全 文 ：瓣萝携 ` ” 8 8 , 3 “ ,
竹节参总皂贰、 构纪 、 当归及银耳对
果蝇寿命及脂褐素影响的初步探讨
陈淑清 张家慧 ` 李咏梅 ’ 蔡平 肖悼殷
(华西医科大学药学院 成都 )
提要 本实验以果蝇为实验动物模型 , 进行了果蝇吃食情况的观察 、 生存实验和脂褐素的测定 。 结
果表明 : 竹节参总皂贰 ( T s jP ) 、 拘祀 、 当归和银耳对果蝇吃食比对照组分别增多65 % 、 47 % 、 95 %和
47 %
。 竹节参总皂戒 ( T s jP ) 、 当归及银耳有延缓果蝇平均寿命的作用 ( p < 。. 05 , p < 。 . 0 1) , T s jP 、
银耳增加雌蝇的最高寿命 , 分别为 4. 5% 和 3 . 2% 。 T s jP 、 拘祀对果蝇脂褐素有一定的抑制作用 。
关抽词 竹节参总皂试 寿命实验 脂褐素 果蝇
竹节参为五加科人参属植物竹节参 ( p a n -
. x j a p o n i e u s C
.
A
.
M e y e r ) 的根茎 , 又名
竹节三七 、 竹节人参 , 是我国常用中药 , 具有
止咳 、 化痰 、 散癖 、 活血等功效 。
竹节参与人参为同科属植物 。 它们的主要
威分相似 , 动物实验表明 , 人参能延长小白鼠
的平均寿命 , 可改善老年人的大脑功能 。 竹节
参总皂贰 ( T o t a l s a p o n i n s o f p a n a x ja p o -
川。 us , T s jP ) 是从竹节参中提出的是 否 也具
有这些作用 , 目前尚无资料报导 。 构祀 、 当归
和银耳都具有滋补强壮之功效 , 是祖国医学中
传统的抗衰延寿药物 , 但还缺乏科学研究 , 本
研究观察以上四种药物对果蝇寿命及脂褐素的
影响 。
实 验 部 分
一 、 实验材料及药物配制
1
.
T s p j系川产的竹节参 ( p a n a x ja p o n i -
cu
“ C . A . M “ y e o 根茎提取物 , 由本校蔡平
等提供 , 为微黄色固体粉末 , 用蒸馏水配成一
定的浓度 , 溶液棕色透明 , 偏酸性 (P H S一 6) 。
· 8 6年本难交应届毕 全生生
银耳 、 拘祀 、 当归均购于成都中药材供应
公司 , 过经鉴定 , 分别为人工栽培的银耳科植
物银耳 ( T r e m e l l a f u 。 i f a r m i s B e r k )的子实
体 、 茄科植物宁夏拘祀 ( L ye iu m b a : b a r u m 。
L ) 的果实 、 伞形科植物当归 ( A n g le i ae 5 1一
n 。 n s i S ( o l i v . ) D i e l s ) 的根 。
银耳 、 构祀 、 当归溶液的配制如下 : 用千
分之一克分析天秤称取 , 加 15 一 20 倍蒸馏水 ,
室温浸泡四小时后 , 煮沸 1 小时 , 过滤浓缩 ,
配成所需的浓度 。 分别加入基础培养基中 。
2
. 果蝇 由北京农业大学提供的美国野生型
( A m e r i e u m w i l d t y p e ) 果蝇 ( D : o s o p h i l a
m e l a n o g a s t e r )
。
果蝇的基础培养基由玉米粉 、 琼脂 、 干酵
母粉 、 红糖 、 苯甲酸等组成 。
将配好后的培养基趁势倒入经 1 2 1 O C 、 15
磅灭菌 30 分钟 , 然后在 1 0 0 “ C烘箱干燥 的 Z x
gc m 指管中 , 每次倒入约 Zm l , 冷却 , 用 消毒
棉花擦干管壁 , 用无菌双层白棉布封口 , 培养
于约2 5 O C ( 2 4 ~ 2 7 “ C )相对湿度 5 5 ~ 8 0%的隔
水式电热恒温培养箱。 各药物培养基的 p H均为
5~ 6
。
3
. 硫酸奎宁 、 氯仿 、 甲醇均购自成都化学
DOI : 10. 13375 /j . cnki . wcjps . 1988. 01. 007
1期 2。
赢不歹赢赢一一一一一一一一一簇葬 3 .5小时内雌蝇吃食百分数荧光分光光度计 sc E PT F R R u o o L( ) P一T a b .1 .Pe re e nta g e ofa e ts ng 。 。 3 .5、 。 us r
T O HO MT E E RF R一 510 i n早 D ros 0h Pi la me la nog a s te r
药物浓 度
C oe n〔 nt ra t j o n
g /0 10 9培养基
吃食总数 (只 )
N o
。 of即 t i ng
吃食 %
a e t i ng
%
0 1 6 547 9早台
只ē 300。 .匕 q曰a o n山,工一a
二 、 实验方法及结果
l
。 果蝇吃食情况的观察
收集 1 0小时内羽化的成虫 , 乙醚麻醉 , 除
去个体较大和较小及发育不正常者 , 分雌雄随
机分组 , 放入药物培养管中 , 何管 10 一25 只 , 每
组数 日相同 , 平放于 25 ’ C恒温箱中 , 待果蝇全
部苏醒后 , 每 10 分钟计数一次正在吃食的果蝇
数 , 共观察 3。 5小时 , 结果见 (表 1 ) 可 以 看
出 , 果蝇在含有药物的培养基上的吃食数目较
对照组数 日多 , 分别增多 6 5% 、 47 % 、 95 %、
4 7 %
。
2
。 果蝇的生存实验
果蝇的收集方法同前 , 侮管 10 只 , 饲养于
药 物
D r u g
对照
c o n t拍 l
竹节参
住性
总牟贰
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2 0几 g / 1 0 09
构祀
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10 3
1 2 3
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当归
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2 。 0
0
。
5 7 4 早
解耳
T r e盛巨 2 · 0 5 6 早 1 47
含药物培养基指管中 , 每 1 2小时统计一次死亡
果蝇数 目 , 每四天更换一次培养基 , 规定每组
最后一个死亡的成虫寿命为该组的最高寿命 ,
见表 2 。
表 2 . 药 物 对 果 蝇 寿 命 的 影 响
T a b
.
2
.
E f f e e t s
o f d r “ g s c , ; 二孟f e o f D r o s o Ph一l a m e l a ` l o g a s t e r
药 物
D u u g
又J 照
C
c” 、仃司 竹节参总皂武T , 户J 构 祀L y C 当 归A u g
银 耳
T r e
封古
2
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2
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药物浓度 ( g / J。。 g 培养基 )〔为 n C e n t服 t i o n
性 别 S e x
ZOm g
忿38早50古50早42古43
果蝇数目 (只 )
N o
.
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悦`n公
``正(…门óz舟h6071工今曰半数死亡时 间 (天 )m e d i a n le t h a l t im e ( d a ys )存活总天数 (天 )T o at l d a y s o f li v in g ( da ys )平均寿命 (天 )
A v e r a g
e l i fe ( d a y s )
4 8
6 8
。
5 7 5
。
5
3 19 5
。
0 30 3 0
。
0 3 1 4 1
。
5
7 5
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。
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2 9 G3
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砂 卜
7 1 0 5
3 5 0 6
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份:
勺J八6时0r
最高寿命 (天 )
H ig h邵 t ]i f e ( d a y s )
6 6
。 6 69
。
0 74
。
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。
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。
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。
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。
5
7 1
。
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3 0 89
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。
2
9 5
。 0 叽 5 ℃ 甲·乏
·习4 ” * 今入、 _` 一沙 ’叹
P < 0
. 肠 P < 0 . 0 1
从上表看出 , T s jP 、 构祀 、 当归及银耳均
能延长雄蝇的平均寿命 , 其中当归 、 银耳有非
常显著的意义 (P < 0 . 01 ) , T叩 j 、 构 祀无统
计学意义 ( p > 。 . 1 ) , 但四种药物都不能延长
雄蝇的最高寿命 。 T s p j 、 银耳能增加雌蝇的平
均寿命 , 其中T s p j有显著 意 义 (P < 0 . 0 5) ,
T s p j
、 银耳还能增加雌蝇的最高寿命 , 增加幅
度分别为 4 . 5写和 3 . 2% , 拘祀 、 当归对雌蝇平
均寿命的影响无统计学意义 ( p > 0 . 1 ) , 两者
者阵没有延长雌蝇的最高
3
. 果蝇中脂褐素的
脂褐素 ( L i p o f u s e
质过氧化的产物及其分解产物与许多其他成分
共价缩合而成的不溶性游渣 , 研究证明 , 各种
动物衰老时细胞中脂褐素含量均增加 , 脂褐素
已作为细胞衰老的重要指标之一 〔门 , 脂褐素的
含量可根据重硫酸奎宁的荧光强度 来 精 确 测
定 。 、 1 一 ’ ,
华 西 药 学 杂 志 工卷
肛吕8 的。ó o nl卜
脂褐素的测定报导较多的是用大鼠脑及脊
髓 , 小鼠及家蝇心肌 。 用果蝇作对象 , 尚无资
料可查 , 故本实验对方法及条件进行了摸索 。
( 1 ) 重硫酸奎宁工作曲线的绘制
用 l u g / m l重硫酸奎宁标准液作样品 扫描 ,
确定出测试条件 : 光源 , 氮灯 ; (激发光 ) E X
3 5 6 n m
, 窄缝 5 ; (发射光 ) E m 4 50 m , 窄缝 1 0 ,灵
敏度 G ia n s 。 重硫酸奎宁工作曲线 的 测 定结
果见表 3 。
表3 . 重硫酸奎宁的荧光强度
T汕 . 3。 F l u or e s c e o c o o里 Q妞i n i n e 扮 s n 挂at e
G r o叩 1 2 3 连 6 6
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0 1 9
.
,
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成广了了一一芍万户伽到 m价
C o cn e n t r a t i o n :
标准液 (m l )
S at n d a r d
10 。 0 0 5
。
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。
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。 5 0 0
。
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0
。
] N 硫酸 (m l)
S u l f u ir
e
A e i d
0 。 0 0 5 。 0 0 9
。
0 0 9
。 5 0 9
。 90 1 0
。
0 0
重硫酸奎宁
(卜g / m l )
Q u加 in e b i -
s U l fa t e
荧 光
F l u or 郎e e n C e
回归后 荧光
e o r el a t io n o f
F I U O r已 C e l l e e
图 1 . 重硫酸奎宁标准曲线
F i g l
. 段 a n d a r d e u r v e by Q u i们 j J l e ib s u l fat e
1
。
0 0 0
。
5 0 0
。
1 0 0
。 0 5 0
。
0 1 0
。
0 0
7 9
。 1 0 3 9
。 0 0 7
。
5 0 4
。
0 0 1
。 0 0 0 . 0 0
一 0 。 0 8
7 8
。
8 8 3 9
。 4 0 7
。
8 2 3
。
8 7 0
。
7 1 r
= 0
。
99 9 9
以重硫酸奎宁浓度为横坐标 , 荧光强度为
纵坐标 , 绘得重硫酸奎宁标准曲线 (图 i )
( 2 ) 药物对果蝇脂褐素的影响
果蝇的收集按前述的方法 , 饲养于含药物
培养基指管中 , 取不同 日龄的果蝇 , 每组 30 只
雌蝇 、 40 只雄蝇 , 乙醚麻醉 , 称重 , 参考 B . L
F l o t 。 h e r , A n t h o n g D , S o h a l等〔2 、 d〕 的方
法 , 略加改进 , 以氯仿一甲醇 ( 2 : 1 ) 提取 , 进
行荧光测定 。 结果见表 4 。
表 4。 药物对果蝇脂褐素含量的影响
T比 . 月. E找瑰 t s of d r绳 5 o n l i P ot u s e i n s n d r o s 。加 i la m e l a n o g a s t e r
d川 g 对 照 C b n tr o l 竹节参总皂贰 T sP j 构祀yL c 当归 A n g
C
o n ce n t r a t fo n g八 0 9培养基黔馨凋 r o s叩ihj a m、 Ogas etr
番舒钒黑景孙i ,a m o ,an , s` 巴炎 光 F lu o r e名 c e n c e
20m g
1 5 2 4h 3 0 1 5
60
。
2 5 6
。
6 5 9
。
7 60
。
4
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。
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。 8 4。 9 4。 2
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。
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。
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汽类鑫漂繁` g w “ 6。 6 8 10。 4名
4
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。
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1 5 9
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11
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3 2
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.
O
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030.59.610
结果表明 , 果蝇脂褐素的含量随 日龄增加
而增加 , 除当归组外 , T s jP 组 、 梅祀组基蝇脂
褐素的积累速度都较对照组慢 , 药物对果蝇脂
褐素积累的抑制作用 , 随 日龄增加而增强 。
讨 论
1
。果蝇的寿命与食量密切相关 , 本实验各
组均采取 自由进食 , 未严格测定各组果蝇的食
量 。 从表 1给食 3 。 5小时内果蝇吃食总数月看 ,
四种药物培养基上平均吃食数目较对照组多 。
有人认为 , 果蝇吃食数目的统计可作为抗衰药
物快速初筛试验〔 “ 〕。 据此观点 , 本实验所用四
种药物均可能有杭衰作用 。
“ . sT jP 、 银耳及当归都有一定延长果蝇平
1期 1 3
二二二二二二二二二二二二二二二二二二二二
均寿命的作用 ( P<。 .0 5, p < 0 . 0 1) , 前二者
对果蝇的最高寿命还有一定的延长作用 。 从表
2 还可看出 , 果蝇的半数死亡时间非常接近其
平均寿命时间 , 与文献报导一致 〔 7 〕。 因此 , · 为
了缩短实验周期 , 可以采用半数死亡时间代替
平均寿命 , 但最后确证药物的抗衰老作用时 ,
还须进行完整的生存试验 。
3
. 脂褐素的积累与果蝇的年龄 有 明 显 关
系 , 随增龄而增加 ; 与文献报 导 一 致 〔“ ,幻 。
T s jP 能明显抑制果蝇脂褐素 , 拘祀对果蝇脂褐
素的抑制主要表现在后半期 , 当归对脂褐素的
积累儿乎无抑制作用 。
4
. 中草药可溶于水的成分是复杂的 , 各成
分的药理作用也不相同 , 究竟是那种成分延长
果蝇寿命和抑制脂褐素 , 通过什么途径 ? 作用
机理如何? 尚待进一步探讨 。
5
. 药物的浓度对试验结果有重要影响 , 本
实验 由于时间限制 , 没有试验每一药物的最适 ,
浓度 , 今后当进一步观察 。
致谢 沈联德教授协助药物的鉴定
参 考 文 献
1
. 广东益寿康 协作组 。 老年学杂志 1 9 8 3 , 1 ( 1) , 1o
2
.
F l e t c h e r B L
,
et a l A n a l y桩e a l B i o c h e而 s t r y
1 9 7 3 ; 5 2 : 1 。
3
.
A r zht o n g D
, e t
.
a l
.
J
.
G e r on t
.
1 9 5 1 , 3 6 ( 5 )
: 52 9 , 协飞
吐 . S ho a l R S
, e t a l
.
J
.
G e r on 1 97 9
; 3选 (心) : 4 5 9 .
5
. 王厚德。 天津医学院学报 2 98 4 , s ( 1 ) , 5 9
6
. 吕维善 , 等 。 老年学杂志 1 98 4 , 2 ( 3 ) , 3 6 。
了. 张佩德 , 等 。 老年学杂志 1 98 5 , 3 ( 2 ) : 7。
A P R E L IM I N A R Y S T U D Y O F T H E E F F E C T S O F T O T A L
S A P O N I N S O F P A N A X J A P O N I C U S
,
L Y C I U M B A R B A R U M L
.
,
A N G E L I C A S I N E N S I S D I E L S A N D T R EM E L L A F U C I F A
R M I S B A R K O N L I F E T E S T A N D L I P O F U S C I N I N
D R O S O P H I L A M E L A N O G A S T E R
C h e n s h u q i n g Z h
a n g J i a h u i L 1 y o n g m e i C a 之 P i n g X i a o 2 1, u o y i n
(W es t hC 玄加 u n主淤邝沟 可 M e d葱c a 正S e诬e成 es , cS 入0 0 1 0了p h a , ” : a e g e h et :娜 u )
A B S r R A C T The an iaxn l m do
e l o f t he tS
u d y w a s D r o s o hp i l
a 幻。 e lan
o
ga st er
.
T h e
e a t jn g
,
the 狱 e t e眺 助 d t he d e t巴m in at ion o f I IP o f u s e in in D r o s o P h i l a me lan o g a s t e r w er
tS u d ie d
.
T he er
s u l t召 s h
ow ed
t h a t the n u m b er of
e at in g of t he t ot
a l sa P o n i n s of p a n ax
J a P Q n l e u s (T s P j )
, L y e iu m b ar b ar u m L
. ,
A n ge l记 a 印n en s i s D ie l s 幼d T r eme l l a f u e if韶m i s
E短r k 运 rD o so hP i la m e l an o g a s t er i n c r ea se d “ % , 47 % , 95 % , 47 % 犯 s P e c t lve ly . T he va e r a g e
1血 of sT P j , A n ge l记 a S ln e n o i s D i e l s 幼 d T r eme l l a fac i far m i s B ar k 讯 D r o s o P h i l a me l即 0 9-
a s t er de lay
e d (P < 0
.
0 5
,
P < 0
.
0 1 )
.
T h e h g h e st l i f e of T SP j an d T er m
e l la f u e i f ar m i
s B撼r k in
rD
o so hP l
a m e lan o g
a st er 互n心r ea se d 4 . 5% , 3 . 2% er s户邹 t l v el y . T h e iL op f u SC in of sT jP , L界 iu m
b ar b ar u m L
.
in F e m a 】e D r o so hP il a r n e l a n o g a日t er d ec r e a s e d
.
K e y W o dr
s T劝t a l sa P< )n In s o f 环垃 a 盆 J a P 0 n ic us iL f e t e st L IP o加沈 in D r o so Ph i la
m e la n o朗 s 七er