，具有较强的抑菌效果且
抑菌作用稳定，能够很好地控制口腔内的致病微生
物的数量，维护口腔的卫生健康，具有较高的市场应
用和开发价值。
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( 责任编辑: 陈翔)
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美国 FDA批准 Opdivo(nivolumab)用于治疗晚期非鳞状非小细胞肺癌
美国 FDA于 2015年 10月 9日批准 Opdivo(nivolumab)再次扩大适用症范围，即可用于治疗晚期(转移性)非
鳞状非小细胞肺癌(non-squamous NSCLC) ，适用于经铂类药物化疗无效的肺癌患者。
肺癌是美国死亡人数最多的癌症之一，估计 2015年全美国新诊断肺癌病例数达 221 200，其中死亡人数将高
达 158 040。肺癌中最常见的是非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC) ，非小细胞肺癌又可分为鳞状细
胞癌和非鳞状细胞癌(腺癌也属此类)两类。
Opdivo的作用机制是阻滞 PD-1/PD-L1(存在于机体免疫系统和某些癌细胞中的一类蛋白)细胞通道，从而帮
助免疫系统杀灭癌细胞，而且研究显示如果患者癌细胞 PD-L1表达阳性越强，治疗效果越好。但详细的作用机制
仍有待研究。
美国 FDA 最初于 2014 年 12 月 22 日批准 Opdivo 用于治疗晚期黑素瘤，2015 年 3 月 4 日 FDA 宣布批准
Opdivo增加新的适应证，即用于治疗晚期鳞状非小细胞肺癌(squamous NSCLC)。此次 FDA又批准 Opdivo用于治
疗晚期鳞状非小细胞肺癌，并授予其突破性疗法认定(Breakthrough Therapy Designation)。
Opdivo由布迈施贵宝公司(Bristol-Myers Squibb)生产销售。FDA 同时批准了由 Dako 公司(Dako North
America Inc．)生产的一种名为 The PD-L1 IHC 28-8 pharmDx test的检测试剂，用于检测患者癌细胞的 PD-L1 阳性
水平，以帮助医疗人员确定患者是否适合采用 Opdivo进行治疗。
此前，FDA 于 2015 年 10 月 2 日采取加速审批程序批准了默克公司(Merck ＆ Co．)生产的 Keytruda
(pembrolizumab)用于治疗晚期(转移性)非小细胞肺癌，适用于其他药物治疗无效且肿瘤细胞呈 PD-L1 表达阳性
(需先使用 Dako公司的 PD-L1 IHC 22C3 pharmDx进行测试)的患者。
(来源:美国 FDA政府公告，2015-10-09 夏训明 编译)
575第 5期 邹婧，等．艾纳香口腔护理液的处方筛选及其抑菌效果研究