全 文 ：HPLC谱法测定蒲公英不同器官中绿原酸的含量
陈 萍1，王建刚2 (1．吉林化工学院化学与制约工程学院，吉林吉林 132022;2．吉林化工学院分析测试中心，吉林吉林 132022)
摘要 ［目的］建立 HPLC法测定蒲公英不同器官中绿原酸含量的方法。［方法］采用 Shim-pack VP-ODS(4． 6 mm ×150． 00 mm，5 μm)色
谱柱;以甲醇 －0． 4%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱;流速为 1． 0 ml /min，检测波长为 326 nm;柱温为 40 ℃;进样量为 20 μl。［结
果］绿原酸的线性范围为 0． 791 20 ～79． 120 μg /ml，(r =0． 999 8)，回收率为 98． 00% ～ 101． 5%。蒲公英叶、根、花和花茎中绿原酸含量
分别为 1． 212、0． 536、0． 448、0． 417 mg /g。［结论］该研究为蒲公英中绿原酸含量测定提供了一种快速、准确的方法;蒲公英叶中绿原酸
含量最高，这为更好地开发利用蒲公英这一药食植物资源提供了依据。
关键词 蒲公英;不同器官;绿原酸;HPLC
中图分类号 S636． 9 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611(2011)16 －09600 －02
Determination of Chlorogenic Acid of Different Organs from Taraxacum mongolicum by High Performance Liquid Chromatography
CHEN Ping et al (College of Chemistry and Pharmaceutical Engineering，Jilin Institute of Technology，Jilin，Jilin 132022)
Abstract ［Objective］To establish a method for determining contents of chlorogenic acid in different organs from Taraxacum mongolicum by
HPLC． ［Method］The HPLC was carried out with Shim-pack VP-ODS column (4． 6 mm × 150． 0 mm，5 μm)using mixture of methanol and
0． 4 % phosphoric acid solution in different ratio as mobile phase． Other conditions were:flow rate of 1． 0 ml /min，detection wavelength of
326 nm，column temperature of 40 ℃ and sampling amount of 20 μl． ［Result］When the concentration of chlorogenic acid ranged from
0． 791 2 to 79． 120 0 μg /ml，the linear relationship between concentration and peak area was good (r = 0． 999 8)． The recovery was 98． 00%
－ 101． 50% ． Leaves、roots、flowers and scapes of Taraxacum mongolicum were 1． 212，0． 536，0． 448 and 0． 417 mg /g in chlorogenic acid，
respectively． ［Conclusion］The method established in this work was a rapid and accurate method for determining chlorogenic acid from Tarax-
acum mongolicum． Leaf of Taraxacum mongolicum was highest in chlorogenic acid，which provided basis for better developing and applying of
Taraxacum mongolicum．
Key words Taraxacum mongolicum;Different organs;Chlorogenic acid;HPLC
作者简介 陈萍(1971 － ) ，女，福建福安人，讲师，硕士，从事工业分析
教学与科研工作。
收稿日期 2011-03-21
蒲公英(Taraxacum mongolicum)俗称婆婆丁、黄花地
丁，为菊科蒲公英属多年生草本植物，在我国各省区均有分
布。其干燥全草可入药，味苦、甘，性寒，具有清热解毒、消
肿散结、利胆利尿等功效，是中医临床上常用的中草药［1］。
蒲公英亦可食用，其叶质脆嫩，气味清香，口感好，营养价值
高，是很好的药食兼用型植物，我国东北部分地区已有人工
栽培［2］。
现代研究表明，蒲公英含蒲公英甾醇、蒲公英苦素、多
糖、绿原酸和黄酮类化合物等多种活性成分［3 －4］。其中绿原
酸具有抗菌、抗氧化、降血压、降血脂、保肝利胆、抗肿瘤等功
效［5］。关于蒲公英中咖啡酸、阿魏酸含量的测定已有报
导［6 －7］，而对其中绿原酸含量的测定报道较少。绿原酸及黄
酮类活性物质的提取方法有水提法［7］、醇提法［8］和微波提取
法［9］，微波法作为一种清洁、高效的提取手段已被人们所接
受。笔者采用微波提取绿原酸，用高效液相色谱法(HPLC)
测定蒲公英不同器官中绿原酸的含量，旨在为进一步开发利
用蒲公英资源提供依据。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 研究对象。蒲公英样品，2010 年 5 月采集于吉林省
吉林市，采集含刚开花的全株，将叶、根、花及花茎分类，经自
来水冲洗，自然阴干，塑料袋分类密封，冰箱保存，备用。
1． 1． 2 主要试剂。磷酸(分析纯)、甲醇(色谱纯) ，由天津大
茂化学试剂厂生产;绿原酸(批号:110753-200413) ，购自中国
药品生物制品检定所;水为娃哈哈纯净水。
1． 1． 3 主要仪器。LC-20AB液相色谱仪包括 SPD-20A二极
管阵列检测器、LC-Solution 数据处理系统，由日本岛津公司
生产;AUX320分析天平，由日本岛津公司生产;MARS 型微
波萃取仪，由美国 CEM公司生产;RT-08型高速中药粉碎机，
由大德乐机械有限公司生产。
1． 2 方法
1． 2． 1 对照品溶液的制备。精密称取绿原酸对照品 7． 912
mg，用甲醇溶解，置于 100 ml 的容量瓶中，用 60%甲醇 －
0． 4%磷酸水溶液稀释至刻度，配制成浓度为 79． 120 0 μg /ml
的绿原酸储备溶液。
1． 2． 2 样品溶液的制备。将自然干燥的蒲公英叶、根、花及
花茎分别在 60 ℃条件下干燥 8 h，粉碎，过 40 目筛，称取
0． 500 0 g不同部位样品粉末，分别置于微波萃取管中，加入
10 ml 60%甲醇 － 0． 4%磷酸水溶液，冷浸 30 min，在微波功
率 600 W、温度 90 ℃条件下萃取 120 s。冷却后用 60%甲醇
－0． 4%磷酸水溶液转移至 50 ml 容量瓶中并定容，经 0． 45
μm滤膜过滤，即得供试品溶液。
1． 2． 3 HPLC 色谱条件。色谱柱为 VP-ODS(150． 0 mm ×
4． 6 mm，5 μm) ;采用梯度洗脱，流动相为甲醇 －0． 4%磷酸水
溶液(甲醇:0 min，5%;10 min，85%;20 min，28%;30 min，
35%;40 min，60%;40． 1 min，95%;48 min，95%;48． 1 min，
5%;55 min，5%) ;流速为 1． 0 ml /min;柱温为 40 ℃;SPD-20A
二极管阵列检测器，检测波长 326 nm;进样量 20 μl。
1． 2． 4 方法学考察。
1． 2． 4． 1 线性关系考察。分别移取绿原酸标准储备液适
量，置于 50 ml容量瓶中，用 60%甲醇 － 0． 4%磷酸水溶液定
容，配制成 7个浓度梯度的对照品溶液，绿原酸浓度分别为
0． 791 2、1． 978 0、3． 956 0、7． 912 0、19． 780 0、39． 560 0、
79． 120 0 μg /ml。按“1． 2． 3”中色谱条件进行色谱分析，以浓
度(C． μg /ml)对峰面积(A)进行线性回归，考察对照品线性
责任编辑 刘群燕 责任校对 傅真治安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2011，39(16):9600 － 9601
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2011.16.175
关系。
1． 2． 4． 2 流动相的选择。绿原酸属酚酸类物质，其分子结
构上含有多个羟基，中性及碱性溶液条件下易解离，为防止
色谱峰拖尾，流动相应调整为酸性。考虑到蒲公英各器官提
取液成分的复杂性，在保证分离的前提下分析时间最短，最
终选择梯度洗脱。
1． 2． 4． 3 检测波长的选择。采用二极管阵列检测器对绿原
酸进行紫外光谱扫描，确定最大吸收波长为检测波长。
1． 2． 4． 4 重复性。平行称取 5 份蒲公英叶粉末，按“1． 2． 2”
中方法制备成供试品溶液，按“1． 2． 3”中色谱条件分别进行
测定，计算峰面积相对标准偏差值(RSD) ，考察方法重现性。
1． 2． 4． 5 回收率试验。精密称取已测含量的蒲公英叶粉末
5份，每份分别加入绿原酸对照品储备液各 3 ml，按“1． 2． 2”
中方法制备程供试品溶液，按“1． 2． 3”中色谱条件分别进行
测定，计算样品平均回收率及 RSD值。
1． 2． 5 样品含量测定。准确称取蒲公英叶、根、花及花茎样
品粉末各 5份，按“1． 2． 2”制备供试品溶液，按“1． 2． 3”中色
谱条件进行测定，通过 LC Solution 色谱工作站进行数据处
理，分别计算蒲公英不同器官中绿原酸含量。
2 结果与分析
2． 1 方法学考察结果
2． 1． 1 线性关系。计算得绿原酸回归方程为:A = 70 252C
+11 534，r =0． 999 8，表明绿原酸在浓度 0． 791 2 ～ 79． 120 0
μg /ml范围内，与峰面积线性关系良好。
2． 1． 2 流动相。最终选择甲醇 － 0． 4%磷酸水溶液梯度洗
脱，甲醇:0 min，5%;10 min，85%;20 min，28%;30 min，35%;
40 min，60%;40． 1 min，95%;48 min，95%;48． 1 min，5%;55
min，5%。在该洗脱条件下，蒲公英提取液 HPLC 色谱图见
图 1。由图 1可知，绿原酸(A)与干扰物可完全分离。
注:A．绿原酸。
Note:Chlorogenic acid．
图 1 蒲公英叶样品 HPLC色谱图
Fig． 1 HPLC chromatography of leaves of Taraxacum mongoli-
cum
2． 1． 3 检测波长。由吸收光谱可知(图 2) ，绿原酸在波长
326 nm处有较大吸收，考虑到长波抗干扰能力强，确定检测
波长为 326 nm。
2． 1． 4 重复性。计算得绿原酸峰面积 RSD 值为2． 17%，表
明方法重现性好。
2． 1． 5 回收率。计算得绿原酸回收率为 90． 10% ～
93． 80%，RSD值为 2． 66%。
图 2 绿原酸紫外吸收光谱
Fig． 2 UV spectrum of chlorogenic acid
2． 2 样品含量 由表 1 可知，不同蒲公英器官中绿原酸含
量存在差异，蒲公英叶中绿原酸含量较高，其他部位如根、
茎、花茎中绿原酸含量差异不大。由此可知，以蒲公英叶为
材料入药或食用较好。
表 1 蒲公英不同器官中绿原酸含量(n =5)
Table 1 The content of chlorogenic acid in different organs of Taraxa-
cum mongolicum
器官
Organs
绿原酸含量
Content of chlorogenic acid∥mg /g
RSD∥%
叶 Leaves 1． 212 2． 17
根 Roots 0． 536 5． 22
花 Flowers 0． 448 4． 52
花茎 Scapes 0． 417 5． 17
3 结论
采用微波辅助提取蒲公英不同器官中的绿原酸，提取
率高，时间短。该试验选择微波辅助提取蒲公英不同器官
中绿原酸等活性物质，并对其提取条件进行了优化，分别考
察了提取溶剂种类、料液比、微波提取功率、微波提取时间
对提取效率的影响。确定最佳的提取条件为:提取液 60%
甲醇 － 0． 4%磷酸水溶液，料液比 1∶20，微波提取前冷浸 30
min，微波功率 600 W，提取温度 90 ℃，提取时间 120 s。
利用 HPLC法对蒲公英不同器官中绿原酸进行了定量
分析，结果表明，绿原酸含量叶 ＞根 ＞花 ＞花茎，这为更好地
栽培蒲公英、合理开发利用蒲公英资源提供了参考依据。
参考文献
［1］姜宁，宋新波．蒲公英的药理学研究进展［J］．中国中医药杂志，2008，6
(12):19 －22．
［2］赵英明，范文丽，宁伟． 药食兼用野生植物蒲公英的利用价值及开发概
述［J］．辽宁农业科学，2008(5):48 －51．
［3］付学鹏，杨晓杰，李本丽，等． 蒲公英不同器官多糖含量测定及抗氧化
性研究［J］．食品研究与开发，2008，29(2):26 －28．
［4］贝宁，于广福． 高效液相色谱法测定蒲公英提取物中咖啡酸含量［J］．
中国野生植物资源，2010，29(3):54 －56．
［5］吴卫华，康桢，欧阳冬生，等．绿原酸的药理学研究进展［J］． 天然产物
研究与开发，2006，18(4):691 －693．
［6］李喜凤，余云辉，郝哲，等． 蒲公英中阿魏酸含量的测定［J］． 时珍国医
国药，2010，21(5):1169 －1170．
［7］梁运霞，宋德花，刘广文，等．正交实验法优选蒲公英中绿原酸的水提
工艺研究［J］．中兽医医药杂志，2009，28(1):33 －35．
［8］付桂明，万茵，周建斌． 杜仲叶醇提液中黄酮测定方法比较研究［J］．中
国食品学报，2006，6(1):224 －227．
［9］尹青，张华． 超声波提取蒲公英中绿原酸［J］．食品研究与开发，2009
(5):23 －27．
106939 卷 16 期 陈 萍等 HPLC谱法测定蒲公英不同器官中绿原酸的含量