全 文 ：不同光照条件对南大青叶(马蓝叶)中靛玉红含量的影响
覃 军1，陈奕龙2，张丹雁2* ，曹 曼2 (1．广州中医药大学第二临床医学院，广东广州 510120;2．广州中医药大学中药学院，广东广州
510006)
摘要 ［目的］研究不同光照条件对南大青叶中靛玉红含量的影响，为开展南大青叶规范化种植提供科学依据。［方法］设置全阴生、半
阴生和阳生 3个不同光照条件组别，于 3月份定植后，观察植株生长状况，于 5月至次年 3 月分别采收南大青叶，采用高效液相色谱法
(HPLC)测定南大青叶中靛玉红的含量。［结果］南大青叶中靛玉红含量随种植时间不同波动较大，每个设置组组内不同月份的靛玉红
含量均有极显著差异(P ＜0． 01);各设置组间仅 11及 12月份靛玉红含量无显著性差异(P ＞ 0． 05)，其余月份不同设置组间均有显著差
异(P ＜0． 05)。［结论］3种光照条件均适宜南板蓝的生长，但综合考虑光照对南大青叶靛玉红含量、植株生长和产量的影响，认为全阴
及半阴条件更适宜种植南大青叶。
关键词 南大青叶;不同光照条件;靛玉红;HPLC
中图分类号 Ｒ284． 1 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611(2014)01 －00059 －02
Effects of Different Illumination Intensities on indirubin content in Leaves of Baphicacanthus cusia (Nees)Bremek．
QIN Jun et al (The Second Clinical College，Guangzhou University of TCM，Guangzhou，Guangdong 510120)
Abstract ［Objective］To study on the content of indirubin in the leaves of Baphicacanthus cusia (Nees)Bremek． under different illumina-
tion intensities，and provide scientific basis for standardized planting of B． cusia leaves． ［Method］ Set three different groups，namely full
shade group，half shade group and unshaded group，then collect the leaves of B． cusia from May till next March after planting in March，and
determine the content of indirubin in the leaves of B． cusia by HPLC． ［Ｒesult］With the various planting time，the content of indirubin in the
leaves of B． cusia fluctuated obviously． The content of indirubin in different month in each group all have extremely significant differences(P
＜ 0． 01);Only in Nov． and Dec．，the content of indirubin has no significant difference(P ＜ 0． 05)，while in other months among different
groups all have significant differences(P ＜ 0． 05)． ［Conclusion］The leaves of B． cusia can be planted in three kinds of lighting conditions，
however，considering the light on indirubin，plant growth and yield，full shade and half shade group are more suitable．
Key words The leaves of Baphicacanthus cusia;Different illumination intensities;Indirubin;HPLC
基金项目 广东省科技厅产学研结合项目(2010B090400529)。
作者简介 覃军(1976 －) ，男，广东广州人，副主任中药师，从事中药饮
片质量控制研究，E-mail:qinkum@ 163． com。* 通讯作者，
教授，硕士生导师，硕士，从事中药品种及真伪鉴别研究和
中药质量标准的研究，E-mail:danyan64@ 21cn． com。
收稿日期 2013-12-06
南大青叶来源于爵床科植物马蓝［Baphicacanthus cusia
(Nees)Bremek．］的干燥叶和幼嫩茎叶，苦咸大寒，具有清热
解毒和凉血定惊等功效，广泛分布于我国西南、华南及华东
地区，具有悠久的民间及临床药用历史，为抗病毒常用中草
药［1］，目前尚未列入国家和地方药品标准。马蓝的地下部分
根茎及根作南板蓝根入药，已被 2010 年版《中国药典》收
载［2］。张丹雁等已初步完成南板蓝根规范化种植研究［3 －5］，
而关于南大青叶的规范化种植研究鲜有报道。
靛玉红作为南板蓝的主要有效成分之一，已成为南板蓝
根及其叶药材的真伪鉴别、含量测定及质量评价的公认指标
成分［1 －2，6］。影响南大青叶中靛玉红含量的因素较多，包括
生态环境、采收时间、加工及贮存方法等。笔者以靛玉红为
指标成分，探讨不同光照条件对南大青叶中靛玉红含量及生
长状况的影响，以期为南大青叶规范化种植研究及质量标准
的制定奠定基础。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 研究对象。南大青叶药材，均采自广东省梅州市平
远县南板蓝 GAP种植基地，经广州中医药大学中药鉴定教
研室张丹雁教授鉴定为南大青叶正品。
1． 1． 2 主要仪器。Waters 515 型高效液相色谱仪，购自美
国Waters公司;Waters 2487 Dual λ Absorbance Detector，购自
美国Waters公司。
1． 1． 3 主要试剂。靛玉红，购自中国药品生物制品检定所，
批号 110717 －200204;甲醇(色谱纯及分析纯) ，购自天津市
大茂化学试剂厂;二氯甲烷(分析纯) ，购自天津市大茂化学
试剂厂;水为重蒸蒸馏水，实验室自制。
1． 2 方法
1． 2． 1 试验用地的选择。试验选在广东省梅州市平远县石
正镇、海拔 500 m左右、通风及排水良好的山地进行。
1． 2． 2 试验设计。分别设置全阴生、半阴生及阳生 3 个不
同光照条件的试验地块，每地块面积为 100 m2，重复 3 次设
置。阳生组:选择四周无树阴遮挡的开阳山地，进行露天种
植，种植地每天受直射光照射约 8 h。半阴生组:选择四周有
小山坡遮挡的空旷山地，于种植地的东西两向人工种植杂树
林作遮阴，保持良好的通风，每天受直射光照射约 4 h。全阴
生组:选择茂密杂树林下，全天仅受散射光照射，除在冬季中
午有极短时间的微弱直射光照射外，其余时间几乎无太阳直
射光照射。
1． 2． 3 样品采集方法。于 2012 年 2 月底将无性繁殖所获
得的南板蓝苗定植于试验地，种植密度均为 30 cm × 35 cm，
田间管理方法相同情况下，观察并记录南大青叶生长状况，
于当年 5月至次年 3 月间每月定期随机采集各地块南大青
叶，经干燥保存备用。
1． 2． 4 色谱条件。色谱柱为 ZOＲBAX Extend － C18色谱柱
(4． 6 mm ×250 mm，5 μm) ;流动相为无水甲醇 －水(75∶25，
V /V) ;流速为 1． 00 ml /min;检测波长为 290 nm;柱温为 30
℃;进样量为 10 μl。
安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2014，42(1):59 － 60，62 责任编辑 石金友 责任校对 卢瑶
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2014.01.106
1． 2． 5 对照品溶液的制备。精密称取 2． 23 mg经五氧化二
磷干燥至恒重的靛玉红对照品，置 100 ml 量瓶中，加无水甲
醇 －二氯甲烷(80∶20，V /V)溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓
度为 22． 3 μg /ml的对照品储备液。精密吸取上述储备液1． 0
ml 于 10 ml 量瓶中定容至刻度，即得 2． 23 μg /ml 的对照品
溶液。
1． 2． 6 供试品溶液的制备。准确称取 1． 000 g经五氧化二
磷干燥至恒重的南大青叶粉末(过 3 号筛) ，置索氏提取器
中，加二氯甲烷 120 ml提取至无色，提取液至旋转蒸发器中，
于 40 ℃蒸干溶媒，残渣用无水甲醇 －二氯甲烷(80∶20，V /V)
分次溶解转移，并稀释定容至 100 ml 量瓶中，摇匀，滤过，取
续滤液，即得供试品溶液。
1． 2． 7 方法学考察。(1)系统适应性考察。取适量供试品
溶液和对照品溶液，在“1． 2． 4”项下的色谱条件进行测定，考
察系统适应性。(2)线性关系的考察。分别精密吸取 2、5、
10、20 μl(22． 3 μg /ml)对照品储备液及 2、5 和 10 μl(2． 23
μg /ml)对照品溶液，依据“1． 2． 4”项下的色谱条件进行测定，
以对照品进样浓度为横坐标(X) ，峰面积为纵坐标(Y)绘制
标准曲线，计算线性回归方程。(3)精密度试验。取同一对
照品溶液，连续进样 6 次，按“1． 2． 4”项下的色谱条件进样，
计算含量。(4)稳定性试验。取同一供试品液，按“1． 2． 4”项
下的色谱条件，分别于 0、1、4、8、12和 24 h时各进样 1次，计
算其峰面积的 ＲSD。(5)重复性试验。精密称取同一批南大
青叶粉末各 6 份，按“1． 2． 6”项下的方法进行制备，按
“1． 2． 4”项下的色谱条件测定，计算其峰面积的 ＲSD。(6)加
样回收率试验。精密称取 0． 100 g的已知靛玉红含量的南大
青叶粉末 6份，分别精密加入 22． 3 μg /ml 的标准溶液 5． 00
ml，按“1． 2． 6”项下的方法进行制备，依次测定，计算平均加
样回收率和 ＲSD。
1． 2． 8 样品的含量测定。精密称取样品 1． 000 g，按
“1． 2． 6”项下中方法制备供试品溶液，按“1． 2． 4”项下的色谱
条件进行测定，按线性回归方程计算样品的含量，每份南大
青叶样品平行检测 3次。
1． 2． 9 数据分析。采用 SPSS 18． 0分析软件对数据进行分
析，结果采用“均数 ±标准差(x ± s)”表示，组间及组内比较
均采用单因素方差分析。
2 结果与分析
2． 1 方法学考察
(1)系统适应性考察。图 1 表明，供试品溶液和对照品
溶液在相同的时间上有对应的吸收峰，各峰间的分离度良
好，表明系统适应性良好。(2)线性关系的考察。经计算得
线性回归方程为:Y = 95 708X + 13 903，Ｒ = 0． 999 7。试验结
果表明，在 4． 46 ～ 446． 00 ng /ml 范围内，靛玉红浓度与峰面
积的线性关系良好。(3)精密度试验。计算得含量的 ＲSD
为 1． 4%，表明靛玉红含量测定的进样精密度良好。(4)稳
定性试验。计算得峰面积的 ＲSD为 1． 7%，表明供试品溶液
在 24 h内稳定。(5)重复性试验。计算得峰面积的 ＲSD 为
1． 4%，表明该方法的重复性良好。(6)加样回收率试验。由
表 1可知，平均加样回收率为 101． 8%，ＲSD为 2． 1%，表明该
方法所得结果可性、可靠，能够满足测量需要。
图 1 对照品和南大青叶供试品高效液相图谱
2． 2 样品的含量测定 由表 2 可知，南大青叶中靛玉红含
量随种植时间不同波动较大，每个设置组组内不同月份的靛
玉红含量均显示出极显著差异(P ＜ 0． 01) ;各设置组间仅 11
及 12月份靛玉红含量无显著性差异(P ＞0． 05) ，其余月份不
同设置组间均有显著差异(P ＜0． 05)。
表 1 南大青叶中靛玉红加样回收率测定结果
序号
m样品
ng
m对照品
ng
m测定量
ng
回收率
%
平均回
收率∥%
ＲSD
%
1 10． 55 11． 15 21． 64 99． 5 101． 8 2． 1
2 10． 58 11． 15 21． 75 100． 2
3 10． 60 11． 15 22． 22 104． 2
4 10． 56 11． 15 21． 70 99． 9
5 10． 51 11． 15 22． 06 103． 6
6 10． 53 11． 15 22． 03 103． 1
表 2 南大青叶样品中靛玉红含量(n =3)
采收日期
靛玉红含量∥μg /g
全阴生组 半阴生组 阳生组
2012 －05 －14 1 408 ±205βE 2 039 ±189αD 241 ±59γG
2012 －06 －15 414 ±33αG 153 ±22βG 353 ±68αFG
2012 －07 －14 1 667 ±297βD 2 861 ±214αB 3 059 ±251αB
2012 －08 －15 1 430 ±112βH 2 645 ±241αC 2 111 ±184αC
2012 －09 －16 1 581 ±179αDE 1 019 ±105βE 788 ±67βE
2012 －10 －15 2 251 ±241βB 3 479 ±296αA 3 467 ±314αA
2012 －11 －15 1 094 ±57αF 1 053 ±95αE 1 110 ±124αD
2012 －12 －17 2 049 ±186αC 1 947 ±251αD 2 305 ±221αC
2013 －01 －14 2 907 ±224αβA 2 551 ±285βC 3 527 ±294αA
2013 －02 －16 543 ±51αG 235 ±31βG 494 ±81αF
2013 －03 －14 1 606 ±232αD 669 ±87βF 797 ±93βE
注:同组内及组间，不同字母表示相互具有极显著差异(P ＜ 0． 01) ;希
腊字母为 3个设置组同时期靛玉红含量比较;英文字母为同一组
不同生长时期靛玉红含量比较。
(下转第 62页)
06 安徽农业科学 2014 年
ＲSD。
1． 2． 5 样品的含量测定。精密吸取供试品溶液 4 μl，在同
一硅胶 G高效薄层板上平行点样 4次，按色谱条件及扫描条
件对样品进行测定，根据回归方程计算样品中栀子苷的量，
再根据稀释倍数及样品质量换算出样品中栀子苷的百分含
量，计算栀子苷平均含量。
2 结果与分析
2． 1 方法学考察 (1)线性关系的考察。计算得线性回归
方程为 Y =216． 700 + 7． 728X，r = 0． 999 54。试验结果表明，
在 0． 240 ～0． 640 μg /ml范围内，栀子苷浓度与峰面积呈良好
的线性关系。(2)稳定性试验。计算得峰面积值的 ＲSD 为
0． 74%，表明5 h内稳定性良好。(3)同板精密度试验。计算
得各斑点峰面积的 ＲSD为 0． 91%，表明精密度良好。(4)加
样回收率试验。计算得平均回收率为 100． 45%，ＲSD 为
1． 69%(n =4) ，表明该方法简便、准确、重复性好，可用于赣
南野生黄栀子中栀子苷的含量测定。
2． 2 样品的含量测定 根据回归方程计算样品中栀子苷的
量，再根据稀释倍数及样品质量换算出样品中栀子苷的百分
含量，计算得栀子苷平均含量为 1． 564 0%，ＲSD为 2． 62%。
3 结论与讨论
(1)试验所用供试品的处理方法操作简单、效率高，样品
薄层扫描测定条件适宜，栀子苷分离良好，杂质对测定无干
扰。检测方法误差小、精度高，可用于栀子中栀子苷的含量
测定。
(2)展开剂是影响试验结果准确性的一个重要因素。试
验选择了多种展开剂对供试品与标准品进行展开，包括乙酸
乙酯 －丙酮 －甲酸 －水(5∶ 5∶ 1∶ 1，V /V /V /V)、氯仿 －乙酸乙
酯 －无水甲醇(3∶ 2∶ 1，V /V /V)和石油醚 －乙酸乙酯 －甲酸
(35∶ 10∶ 0． 5，V /V /V) ，结果表明第 2 种展开剂的展开效果最
好，斑点清晰、Ｒf 值适宜。所以试验采用氯仿 －乙酸乙酯 －
甲醇(3∶ 2∶ 1，V /V /V)为展开剂。
(3)扫描波长的选择。试验对栀子苷标准品进行了光谱
扫描，测得栀子苷在 240和 238 nm处都有最大吸收，进而在
238、240 nm波长处分别对栀子供试品进行扫描，发现在 240
nm处基线平整、没有小峰、不拖尾，所以选择波长为 240
nmwe栀子苷的测定波长。
参考文献
［1］郑占虎，董泽宏，余靖，等． 中成药现代研究与应用［M］． 北京:学苑出
版社，1999:3166．
［2］国家药典委员会．中国药典(一部)［S］．北京:中国医药科技出版社，
2010:231．
［3］陈德昌，鲁静，王宝琴． 中药化学对照品工作手册［K］． 北京:中国医药
科技出版社，2000:117．
［4］付红蕾，梁华正，廖夫生． 栀子中京尼平苷的研究现状和应用前景［J］．
时珍国医国药，2005，68(1):54 －56．
［5］刘怡，陈磊，张留记． 不同产地栀子皮和栀子仁中有效成分的含量比较
［J］． 中药新药与临床药理，2012，23(1):81．
［6］王谦，唐畅，姚健，等． 各栀子主产区栀子中栀子苷含量的比较研究
［J］． 泸州医学院学报，2009，32(2):133 －135．
［7］李桂兰，巴雅尔，苟雅书． 薄层扫描法测定沙日 －毛都 －8中栀子甙的
含量［J］． 中国民族医药杂志，2002，8(2):39．
［8］于淑华，李景清，吴志英，等． 薄层扫描法测定三子散(蒙古族验方)中
栀子苷的含量［J］． 药物分析杂志，1996，16(4):267．
［9］YANG H L，QIN B，SONG Y L，et al． Effect of Different Processing Meth-
ods on the Content of Geniposide in FＲUCTUS GAＲDENIAE［J］． Medic-
inal Plant，2012，3(2) :32 －34，37．
［10］YOU J，DENG Q Y，GAO L，et al． Optimization of the Extraction
Process of Geniposide from FＲUCTUS GAＲDENIAE by Orthogonal De-
sign［J］． Medicinal Plant，2011，2(5) :51 －53，
檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪
56．
(上接第 60页)
3 结论与讨论
由于当年 6月份气候反常，持续暴雨，植株叶片大量腐
烂脱落，光照不足，严重影响靛玉红含量的生成和累积，3 个
试验组靛玉红含量异常低;露地种植的阳生组 8月份虽然靛
玉红含量较高，但由于三伏高温，加之易生病害，植株叶片发
黄大量脱落，南大青叶产量低，而全阴和半阴组不受影响;次
年 1月，受霜冻影响，植株叶片冻枯凋落，阳生组南大青叶产
量严重不足，而全阴蔽和半阴蔽下种植因受阴蔽树保护，不
受霜冻影响，产量影响不大;次年 2 月及 3 月份为盛花期和
初果期，生殖生长使植株营养消耗大，导致靛玉红含量明显
降低，且从植株生长状况来看，由于受生殖生长及倒春寒的
影响，该 2个月份落叶严重，3 个试验组的南大青叶产量亦
不足。
试验结果表明，3个不同光照组别的南大青叶中靛玉红
含量在其生长周期中呈现出基本相同的变化趋势，排除个别
靛玉红含量较低的月份，其他月份的含量均远高于药典收载
的大青叶(十字花科菘蓝 Isatis indigotica Fort．)靛玉红含
量［2］。仅从靛玉红含量结果看，全阴、半阴及露地条件均适
宜南大青叶的种植，但综合考虑光照对植株生长和产量的影
响等因素，全阴及半阴条件更适宜南大青叶的种植，这一结
论与传统观点所认为的南板蓝为半阴生植物相符［7 －8］，为开
展南大青叶规范化种植及制定质量标准奠定基础。
参考文献
［1］杨秀贤，吕曙华，吴寿金．马蓝叶化学成分的研究［J］．中草药，1995，26
(12):622．
［2］国家药典委员会．中国人民共和国药典(一部)［S］．北京:中国医药科
技出版社，2010:229．
［3］张丹雁，林秀旎，陈晓庆，等．南板蓝(马蓝)驯育栽培技术研究［J］．现
代中药研究与实践，2010，24(2):18 －19．
［4］张丹雁，陈晓庆，林秀旎，等．南板蓝根规范化生产标准操作规程(SOP)
［J］．现代中药研究与实践，2011，25(6):19 －22．
［5］杜沛欣，张丹雁，陈晓庆，等．栽培南板蓝的生长特性研究［J］．中国实
用医药，2011，6(21):27 －28．
［6］潘金火，李国荣．四种大青叶药材中靛蓝、靛玉红的含量比较［J］．中药
材，2000，23(5):254 －255．
［7］魏世勇．南板蓝的栽培技术［J］．信阳农业高等专科学报，2005，15(1):
38 －41．
［8］张丹雁，林秀旎，陈晓庆，等．果林间种模式下南板蓝株高及分枝生长
规律研究［J］．广州中医药大学学报，2013，30(1):83 －87．
［9］黄凤婷，马永良，林春颖，等．酶法辅助提取南板蓝叶中靛玉红的工艺
研究［J］．安徽农业科学，2012，40(26):12866 －12867，12879．
26 安徽农业科学 2014 年