全 文 ：　表 5 游离异嗪皮啶提取工艺方差分析表
方差来源 离差平方和 自由度 均方 F P
A 10.25 2 5.125 13.31 P>0.05
B 56.52 2 28.260 73.40 P<0.05
C 5.59 2 2.795 7.26 P>0.05
D 0.77 2 0.385
　表 6 异嗪皮啶总量水解工艺方差分析表
方差来源 离差平方和 自由度 均方 F P
a 5.44 2 2.720 36.27 P<0.05
b 1.73 2 0.865 11.53 P>0.05
c 1.11 2 0.555 7.40 P>0.05
d 0.15 2 0.075
2.4 　样品测定　色谱条件:色谱柱为 Diamonsil C18
柱(200 mm×4.8 mmi.d , 5μm);流动相:乙腈-甲醇-
冰-冰醋酸=17∶3∶80∶1;检测波长 344 nm;流速 0.9 ml/
min;进样量 20μl ,柱温为室温。取上述 2种溶液各
20μl分别进样 ,按外标一点法计算样品中游离型异
嗪皮啶含量和总异嗪皮啶含量 ,结果见表 3 、表 4。
2.5 　结果分析　对所得数据进行直观分析和方差
分析 ,结果见表 5 、表 6。可以看出 ,在游离型异嗪皮
啶提取工艺中 ,在溶剂量 、提取时间 、提取次数 3个
因素中 ,最主要的影响因素为提取次数 ,其次为溶剂
量 。经过分析 ,优化后的最佳条件为 A3B3C3 ,即采
用 12倍量甲醇 ,提取 3次 ,每次提取 60 min。在水
解过程中 ,最主要的影响因素为水解时间 ,其次为
H2SO4 浓度 。经过分析 , 优化的最佳水解条件为
a1b1c2 ,即采用 10倍量 15%H2SO4 在 100℃水浴中水
解 2 h 。
参 考 文 献
1 　徐国钧 ,等.中国药材学.北京:中国医药科技出版社 ,
1996∶301
(2003-09-11收稿)
Study on the Extraction Process for Free Isofraxidin and Hydrolytic Condition
of Combined Isofraxidin in Ciwujia with Orthogonal Design
Yuan Xinrong , Bi Kaishun , Li Qiang
(Shenyang Pharmaceutical University , Shenyang 110016)
Abstract　Objective:To optimize the extraction and hydrolytic condition of isofraxidin in Ciwujia.Methods:The study was carried out
through orthogoral experimental design.The content of isofraxidin was determined as marker to evaluate the effect on the extraction and hydrolyt-
ic condition of different process.Results:The optimum extraction condition was 12 times methanol and 3 times for sixty minutes every time.And
the optimum hydrolytic condition was that hydrolysis for two hours , ten times amount of 15% sulfuric acid at 100℃.
Key words　Ciwujia;Isofraxidin;Orthogonal design
正交试验法优选蒲公英水提工艺
谭红胜1　夏新华1　楚生辉2
(1.湖南中医学院 ,长沙 410004;2.陕西中医学院 ,咸阳 712083)
　　摘要　目的:优选蒲公英的水提工艺。方法:采用正交试验法 , 以测定蒲公英中咖啡酸的提取率作为考察指
标。结果:蒲公英的最优水提工艺为加水浸泡 1.5 h , 提取 2 次 ,加水量分别为 12倍 、10 倍 ,提取时间分别为 1.5 h、
1.0 h。结论:本实验为蒲公英制剂的进一步研究奠定了基础。
关键词　蒲公英　水提工艺　正交试验
　　蒲公英为常用的清热解毒中药 。现代药理研究
表明 ,其抗菌的主要有效成分为绿原酸和咖啡酸〔1〕 ,
中国药典(2000年版)规定其咖啡酸含量不得低于
0.02%。笔者采用正交试验法对蒲公英的水提工艺
进行了优选。
1 　仪器与试药
1.1 　仪器　Waters高效液相色谱仪;Waters 2487紫
外检测器;Breez 工作站;C-R3A 数据处理器;Nova-
PakC18柱(3.9×150 mm ,4μm)。
·211·中药材第27卷第 3 期 2004 年 3月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2004.03.028
1.2 　试药　蒲公英药材购自湖南省药材公司 ,咖
啡酸对照品由中国药品生物制品检验所提供 ,甲醇
为色谱纯 ,水为重蒸馏水 ,其他试剂均为分析纯。
2 　方法与结果
2.1 　水提液中咖啡酸的测定
2.1.1 　色谱条件:色谱柱:Nova-PakC18柱(3.9 ×
150mm ,4 μm);流动相:甲醇-0.5%冰醋酸水溶液(21
∶79);流速 1 ml/min;检测波长:323 nm;柱温:40℃。
2.1.2 　对照品溶液的制备:精密称取在 110℃干燥
至恒重的咖啡酸对照品 7.5 mg ,置 5 ml量瓶中 ,加
甲醇至刻度 ,摇匀 ,精密量取 2 ml ,置 10 ml量瓶中 ,
加甲醇至刻度 ,摇匀 ,即得 。
2.1.3 　标准曲线的制备:精密吸取浓度为 0.030
mg/ml的咖啡酸对照品溶液 2 、4 、6 、8 、10μl进样 ,测
定其峰面积积分值 ,以浓度为横坐标 ,峰面积积分值
为纵坐标 ,绘制标准曲线 ,其回归方程为 Y=5.17×
10
3
X+1.09 ×104 , r =0.9994。咖啡酸在 60.0 ～
300.00 ng范围内具有良好的线性关系。
2.1.4 　供试品溶液的制备与测定:精密量取提取
液适量 ,慢慢加入一定量甲醇 ,边加边振摇 ,离心 ,取
上清液 ,用 0.45μm微孔滤膜滤过 ,取续滤液作为供
试品溶液。精密吸取供试品溶液适量 ,注入高效液
相色谱仪 ,测定峰面积 ,计算 ,即得 。
2.2 　蒲公英水提次数及粉碎度的初步考察　取蒲
公英粗粉与全草适量 ,在相同条件下分别加水提取
三次 ,分别收集各次水提液 ,并用HPLC 法测定咖啡
酸含量 ,计算出咖啡酸的提取率 ,结果表明粗粉的总
提取率明显高于全草 ,且第三次提取液中咖啡酸的
量均少于 3次提取总量的 10%。因此 ,从提取率与
经济的角度综合考虑 ,蒲公英以粗粉水提2次为宜 。
2.3 　正交试验法对蒲公英水提工艺的优选
2.3.1 　试验设计:选择浸泡时间 、加水量 、提取时
间作为考察因素 ,每个因素各取三个水平(见表 1),
以咖啡酸提取率为评价指标 ,用 L9(34)正交表安排
试验(见表 2)。
　表 1 因素水平表
水平 浸泡时间(h)A 加水量(倍)B 提取时间(h)C
1 0.5 8 , 6 1.0 , 0.5
2 1.0 10 , 8 1.5 , 1.0
3 1.5 12 , 10 2.0 , 1.5
2.3.2 　结果:取蒲公英粗粉(咖啡酸含量为
0.066%)30 g ,均平行两份 ,根据表 2安排 ,分别加水
煎提 2次 ,收集 1 、2 、4 、5 、7 、8号提取液 ,定容至 500
ml ,另收集 3 、6 、9 号提取液 ,定容至 1000 ml。精密
量取提取液适量 ,测定提取液中咖啡酸含量 ,并计算
提取率(见表 2)。对表 2试验结果进行方差分析 ,
结果见表3。
　表 2 正交试验结果
实
验号 A B C
咖啡酸提取率(%) 合计
1 1 1 1 1 4.56 4.49 9.05
2 1 2 2 2 6.00 5.89 11.89
3 1 3 3 3 6.06 6.03 12.09
4 2 1 2 3 5.23 5.60 10.83
5 2 2 3 1 6.16 5.85 12.01
6 2 3 1 2 6.04 6.45 12.49
7 3 1 3 2 6.26 5.83 12.09
8 3 2 1 3 6.08 6.12 12.20
9 3 3 2 1 6.22 6.17 12.39
K1 33.03 31.97 33.74 33.45
K2 35.33 36.10 35.11 36.47
K3 36.68 36.97 36.19 35.12
R 3.65 5.00 2.45 3.02
SS 1.13 2.38 0.50 0.76
CT2/9 =105.042=11033.40
　表 3 方差分析表
误差来源 SS f S F P
A 1.13 2 0.57 5.85 <0.05＊
B 2.38 2 1.19 12.26 <0.01＊
C 0.50 2 0.25 2.59 >0.05　
误差 1.07 11 0.097
　　＊F0.05(2 , 11)=3.98;F0.01(2 ,11)=7.21
从表2与表 3可知各因素对提取效果的影响程
度依次为 B>A>C ,因素 B对试验结果影响很显著
(P<0.01),因素A对试验结果影响显著(P<0.05),
而因素 C对试验结果影响不显著 ,可任意选取其一
个水平。因此 ,最优提取工艺条件可选方案 A3B3C2
或 A3B3C3 。
2.3.3 　验证试验:精密称取蒲公英粗粉 30 g ,共 6
份 ,三份按方案A3B3C2 提取 ,三份按方案 A3B3C3 提
取 。收集提取液 ,按上述方法进行测定 ,结果表明:
咖啡酸浸出率A3B3C2 平均为 6.31%,A3B3C3平均为
5.35%,故确定最优提取工艺条件为A3B3C2 。
参 考 文 献
1 　郑虎占 ,等.中药现代研究与应用(第五卷).北京:学苑
出版社 , 1998∶4447
(2003-12-10收稿)
·212· 中药材第 27 卷第 3期 2004年 3 月