全 文 ：一定优势。在大肠癌肿瘤组织 MMP2 mRNA表达水平检测和相
关性分析中 , 显示健脾复方 +5-Fu组 MMP2 mRNA的表达与健
脾复方组 、 5-Fu组和模型对照组的差异有统计学意义。经单因
素回归分析 , MMP2 mRNA表达与不同的治疗方案显著相关 , 进
一步多元回归分析显示 MMP2 mRNA表达与不同的治疗方案 、肿
瘤转移部位数量和肝转移显著相关。 这些结果提示健脾复方联
合化疗可抑制大肠癌生长和转移 ,其作用机制可能与抑制大肠癌
肿瘤组织 MMP2 mRNA的表达有关。
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收稿日期:2009-06-26;　修订日期:2010-07-30
基金项目:国家民委科研基金项目(No.08HB03)
作者简介:刘杰书(1963-),男(土家族), 湖北建始人, 现任湖北民族学院
医学院教授 ,学士学位 ,主要从事民族医药的开发研究工作.
羊耳蒜的气相色谱一质谱联用分析
刘杰书 1 ,李泳锋1 ,刘金龙 2
(1.湖北民族学院·医学院 ,湖北 恩施　445000;　2.湖北民族学院·生物科学与技术学院 ,湖北 恩施　445000)
摘要:目的 对羊耳蒜化学成分进行系统研究。方法 对羊耳蒜干全草选用 70%乙醇超声细胞粉碎机提取 , 离心 、除杂 、
选择试剂分离纯化 , 所得提取物采用气相色谱 -质谱联用(GC-MS)分析鉴定成分。结果 羊耳蒜提取物共检测出 51个
峰 , 现已鉴定出 22个化合物。结论 羊耳蒜化学成分主要是生物碱 、脂肪酸及小分子的酚性物质。
关键词:濒危植物;　羊耳蒜;　气相色谱一质谱联用;　超声波提取法
DOI标识:doi:10.3969 /j.issn.1008-0805.2010.12.017
中图分类号:R284.2　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2010)12-3076-02
　　羊耳兰属 , 兰科 ,约 250种 ,广泛分布于全球热带与亚热带地
区 , 少数种类也见于北温带 ,我国有 45种 , 约有 19种产于台湾 ,
其余以西南为最多。由于生态的破坏和过度的采掘 ,在全球现已
处于濒危阶段 , 已被国际贸易公约规定的保护野生兰科植物的一
种。羊耳蒜 , 兰科羊耳兰属植物羊耳蒜 Liparisjaponica(Miq.)
Maxim., 以带根全草入药 ,夏秋采收 , 洗净晒干。在土家医药学
中全草有活血调经 、止血 、止痛 、强心 、镇静的功效 [ 1] , 能治疗崩
漏 , 白带 ,产后腹痛 , 外伤急救等病症。现国内外还未见对羊耳蒜
的化学成分研究的相关报道 [ 2]。 为此对羊耳蒜的中药化学成分
进行研究。本实验用超声细胞粉碎机进行提取 ,用极性的大小进
行分离 , 用气相色谱 -质谱联用分析其中化学成分 , 用 NIST谱图
库检索鉴定化合物 ,用峰面积归一化法计算各峰的相对含量 。
1　材料与仪器
1.1　仪器 采用美国 AgilentGC6890N/MS5975i气相色谱 -质谱
-计算机联用(GC-MS-DS)。 AW 120型电子分析天平(新疆
嘉颖科技有限公司 ,精度 0.1 mg);JY96-II超声细胞粉碎机(宁
波新芝生科技股份有限公司产品);旋转蒸发器 RE-52(上海亚
荣生化仪器厂产品);飞鹤离心机 AnkeTGL-16G等。
1.2　药材与试剂 羊耳蒜(购买于咸丰县药商 , 湖北民族学院医
学院刘杰书鉴定 ,为羊耳蒜);乙醚 、醋酸乙酯 、丙酮 、正丁醇 、无
水乙醇 、无水硫酸钠等试剂均为优级纯。
2　方法
2.1　色谱柱 为 HP-5MS弹性石英毛细管柱(30 m×0.25 mm
×0.25 μm);升温程序:从 60℃开始 ,保温 2 min, 以 5℃· min-1
升温到 160℃,保温 1· min-1 ,再以 10℃/min升温到 240℃,保温
2min。汽化室温度 260℃;载气:高纯氦气;载气流量 10ml·min-1;
分流比 20∶1,进样量 0.1 μl。
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时珍国医国药 2010年第 21卷第 12期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2010VOL.21NO.12
2.2　质谱条件 质谱的电离方式为 EI, 灯丝电流
0.6 mA;电子能量 70 eV,倍增器电压 1 023 V, 离
子源 200℃,扫描周期 0.5s,溶剂延迟 3.0min, 扫
描范围 50 ～ 550amu.
2.3　样品制备 将羊耳蒜干全草在 60℃烘箱烘
至衡重后用粉碎机粉碎 120目 , 精密称取干粉末 2
g置 50 ml烧杯中 , 加 20 ml70%乙醇, 置于超声细
胞粉碎机 500W处提取 15min, 提取液 , 用离心机
离心除杂 ,离心液用旋转蒸发器回收乙醇 ,得浸膏 ,
加入石油醚除色素并将沉淀物 ,乙醚溶解 , 乙醚液
检测成分 ,沉淀物醋酸乙酯溶解 , 醋酸乙酯溶解检
测成分 ,沉淀物丙酮溶解 ,丙酮液检测成分 ,沉淀物
正丁醇溶解, 正丁醇液检测成分 , 沉淀物 50%乙醇
溶解 , 50%乙醇液检测成分。
2.4　样品测定 精确吸取供试品溶液 5种 , 分别
注入气相色谱仪中 , 对羊耳蒜进行 GC-MS分析 ,
得到羊耳蒜的 GC-MS总离子流图 ,见图 1 ～ 5。
启动 P6890MS化学工作站 , 利用 NIST05 -Wi-
ley275质谱库对各色谱峰进行检索 , 根据质谱数
据 、相对保留时间和有关参考文献 ,确认中各化学
成分。通过 ShimadzuGC-MSsolution数据处理
系统 , 按照峰面积归一法进行定量分析 , 得出羊耳
蒜中各化学成分的相对质量分数。
3　结果
供试品溶液经 GC-MS联用仪分析鉴定 , 在
确定各对照组分质谱数据和扫描峰号后 , 用 NIST
谱库进行检索 , 并核对标准质谱图及有关资料 , 统
计 5种供试品溶液从中分离 、鉴定出 16个化合
物。结果见表 1及图 1 ～ 5。
图 1　乙醚羊耳蒜 GC-MS总离子流图
图 2　醋酸乙酯羊耳蒜 GC-MS总离子流图
图 3　丙酮羊耳蒜 GC-MS总离子流图
图 4　正丁醇羊耳蒜　　　　　　　　　图 5　50%乙醇羊耳蒜
GC-MS总离子流图　　　　　　　　　　GC-MS总离子流图
表 1　羊耳蒜提取物化学成分
组分名称 分子式 分子量
Maleicanhydride　顺丁烯二酐 C4H2O3 98Benzenamine, 3 , 4-dimethyl-3, 4-二甲苯胺 C8H11N 121Benzofuran, 2, 3- -2, 3-二氢 -苯并呋喃 C8H8O 120
5, 6, 7, 8-Tetrahydroindolizine5, 6, 7, 8-四氢氮茚 C8H11N 121
2-Furancarboxaldehyde, 5-(hydroxym5-甲基 -2-呋喃甲醛 C6H6O3 126
2-Methoxy-4-vinylphenol2-甲氧基 -4-乙烯基苯酚 C9H10O2 150Benzaldehyde, 4-hydroxy-4-羟基苯甲醛 C7H6O2 122Vanilin3-甲氧基 -4-羟基苯甲醛 C8H8O3 152Tetradecanoicacid肉豆蔻酸 C14H28O2 228Phyto C20H40O 278n-Hexadecanoicacid十六烷酸 C16H32O2 256
3-Methyl-1-phenyl-2-azafluorene1-苯基 -3-甲基 -2-氮杂芴 C19H15N 257Procerin C15H18O2 230
9, 12-Octadecadienoicacid(Z, Z)-(Z, Z)-9 , 12-十八烷二烯酸 C18H32O2 280
9, 12, 15-Octadecatrienoicacid,
2, 3-dihydroxypropylester, (Z, Z, Z)- C21H36O4 280
Octadecanoicacid硬脂酸 C18H36O2 284
5-Methoxy-2-nitro-10H-acridin-9-one C14H10N2O4 270
Eudesma-5, 11(13)-dien-8, 12-olide桉叶油二烯 5, 11(13)-内酯-8, 12 C15H20O2 232
5, 8-Dimethoxy-2, 3, 10, 10a-tetrahydro-1H,
4aH-phenanthrene-4, 9-dione C16H18O4 274
Verazine藜芦嗪 C27H43NO 397Stigmasta-5, 22-dien-3-ol, acetate, (3á)- C31H50O 438
8-Alyl-2-oxo-2H-chromene-3-carboxylicacid C22H28N2O3 368
4　讨论
羊耳蒜是土家族医药特色药物之一 , 其临床疗效在长期医疗实践中 ,效果显
著。现从其 5种提取液中共检测出 51个峰 ,鉴定出 22个化合物 , 还有 35个未
鉴定出来。本实验对羊耳蒜进行驯化成功 , 现已处于对其进行组织培养过程中。
实验结果为拯救濒危植物 、储备物种资源作进一步的科学研究起到积极作用 , 将
为以后开发新药提供理论依据及资源。
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