全 文 ：第３　１卷，第８期　 　　　　　　　　　　　光 谱 学 与 光 谱 分 析 Ｖｏｌ．３１，Ｎｏ．８，ｐｐ２１６１－２１６５
２　０　１　１年８月　　　　　　　　　　　 　Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ　ａｎｄ　Ｓｐｅｃｔｒａｌ　Ａｎａｌｙｓｉｓ　 Ａｕｇｕｓｔ，２０１１ 　
滇龙胆紫外指纹图谱共有峰率和变异峰率双指标序列分析法
袁天军１，２，王元忠１，赵艳丽１，张　霁１，金　航１＊，张金渝１＊
１．云南省农业科学院药用植物研究所，云南 昆明　６５０２２３
２．云南民族大学化学与生物技术学院，云南 昆明　６５００３１
摘　要　利用共有峰率和变异峰率双指标序列分析法，采用平均值、平滑和一次微分处理方法校准和排除
干扰，提高光谱的分辨率，考察三种极性溶剂提取的滇龙胆样品中各波段稳定性和重现性的变异系数ＲＳＤ，
计算紫外指纹图谱共有峰率和变异峰率，对滇龙胆样品间进行定性评价。结果表明，滇龙胆在氯仿、无水乙
醇和水三种极性溶剂下分别提取４０ｍｉｎ可达到最大提取率，且稳定性在３０ｈ内变异系数 ＲＳＤ％分别在
０．０７８～０．４５５，０．１５８～０．４６２，０．０５２～０．６８２之间；重现性变异系数ＲＳＤ％分别在０．０４４～０．７５３，０．１５６～
０．２８８，０．１９１～２．４１３之间。指纹图谱显示，滇龙胆不同产区样品间最大共有峰率达６７．６％，最小共有峰率
为４５．２％，变异峰率最大为７８．９％，最小为２１．７％。该法可以准确对两个以上中药材样品进行定性评价，
阐明不同产区间的相似程度，为中药材真伪鉴定和品质评价奠定基础。
关键词　滇龙胆；紫外指纹图谱；双指标序列分析法；定性评价
中图分类号：Ｏ６５７．３　　文献标识码：Ａ　　　ＤＯＩ：１０．３９６４／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－０５９３（２０１１）０８－２１６１－０５
　收稿日期：２０１０－１０－１３，修订日期：２０１１－０２－１６
　基金项目：科技部“十一五”支撑专项项目（２００６ＢＡ１０６Ａ１２－１３）和云南省重大专项（［２００７］１７１８）资助
　作者简介：袁天军，１９８４年生，云南民族大学化学与生物技术学院硕士研究生
＊通讯联系人　　ｅ－ｍａｉｌ：ｊｉｎｈａｎｇ２００９＠１２６．ｃｏｍ；ｊｙｚｈａｎｇ２００８＠１２６．ｃｏｍ
引　言
　　滇龙胆（Ｇｅｎｔｉａｎａ　ｒｉｇｅｓｃｅｎｓ）为龙胆科（Ｇｅｎｔｉａｎａｃｅａｅ）多
年生宿根草本植物，其根茎为用药部位，含有龙胆苦苷（ｇｅｎ－
ｔｉｏｐｉｃｒｏｓｉｄｅ）、獐牙菜苦苷（ｓｗｅｒｔｉａｍａｒｉｎ）、獐牙菜苷（ｓｗｅｒｏ－
ｓｉｄｅ）、龙胆碱（ｇｅｎｔｉａｎｉｎｅ）、熊果酸（ｕｒｓｏｌｉｃ）、齐墩果酸
（ｏｌｅａｎｏｌｉｃ　ａｃｉｄ）、马钱子苷酸（ｌｏｇａｎｉｃ　ａｃｉｄ）、龙胆次碱（ｇｅｎ－
ｔｉａｎｉｄｉｎｅ）、龙胆醛碱（ｇｅｎｔｉａｎａｌ）等多种活性成分［１］，具有保
肝、健胃、利胆、抗炎、降血压、增强免疫功能、抗病原体等
作用［２］。主要分布在我国广西、湖南、四川、云南、贵州等
地［３］。随着滇龙胆生境不断遭到破坏，野生数量急剧减少，
产量明显下降，替代品不断涌入市场，导致滇龙胆中药材品
质下降。为使滇龙胆的鉴别及质量进行有效控制，本文基于
中药材中化合物有非对称性、自身具有遗传稳定性和变异性
的生物学特征，采用氯仿、无水乙醇、重蒸水三种不同极性
溶剂分别提取，并用三组平均值、四点平滑、一次微分等方
法校准和排除干扰，利用多维共有峰率和变异峰率双指标系
列法建立不同产区滇龙胆紫外指纹图谱。结果表明，该方法
具有稳定性高、重现性好等特征，可以快速、有效鉴别不同
产区滇龙胆中药材，为中药材质量的准确评价提供参考。
１　实验部分
１．１　仪器
ＵＶ－２５５０双通道紫外可见分光光度仪（岛津公司，自带
工作站），ＳＹ３２００－Ｔ型超声波清洗机（上海声源超声仪器设
备有限公司），ＡＲ１１４０型万分之一分析天平（ＮＪ，ＵＳＡ），
０．４５μｍ过滤膜（天津 Ａｕｌｏｍａｔｉｃ　ｓｃｉｅｎｃｅ公司），ＤＦＴ－１００型
中药粉碎机（浙江温岭市林大机械有限公司）。
１．２　药材及试剂
氯仿（ＡＲ），无水乙醇（ＡＲ），二次重蒸水，滇龙胆药材
样品见表１。
１．３　测试样品制备及测试条件
样品加入各种提取溶剂，在室温条件下采用超声法提取
４０ｍｉｎ可达到最大且稳定的提取率。测定波长１９０～４００
ｎｍ，狭缝１．０ｎｍ，采样间隔０．２ｎｍ。
１．４　紫外指纹图谱测试液制备
准确称取粉碎后过１００目筛的滇龙胆样品０．３００　０ｇ（平
行３份，Ｄ２样品平行５份）于５０ｍＬ具塞三角瓶中，精确加
入２０ｍＬ氯仿，超声提取４０ｍｉｎ，过滤，用氯仿洗涤粉末，
收集滤液并定容于２５．００ｍＬ容量瓶中待测。挥干粉末后，
精确加入２０ｍＬ无水乙醇，超声提取４０ｍｉｎ，过滤，用无水
乙醇洗涤粉末，收集滤液并定容于２５．００ｍＬ容量瓶中待测。
水提取液制备同无水乙醇提取液相同。测定液稀释一定倍数
后，使吸光度值Ａ＜２，在此范围内，峰的吸收波长随浓度变
化甚微。以对应提取溶剂作为参比进行紫外指纹图谱测定。
Ｔａｂｌｅ　１　Ｍａｔｅｒｉａｌｓ
序号 采集地
经度
／ｄｅｇｒｅｅ
纬度
／ｄｅｇｒｅｅ
海拔
／ｍ
Ｄ１ 昆明市筇竹寺后山　　　　　 Ｎ２５．６６４　７° Ｅ１０２．６２０　８° ２　２８９
Ｄ２ 楚雄州南华县水井房　　　　 Ｎ２５．３０８　８° Ｅ１０１．２７１　２° ２　１２２
Ｄ３ 临沧市云县茶房乡福焰山　　 Ｎ２４．２９９　９° Ｅ１００．２３７　３° ２　０１６
Ｄ４ 贵州省兴义安龙　　　　　　 Ｎ２５．１５０　３７° Ｅ１０５．３２８° ２　２０７
Ｄ５ 玉溪市江川县安华乡中村后山 Ｎ２４．３９６　８° Ｅ１０２．６９５　６° １　９３３
Ｄ６ 怒江州兰坪县脚裂山　　　　 Ｎ３２．７１４　８° Ｅ１０７．４３５　１° ２　１００
Ｄ７ 文山州马关县小街乡老抖地山 Ｎ２３．２５３　５° Ｅ１０４．０５０　９° １　９５５
Ｄ８ 曲靖市师宗县葵山镇小查拉山 Ｎ２４．７５３　８° Ｅ１０３．７９４　７° １　８６４
Ｄ９ 楚雄州姚安县太平镇矿石　　 Ｎ２５．３９０　９° Ｅ１０１．２８０　９° ２　２４６
Ｄ１０ 昆明市小哨　　　　　　　　 Ｎ２５．１７１　４° Ｅ１０２．９４９　１° １　９３７
Ｄ１１ 文山州砚山县二塘罗盖壳山　 Ｎ２３．４８８　１° Ｅ１０４．２５７　６° １　６２６
Ｄ１２ 楚雄州南华县紫溪山　　　　 Ｎ２５．０５６　４° Ｅ１０１．３８２　５° ２　０８６
２　结果与分析
２．１　光谱信号预处理
采用紫外可见分光光度仪自带软件 ＵＶ　Ｐｒｏｂｅ对采集的
原始光谱进行３组平均化以提高测定的准确度，对平均化的
光谱进行４点平滑处理［４］，滤除光谱噪音以提高信号的可用
性，对平滑处理后的光谱数据进行一次微分处理［５］，进一步
校准基线，消除二次背景噪音，提高光谱的分辨率。
２．２　最佳提取时间
以样品Ｄ１为研究对象，分别采用氯仿、无水乙醇、水进
行超声提取２０，３０，４０，５０和６０ｍｉｎ，按２．１节方式处理分
别测定三次，结果表明采用氯仿提取３０ｍｉｎ可达到最大提
取率，无水乙醇和水分别提取４０ｍｉｎ可达到最大提取率。因
此采用４０ｍｉｎ作为提取的最佳时间。
２．３　指纹图谱时间稳定性实验
将保存在０～４℃下提取４０ｍｉｎ的Ｄ１样品制备液，分
别在０，５，１０，２０，３０和４０ｈ时进行紫外测定三次，按２．１
节方式处理。结果表明，在３０ｈ内样品保持稳定，氯仿、无
水乙醇、水提取液波长变异系数 ＲＳＤ％最大分别为０．４５５，
０．６４２和０．６８２，最小变异系数 ＲＳＤ％分别为０．０７８，０．１５８
和０．０５２。因此，制备液在保存３０ｈ之内稳定性较好。
２．４　指纹图谱重现性实验
以样品Ｄ２为研究对象，准确称取０．３００　０ｇ样品５份，
按１．４节方式处理后提取４０ｍｉｎ，每组样品在紫外下测定三
次，经２．１节方式处理后，氯仿、无水乙醇、水提取液波长
变异系数ＲＳＤ％最大分别为０．７５３，０．２２８和２．４１３，最小变
异系数ＲＳＤ％分别为０．０４４，０．１５６和０．１９１。结果表明，三
种极性溶剂提取４０ｍｉｎ后，样品重现性较好。
２．５　不同产区滇龙胆紫外指纹图谱
不同产区滇龙胆紫外指纹图谱，见图１—图３。
Ｆｉｇ．１　ＵＶ　ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ　ｓｐｅｃｔｒａ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｆｒｏｍ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
ａｒｅａｓ　ｏｆ　Ｇｅｎｔｉａｎａ　ｒｉｇｅｓｃｅｎｓ　ｗｉｔｈ　Ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ
Ｎｏｔｅ　１：Ｄ４，２：Ｄ１，３：Ｄ１０，４：Ｄ８，５：Ｄ６，６：Ｄ２，７：Ｄ９，８：Ｄ７，
９：Ｄ１２，１０：Ｄ５，１１：Ｄ３，１２：Ｄ１１，ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｂｅｌｏｗ
Ｆｉｇ．２　ＵＶ　ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ　ｓｐｅｃｔｒａ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｆｒｏｍ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ａｒｅａｓ
ｏｆ　Ｇｅｎｔｉａｎａ　ｒｉｇｅｓｃｅｎｓ　ｗｉｔｈ　ａｂｓｏｌｕｔｅ　ｅｔｈａｎｏｌ
Ｆｌｇ．３　ＵＶ　ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ　ｓｐｅｃｔｒａ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｆｒｏｍ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
ａｒｅａｓ　ｏｆ　Ｇｅｎｔｉａｎａ　ｒｉｇｅｓｃｅｎｓ　ｗｉｔｈ　ｗａｔｅｒ
２．６　紫外指纹图谱共有峰和变异峰的确定
对于紫外光谱指纹图谱，同一吸收峰在不同的图谱中没
有一个固定的变化范围，对不同图谱中共有峰可采用Ｗ 正
态分布检验进行识别，对于一组非常接近的吸收峰，若不满
足正态分布，可采用组内吸收峰波长的极差值与该组以及相
邻组之间的平均波数差值进行比较，当极差值显著小于平均
波数值时视为一组共有峰，反之视为变异峰。共有峰率Ｐ＝
（Ｎｇ／Ｎｄ）×１００％，变异峰率Ｐｖａ＝（ｎａ／Ｎｇ）×１００％，Ｐｖｂ＝
２６１２ 光谱学与光谱分析　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 第３１卷
（ｎｂ／Ｎｇ）×１００％，其中Ｎｇ，Ｎｄ，ｎａ，ｎｂ，Ｐｖａ和Ｐｖｂ分别代表
两个图谱中共有峰数、独立峰数、ａ图谱的变异峰数、ｂ图谱
的变异峰数、ａ图谱的变异峰率、ｂ图谱的变异峰率，Ｎｄ＝
Ｎｇ＋ｎａ＋ｎｂ。
２．７　不同产区滇龙胆共有峰的识别
不同产区滇龙胆分别经氯仿、无水乙醇、水提取采用紫
外检测后，分别通过平均、平滑、一次微分处理后得到指纹
图谱吸收峰波长数据及共有峰的识别，见表２。
Ｔａｂｌｅ　２　Ｔｈｅ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｓ　ｏｆ　ｐｅａｋｓ　ｉｎ　ＵＶ　ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ　ｓｐｅｃｔｒａ　ｏｆ　Ｇｅｎｔｉａｎａ　ｒｉｇｅｓｃｅｎｓ　ｐａｌ　ｗｉｔｈ　ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ，ｅｔｈａｎｏｌ　ａｎｄ　ｗａｔｅｒ＊
序号
吸收峰波长λ／ｎｍ
Ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ　 Ｅｔｈａｎｏｌ　 Ｗａｔｅｒ
Ｄ１　 ２８７．８０　 ２５９．２０　 ２０８．６０　 １９６．２０　 １９３．４０　 ２５３．２０
Ｄ２　 ２１９．２０　 ２０６．８０　 ２９７．００　 ２５８．４０
Ｄ３　 ２８４．００　 ２５７．２０　 ２４５．８０　 ２１４．００　 ２０５．００　 １９４．００　 ２９８．６０　 ２０１．４０　 ２８０．６０　 ２５０．２０
Ｄ４　 ３２６．００　 ２８８．２０　 ２５６．８０　 ２５０．８０　 ２０５．２０　 １９３．６０　 ２９５．００　 ２００．４０　 ２９５．６０
Ｄ５　 ３３５．８０　 ２８６．２０　 ２５６．８０　 ２１４．００　 ２０６．４０　 ２００．６０　 ３６０．８０　 ３００．４０　 ２０２．４０　 ２８３．００　 ２５５．００
Ｄ６　 ２８８．８０　 ２５６．６０　 ２４９．２０　 ２１７．８０　 ２０６．４０　 ２００．００　 ３７２．２０　 ３０１．００　 ２０５．６０　 １９８．８０　 ２８７．００
Ｄ７　 ２８８．２０　 ２４６．２０　 ２０５．８０　 １９８．２０　 ２９５．００　 ２００．４０　 ２７８．４０
Ｄ８　 ３２５．６０　 ２８７．２０　 ２５６．８０　 ２５３．６０　 ３６２．００　 ３００．００　 １９７．４０　 ２８１．２０　 ２５４．６０
Ｄ９　 ３０２．４０　 ２５６．８０　 ２９０．２０　 ２７５．４０
Ｄ１０　 ２８６．００　 ２５３．８０　 ２１１．００　 ２０３．６０　 １９７．２０　 ３０２．４０　 １９９．８０　 ２５３．６０
Ｄ１１　３０２．００　 ２５７．００　 ２４８．２０　 ３５９．２０　 ２９０．６０　 ２７９．４０
Ｄ１２　 ２１８．２０　 ２０６．６０　 １９５．００　 ３５３．４０　 ２９７．６０　 ２８６．００　 ２５３．２０
＊对吸收峰波长进行Ｗａ＝０．０５检验，表２中同一列中的吸收峰为共有峰。
２．８　基本关系组、对及分析
分别采用氯仿、无水乙醇、水三种极性溶剂提取滇龙胆
后进行紫外检测。原始图谱采用平均、平滑、一次微分处理
后，以各样品为参考，分别以指纹图谱共有峰率和变异峰率
计算公式计算出其他样品的共有峰率和变异峰率，按共有峰
大小排成ｎ维序列片段，通过该序列片段可以精确描述一个
样品与另外所测任意样品之间的远近关系。１２个滇龙胆样
品的双指标序列（见表３）。中药指纹图谱片段按每个序列共
有峰率的平均值为标准进行整体分析，以平均值为分界线将
各序列分为前后两部分，大于等于平均值共有峰率的序列之
间相似性越高，序列间变异率值越小。根据此法确定出１２个
不同产区的滇龙胆样品相似性（见表４）。
Ｔａｂｌｅ　３　Ｔｈｅ　ｃｏｍｍｏｎ　ａｎｄ　ｖａｒｉａｔｉｏｎ　ｐｅａｋ　ｒａｔｉｏｓ　ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｓａｍｐｌｅｓ
序列 （Ｐ；ＰｖＤ１３，Ｐｖｂ） 序列 （Ｐ；ＰｖＤ１３，Ｐｖｂ） 序列 （Ｐ；ＰｖＤ１３，Ｐｖｂ）
Ｄ１∶Ｄ１０＊ （６７．６％；２１．７，２６．１） Ｄ２∶Ｄ９ （６５．７％；２１．７，３０．４） Ｄ３∶Ｄ６ （６１．５％；２９．１，３３．３）
Ｄ１∶Ｄ９ （６２．９％；３５．３，２３．５） Ｄ２∶Ｄ１２ （６２．８％；２２．７，３６．３） Ｄ３∶Ｄ２ （５７．８％；３４．６，３８．４）
Ｄ１∶Ｄ２ （６２．１％；１７．４，４３．５） Ｄ２∶Ｄ１ （６２．１％；４３．５，１７．４） Ｄ３∶Ｄ７ （５７．１％，５５．０，２２．０）
Ｄ１∶Ｄ１２ （５８．３％；２８．６，４２．８） Ｄ２∶Ｄ１０ （５８．９％；３４．９，３４．９） Ｄ３∶Ｄ１ （５４．０％；４５．０，４０．０）
Ｄ１∶Ｄ８ （５５．５％；４５．０，３５．０） Ｄ２∶Ｄ３ （５７．８％；３８．４，３４．６） Ｄ３∶Ｄ１２ （５１．３％；５５．０，４０．０）
Ｄ１∶Ｄ５ （５４．０％；４５．０，４０．０） Ｄ２∶Ｄ４ （５５．８％；４５．８，３３．３） Ｄ３∶Ｄ１１ （５１．３％；５０．０，４５．０）
Ｄ１∶Ｄ３ （５４．０％；４０．０，４５．０） Ｄ２∶Ｄ５ （５５．０％；５４．５，２７．３） Ｄ３∶Ｄ５ （５１．２％；４５．４，５０．０）
Ｄ１∶Ｄ４ （５１．３％；４５．０，５０．０） Ｄ２∶Ｄ６ （５４．５％；４５．８，３７．５） Ｄ３∶Ｄ９ （５０．０％；６３．１，３６．８）
Ｄ１∶Ｄ６ （５０．０％；４５．０，５５．０） Ｄ２∶Ｄ７ （５１．３％；６５．０，３０．０） Ｄ３∶Ｄ１０ （５０．０％；５５．０，４５．０）
Ｄ１∶Ｄ７ （４７．２％；７０．６，４１．２） Ｄ２∶Ｄ８ （５１．２％；５７．１，３８．１） Ｄ３∶Ｄ４ （５０．０％；４５．４，５４．５）
Ｄ１∶Ｄ１１ （４５．２％；５７．９，６３．１） Ｄ２∶Ｄ１１ （５０．０％，６５．０，３５．０） Ｄ３∶Ｄ８ （４７．５％；７８．９，３１．６）
Ｄ４∶Ｄ８ （５６．２％；４４．４，３３．３） Ｄ５∶Ｄ１０ （６５．６％；３３．３，１９．０） Ｄ６∶Ｄ３ （６１．５％；３３．３，２９．１）
Ｄ４∶Ｄ２ （５５．８％；３３．３，４５．８） Ｄ５∶Ｄ９ （６３．６％，３３．３，２３．８） Ｄ６∶Ｄ１０ （６０．０％；４２．８，２３．８）
Ｄ４∶Ｄ９ （５４．８％；４７．０，３５．３） Ｄ５∶Ｄ８ （５５．８％，４２．１，３６．８） Ｄ６∶Ｄ１１ （５９．４％；４２．１，２６．３）
Ｄ４∶Ｄ７ （５４．５％；４４．４，３８．９） Ｄ５∶Ｄ２ （５５．０％，３７．５，４７．８） Ｄ６∶Ｄ９ （５８．８％；３５．０，３５．０）
Ｄ４∶Ｄ１１ （５４．３％；５２．６，３１．６） Ｄ５∶Ｄ１２ （５５．０％；３５．０，４５．０） Ｄ６∶Ｄ８ （５７．１％；４０．０，３５．０）
Ｄ４∶Ｄ１０ （５４．０％；５０．０，３５．０） Ｄ５∶Ｄ１ （５４．０％；４０．０，４５．０） Ｄ６∶Ｄ１２ （５６．６％；４７．０，２９．４）
Ｄ４∶Ｄ５ （５３．８％；４７．６，３８．１） Ｄ５∶Ｄ７ （５２．９％；５５．５，３３．３） Ｄ６∶Ｄ７ （５６．２％；５５．５，２２．２）
Ｄ４∶Ｄ１ （５１．３％；５０．０，４５．０） Ｄ５∶Ｄ１１ （５２．９％；４４．４，４４．４） Ｄ６∶Ｄ２ （５４．５％；３７．５，４５．８）
Ｄ４∶Ｄ３ （５０．０％；５４．５，４５．４） Ｄ５∶Ｄ６ （５１．３％；３６．８，５７．９） Ｄ６∶Ｄ５ （５１．３％；５７．９，３６．８）
Ｄ４∶Ｄ１２ （５０．０％；５５．６，４４．４） Ｄ５∶Ｄ４ （５１．３％；５０．０，４５．０） Ｄ６∶Ｄ１ （５０．０％；５５．０，４５．０）
Ｄ４∶Ｄ６ （４８．７％；５７．９，４７．４） Ｄ５∶Ｄ３ （５１．２％；５０．０，４５．４） Ｄ６∶Ｄ４ （４８．７％；４７．４，５７．９）
３６１２第８期　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　光谱学与光谱分析
　续表３
Ｄ７∶Ｄ１１ （６５．６％；３１．６，３６．８） Ｄ８∶Ｄ９ （６６．７％；２５．０，２５．０） Ｄ９∶Ｄ８ （６６．７％；２５．０，２５．０）
Ｄ７∶Ｄ１０ （５９．４％；３１．６，３６．８） Ｄ８∶Ｄ１０ （６２．９％；２３．５，３５．３） Ｄ９∶Ｄ１２ （６５．７％，２１．７，３０．４）
Ｄ７∶Ｄ３ （５７．１％，２２．０，５５．０） Ｄ８∶Ｄ１２ （６２．５％；２０．０，４０．０） Ｄ９∶Ｄ２ （６５．７％；３０．４，２１．７）
Ｄ７∶Ｄ８ （５６．３％；３８．９，３８．９） Ｄ８∶Ｄ６ （５７．１８％；３５．０，４０．０） Ｄ９∶Ｄ５ （６３．６％，２３．８，３３．３）
Ｄ７∶Ｄ６ （５６．２％；２２．２，５５．５） Ｄ８∶Ｄ１１ （５７．１５；４０．０，３５．０） Ｄ９∶Ｄ１ （６２．９％；２３．５，３５．３）
Ｄ７∶Ｄ９ （５４．５％；３８．９，４４．４） Ｄ８∶Ｄ４ （５６．２％；３３．３，４４．４） Ｄ９∶Ｄ６ （５８．８％；３５．０，３５．０）
Ｄ７∶Ｄ４ （５４．５％；３８．９，４４．４） Ｄ８∶Ｄ７ （５６．３％；３８．９，３８．９） Ｄ９∶Ｄ１１ （５８．６％；２９．４，４１．２）
Ｄ７∶Ｄ１２ （５３．１％；２９．４，５８．９） Ｄ８∶Ｄ１ （５５．５％；３５．０，４５．０） Ｄ９∶Ｄ４ （５４．８％；３５．３，４７．０）
Ｄ７∶Ｄ５ （５２．９％；３３．３，５５．５） Ｄ８∶Ｄ５ （５５．８％，３６．８，４２．１） Ｄ９∶Ｄ７ （５４．５％；４４．４，３８．９）
Ｄ７∶Ｄ２ （５１．３％；３０．０，６５．０） Ｄ８∶Ｄ２ （５１．２％；３８．１，５７．１） Ｄ９∶Ｄ１０ （５３．１％；４７．０，４１．２）
Ｄ７∶Ｄ１ （４７．２％；４１．２，７０．６） Ｄ８∶Ｄ３ （４７．５％；３１．６，７８．９） Ｄ９∶Ｄ３ （５０．０％；３６．８，６３．１）
Ｄ１０∶Ｄ１ （６７．６％；２６．１，２１．７） Ｄ１１∶Ｄ７ （６５．６％；３６．８，３１．６） Ｄ１２∶Ｄ９ （６５．７％，３０．４，２１．７）
Ｄ１０∶Ｄ５ （６５．６％；１９．０，３３．３） Ｄ１１∶Ｄ６ （５９．４％；２６．３，４２．１） Ｄ１２∶Ｄ８ （６２．５％；４０．０，２０．０）
Ｄ１０∶Ｄ８ （６２．９％；３５．３，２３．５） Ｄ１１∶Ｄ９ （５８．６％；４１．２，２９．４） Ｄ１２∶Ｄ２ （６２．８％；３６．３，２２．７）
Ｄ１０∶Ｄ６ （６０．０％；２３．８，４２．８） Ｄ１１∶Ｄ８ （５７．１５；３５．０，４０．０） Ｄ１２∶Ｄ１ （５８．３％；４２．８，２８．６）
Ｄ１０∶Ｄ７ （５９．４％；３１．８，３６．６） Ｄ１１∶Ｄ１０ （５５．９％；３６．８，４２．１） Ｄ１２∶Ｄ６ （５６．６％；２９．４，４７．０）
Ｄ１０∶Ｄ２ （５８．９％；３４．９，３４．９） Ｄ１１∶Ｄ４ （５４．３％；３１．６，５２．６） Ｄ１２∶Ｄ１０ （５６．３％；４７．６，４７．６）
Ｄ１０∶Ｄ１２ （５６．３５；４７．６，４７．６） Ｄ１１∶Ｄ５ （５２．９％；４４．４，４４．４） Ｄ１２∶Ｄ５ （５５．０％；４５．０，３５．０）
Ｄ１０∶Ｄ１１ （５５．９％；４２．１，３６．８） Ｄ１１∶Ｄ３ （５１．３％；４５．０，５０．０） Ｄ１２∶Ｄ７ （５３．１％；５８．９，２９．４）
Ｄ１０∶Ｄ４ （５４．０％；３５．０，５０．０） Ｄ１１∶Ｄ１２ （５１．２％４７．６，４７．６） Ｄ１２∶Ｄ３ （５１．３％；４０．０，５５．０）
Ｄ１０∶Ｄ９ （５３．１％；４１．２，４７．０） Ｄ１１∶Ｄ２ （５０．０％，６５．０，３５．０） Ｄ１２∶Ｄ１１ （５１．２％４７．６，４７．６）
Ｄ１０∶Ｄ３ （５０．０％；４５．０，５５．０） Ｄ１１∶Ｄ１ （４５．２％；６３．１，５７．９） Ｄ１２∶Ｄ４ （５０．０％；４４．４，５５．６）
　＊Ｄ１∶Ｄ１０（６７．６％；２１．７，２６．１），该序列片段表示以样品Ｄ１为参考，样品Ｄ１０与样品Ｄ１之间的共有峰率为６７．６％，Ｄ１样品的变异峰率
是２１．７％，Ｄ１０样品的变异峰率是２６．１％，从共有峰率和变异峰率综合看，二者之间差异性极小，相似度较高。
Ｔａｂｌｅ　４　Ｔｈｅ　ｃｏｍｍｏｎ　ａｎｄ　ｖａｒｉａｔｉｏｎ　ｐｅａｋ　ｒａｔｉｏｓ　ｉｎ　ｓｉｍｉｌａｒ　ｓａｍｐｌｅｓ
序列 （Ｐ；ＰｖＤ１３，Ｐｖｂ） 序列 （Ｐ；ＰｖＤ１３，Ｐｖｂ） 序列 （Ｐ；ＰｖＤ１３，Ｐｖｂ）
Ｄ１∶Ｄ１０ （６７．６％；２１．７，２６．１） Ｄ２∶Ｄ９ （６５．７％；２１．７，３０．４） Ｄ３∶Ｄ６ （６１．５％；２９．１，３３．３）
Ｄ１∶Ｄ９ （６２．９％；３５．３，２３．５） Ｄ２∶Ｄ１２ （６２．８％；２２．７，３６．３） Ｄ３∶Ｄ２ （５７．８％；３４．６，３８．４）
Ｄ１∶Ｄ２ （６２．１％；１７．４，４３．５） Ｄ２∶Ｄ１ （６２．１％；４３．５，１７．４） Ｄ３∶Ｄ７ （５７．１％，５５．０，２２．０）
Ｄ１∶Ｄ１２ （５８．３％；２８．６，４２．８） Ｄ２∶Ｄ１０ （５８．９％；３４．９，３４．９） Ｄ３∶Ｄ１ （５４．０％；４５．０，４０．０）
Ｄ１∶Ｄ８ （５５．５％；４５．０，３５．０） Ｄ２∶Ｄ３ （５７．８％；３８．４，３４．６）
Ｄ４∶Ｄ８ （５６．２％；４４．４，３３．３） Ｄ５∶Ｄ１０ （６５．６％；３３．３，１９．０） Ｄ６∶Ｄ３ （６１．５％；３３．３，２９．１）
Ｄ４∶Ｄ２ （５５．８％；３３．３，４５．８） Ｄ５∶Ｄ９ （６３．６％，３３．３，２３．８） Ｄ６∶Ｄ１０ （６０．０％；４２．８，２３．８）
Ｄ４∶Ｄ９ （５４．８％；４７．０，３５．３） Ｄ５∶Ｄ８ （５５．８％，４２．１，３６．８） Ｄ６∶Ｄ１１ （５９．４％；４２．１，２６．３）
Ｄ４∶Ｄ７ （５４．５％；４４．４，３８．９） Ｄ６∶Ｄ９ （５８．８％；３５．０，３５．０）
Ｄ４∶Ｄ１１ （５４．３％；５２．６，３１．６） Ｄ６∶Ｄ８ （５７．１％；４０．０，３５．０）
Ｄ４∶Ｄ１０ （５４．０％；５０．０，３５．０） Ｄ６∶Ｄ１２ （５６．６％；４７．０，２９．４）
Ｄ７∶Ｄ１１ （６５．６％；３１．６，３６．８） Ｄ８∶Ｄ９ （６６．７％；２５．０，２５．０） Ｄ９∶Ｄ８ （６６．７％；２５．０，２５．０）
Ｄ７∶Ｄ１０ （５９．４％；３１．６，３６．８） Ｄ８∶Ｄ１０ （６２．９％；２３．５，３５．３） Ｄ９∶Ｄ１２ （６５．７％，２１．７，３０．４）
Ｄ７∶Ｄ３ （５７．１％，２２．０，５５．０） Ｄ８∶Ｄ１２ （６２．５％；２０．０，４０．０） Ｄ９∶Ｄ２ （６５．７％；３０．４，２１．７）
Ｄ７∶Ｄ８ （５６．３％；３８．９，３８．９） Ｄ８∶Ｄ６ （５７．１８％；３５．０，４０．０） Ｄ９∶Ｄ５ （６３．６％，２３．８，３３．３）
Ｄ７∶Ｄ６ （５６．２％；２２．２，５５．５） Ｄ９∶Ｄ１ （６２．９％；２３．５，３５．３）
Ｄ１０∶Ｄ１ （６７．６％；２６．１，２１．７） Ｄ１１∶Ｄ７ （６５．６％；３６．８，３１．６） Ｄ１２∶Ｄ９ （６５．７％，３０．４，２１．７）
Ｄ１０∶Ｄ５ （６５．６％；１９．０，３３．３） Ｄ１１∶Ｄ６ （５９．４％；２６．３，４２．１） Ｄ１２∶Ｄ８ （６２．５％；４０．０，２０．０）
Ｄ１０∶Ｄ８ （６２．９％；３５．３，２３．５） Ｄ１１∶Ｄ９ （５８．６％；４１．２，２９．４） Ｄ１２∶Ｄ２ （６２．８％；３６．３，２２．７）
Ｄ１０∶Ｄ６ （６０．０％；２３．８，４２．８） Ｄ１１∶Ｄ８ （５７．１５；３５．０，４０．０） Ｄ１２∶Ｄ１ （５８．３％；４２．８，２８．６）
Ｄ１０∶Ｄ７ （５９．４％；３１．８，３６．６） Ｄ１２∶Ｄ６ （５６．６％；２９．４，４７．０）
Ｄ１０∶Ｄ２ （５８．９％；３４．９，３４．９）
　　表３结果表明，不同产区滇龙胆之间存在一定的差异。
随着滇龙胆产区之间空间距离的增加，其样品间共有峰率逐
渐呈下降趋势，变异峰率呈上升趋势。滇龙胆整体共有峰率
均小于７０％，大于４５％，变异率最大达７８．９％。表４结果表
４６１２ 光谱学与光谱分析　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 第３１卷
明不同产地滇龙胆随地理距离的增加相近程度逐渐减小，但
总体相似度在５０％～７０％之间，滇中地区昆明和楚雄、滇西
南临沧和滇西北怒江、滇东南文山地区和滇东曲靖、滇南玉
溪和滇中昆明之间相近程度较高，贵州产区与云南产区滇龙
胆间相近程度都较低。
３　结　论
　　在紫外条件下利用双指标序列分析法，通过三组平均、
４点平滑和一次微分处理建立了滇龙胆紫外指纹图谱。该方
法稳定性高、重现性好，准确定性反映任意两个样品之间的
相似和差异情况，同时从整体上对其进行分组，与常用的模
糊聚类相比更为客观、直接。能进一步区分中药材真伪和药
材的品质，为中药材定性评价奠定了基础。
实验结果表明，样品相近程度随地理位置不同变化较
大，这可能与云南地理、气候多元化有关。野生滇龙胆中药
材在长期的进化过程中，遗传的稳定性和变异性与外界环境
的变化密切相关，而指纹图谱中共有峰率和变异峰率在一定
程度可以客观的反映不同产区野生滇龙胆的相近情况，为滇
龙胆的进一步研究提供了理论依据。
Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ
［１］　ＳＵＮ　Ｎａｎ－ｊｕｎ，ＸＩＡ　Ｃｈｕｎ－ｆａｎｇ（孙南君，夏春芳）．Ｃｈｉｎａ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍａｔｅｒｉａ　Ｍｅｄｉｃａ（中国中药杂志），１９８４，９（１）：３３．
［２］　Ｔｈｅ　Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ　Ｃｏｍｍｉｔｔｅ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ，Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ（中国药典），Ｐａｒｔ　Ｏｎｅ（一部）．Ｂｅｉｊｉｎｇ：Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｉｎｄｕｓｔｒｙ　Ｐｒｅｓｓ（北京：
化学工业出版社），２０１０．
［３］　ＲＡＮ　Ｍａｏ－ｘｉｏｎｇ（冉懋雄）．Ｃｈｉｎａ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｏｒｐ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　＆ Ｈｅｒｂａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ｃｏｍｐｉｌｅ（中国中药区化），Ｐａｒｔ　Ｏｎｅ（一部）．Ｂｅｉｊｉｎｇ：
Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｐｒｅｓｓ（北京：科学出版社），１９９５．
［４］　Ｍｃｃｌｕｒｅｌ，Ｂａｒｔｏｎｊ　Ｗ　Ｆ，ｅｔ　ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｅａｒ　Ｉｎｆｒａｒｅｄ　Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ，１９９８，６：７７．
［５］　Ｇｏｒｒｙ　Ｐ　Ａ．Ａｎａｌｙｓｉｓ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９０，６２：５７０．
Ｔｈｅ　Ｃｏｍｍｏｎ　ａｎｄ　Ｖａｒｉａｔｉｏｎ　Ｐｅａｋ　Ｒａｔｉｏ　Ｄｕａｌ　Ｉｎｄｅｘ　Ｓｅｑｕｅｎｃｅ　Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｉｎ
ＵＶ　Ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ　Ｓｐｅｃｔｒａ　ｏｆ　Ｇｅｎｔｉａｎａ　Ｒｉｇｅｓｃｅｎｓ
ＹＵＡＮ　Ｔｉａｎ－ｊｕｎ１，２，ＷＡＮＧ　Ｙｕａｎ－ｚｈｏｎｇ１，ＺＨＡＯ　Ｙａｎ－ｌｉ　１，ＺＨＡＮＧ　Ｊｉ　１，ＪＩＮ　Ｈａｎｇ１＊，ＺＨＡＮＧ　Ｊｉｎ－ｙｕ１＊
１．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　Ｐｌａｎｔ，Ｙｕｎｎａｎ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｋｕｎｍｉｎｇ　６５０２２３，Ｃｈｉｎａ
２．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｙｕｎｎａｎ　Ｎａｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋｕｎｍｉｎｇ　６５００３１，Ｃｈｉｎａ
Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｃｏｍｍｏｎ　ａｎｄ　ｖａｒｉａｔｉｏｎ　ｐｅａｋ　ｒａｔｉｏ　ｄｕａｌ　ｉｎｄｅｘ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ，ｕｓｉｎｇ　ｍｅａｎ　ｖａｌｕｅ，ｓｍｏｏｔｈｎｅｓｓ　ａｎｄ
ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ　ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｔｏ　ｃａｌｉｂｒａｔｅ　ａｎｄ　ｅｘｃｌｕｄｅ　ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ，ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｉｎｃｒｅａｓｅ　ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｐｅｃｔｒｕｍ，ａｎｄ　ｔｈｅｎ　ｉｎｓｐｅｃ－
ｔｅｄ　ｔｈｅ　ＲＳＤ　ｏｆ　ｓｔａｂｉｌｉｔｙ　ａｎｄ　ｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｒｅｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐｏｌａｒｉｔｙ　ｓｏｌｖｅｎｔ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　Ｇｅｎｔｉａｎａ　ｒｉｇｅｓｃｅｎｓ，ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ　ｔｈｅ　ｃｏｍｍｏｎ
ａｎｄ　ｖａｒｉａｔｉｏｎ　ｐｅａｋ　ｒａｔｉｏ　ｉｎ　ｔｈｅ　ＵＶ　ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ　ｓｐｅｃｔｒａｌ，ｔｏ　ｅｖａｌｕａｔｅ　ｔｈｅ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｏｆ　Ｇ．ｒｉｇｅｓｃｅｎｓ　ｆｒｏｍ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ａｒｅａｓ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ
ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ，ａｔ　４０ｍｉｎ，ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｒａｔｉｏ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｉｎ　ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ，ａｂｓｏｌｕｔｅ　ｅｔｈｙｌ　ａｌｃｏｈｏｌ　ｏｒ　ｗａｔｅｒ，ａｎｄ　ｉｎ　３０ｈｔｈｅ　ＲＳＤ　ｏｆ　ｓｔａ－
ｂｉｌｉｔｙ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ　ｗｅｒｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ　０．０７８～０．４５５，０．１５８～０．４６２，０．０５２～０．６８２；ｔｈｅ　ＲＳＤ　ｏｆ　ｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ　ｗｅｒｅ　ｂｅ－
ｔｗｅｅｎ　０．０４４～０．７５３，０．１５６～０．２８８，０．１９１～２．４１３．Ｔｈｅ　ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ　ｓｐｅｃｔｒａｌ　ｉｍｐｌｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｌａｒｇｅｓｔ　ｃｏｍｍｏｎ　ｐｅａｋ　ｒａｔｉｏ　ｗａｓ
６７．６％，ｗｈｉｌｅ　ｔｈｅ　ｌｅａｓｔ　ｗａｓ　４５．２％，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｌａｒｇｅｓｔ　ｖａｒｉａｔｉｏｎ　ｐｅａｋ　ｒａｔｉｏ　ｗａｓ　７８．９％，ｔｈｅ　ｌｅａｓｔ　ｗａｓ　２１．７％ａｍｏｎｇ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ａｒｅａｓ
ｏｆ　Ｇ．ｒｉｇｅｓｃｅｎｓ．Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｅｘａｃｔｌｙ　ｉｎ　ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｗｏ　ｍｏｒｅ　ｈｅｒｂ　ｓａｍｐｌｅｓ，ａｎｄ　ｃｌａｒｉｆｉｅｄ　ｔｈｅ　ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ
ｌｅｖｅｌ　ａｍｏｎｇ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ａｒｅａｓ，ａｌｓｏ　ａｐｐｌｉｅｄ　ｔｈｅ　ｂａｓｅｍｅｎｔ　ｆｏｒ　ａｕｔｈｅｎｔｉｃｉｔｙ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｅｒｂｓ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ　Ｇｅｎｔｉａｎａ　ｒｉｇｅｓｃｅｎｓ；ＵＶ　ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ　ｓｐｅｃｔｒａｌ；Ｄｕａｌ　ｉｎｄｅｘ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ；Ｑｕａｌｉｔｉｖｅ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ
（Ｒｅｃｅｉｖｅｄ　Ｏｃｔ．１３，２０１０；ａｃｃｅｐｔｅｄ　Ｆｅｂ．１６，２０１１）　　
＊Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ａｕｔｈｏｒ
５６１２第８期　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　光谱学与光谱分析