全 文 ：研究报告香料香精化妆品
FLAVOUR FRAGRANCE COSMETICS
2 0 1 6年4月第2期
A p r. 2 0 1 6 , N o . 2
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艾纳香口腔护理液安全性评价研究 *
1. 中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所/农业部华南
作物基因资源与种质创制重点开放实验室，海南儋州 571737
2. 广东药学院中药学院，广东广州 510006
3. 海南省艾纳香工程技术研究中心，海南儋州 571737
………………………… 邹 婧1，2，3 王 凯1，3 马青松1，2，3
陈 艳1，2，3 庞玉新1，3#
作 者 简 介
邹婧（1991—），女，在读硕士研究生，
主要从事药物制剂研发。
#通信作者：庞玉新（1975—），男，博
士，副研究员，主要从事南药资源研
究与开发。
联系电话：0898 - 23300268
E - mail：blumeachina@126.com
选用 SD 大鼠进行口腔黏膜刺激性试验、口腔及黏膜用药急性毒性试验；选用白色豚鼠进行过敏试验；选用昆明
种小鼠进行灌胃给药急性毒性试验，观察给药后动物口腔黏膜、受药皮肤、体重变化、全身毒性反应情况及死亡只数。
艾纳香口腔护理液在口腔黏膜刺激性试验中，未发现 SD 大鼠口腔黏膜组织异常；在过敏试验中，白色豚鼠皮肤用药
未引起过敏反应；在急性毒性试验中，大鼠的耐受性良好；小鼠灌胃时测得的最大给药量 (MLD) 为 288 mg/kg，相对
于成人给药量的 1 200 倍。上述动物均未见死亡和明显毒性反应。以上试验说明艾纳香口腔护理液无口腔黏膜刺激
性和致敏性，无明显急性毒性反应，提示其作为口腔外用护理液临床用药安全。
艾纳香口腔护理液 刺激性 过敏性 急性毒性 安全性
Study on the Safety Evaluation of Blumea Mouthwash*
ZOU Jing1,2,3 WANG Kai1,3 MA Qing - song1,2,3 CHEN Yan1,2,3 PANG Yu - xin1,3#
(1. Tropical Crops Genetic Resources Institute, Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences/Key
Laboratory of Crop Gene Resources and Germplasm Enhancement in Southern China, Danzhou 571737，
Hainan， China ；2. School of Traditional Chinese Medicine，Guangdong Pharmaceutical University，
Guangzhou 510006，Guangdong， China ；3. Hainan Provincial Engineering Research Center for Blumea
balsamifera，Danzhou 571737，Hainan， China)
Abstract: The oral mucosa irritation and oral mucosa acute toxicity for Blumea mouthwash were tested on SD
rat; allergy tests was carried on white guinea pig, and acute toxicity was tested on KM mice through lavage
administration. Oral mucosa, applied skin, changes in weight, systemic toxicity reaction and death situation were
observed after the treatment. During the oral mucosa irritation test, there was no abnormal oral mucosa tissue
observed in the histopathological sections of SD rat. During the allergy tests, the results showed that Blumea
mouthwash had no allergic response on skin treatment of white guinea pig. During the acute toxicity test, all rats
were found well tolerated. And its maximum lethal dose (MLD) in mice was 288 mg/kg, which was equal to about
1 200 times of the adult dosage. Besides, there was no death and obvious toxic effects occurred in these animals. It
meant that the Blumea mouthwash had no oral mucosa irritation and sensitization, no significant acute toxicity. It
*基金项目：国家自然科学基金项目 （81374065）；贵州省黔
科合重大专项字 （2013 - 6011）
收稿日期：2015 - 11 - 18；修回日期：2015 - 12 - 17
研究报告 香料香精化妆品 2016年4月
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艾纳香 [Blumea balsamifera（ L.） DC.] 为菊科
艾纳香属多年生木质草本植物，始载于《备急千金
要方》。其芳香独特，以全草或地上部分入药，在
黎族、苗族、壮族等少数民族地区有着悠久的用药
历史，是一种重要的民间药物 [1-3]。艾纳香性温味
辛、苦，入肝、肾、膀胱经，具有温中活血、调经、
镇痛、祛风除湿、去痰止咳、治疗皮肤烧烫伤、晒
后修复及透皮促渗透等多种功效，艾纳香叶经水蒸
气蒸馏得到的粉状提取物艾粉，其主要成分为左旋
龙脑，并含樟脑、异龙脑、β - 石竹烯和花椒油素
等，具有较好的抑菌止痒、抗氧化、镇痛等药理活
性 [4-7]。本研究中的艾纳香口腔护理液是以艾粉为
主要原料，辅以乙醇、甘油、聚氧乙烯氢化蓖麻油、
A.SAP（抗菌剂）、木糖醇、食用香精等相应辅料组
成 [8]，通过进行口腔黏膜刺激性试验、过敏试验、
口腔及黏膜用药急性毒性试验和灌胃给药急性毒
性试验，为艾纳香口腔护理液的安全性评价提供参
考依据。
1 材料与方法
1.1 实验动物及饲养条件
Sprague-Dawley（SD）大鼠 40 只，SPF 级，
体重 180～200 g，250～280 g，雌雄各半，动物合
格证：SCXK（湘）2014-0011；白色豚鼠 30 只，
体重 250～300g ，雌雄各半，动物合格证：SCXK
（湘）2014-0010；昆明种小鼠 40 只，雌雄各半，
体重 18～22g，动物合格证：SCXK（湘）2014-
0011。上述动物均由湖南省长沙市天勤生物技术
有限公司提供，统一由动物实验中心单笼颗粒饲
料饲养，自由饮水，室温（22±2） ℃，湿度平均为
50%～70%。
1.2 仪器
Axio Imager.M2 全自动正置多功能显微镜，广
州千江仪器有限公司；TGL-16G 高速台式离心机，
上海安亭科学仪器厂；LEICA RM2245 半自动轮转
切片机，浙江科迪仪器设备有限公司。
1.3 材料
多聚甲醛（批号 20140512），国药集团化学试
剂有限公司；2，4- 二硝基氯苯（批号 20120901），
上海晶纯试剂有限公司；8 % 硫化钠（批号
10020618），上海统亚化工科技发展有限公司；艾
粉（左旋龙脑质量分数为 85%），菊科植物艾纳香
叶的提取物（产地为贵州省罗甸县罗苏乡），经中
国热带农业科学院庞玉新副研究员鉴定为菊科植
物艾纳香（Blumea balsamifera） 叶片水蒸气蒸馏法
所得的提取物。
1.4 方法
1.4.1 口腔黏膜刺激性试验
分组与给药：取 S D 大鼠 2 0 只，体重
180～200 g，雌雄各半，随机分成两组，即艾纳香
口腔护理液组与生理盐水组。将艾纳香口腔护理
液 0.5 mL 喷入大鼠口腔内，每隔 1 h 重复一次，连
续 4 次，对照组给予等量的生理盐水。观察记录给
药后 24 h 全身状况及局部黏膜的变化，肉眼连续
观察 7 d 口腔黏膜充血、肿胀、糜烂、溃疡等局部
反应情况。末次给药后次日取受药颊部黏膜及其
周围组织作病理组织学切片检查，观察各黏膜上皮
细胞结构有无异常发现，根据黏膜刺激性反应肉眼
及组织病理学刺激反应分级，评定药液对口腔黏膜
刺激性。
1.4.2 过敏试验
取健康白色豚鼠 3 0 只，雌雄各半，体重
250～300 g，随机分成 3 组；空白对照组（赋形
剂）、艾纳香口腔护理液组与阳性对照组（2，4- 二
硝基氯苯，实验前用丙酮配成 10 g/L 的致敏浓度和
1.0 g/L 的激发浓度），于试验前 24 h 将豚鼠背部两
侧毛剪去，用 8% 硫化钠对豚鼠脊柱两侧脱毛，每
侧去毛区约 3 cm×3 cm，先后进行致敏接触试验
和激发接触试验。
（1）致敏接触试验：每只动物分笼饲养，取艾
纳香口腔护理液 0.2 mL 涂在豚鼠右侧毛区，用不
透水的透明纸覆盖，绷带缠绕，以医用胶皮膏固定
6 h 后去掉覆盖物，酒精棉球拭净，去除受试药物。
再分别于第 7 d 和第 14 d，以同样方法各重复一
次，共计 3 次，空白对照组和阳性对照组药物的用
量方法与艾纳香口腔护理液组一致。
（2）激发接触试验：于末次给药致敏后 14 d，
将各组的受试药物 0.2 mL 涂于豚鼠背部左侧脱毛
区，6 h 后用蒸馏水冲洗背部残余药物，即刻观察，
然后于 24、48 和 72 h 再次观察皮肤过敏反应及
全身反应情况，按表 1 和表 2 所列源自《中药新药
may be used as asafety clinical oral care liquid topically.
Key words: Blumea mouthwash irritation allergy acute toxicity safety
研究报告
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不引起死亡的最大累积剂量作为最大给药量（以合
理的最大浓度和最大体积），记录 14 d 内小鼠每日
体重、行为、进食饮水量、分泌物、排泄物等毒性
症状，并对濒死、死亡及观察结束后的动物及时进
行大体解剖，肉眼观察主要脏器心、肝、脾、肺、肾
有无病理变化，若出现体积、颜色、质地等改变时
应进行组织病理学检查。
2 结果与分析
2.1 艾纳香口腔护理液对大鼠口腔黏膜的刺激性
试验
大鼠口腔给予艾纳香口腔护理液，未发现全
身状况异常，镜下观察到艾纳香口腔护理液组的组
织上皮细胞结果完整，成纤维细胞完整，细胞核明
显，未见炎性细胞浸润，具体见图 1；肉眼及组织
切片观察，艾纳香口腔护理液组与生理盐水对照组
对组比较均无异常，揭示艾纳香口腔护理液对口腔
黏膜无刺激性，具体见图 2。
研究指南》中有关皮肤过敏反应的评分标准进行评
价，其中反应平均值 =（红斑形成总分＋水肿形成
总分）/ 合计动物数，致敏发生率 = 出现皮肤红斑、
水肿或全身性过敏反应的动物例数（不论程度轻
重）/ 受试动物总数。
表 1 皮肤过敏反应程度的评分标准
评分项目 皮肤过敏反应情况 分值
红斑
无红斑 0
轻度红斑，勉强可见 1
中度红斑，明显可见 2
重度红斑 3
紫红色红斑并有焦痂形成 4
水肿
无水肿 0
轻度水肿，勉强可见 1
跨度水肿，明显可见（边缘调出周围皮肤） 2
重度水肿，皮肤隆起 1 mm，轮廓清楚 3
严重水肿，皮肤隆起 1 mm 以上并有扩大
或有水沟或溃疡
4
表 2 皮肤致敏评价标准
致敏发生率 /% 皮肤致敏性评价
0～10 无致敏性
11～30 轻度致敏性
31～60 中度致敏性
61～80 高度致敏性
81～100 极度致敏性
1.4.3 口腔及黏膜用药急性毒性试验
取 SD 大鼠 20 只，雌雄各半，体重 250～280 g，
将试验动物随机分成二组，即艾纳香口腔护理液组、
生理盐水对照组。将最高质量浓度（2.4 mg/mL）
的艾纳香口腔护理液 0.6 mL 喷入大鼠口内，每隔 1 h
再重复 1 次，每天共 12 次，对照组给予等量的生
理盐水。观察记录给药后 24 h 及连续 7 d 动物的
呼吸和中枢神经系统症状及其他的中毒表现，局部
口腔黏膜有无红斑、水肿、溃疡、坏死等，并记录
大鼠给药后毒性反应及死亡数。
1.4.4 灌胃给药急性毒性试验
因为预实验结果无法测出 LD50，故进行 1
日内的最大给药量（MLD）实验。取昆明小鼠 40
只，雌雄各半，禁食 12 h 后，随机分为艾纳香口腔
护理液组和空白对照组，每组 20 只，药物组小鼠
以 40 mL/kg 灌胃给药，空白对照组给予等体积蒸
馏水，1 次或 1 日内每隔 4～6 h 连续给药 3 次，以
图 1 艾纳香口腔护理液组组织切片图
（HE 染色 ×200）
图 2 生理盐水对照组组织切片图
（HE 染色 ×200）
第2期　　　　　　　　　　　　　邹 婧，等：艾纳香口腔护理液安全性评价研究
研究报告 香料香精化妆品 2016年4月
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2.2 艾纳香口腔护理液对豚鼠皮肤的过敏性试验
艾纳香口腔护理液对豚鼠过敏反应的影响结
果见表 3。阳性对照组豚鼠皮肤受试区激发后，6 h
即出现轻度红斑，无水肿，在 24、48 和 72 h 后出
现红斑、水肿，致敏率 100%；空白对照组和艾纳香
口腔护理液组激发后 6、24、48 和 72 h 未见致敏
现象及全身反应。根据皮肤致敏性评分标准，可确
定艾纳香口腔护理液无致敏性，无过敏反应发生，
结果见表 3。
表 3 艾纳香口腔护理液对豚鼠过敏反应的影响
组别 动物数 / 只
反应平均值
致敏率 /%
6 h 24 h 48 h 72 h
生理盐水对照组 10 0 0 0 0 0
2，4- 二硝基氯苯阳性对照组 10 1.4 3.6 3.9 3.4 100
艾纳香口腔护理液组 10 0 0 0 0 0
2.3 口腔及黏膜用药急性毒性试验结果
大鼠口腔给予艾纳香口腔护理液，连续观察 7 d
无一动物死亡，其全身状况、饮食、摄水及体重增长
均正常，动物处死尸解后的心、肝、脾、肺、肾无病
理学改变。大鼠艾纳香口腔护理液口腔给药最大量
为 69.12 mg/（kg· d），结果见表 4。
表 4 艾纳香口腔护理液大鼠口腔黏膜用药急性毒性 mg/( kg· d )
组别 动物数 / 只 死亡数 / 只 全身状况 呼吸 饮食摄水
平均体重 /g 最大给药量
/（mg· kg-1· d-1）给药前 给药后
对照组雌性
20 0 正常 正常 正常
255.02 274.16 /
给药组雌性 253.51 267.28 69.12
对照组雄性 260.51 280.89 /
给药组雄性 263.81 276.46 69.12
2.4 灌胃给药急性毒性试验结果
给药后试验小鼠活动量减少，喜静卧，大便稀
疏，饮食、摄水量稍有减少。上述症状于给药后第
2 d 恢复正常。观察期间小鼠均无明显中毒及死亡
现象，皮毛光泽，眼、鼻、口、耳无异常分泌物，呼
吸正常，未见其他异常行为。观察结束后尸解，主
要组织器官（心、肝、脾、肺、肾）均无病理学改
变。给药后恢复正常进食饮水，观察期间各组动物
体重呈增长趋势，同性小鼠间的艾纳香口腔护理液
给药组与生理盐水对照组比较，均无显著性差异
（P>0.05），结果见表 5。
表 5 艾纳香口腔护理液小鼠灌胃给药急性毒性试验结果
组别 小鼠数 / 只
给药前后小鼠体重变化情况 /g
0 d 1 d 3 d 5 d 7 d 14 d
对照组雌性 10 19.85 ± 1.21 21.53 ± 1.22 22.51 ± 1.21 23.55 ± 1.36 24.51 ± 0.95 28.61 ± 1.50
给药组雌性 10 20.19 ± 1.06 20.95 ± 1.09 22.66 ± 1.04 24.03 ± 1.01 24.66 ± 0.74 28.49 ± 1.02
对照组雄性 10 19.77 ± 0.52 21.84 ± 1.30 23.02 ± 0.82 23.97 ± 1.11 25.41 ± 0.85 30.46 ± 1.31
给药组雄性 10 20.63 ± 1.32 21.00 ± 1.17 22.38 ± 1.00 23.42 ± 1.02 25.24 ± 0.99 30.27 ± 1.55
3 讨论
本研究中的艾纳香口腔护理液是以艾纳香提
取物为主要原料药，并配以相应的辅料制备而成，
为确保其用药的安全无毒，本研究通过对该护理液
进行口腔黏膜刺激性试验、过敏试验、口腔及黏膜
用药急性毒性试验及灌胃给药急性毒性试验，观察
给药后动物的体重、毒性症状及动物死亡数。
在大鼠口腔黏膜刺激性试验中，未发现口腔黏
膜组织异常，证明艾纳香护理液对口腔黏膜无刺激
性；在豚鼠过敏性试验中，艾纳香口腔护理液在
（下转第 72 页）
香精创拟 香料香精化妆品 2016年4月
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酸萝卜香气。这 3 个配方都是根据前一个配方的
香气特点来进行调改的，改变了前面的不足之处，
配方 3 基本上各路香韵的协调性都比较好，可认为
配方 3 为一个成熟满意的配方。
5 结论
采用同时蒸馏萃取法，分析了自制四川风味酸
萝卜的风味物质成分。结合调香经验，配制了一款
令人比较满意的酸萝卜香精。
参考文献
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（上接第 62 页）
皮肤用药后未引起过敏反应；在大鼠口腔黏膜用药
急毒性试验中，动物全身状况、饮食、摄水及体重
增长均正常，尸解后心、肝、脾、肺、肾无病理学改
变，证明作为口腔外用护理液，艾纳香口腔护理液
的给药量及可吸收至全身的量少，正常使用是安全
的；在小鼠灌胃给药急毒性试验中，由于预实验结
果毒性较低无法测出 LD50，说明艾纳香口腔护理
液的毒性较低，故以口腔护理液最大给药浓度和最
大给药体积在 24 h 内给小鼠灌胃 3 次，观察期内
各组动物体重呈增长趋势，同性小鼠间的艾纳香口
腔护理液给药组与生理盐水对照组比较，均无显著
性差异（P>0.05）。艾纳香口腔护理液小鼠急性毒
性试验的最大给药量为 288 mg/( kg· d )，相当于成
人给药剂量的 1200 倍，其全身状况、饮食、摄水和
体重增长均正常，各组织器官无病理学改变，证明艾
纳香口腔护理液毒性较低，临床常用剂量安全性高。
综上所述，艾纳香口腔护理液作为口腔局部用
药是安全的，这为艾纳香口腔护理液后期的临床用
药提供了参考依据。
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