全 文 ：第 1 7卷 第 4 期
1 9 8 6年 1 2 月
东 北 农 学 院 学 报
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黑龙江省蕃茄病毒病毒源类型的鉴定
郑品清 李桂英 李景富 李盛耸
(蔬菜育种教研室 )
蕃茄 病毒病的主要毒源类型是烟草花叶病毒
瓜花叶病毒 ( C M V ) , 占 2 . 1% ; 再次 为 T M V 和
在鉴别寄主上未表现症状的 占3 . 83 % 。
( T M V )
, 占 9 2 . 2 3% ; 其次丸升
C M V 混合感染类 型 , 占 1 . 74
蕃茄病毒病是世界性病害 , 在我国及我
省各地普遍危害严重 。 蕃茄病毒病的种类很
多 , K . W . S m i ht 鉴 定 已发现有 14 种 ,
日本主要有 T M V 、 C M V 和少量马 铃 薯 、
病毒 ( P V X ) 【` ’ 。 我国上海 、 南京 、 北京 、
西安 、 兰州 、 石家庄 、 广州等地 鉴 定 出 有
T M V
、
C M V
, 在个别地区有少 量 P V X 。
发生比例因地 区及栽培季节不 同而异 。 广州
以 C M V 为主 「幻 , 北京 、 兰州 、 石家庄等地
以 T M V 为主 . 上海 、 南京 〔 J ’西安等姚春蕃
茄以 T M V 为主 , 夏 蕃 茄 以 C M V 为 主 ,
北京地 区曾发现有少量的 P V X 。
我院于 1 9 8 1一 1 9 8 2 年鉴定出哈尔 滨 地
区蕃茄病毒病的主要毒源类型 是 T M V “ ’ 。
本文的目的是继续鉴定哈尔滨地区的其他毒
源类型及黑龙江省的主要毒源类型 , 为确定
我省蕃茄抗病育种 目标及生产防治 、 人工免
疫提出理论依据 。
材料 和 方 法
本文于 1 9 8 6 年 4 月 17 日收到。
自 1 9 8 3 年 7 月至 1 9 8 5 年 9月 , 夕二后在
黑龙江省的哈尔滨 (为主 ) 、 佳木斯 、 齐齐
哈尔 、 双鸭山 、 大 庆 、 鹤 岗 、 牡升 社 、 阿
城 、 海伦等 9 个市县 35 个点 、 42 个儿块共采
集病毒标样 2 87 个 。 在无虫温室或倒冬月人
工汁液摩擦法分期分别接种于心叶火: 、 是陀
罗 、 千 日红 、 蚕豆鉴别寄主植 物 〔` , _ }二 咯 3
株 ) , 根据所引起症状的特点 , 把类似的分
离物归类 , 每类选出 1 个分离物作劳病派鉴
定的代表株 。
试验用毒源植物 : 将经生物鉴兄认为是
T M V 的分离物连续于曼陀罗上进行 退 汾
离 5 次 , 然后繁殖在早粉 2号蕃茄上羚为毒
源植物 , 经生物鉴定认为 是 C M V 韵 尸 : 离
物接种于心叶烟上作为毒源植物 , t 各项测
定用 。
1 9 8 5 年 4 一 7 月 , 对初步鉴定共 御朴
的分离物进行寄主范围测定 ` 6 ’ , 按常视方法
第 4 期 郑品清等 : 黑龙江省蕃茄病毒病毒源类型的鉴定
接种 6科 20 种植物 。 物理抗性测定tJ 7, 按常
规测定钝化温度 、 稀释限点 、 体外保毒期 ,
每项测定用寄主植物 3 株 , 重 复 2一 3 次 ,
电镜观察病毒粒子形态 〔 ` , ” , : 于 1 9 8 3 年 n
月取蕃茄病毒病叶榨取汁液 , 适 当稀释后用
3%磷钨酸负染 5 分钟 , 置 L E M一 1 0 C 二 5
万倍电镜下观察病毒粒子形态 。 血 清 学 试
验 : ( 1) T M V 的提纯 , 按中国农科院 蔬 菜
研究所提供的方法进行 , 将所获 提 纯 液 在
75 1 G 分光光度计上扫描 , 观 察 核 蛋 白 曲
线 , 电镜 ( 5 万倍 ) 观察病毒粒子形态及回
接于心叶烟上观察枯斑的出现 。 ( 2) 抗血清
制备与应用 , 用己被确 定 的 T M V 提 纯 液
作免疫抗原 , 加等量不完全福氏 佐 剂 乳 化
后 , 在家兔后腿作肌肉注射 , 每次注射量为
2 毫升 , 每周 1 次 , 共 3 次 , 最后 1 次 20 天
后采用耳静脉采血 , 取抗血清 , 按试管沉淀
法测定效价 , 置 4℃冰箱中保存备用 。 用 琼
脂双扩散法进行抗血清测定 , 以 健 株 为 对
照 。
经初步鉴定为 C M V 的分离物 , 继续以
两种不同来源的 C M V 抗血 清 (农 牧 渔 业
部植检所及东北农学院张明厚教 投 自美 国
A r k a n s a : 州立大学带来 ) 。
表 1 . 蕃茄病毒病分离物在
鉴别寄主上 的症状
鉴别寄主上的症状
分离物
心 叶烟 曼陀罗 蚕 豆 千日红
1 L N L N O
11 蓝1 5五生* L N
H L L N / M L N / M L N
I V 0 0 0
L N / S M
S M
L N / S M
O
注 . L N一局部枯斑 , S M一系统 花叶 , 接 种 叶 /上 位
叶 , O一无症状 , S M *一叶 片变厚 , 色浓绿稍狭 窄 , 花 叶
不明显 。
2
. 分离物 8弓一 106 和 8 3一 6仑病源鉴定
的结 果
表 2 . 分离物83 一 1 06 在鉴别寄主植物
上 的表刀乙症状 ( 1 9 8 5 )
能染不侵统染系侵
科名一 ~ 一~ 一 , ~ ~ ~一 甲侧 , 望一 , r 二 , , ~ ,一 嗯一症 状种 ’ 名 局部枯斑
蔡科
试 验 结 果
1
. 生物鉴定结果
心叶烟 ( N ie o t ia n a g lu t i n o s a ) +
曼陀罗 ( D a t u r a s t r a m o n i。皿 ) +
矮牵牛 ( P e t u r n i a 卜丁b : i d a ) +
亮黄烟 ( B r ig五t y e l lo w ) +
蕃 茄 ( L了e o p e r s ; e u m e s e u l e n t u 扭 )
三生烟 ( N . t a b a e e lt nr s a m o u n )
黄苗仿 〔N . t a ba e c :: nr )
洋酸浆 ( P h y s o li s f to r id n a )
辣 椒 ( C a p s ie o m a 且 n u 二 ` )
一豆见菜绿可蚕
豆科
瓜黄南葫芦$.1
克科一花旋
根据所采到的 2 37 个病毒病症标样在鉴
别寄主上的症状列为 4 类情况 (表 1) 。
由表 1 看出 , 分离物 I被鉴定为烟草花
叶病毒 ( T M V ) , 分离物 l 被鉴定为黄瓜花
叶 病毒 ( C M V ) , 分离 物 l 为 T M V 和
C M V 混合感染 , 分离物万在各种鉴别寄 主
上未出现症状 , 可 能由于采到的病叶由生理
因素或非汁液接种的病毒所引起 。 于分离物
I 中选出 83 一 10 6 , 作为 T M V 的代表分 离
物 , 于分离物 卫中选出 83 一 6 6 , 作为 C M V
的代表分离物 , 供各项测定用 。
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( C
肚 e u r b主亡a p e : o )
一 - -一 _ _ _千 日红 ( G o 卫p卜r o n a g , o性o s a ) +
牵牛花 ( P l a r b i t i s n i l e卜e i s万)
东 北 农 学 院 学 报 第 7 1卷
( ) 1分离物 83 一 16 0(经生物鉴定后 初
步认为是 T M V )
① 寄生范围测定的结果 : 在 6 科 2 0种
鉴定寄主植物上的症状反应有局部枯斑 、 系
统花叶及不能侵染等 3 种类型 (表 )2 。
② 物理抗性测定 : 稀 释 限点 1扩 7一
0 1一 “ , 钝化温度 8 5一 9 5 oC , 体外保毒期 5 个
月 (一般室温 ) 。
③ 在 5 万倍电镜下观察到病毒粒子为
3 0 0~ 3 2 0 X 18 , , m
, 是 T M V (图 1 ) 。
④ 血清学试验 : 1 9 8 4 午用琼 脂 双 扩
散法测定分离物 83 一 1 06 等 (6 、 7 、 8) 与 T M V
抗血清 ( T ) 之间有明显的沉淀线 , 说明其
亲缘关系近 ; 而健株对照 ( O ) 与 T M V 抗
血清 ( T ) 之间则无沉淀线 , 说 明无亲缘关
系 (图 2 ) 。
图 1 . 蕃茄烟草花叶病毒 ( T M V ) 病毒拉子
T MV ( x 1 0 0
, 0 0 0 ) , 粒体长 5 0 0~ 3 2 0 x i s n m
图 2 . 蕃茄烟草花叶病毒 ( T M V )
琼 脂双扩散 。
T 二 T M V抗 血清 , 6 、 7、 s = TM V毒 源 ,
O
= 健株 (对照 ) 。
图 3 . 暮茄黄瓜花叶病毒 ( C M V )
琼 脂双扩散
C
= C M V执血清 , 1 、 2 、 3 、 4、 5 = C M V毒源 ,
6 二 健 株 (对照 ) .
第 4 期 郑品清等 : 黑龙江省蕃茄病毒病毒源类型的鉴定 38 9
上述寄主范围 、 汁液抗性 、 抗血清反应
及病毒粒体形态的各项测定结果 , 与国内外
报道的 T M V 特性相似 “ 一 “ ’ , 因此被鉴定为
T M V
。
( 2 ) 分离物 8 3一 6 6
经生物鉴定及两种来 自国内外的 C M V
抗血清测定结果 , 认为分离 物 83 一6 ( 1 、
2
、
3
、
4
、
5 ) 是 C M V (图 3 ) 。
3
. 黑龙江省蕃茄病毒病的种类和数量
分布情况
从全省各地区所采到 的 28 7 个 病 毒 标
样 , 经上述方法鉴定 , 可分为两种病毒类型
(表 3 ) 。
表 3 . 蕃茄病毒病的种类和数量分布表 ( 1 9 8 3~ 1 9 8 5 )
毒 源 种 类
采样时间 地 点 标 样 数 T MV C M V T M V + C MV 无 症 状
标样数 (% ) 标样数 (% 》 标样数 (% ) 标样数 (% )
,土o八U011 0 5 9 4 8 9
。
5 2 0
。
9 5 0
.
9 5 8 5 7
nU八énō八“nùnù,上孟二
OU品丹19 8 3
哈 尔 滨
齐齐 哈尔
双 鸭 山
佳 木 斯
合 计 1 2 5 1 1 4 匀1 . 2 0 0 。 8 0 0 。 8 0 7 。 2 0
哈 尔 滨
大 庆
阿 城
合 计
8 7 8 1 9 3
。
1 0 3
。
4难 1 。 1 5 2 。 3
1 9 8 4
1 0 0
1 0 0
10 0 9 4 9 4
.
0 0
哈 尔 滨
鹤 岗
牡 丹 江
佳 木 斯
齐齐哈尔
海 伦
合 计
1 4 9 6 4
。 2 9 2 1 4
.
2 9 2
。
4 2
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门引.énU内们ùn nóōénón,二`1. 1,111
1 9 8 5 1 9
9
1 9
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62 5 7 9 1
。
9 4 3
.
2 2 4
.
8 3
总计 2 87 2 6 5 9 2 。 3 3 6 2 。 1 0 7 4 1 1 3 . 8 3
由上表看出 , 被鉴定为烟草 花 叶 病 毒
( T M V ) 的分离物在省内 9 个地区都 有 分
布 , 占总标样的 92 . 23 % ; 分离物黄瓜花 叶
病毒 ( C M V ) 分布于哈尔滨 , 占哈尔 滨 标
样的 2 . 9% , 占省内总标样的 2 . 1% ; 被鉴定
为 T M V 和 C M v 混合感染的 分 布 于 哈 尔
滨 , 占哈尔滨标样 的 2 . 4% , 占总 标 样 的
1
.
7% ; 无症状的 (指在鉴别寄主植 物 上 )
占标样的 3 . 83 % 。 本试验为我省蕃茄抗病毒
病育种确定了育种目标 , 主要是 抗 T M V ,
但也要兼抗 C M V 。 培育成多抗性品种 , 可
以解决蕃茄病毒病在生产上 的危害 。
本文承蒙张明厚教授审阅 , 特此致谢 。
3 90 东 北 农 学 院 学 报 第 17 卷
参 考 文 献
〔1 〕 小 室康雄 : 野莱O 巾才 沙久 , 诚文堂新光社 , 1 9 7 3 ,
4 8一4 9 、 6 0 、 1 7 6 0
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ID E N T I F I C A
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IO N O F P A T H O T Y P E S O F
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p r o v i n e e b e t w e e n 1 9 8 3一 1 9 8 5 . P a t h o t y p e s w e r e i d e n t i f i e d b y m e a n s o f b i o a s s a y ,
e l e e t r o n i e m i e r o s e o p i e a l o b s e r v a t i o n
, s e r o l o g i e a l t e s t w i t il m i e r o
一 p r e e i p i t a t s o n
g e l d o u b l e d i f f u s i o n
,
m e a s u r e m e n t o f s o m e p h y s i e a l p r o p e r t i e s
, a n d h o s t r a n g e
d e t e r m i n a t i o n
.
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v i r u s ) 2
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a n d C M V
, a n d 5
.
5 3%
s h o w e d n o s y m p t o m s o n t h e d i f f e r e n t i a l h o s t s
.
I t w a s e o n e l u d e d f r o m o u r s t u d i e s t h a t t h e P r e d o m i n a n t P a t h o t y p e o f t o l n o t o
v i r u s d i s e a s e i n H e i l o n g ji a n g p r o v i n e e w a s T M V
.