全 文 ：·生物技术· 北方园艺 2008(5):200～ 201
第一作者简介:付印东(1973-),男 ,工程师, 主要从事园林植物栽
培育种工作。
通讯作者:孙晓梅。
基金项目:沈阳农业大学中 、青年硕士生导师资助项目。
收稿日期:2007-12-30
紫 花 地 丁 组 培 快 繁 技 术 研 究
付印 东1 , 孙 晓梅2 , 杨宏光2 , 王亚 斌2
(1.沈阳市植物园景观部 ,辽宁沈阳 110163;2.沈阳农业大学林学院,辽宁 沈阳 110161)
摘 要:以紫花地丁的茎尖为外植体进行组织培养研究 ,结果表明:外植体用 70%酒精处理
30 s ,0.1%HgCl2 处理6 min效果最佳;最佳生长和增殖培养基为:MS+BA 3 mg/L+NAA 0.1
mg/ L;最佳生根培养基为:1/2 MS+BA 0.3 mg/L+AC 0.3 g/L ,生根率达 100%。
中图分类号:S 682.1+9 文献标识码:B 文章编号:1001-0009(2008)05-0200-02
紫花地丁(Viola yedoensis)为堇菜科堇菜属多年生
草本植物。其开花早 、花期长 ,株型紧密 、低矮 ,是布置
花坛花境 、点缀草坪道路的良好材料。同时还具有抗烟
尘、抗污染、抗有毒有害气体等特点 ,因此是具有开发潜
力的地被植物。但目前紫花地丁还处于野生状态 ,现对
紫花地丁的组织培养进行了研究 ,为其进一步开发利用
提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料
试验在沈阳农业大学林学院组织培养实验室进行 ,
以沈阳农业大学植物园内野生紫花地丁种子播种所得
幼苗为试验材料。
1.2 试验方法
1.2.1 外植体的采集 待播种苗长出2片真叶时 ,切去
根部 ,用地上部分作外植体。
1.2.2 外植体的消毒 选取健壮无病的外植体 ,自来水
冲洗 3 ～ 4遍 ,冲洗干净后置于超净工作台上进行表面
灭菌 ,消毒液使用70%乙醇和 0.1%升汞溶液。表面灭
菌后用无菌水浸洗 4 ～ 5次 ,以尽可能洗掉残留在外植
体上的消毒液 ,每次 2 min以上 ,最后放在灭菌后的滤纸
上备用。
1.2.3 培养基的配置 以下所用培养基均含有蔗糖
3%,琼脂8 g/L ,pH 5.8。光照培养 ,每天光照 16 h ,光
强2 000 lx ,温度(25±2)℃。初代培养和继代培养:设 9
种处理 ,配方如下:MS;MS +NAA 0.1 mg/L;MS+
NAA 0.2 mg/L;MS+BA 1 mg/ L+NAA 0.1 mg/L;
MS+BA 1 mg/L+NAA 0.2 mg/ L;MS+BA 3 mg/L+
NAA 0.1 mg/L;MS+BA 3 mg/ L+NAA 0.2 mg/L;
MS+BA 1 mg/ L;MS+BA 3mg/ L。生根培养:设8种处
理 ,配方如下:1/2 MS +BA 0.1 mg/ L;1/2 MS+BA
0.1 mg/ L+AC 0.3 mg/L;1/2 MS+BA 0.2 mg/L;1/2
MS+BA 0.2 mg/L +AC 0.3 g/L;1/2 MS +BA
0.3 mg/ L;1/2 MS +BA 0.3 mg/ L +AC 0.3 g/ L;1/2
MS+BA 0.5 mg/L;1/2 MS +BA 0.5 mg/L +
AC 0.3 g/L。
1.3 试验结果调查
定期观察苗的生长情况 ,20 d后统计平均每株新展
叶数 、叶色及苗的生长状况。1个月后统计增殖倍数 、增
殖芽数 、平均每株分化芽数。定期观察根的发生时间 ,
统计生根率和平均根数。
增殖倍数=可见芽总数/接种时总芽数;平均每株
分化芽数=增殖芽总数/接种时总芽数;平均每株新展
叶数=新展叶总数/接种总苗数;生根率(%)=生根苗
数/接种的总苗数×100;平均根数(条)=总根数/生根
总苗数。
2 结果与分析
2.1 不同消毒时间对紫花地丁外植体消毒效果的影响
表1 不同消毒时间对紫花地丁外植体消毒效果的影响
70%酒精/ s 0.1%HgCl2/min 接种株数/个 污染数/个 污染率/ % 成活数/个 成活率/ %
15
15
15
15
30
30
30
30
45
45
45
45
60
60
60
60
2
4
6
8
2
4
6
8
2
4
6
8
2
4
6
8
30
30
30
30
30
30
30
30
30
30
30
30
30
30
30
30
26
20
10
7
26
17
8
3
21
15
9
0
18
7
5
0
86.7
66.7
33.3
23.3
86.7
56.7
16.7
10.0
70.0
50.0
30.0
0
60.0
23.3
16.7
0
28
29
28
14
30
29
25
10
26
23
20
9
20
13
7
4
93.3
96.7
93.3
46.7
100
96.7
83.3
33.3
86.7
76.7
66.7
30.0
66.7
43.3
23.3
13.3
由表 1可以看出 ,随着酒精和 HgCl2 消毒时间的增
加 ,外植体的污染率和成活率都降低;酒精处理 60 s ,
HgCl2 处理 8 min 时污染率为 0 ,但成活率最低为
200
北方园艺 2008(5):200 ～ 201 ·生物技术 ·
13.3%。酒精处理30 s ,HgCl2 处理2min时成活率高达
100%,但污染率为86.7%。综合考虑污染率和成活率 ,
酒精处理 30 s , HgCl2 处理 6 min 为最佳 ,污染率为
16.7%,成活率为 83.3%。
2.2 不同激素配比对紫花地丁生长及增殖培养的影响
表 2 不同激素配比对紫花地丁生长及增殖培养的影响
培养基 接种数/个 平均株高/cm 平均每株新展叶数/个 增殖芽数/个 增殖倍数 叶色 生长势
MS
MS+NAA 0.1
MS+NAA 0.2
MS+BA 1+NAA 0.1
MS+BA 1+NAA 0.2
MS+BA 3+NAA 0.1
MS+BA 3+NAA 0.2
MS+BA 1
MS+BA 3
50
50
50
50
50
50
50
50
50
5.7
6.3
6.5
5.5
5.4
4.6
5.0
3.5
3.3
6
5
3
6
4
4
5
4
4
23
30
35
93
129
342
254
156
166
1.46
1.60
1.70
2.78
2.86
7.84
6.08
4.12
4.32
浅绿
浅绿
浅绿
绿
绿
绿
绿
浅绿
黄
较弱
中等
强
强
强
强
强
较弱
最弱
由表 2可以看出 ,不同培养基中外植体均可形成不
定芽 ,且新叶展开数量差异不大 ,与激素配比关系不大。
不加激素有不定芽分化 ,但长势较弱 ,增殖倍数最小为
1.46。随着 BA浓度的增高 ,增殖倍数不断升高 ,但 BA
的浓度超过一定值时会抑制不定芽的生成。当BA浓度
为3 mg/L ,NAA浓度为 0.1 mg/ L 时增殖倍数达到最
大值 7.84。只加 BA时 ,外植体长势不强 ,且叶色偏浅
绿 ,甚至发黄。
2.3 不同培养基配方对紫花地丁生根生长的影响
表 3 不同培养基配方对紫花地丁生根生长的影响
培养基 接种数/个
生根株数
/株
生根率
/ %
平均生根数
/条
1/2 MS+BA 0.1
1/2 MS+BA 0.2
1/2 MS+BA 0.3
1/2 MS+BA 0.5
1/2 MS+BA 0.1+AC 0.3
1/2 MS+BA 0.2+AC 0.3
1/2 MS+BA 0.3+AC 0.3
1/2 MS+BA 0.5+AC 0.3
1/ 2 MS+AC 0.3
30
30
30
30
30
30
30
30
30
22
27
30
30
25
29
30
30
18
73.3
90
100
100
83.3
96.7
100
100
60
3
4
4
4.5
5
4.5
5
4
4
由表 3可以看出 ,其配方均可以分化出不定根 ,生
根率最低的也有 60%。当 BA浓度大于 0.3 mg/L 时 ,
生根率达到 100%。AC对平均生根数和根的长度影响
不大。由表 3 可以看出最佳生根培养基配方为
1/2 MS+BA 0.3 mg/ L+AC 0.3 g/L。
3 结论与讨论
3.1 结论
研究得出紫花地丁外植体用 70%酒精处理 30 s ,
0.1%HgCl2 处理6 min效果最佳 ,污染率为 16.7%,成
活率为 83.3%。最适宜紫花地丁生长和增殖的培养基
配方为 MS+BA 3 mg/ L+NAA 0.1 mg/L。最适宜紫
花地丁生根的培养基配方为 1/2 MS+BA 0.3 mg/L+
AC 0.3 g/L ,生根率达 100%,平均每株根的数目 5条左
右 ,根健壮 ,根毛比较丰富。
3.2 讨论
有研究表明 ,培养基中使用细胞分裂素和细胞生长
素对不定芽的诱导起着关键性的作用 ,BA与 IAA配合
使用效果优于单独使用 ,这与试验的研究结果相一致。
还有研究表明 ,BA对诱导生根的作用很大 ,但在研
究中加入不同浓度的BA虽然对紫花地丁生根影响并不
明显。在增殖过程中 ,9种增殖培养基均可诱导紫花地
丁产生不定根 ,甚至只加MS的培养基中也有发根现象。
原因可能由于紫花地丁本身就是一种生根能力较强的
植物。在试验中发现 , AC对诱导生根也有一定的促进
作用 ,加入 AC 的培养基较不加的生长快 ,健壮。同时
AC还具有吸附作用 ,吸附培养基中的有害物质 ,但 AC
也吸附营养物质 ,因此在使用AC时 ,要注意与激素的配
合使用。
参考文献
[ 1] 黄海帆,李萍.彩叶草的组织培养[ J] .植物生理学通讯 , 2003, 39(4):
339.
[ 2] 马成亮.紫花地丁的栽培及利用价值[ J] .特种经济动植物 ,2002(2):19.
[ 3] 谭文澄,戴策刚.观赏植物组织培养技术[ M] .北京:中国林业出版
社 ,1991.
Study on the Tissue Culture and Rapid Propagation Technique of the Viola yedoensis
FU Yin-dong1 , SUN Xiao-mei2 , YANG Hong-guang2 ,WANG Ya-bin2
(1.Landscape Department of Shenyang A rboretum , Liaoning , Shenyang 110163 , China;2.Shenyang Ag riculture University College of Fo r-
est , Liaoning , Shenyang 110161 , China)
Abstract:Selecting the vigorous and healthy stem top of Viola yedoensis as explants carried on the industrialized rapid
clonal propagation technology research.The results showed that plant hormone combination of MS+BA 3 mg/ L+NAA
0.1 mg/L was the best for callus induction and growth.1/2 MS+BA 0.3mg/L+AC 0.3 g/ L w as the best for rootage ,
rooting rate was 100%.
Keyword:Viola yedoensis;Explant;Tissue culture
201