全 文 ：收稿日期:2016-01-23; 修订日期:2016-05-09
基金项目:国家自然科学基金(No． 81102806);
大理学院应用开发研究基金立项项目
(No． KYYY201405)
作者简介:赵志莲(1972-)，女(白族)，云南鹤庆人，大理大学高级讲师，硕
士学位，主要从事药用植物生物技术及品质评价研究工作．
* 通讯作者简介:李海峰(1971-)，男(白族)，云南云龙人，大理大学教
授，硕士研究生导师 ，硕士学位，主要从事药用植物生物技术及品质
评价研究工作 ．
滇龙胆裂环烯醚萜类活性成分积累规律的研究
赵志莲1，2，张 琳1，刘卫红3，李跃华4，李海峰1*
(1． 大理大学药学与化学学院，云南 大理 671000;
2． 大理农林职业技术学院，云南 大理 671003;
3． 大理大学图书馆，云南 大理 671000;
4． 云南省大理分析测试中心，云南 大理 671000)
摘要:目的 探讨同一居群滇龙胆根及根茎、茎、叶、花中裂环烯醚萜类主要活性成分的积累规律。方法 采用高效液相色
谱法(HPLC)测定同一居群滇龙胆根及根茎、茎、叶、花中龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、獐芽菜苷等主要活性成分的含量，并建
立其 HPLC图谱，对滇龙胆不同部位中主要活性成分积累规律进行研究。结果 同一居群滇龙胆根及根茎中龙胆苦苷含
量极显著高于叶、花和茎(P ＜ 0． 01)，滇龙胆叶中獐芽菜苦苷含量极显著高于根及根茎、花、茎(P ＜ 0． 01)，滇龙胆花中獐
芽菜苷含量显著高于根及根茎(P ＜ 0． 05);同一居群滇龙胆根及根茎、茎、叶、花 HPLC 图谱相似度在 0． 986 以上，确定
HPLC 图谱中 26 个共有峰。结论 同一居群滇龙胆根及根茎、茎、叶、花中龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、獐芽菜苷含量存在极显
著(P ＜ 0． 01)或显著(P ＜ 0． 05)差异;滇龙胆根及根茎、叶、花 HPLC 图谱相似度较高，主要活性成分种类差异较小。
关键词:滇龙胆; 高效液相色谱法; 含量测定; 高效液相色谱
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2016． 09． 009
中图分类号:Ｒ284;Q945 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2016)09-2073-03
Accumulation rule of active secoiridoid in the same population Gentiana rigescens Franch．
ZHAO Zhi-lian1，2，ZHANG Lin1，LIU Wei-hong3，LI Yue-hua4，LI Hai-feng1*
(1． College of Pharmacy and Chemistry，Dali University，Dali 671000，China;2． Dali Vocational and Tech-
nical College of Agriculture and Forestry，Dali 671003，China;3． Library of Dali University，Dali 671000，
China;4． Dali Analysis and Testing Center of Yunnan Province，Dali 671000，China)
Abstract:Objective To discuss the accumulation rule of the active secoiridoid in the root，stem，leaf and flower of the same
population Gentiana rigescens Franch． Methods The contents of the active ingredients which including gentiopicroside，swer-
tiamarin and sweroside in the root，stem，leaf and flower of the same population Gentiana rigescens Franch． were determined by
HPLC and established the HPLC map to discuss the accumulation rule of the active secoiridoid in different parts of Gentiana riges-
cens Franch． Ｒesults The content of gentiopicroside in root is significantly (P ＜ 0． 01)higher than in leaf，flower and stem;The
content of swertiamarin in leaf is significantly (P ＜ 0． 01)higher than in root，flower and stem;The content of sweroside in flower
is slightly (P ＜ 0． 05)more than in root，leaf and stem;26 common peaks in HPLC chromatograms map were selected in the roots
and rhizomes，stems，leaves，flowers of same population Gentiana rigescens Franch． and the similarities were all above 0． 986．
Conclusion There is a significantly difference (P ＜ 0． 01)or slightly difference (P ＜ 0． 05)of the content of gentiopicroside，
swertiamarin，sweroside among same populations;And similarity among roots and rhizomes，stems，leaves，flowers are high in the
same population，there are little differences about species of main active ingredients．
Key words:Gentiana rigescens Franch．; HPLC; Content determination; HPLC chromatograms map
滇龙胆 Gentiana rigescens Franch． 又称坚龙胆、滇龙胆草，为
龙胆科(Gentianaceae)龙胆属多年生宿根草本植物［1］，云南是滇
龙胆的道地产区。滇龙胆是我国传统中药材龙胆的重要来源，以
根及根茎入药，具有清热泻火、保肝、健脾、杀菌等作用，是龙胆泻
肝汤、龙胆泻肝片颗粒、龙胆注射液、苦胆草片、十味龙胆花颗粒
等一百多种中成药的原料［2］。最新药理学研究表明滇龙胆还有
抗 ＲSV(Ｒespiratory Syncytial Virus)病毒［3］、降血糖［4，5］、降血
脂［6］等作用。
滇龙胆的主要功效成分龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、獐芽菜苷在
叶绿体中合成并进行储藏和分配，从叶经茎向下运输，最后主要
在根及根茎中积累和储存。在滇龙胆叶绿体中，牻牛儿基二磷酸
酯通过羟基化氧化成柠檬醛，再经过环化、水合和还原形成臭蚁
二醛，臭蚁二醛经过烯醇化、羟醛缩合和苷化成环烯醚萜苷，环烯
醚萜苷通过环断裂、氧化内酯化最终形成龙胆苦苷，在龙胆苦苷
基础上形成了獐芽菜苦苷、獐芽菜苷［7，8］。因此，本研究拟利用
高效液相色谱法(HPLC)测定同一居群滇龙胆根及根茎、茎、叶、
花中龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、獐芽菜苷等主要活性成分的含量，并
建立其 HPLC 谱图，探讨滇龙胆根及根茎、茎、叶、花中裂环烯醚
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2016 VOL． 27 NO． 9 时珍国医国药 2016 年第 27 卷第 9 期
萜类主要活性成分的积累规律，为大理白族民间长期以来以滇龙
胆全草入药提供理论依据。
1 仪器与试药
Agilent1200 高效液相色谱仪，包括 G1313A ALS 自动进样
器、G1315A /B DAD检测器(美国惠普公司);Agilent ChemStation
色谱工作站(美国惠普公司);SK5200H型超声波清洗仪(上海科
导超声仪器有限公司);梅特勒电子天平 AE240(瑞士);FY135
型中草药粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司) ;Millipore纯水处
理系统等。
龙胆苦苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号:110770 －
201013，纯度≥96． 9%)，獐芽菜苦苷对照品(中国药品生物制品
检定所，批号:0785 － 200203，纯度≥98%)，獐芽菜苷对照品(贵
州迪大生物有限公司，GAS NO:14215 － 86 － 2，纯度≥98%)。高
效液相流动相甲醇为色谱纯(美国 Tedia公司)，提取样品用甲醇
为分析纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
2012 年 12 月在大理州南涧县采集开花期同一居群滇龙胆，
采样点海拔高度为 2016 m、经纬度为 N 25°67． 550 E 99°03．
183，生境为红壤的荒山向阳坡，随机采集无病虫害的开花期植
株 30 株，采集植株之间的株距不小于 6 m，采集植株经大理大学
李海峰教授鉴定为龙胆科滇龙胆 Gentiana rigescens Franch．，采集
的植株样品 40 ℃恒温箱干燥至恒重。
2 方法与结果
2． 1 同一居群滇龙胆根及根茎、茎、叶、花中三种成分含量测定
从采集样品中随机选取质量在 25 ～ 30 g 之间的植株(植株生长
年限相近)9 株作为试验材料，试验材料分别按根及根茎、茎、叶、
花四个部位粉碎，过 100 目筛混合均匀，参考文献［9 ～ 11］的方法提
取并对同一居群滇龙胆根及根茎、茎、叶、花中龙胆苦苷、獐芽菜
苦苷、獐芽菜苷含量测定方法学进行考察，线性关系、精密度、重
复性、稳定性、加样回收率试验符合含量测定要求。龙胆苦苷、獐
芽菜苦苷、獐芽菜苷对照品及样品色谱图如图 1 所示。因此，用
文献［9 ～ 11］报道的方法分别测定同一居群滇龙胆根及根茎、茎、
叶、花中龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、獐芽菜苷含量，每个部位重复测
定 3 次，所得数据用 SPSS17． 0 统计软件进行单因素方差分析。
结果见表 1。
1 －獐芽菜苦苷，2 －龙胆苦苷，3 －獐芽菜苷
A －对照品，B －根及根茎，C －茎，D －叶，E －花，
图 1 对照品(A)及样品(B ～ E)色谱图
2． 2 同一居群滇龙胆根及根茎、茎、叶、花 HPLC 图谱的建立
将“2． 1”的试验材料分别按根及根茎、茎、叶、花四个部位粉碎，
过 100 目筛混合均匀，参考文献［9 ～ 11］的方法提取并对滇龙胆根
及根茎、茎、叶、花的 HPLC 图谱的建立方法学进行考察，稳定性、
精密度、重复性试验符合指纹图谱的要求，分别建立滇龙胆根及
根茎、茎、叶、花 HPLC 图谱，用“中药色谱指纹图谱相似度评价
系统 2004A 版”进行图谱相似度分析。结果见图 2。
2． 3 同一居群滇龙胆不同部位主要活性成分积累规律分析 同
一居群滇龙胆根及根茎中龙胆苦苷含量极显著高于叶、花和茎
(P ＜ 0． 01)，叶和花中龙胆苦苷含量无显著差异;滇龙胆叶中獐
芽菜苦苷含量极显著高于根及根茎、花、茎(P ＜ 0． 01)，根及根茎
和花中獐芽菜苦苷含量无显著差异;滇龙胆花中獐芽菜苷含量显
著高于根及根茎中(P ＜ 0． 05)，茎和叶中均没有检测到獐芽菜
苷。同一居群滇龙胆不同部位主要活性成分积累规律为龙胆苦
苷含量为根及根茎 ＞叶、花 ＞茎，獐芽菜苦苷含量为叶 ＞根及根
茎、花 ＞茎，獐芽菜苷含量为花 ＞根及根茎，叶、茎未检测到獐芽
菜苷。见表 1。
2． 4 同一居群滇龙胆根及根茎、茎、叶、花 HPLC 图谱的比较分
析 对同一居群滇龙胆根及根茎、茎、叶、花不同部位样品进行比
较分析，如图 2 所示，将滇龙胆根及根茎、茎、叶、花中的 HPLC 图
谱的 AIA 格式的原始数据导入“中药色谱指纹图谱相似度评价
系统 2004A 版”软件系统，以 S10 为参照图谱，选取“时间窗宽
度”为 0． 1 min，经过多点校正，自动匹配，以中位数法，生成对照
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时珍国医国药 2016 年第 27 卷第 9 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2016 VOL． 27 NO． 9
图谱 Ｒ，有匹配数据的输出结果得到 26 个共有峰，经过与对照品
保留时间比较，确认 A为獐芽菜苦苷、B为龙胆苦苷、C为獐芽菜
苷，其中龙胆苦苷的峰面积所占比例最大，分离度能达到要求，是
滇龙胆药材的主要活性成分。对滇龙胆根及根茎、茎、叶、花中的
HPLC 图谱进行相似度分析见表 1，根及根茎、花、叶的相似度较
高，相似度在 0． 986 以上;茎的 HPLC 色谱图相似度较低，相似度
仅为 0． 777。
表 1 同一居群滇龙胆不同部位中龙胆苦苷、獐芽菜苦苷及獐芽菜苷含量的比较分析 (珋x ± s)
部位
质量分数 /%
龙胆苦苷 獐芽菜苦苷 獐芽菜苷 总质量分数
相似度
南涧 －根及根茎 7． 006 ± 0． 87Aa 0． 292 ± 0． 05Bb 0． 027 ± 0． 02bb 7． 322 ± 0． 91Aa 0． 989
南涧 －茎 1． 384 ± 0． 58Cc 0． 098 ± 0． 04Cc ND 1． 594 ± 0． 52Cc 0． 777
南涧 －叶 5． 563 ± 1． 09Bb 0． 480 ± 0． 08Aa ND 6． 043 ± 1． 04Bb 0． 986
南涧 －花 5． 377 ± 0． 62Bb 0． 257 ± 0． 06Bb 0． 040 ± 0． 02Aa 5． 674 ± 0． 60Bb 0． 996
数据后大小写字母分别表示 P ＜ 0． 01 和 P ＜ 0． 05，水平显著性差异。ND表示未检出;n = 3
9 －獐芽菜苦苷，10 －龙胆苦苷，11 －獐芽菜苷，
S1 －根及根茎，S2 －茎，S3 －叶，S4 －花
图 2 同一居群滇龙胆不同部位 HPLC色谱图
3 讨论
滇龙胆为多年生宿根草本植物，滇龙胆地下部分根及根茎为
多年生，滇龙胆地上部分茎、叶、花为一年生，滇龙胆地下部分根
及根茎主要活性成分积累量随着生长年限的增加而逐渐增加。
本实验结果表明，龙胆苦苷主要在滇龙胆根及根茎中积累，獐芽
菜苦苷主要在滇龙胆叶中积累，獐芽菜苷主要在滇龙胆花中积
累，而且茎和叶中没有检测到獐芽菜苷。因此，龙胆苦苷在滇龙
胆根及根茎积累量随着生长年限的增加而逐渐增加，而獐芽菜苦
苷、獐芽菜苷在滇龙胆根及根茎积累量与生长年限无关，獐芽菜
苦苷、獐芽菜苷积累量主要可能受合成、运输、分配和贮藏能力的
影响。
滇龙胆药材的质量控制主要以龙胆苦苷为指标，而与滇龙胆
功效密切相关的獐芽菜苦苷、獐芽菜苷没有作具体要求，所以很
难从传统医学“活性物质群”角度评价滇龙胆品质，而且与滇龙
胆功效密切相关的主要活性成分在不同部位的积累量也各不相
同。本实验结果为大理白族民间长期以来以滇龙胆全草入药提
供了重要的科学依据，滇龙胆全草入药更能体现其“活性物质
群”整体作用，因为龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、獐芽菜苷分别主要在
滇龙胆根及根茎、叶、花中积累，药用滇龙胆全草更能有效利用不
同部分的主要活性成分。同时，滇龙胆根及根茎、叶、花 HPLC 图
谱相似度在 0． 986 以上，且滇龙胆根及根茎、叶、花中龙胆苦苷含
量超过药典标准。虽然茎中龙胆苦苷含量没有达到药典标准、
HPLC 图谱相似度仅为 0． 777，但是滇龙胆根及根茎、茎、叶、花
HPLC 图谱中有 26 个共有峰，不同部位主要化学成分差异较小。
因此，大理白族民间长期以来以滇龙胆全草入药具有一定的科学
依据，值得进一步深入研究。
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2016 VOL． 27 NO． 9 时珍国医国药 2016 年第 27 卷第 9 期