全 文 ：TTC法测定嵩草种子生活力的
适宜条件研究
王得贤　谢永丽　严　虎 　苟桂香＊　应　宗＊
(青海大学农牧学院 ,西宁 ,810003)
　　　　摘　要　在不同温度(20℃, 25℃, 30℃, 35℃, 40℃, 45℃), 不同 TTC浓度(0.1%, 0.2%, 0.3%,
0.4%, 0.5%, 0.6%)下 ,在 0 ～ 12h内测定了线叶嵩草种子生活力的适宜条件。结果表明:在 35℃
的温度 、0.1%的 TTC浓度和 3h的染色时间下 , 可获得最佳染色效果 , 可作为线叶嵩草种子生活力
测定的适宜条件。
关键词　线叶嵩草　TTC法　温度　时间　TTC 浓度　种子生活力　测定
　　　　中图分类号:S543　文献标识码:B　文章编号:1003—7950(1999)04—0008—03
The study on Appropriate conditions of Determination Kobresia
Capillifolia seed Viability using TTC Method
WANG De-Xian et al
(Faculty of Agriculture and Animal sciences ,Qinghai University ,Xining ,810003)
　　Abstract:Under the conditions of different temperature(20℃,25℃, 30℃, 35℃, 40℃ and 45℃)
and TTC (triphenyl tetrazolium chloride)concentration(0.1%, 0.2%, 0.3%, 0.4%, 0.5% and
0.6%)and during the period of different dyeing time(0 ～ 12h)the seed viability of Kobresia capillifolia
was determined.The results showed that under the conditions of the temperature of 35℃, the TTC concen-
tration of 0.1% and at the dyeing time of 3h the dyeing effect was the most appropriate.They could be
the most appropriate condition to determine Kobresia capillifolia seed viability.
　　Key words:Kobresia capillifolia ,Temperature ,Dyeing time ,TTC concentration ,Seed viability , De-
termination
　　在测定嵩草种子生活力时 ,常用 TTC法
(氯化三苯四氮唑法)。用什么样的 TTC 浓
度 、温度及染色时间下 ,可获得较好的染色效
果 ,未见报道 。为此 , 我们以线叶嵩草(Ko-
bresia capillifolia)种子为材料初步探讨了 TTC
法测定其生活力的适宜温度 、浓度和染色时
间 ,为嵩草种子生活力的 TTC 法测定提供理
论依据。
1　材料和方法
1.1　供试种子　线叶嵩草种子于 1998年 9
月6日采集于青海省贵德县拉鸡山 ,海拔高
度约 3400m 。采集后室温(17±3℃)下自然
风干 , 测定时(1998 年 10 月 19 日)千粒重
1.195g ,含水量 18.84%。
1.2　试验方法
1.2.1　测定种子的准备:种子在切开前 ,均
匀摊开放置于两层用水润湿的滤纸间 ,在
25℃下过夜(12h)。然后沿腹缝线切开 ,放入
已事先标有温度及不同浓度 TTC 溶液的点
滴板中。每处理重复3次 。
1.2.2　TTC 溶液的配制:先配成 1%TTC 母
液〔1〕 ,pH 在 6.5 ～ 7.5间(若不在 6.5 ～ 7.5
间 ,用缓冲液配),存放于棕色试剂瓶中 ,放于
暗处 ,用时分别稀释至 0.1%、0.2%、0.3%、
0.4%、0.5%和 0.6%。
1.2.3　在不同温度下染色鉴定:在 20℃、
25℃、30℃、35℃、40℃和 45℃六个温度下染
色 ,在开始至 30min范围内每隔 5min 观察记
载胚染色情况一次 ,以后每隔 30min观察记
载一次 ,直至 12h 。
草原系九九届毕业生
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青海畜牧兽医杂志 　1999年第 29 卷第 4 期(总第 142 期)
2　结果与讨论
2.1　不同温度对线叶嵩草种子 TTC染色的
影响
由表 1可见 ,在各温度下的染色效果不
一样 。35℃下染色效果最佳 ,至 150min 时 ,
平均达52.52%,而 25℃的平均染色百分数
(33.61%)、 30℃下的平均染 色百分数
(30.83%)和 45℃下的平均染色百分数
(33.07%)接近 ,但均不如 35℃下的染色效果
好。至 180min 时 , 35℃下的染色平均达 57.
77%,较 150min 下的有所提高 , 而 25℃的
(36.08%)、30℃下的(31.11%)和 45℃下的
(36.38%)接近 ,但均低于 35℃下的 。180min
以后(表中未列出)染色数基本上无变化 。因
此 ,35℃是线叶嵩草的最佳染色温度。
2.2　不同TTC浓度对线叶嵩草种子染色的
表 1 不同 TTC 浓度 、不同时间在不同温度下线叶嵩草种子染色的百分数
TTC浓度(%)
30min
20℃ 25℃ 30℃ 35℃ 40℃ 45℃
60min
20℃ 25℃ 30℃ 35℃ 40℃ 45℃
0.1 0 0 10.0 8.3 0 0 0 0 16.7 13.3 11.7 5.0
0.2 0 0 13.3 5.0 0 0 0 0 26.7 20.0 8.3 0
0.3 0 0 6.7 3.3 0 0 0 0 18.3 18.3 11.7 0
0.4 0 0 3.3 15.0 0 0 0 0 10.0 26.7 6.7 0
0.5 0 0 1.7 10.0 0 0 0 0 3.3 18.3 3.3 0
0.6 0 0 15.0 1.7 0 0 0 0 18.3 15.0 3.3 0
　　注:30min以前未染色 , 180min后染数与 180min时的一样 ,表中未列出;表中数据为三次重复的平均值(%)
TTC浓度(%)
90min
20℃ 25℃ 30℃ 35℃ 40℃ 45℃
120min
20℃ 25℃ 30℃ 35℃ 40℃ 45℃
0.1 0 18.3 23.3 38.3 20.0 20.0 6.7 35.0 26.7 70.0 31.7 26.7
0.2 0 10.0 36.7 33.3 18.3 23.3 1.7 28.3 55.0 61.7 35.0 30.0
0.3 0 8.3 26.7 33.3 13.3 18.3 1.7 20.0 36.7 58.3 20.0 28.3
0.4 0 6.7 15.0 30.0 10.0 15.0 3.3 21.7 21.7 36.7 16.7 20.0
0.5 0 10.0 5.0 26.7 5.0 20.0 0 25.0 5.0 33.3 6.7 26.7
0.6 0 15.0 20.0 21.7 3.3 13.3 0 30.0 33.3 35.0 3.3 16.7
TTC浓度(%)
150min
20℃ 25℃ 30℃ 35℃ 40℃ 45℃
180min
20℃ 25℃ 30℃ 35℃ 40℃ 45℃
0.1 6.7 46.7 28.3 71.7 33.3 36.7 6.7 48.3 28.3 80.0 35.0 45.0
0.2 1.7 33.3 60.0 61.7 35.0 45.0 1.7 38.3 60.0 63.3 36.7 50.0
0.3 1.7 26.7 36.7 60.0 20.0 36.7 1.7 30.0 36.7 65.0 20.0 41.7
0.4 3.3 25.0 21.7 40.0 16.7 25.0 3.3 28.3 21.7 45.0 16.7 25.0
0.5 0 31.7 5.0 45.0 8.3 31.7 0 33.3 6.7 53.3 10.0 33.3
0.6 0 38.3 33.3 36.7 3.3 23.3 0 38.3 33.3 40.0 3.3 23.3
影响
由表1 可见 ,在 60min以前各浓度下的
染色效果基本一致。至 90min以后 , 0.1%和
0.2%TTC浓度下染色效果明显优于其它浓
度 ,至 150min和180min时平均染色百分数分
别达到 37.23%, 40.55%和 39.45%,
41.67%。二浓度下染色效果基本一致(0.2%
浓度下的稍高)。考虑到 TTC 药品较贵 ,以
0.1%的染色浓度为佳。180min后 ,各浓度在
不同温度下的染色百分数无变化。
2.3　染色时间对 TTC法测定线叶嵩草的影
响
在 180min以前(表 1),随着时间延长 ,染
色百分数提高 。在 30℃和 35℃时至 30min
时已开始染色 ,但其它浓度下未出现染色 ,至
60min时 , 40℃和 45℃的也出现了染色 ,但
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4 1999　
青海畜牧兽医杂志
Chinese Qinghai Journal of Animal and Veterinary sciences
29卷 4期
Vol.29 ,No.4
20℃下的只到 120min 才出现了染色 , 且至
180min时平均只染色 2.23%,远低于 35℃下
的57.77%。因此 ,嵩草种子在不同温度下
所需染色时间不一样。在 35℃和 0.1%,
0.2%的 TTC 浓度下 , 染色时间以 3h(即
180min)为宜 ,再延长时间 ,染色百分数基本
上无变化 。
因此 ,线叶嵩草宜在 35℃下用 0.1%的
TTC染色 3h为佳 。该条件与大多数牧草种
子TTC 法测定时的染色条件一致〔1〕 。可能也
可用于用 TTC 法测定其它嵩草种子生活力
的适宜条件。
3　参考文献
1　甘肃农业大学主编.草原与牧草学实习实验
指导.甘肃科学技术出版社 , 1991 , 142 ～ 154 , 159
2　〔美〕D.F.格雷勃编.农业种子四唑测定手
册.北京:农业出版社 , 1979 , 3～ 9
致谢:魏臻武老师在采集种子时给予大力支持 ,
王英梅 、史有录 、朱生秀 、李军庆 、严兆香 、严文兰 、冠
青善同学作了部分工作 ,在此一并致谢 。
(收稿时间:1999-04-07)　
·牧医简报·
青海生物制药厂生物制品车间
GMP改造的体会
郭晓阳　(青海省兽医生物药品制造厂 ,西宁 ,810003)
　　我厂始建于 1958 年 , 主要生产兽用疫苗 , 几十
年来 ,对控制畜禽传染病的流行 ,促进青海畜牧业的
发展做出了很大的贡献。但 40 多年来 , 我厂未进行
重大的技术改造的设备更新 , 厂房陈旧 、设备老化 、
生产环境差等问题已制约着本厂的发展。根据农业
部农牧发(1994)32 号文的要求 , 我厂于 1996 年 7 月
向青海省畜牧厅申请进行生物制品车间技术改造。
省畜牧厅于当年批准了我厂的技改申请。经多方征
求意见及筹措资金 ,决定按 GMP(兽药生产质量管理
规范)标准新建一座生物制品车间。为此 ,我们先后
考察了北京 、南京 、陕西 、山西 、河北生物制药厂 , 兰
州兽医研究所口蹄疫中试车间。 在此基础上 , 结合
我厂生产实际 , 初步完成生物制品车间的工艺平面
图。此图于 1997年 5 月 7 日经农业部药政处和中国
兽药监察所审定后 , 委托中国建筑科学院北京空调
所正式设计 ,设计生产能力为年产疫苗 3 亿头份 , 总
投资为 750万元。 6 月 24日完成施工图设计。土建
工程于 1997年 9 月 1日开工 , 1999 年1 月 4 日完工。
净化工程及设备安装预计 1999 年 6月底完成。现将
这次技改的一些情况和体会叙述如下。
1　满足生产需要。新建车间必须满足现有生物制
品生产的需要 , 主要的班组都要进入新车间。 根据
我厂现生产的疫苗品种和规模 , 决定按 GMP 标准新
建厂房面积 1714m2 ,其中净化面积 430m2 , 包括主要
疫苗生产的操作间 、配苗 、分装 、冻干 、包装流水线及
空调净化机房等。
2　符合GMP要求。新建厂房必须符合农业部《兽药
质量管理规范》中规定的各项要求。 车间分为控制
区 、洁净区。控制区为准备区 , 洁净区包括生产区 、
灌装区。污物从专设通道传出 , 使人流 、物流 、半成
品 、成品互不交叉 , 洁净物和污物严格分开。 生产区
无菌间为一万级 , 操作台为一百级 , 灌装区为一万
级 ,操作台为一百级 , 洁净通道为十万级 , 生产区采
用三条生产线。 实施 GMP不仅仅是在厂房 、设施 、
设备等硬件方面 , 更重要的是在软件上对整个药品
生产 、销售过程各项管理措施规范化 ,杜绝影响产品
质量的因素和可能出现的质量问题 , 防止发生对生
产人员 、外界环境造成危害 , 确保产品质量和生产顺
利进行。
3　生产能力及产品质量水平要上一个新台阶。 我
厂现在主要生产牛羊疫苗 , 年产 1 亿多头份。为满
足日益扩大的市场需要 , 这次技改后年生产能力将
提高到 3 亿头份。由于生产流水线全部按 GMP标准
布置 , 加上生产过程中全面监督 , 产品的污染将大大
的减少 , 效率进一步提高 ,产量和质量将达到一个新
水平。
4　给新产品留有空间 。为了企业的生存和发展 , 为
今后开发的新产品或引进的新项目能够随时投入生
产 , 给新产品留出一定的空间是非常必要的。这次
技改中我们专门为新产品设计了一个万级洁净室和
相应的温室和无菌间。
5　存在问题 。这次技改是在没有现成模式可以借
鉴的情况下进行的 , 由于技改的资金 、人员的知识水
平以及其它因素的限制 , 尚有许多不足之处 , 可概况
为以下两点。
5.1　资金不足 , 使厂房面积有所减少 , 有些设备如
超声波洗瓶机 、全自动贴签机等需要下一步再行购
置。
5.2　监察室及动物室改造没有同步进行。 两室的
改造本应同车间技改同步进行 , 受资金制约 , 厂里准
备以后陆续进行改造。
技术改造是一个系统工程 , 需要各方面的紧密
配合和协调 , 我们将按 GMP 的要求 , 把这个项目搞
好 , 为青海畜牧业的发展做出我们应有的贡献。
(收稿时间:1999-05-07)
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青海畜牧兽医杂志 　1999年第 29 卷第 4 期(总第 142 期)