全 文 ：檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
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［责任编辑 蔡仲德］
［收稿日期］ 20101026(002)
［基金项目］ 国家 973 计划中医基础理论专项(2009CB522800;2009CB522805)
［通讯作者］ * 李向日，研究方向:中药炮制、质量控制及活性成分，Tel:010-84738616，E-mail:lixiangri @ sina. com;* 李飞，Tel:010-
84738616，E-mail:lf668@ sina. com
药用植物乌头净制机制研究
吕永磊，李珊，李向日 * ，李飞 *
(北京中医药大学中药学院，北京 100102)
［摘要］ 目的:研究药用植物乌头净制的机制。方法:以滴定法测定总生物碱的含量;分光光度法测定酯型生物碱的含
量;高效液相色谱法测定 3 种双酯型生物碱的含量;苯酚-硫酸分光光度法测定多糖的含量。结果:母根、子根、须根总生物碱
含量分别为 11. 20，11. 70，18. 40 mg·g － 1;酯型生物碱含量分别为 4. 41，3. 33，8. 24 mg·g － 1;3 种双酯型生物碱含量之和分别为
0. 90，1. 07，2. 18 mg·g － 1;多糖含量分别为 60. 60，98. 20，61. 80 mg·g － 1。结论:母根、子根、须根主要化学成分类别没有明显区
别，但含量有差异;须根的 3 种双酯型生物碱含量之和是母根的 2 倍多，《中国药典》规定除去须根具有一定的科学性。
［关键词］ 乌头;净制;生物碱;多糖
［中图分类号］ R284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2011)07-0050-04
Study on Cleaning Mechanism of Aconitum carmichaeli
LV Yong-lei，LI Shan，LI Xiang-ri* ，LI Fei*
(School of Chinese Pharmacy，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100102，China)
［Abstract］ Objective:To study the cleaning mechanism of Aconitum carmichaeli. Method:Titration
method was used to determine the content of total alkaloids;UV was used to determine the content of ester-type
alkaloids;HPLC was used to determine the content of three kind of diester alkaloids namely aconitine，
hypaconitine，mesaconition;sulfuric-phenol method was used to determine the content of polysaccharides. Result:
The content of total alkaloids in parent root，daughter root，rootlet of Aconitum carmichaeli was 11. 20，11. 70，
18. 40 mg·g － 1 respectively;the content of ester-type alkaloids was 4. 41，3. 33，8. 24 mg·g － 1 respectively;the
content of three kind of diester alkaloids was 0. 90，1. 07，2. 18 mg·g － 1 respectively;the content of polysaccharides
was 60. 60，98. 20，61. 80 mg·g － 1 respectively. Conclusion:The categories of main chemical compositions of
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第 17 卷第 7 期
2011 年 4 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 17，No. 7
Apr.，2011
parent root，daughter root and rootlet have no obvious difference，but the content of them is different. The sum of
content of three kind of diester alkaloids of rootlet is more than twice that of parent root. Cleaning has scientific
value.
［Key words］ Aconitum carmichaeli;cleaning;alkaloid;polysaccharide
《中国药典》2010 年版规定川乌为毛茛科植物
乌头 Aconitum carmichaeli Debx.的干燥母根，附子为
毛茛科植物乌头 A. carmichaeli Debx. 的子根的加工
品，川乌、附子净制时都需除去须根。生物碱是川
乌、附子的主要有效成分，也是毒性成分，其中双酯
型生物碱是其主要毒性成分。双酯型生物碱性质不
稳定，易被水解，经一级水解失去一分子醋酸生成相
应低毒的单酯型生物碱，再进一步水解生成几乎无
毒的胺醇型生物碱。多糖是川乌、附子的有效成分。
据文献报道，川乌多糖有降血糖作用［1］，附子多糖有
显著的抑瘤、抗过氧化损伤、提高免疫力的作用［2-3］。
本研究将母根、子根、须根的总生物碱、酯型生物碱、
3 种双酯型生物碱及多糖的含量进行比较，为乌头
净制机制研究提供依据。
1 仪器和试药
1. 1 仪器 TCO-250 型超声波清洗器(北京医疗设
备二厂);方型调节式中药切片机(中国温岭市大海
药材器械厂);TU-1810 紫外-可见分光光度仪(北京
普析通用仪器有限公司);Agilent 1100 高效液相色
谱仪(四元泵、VWD 检测器)。
1. 2 试药 乌头 A. carmichaeli 为江油太平镇 GAP
基地产品，2009 年 7 月 2 号采收，经北京中医药大学
生药系陈玉婷教授鉴定。采集带泥乌头7 940 g，经
净制，分离不同部位，得鲜母根 1 132 g、鲜子根
4 345 g，共占带泥乌头 68. 97%。母根、子根、须根
经切片，阴干，得干燥品母根 241 g、子根1 601 g、须
根 180 g。
乌头碱(批号 110720-200410)、新乌头碱(批号
110798-200404)、次乌头碱(批号 110799-200404)、
D-葡萄糖(Glc，批号 110833-200503)购自中国药品
生物制品检定所;乙腈为色谱纯(美国 Fisher 公司);
水为高纯水;其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 总生物碱的含量测定［4］ 精密称定母根、子
根、须根中粉各 4 g，分别置具塞锥形瓶中，分别加乙
醚-氯仿(3∶ 1)50 mL 与氨试液 4 mL，密塞，摇匀，放
置过夜，滤过，药渣加乙醚-氯仿(3 ∶ 1)50 mL，超声 1
h，滤过，药渣再用乙醚-氯仿(3∶ 1)洗涤 3 次，每次 15
mL，滤过，洗液与滤液合并，减压蒸干。残渣加乙醚-
氯仿(3∶ 1)5 mL 使溶解并蒸干，再加乙醇 5 mL 使溶
解，精密加入硫酸滴定液(0. 01 mol·L － 1)15 mL、水
15 mL 与甲基红指示液 3 滴，用氢氧化钠滴定液
(0. 02 mol·L － 1)滴定至黄色。每 1 mL 硫酸滴定液
(0. 01 mol·L － 1)相当于 12. 9 mg 的乌头碱(C34 H47
NO11)，结果见表 1。
表 1 母根、子根、须根生物碱含量测定(n = 3) mg·g － 1
样品 新乌头碱 乌头碱 次乌头碱 三种双酯型生物碱总和 酯型生物碱 总生物碱
母根 0. 36 0. 09 0. 45 0. 90 4. 41 11. 20
子根 0. 32 0. 10 0. 65 1. 07 3. 33 11. 70
须根 0. 45 0. 11 1. 62 2. 18 8. 24 18. 40
注:3 种双酯型生物碱含量总和为新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的含量之和。
2. 2 酯型生物碱的含量测定［5］ 精密称定乌头碱
对照品 22. 54 mg，置 10 mL 量瓶中，加无水乙醇溶解
并稀释至刻度。精密量取对照品溶液 0. 1，0. 5，1. 0，
1. 5，2. 0，2. 5 mL，分别置 25 mL 量瓶，均加无水乙醇
使成 2. 5 mL，各精密加入碱性盐酸羟胺试液 1. 5
mL，摇匀，在 63 ℃水浴中保温 10 min，放冷，加高氯
酸铁试液 13 mL，摇匀，放置 5 min，精密加入高氯酸
试液 8 mL，用高氯酸铁试液稀释至刻度，摇匀，放置
15 min，以第 1 份为空白，照分光光度法 2005 年版
《中国药典》(附录ⅤB)在 520 nm 的波长处测定吸
收度，以吸收度为纵坐标，含量(mg)为横坐标，绘制
标准曲线。线性回归方程 Y = 2. 027 5X － 0. 005 7
(r = 0. 999 1)，乌头碱在 0. 01 ～ 0. 23 mg 线性关系良
好。
精密称定母根、子根粗粉各 2 g，须根粗粉 1 g，
分别置具塞锥形瓶中，分别加乙醚 50 mL 与氨试液
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吕永磊，等:药用植物乌头净制机制研究
4 mL，密塞，摇匀，放置过夜，滤过，药渣加乙醚 50
mL，连续振摇 1 h，滤过，药渣再用乙醚洗涤 3 次，每
次 15 mL，滤过，洗液与滤液合并，减压回收溶剂。
残渣加氯仿 2 mL 使溶解，转入分液漏斗中，用氯仿
3 mL 分次洗涤容器，洗液并入分液漏斗中，用 0. 05
mol·L － 1硫酸溶液提取 3 次，每次 5 mL，酸液依次用
同一氯仿 10 mL 振摇洗涤，合并酸液，加氨试液调节
pH 至 9，再用氯仿提取 3 次，每次 10 mL，氯仿液依
次用同一水 20 mL 振摇洗涤，合并氯仿液，减压蒸
干。残渣加无水乙醇适量使溶解，转入 5 mL 量瓶
中，用无水乙醇分次洗涤容器，洗涤液并入量瓶中，
再加无水乙醇稀释至刻度，摇匀。精密量取上述溶
液及无水乙醇空白溶液各 2. 5 mL，分别置 50 mL 试
管中，各精密加入碱性盐酸羟胺试液 1. 5 mL，摇匀，
在 63 ℃水浴中保温 10 min，放冷，加高氯酸铁试液
13 mL，摇匀，放置 5 min，精密加入高氯酸试液 8
mL，用高氯酸铁试液稀释至刻度，摇匀，放置 15
min，以第 1 份为空白，照分光光度法 2005 年版《中
国药典》(附录ⅤB)在 520 nm 的波长处测定吸收度
(表 1)。
2. 3 3 种双酯型生物碱的含量测定
2. 3. 1 供试品溶液的制备 精密称定母根、子根、
须根过 80 目粉末各 1 g，按 2010 年版《中国药典》川
乌项下含量测定方法制备供试品溶液。
2. 3. 2 3 种双酯型生物碱检测方法 按文献法
检测［6］。
2. 3. 3 3 种双酯型生物碱的含量测定 分别精密
量取各供试品溶液 10 μL，按 2. 3. 2 项下方法测定，
色谱图见图 1，按外标法计算各供试品溶液中新乌
头碱、乌头碱、次乌头碱的含量(表 1)。
2. 4 多糖的含量测定
2. 4. 1 供试品溶液的制备 精密称定子根粗粉 0. 2
g，加入 80%乙醇 50 mL 回流提取 3 h，滤渣挥尽乙醇
后，60 mL 水回流提取 3 次，每次 1 h，过滤，合并水
提液并浓缩，加乙醇使醇含量至 80%，于 4 ℃冰箱
中过夜，过滤，得粗多糖。将粗多糖溶于水，定容至
250 mL，作为供试品溶液。
2. 4. 2 标准曲线的绘制 精密称定葡萄糖对照品
9. 336 mg，定容至 100 mL。精密量取溶液 1. 0，2. 0，
4. 0，8. 0，16. 0，25. 0 mL，分别置于 50 mL 量瓶中，稀
释至刻度，摇匀，配成系列标准溶液。精密量取 1
mL 系列标准溶液于具塞试管中，以蒸馏水作空白，
图 1 母根、子根、须根 HPLC
A. 3 种双酯型生物碱对照品;B.母根;C.子根;D.须根
19. 新乌头碱;21. 乌头碱;23. 次乌头碱
分别加入 5%苯酚溶液 1 mL，浓硫酸 6 mL，摇匀，放
置 5 min，沸水加热 15 min，冷至室温，于 484 nm 处
测定吸收度。得回归方程 Y = 69. 386X － 0. 010 1，
r = 0. 999 1，葡萄糖在0. 233 4 ～ 11. 67 mg·L － 1线性
关系良好。
2. 4. 3 精密度试验 精密量取葡萄糖标准溶液 1
mL，按 2. 4. 2 项下方法显色并测定吸收度，平行测
定 6 份，结果 RSD 1. 04%，表明仪器精密度良好。
2. 4. 4 稳定性试验 按 2. 4. 1 项下方法制备 1 份
供试品溶液。精密量取供试品溶液 1 mL，置具塞试
管中，照 2. 4. 2 项下方法显色并测定吸收度，每隔 1
h 测定 1 次，连续 6 h，结果 RSD 1. 21%，表明 6 h 内
显色稳定。
2. 4. 5 重复性试验 按 2. 4. 1 项下方法制备 6 份
供试品溶液。精密量取各供试品溶液 1 mL，分别置
于具塞试管中，照 2. 4. 2 项下方法显色并测定吸收
度，结果 RSD 3. 01%，表明该方法重复性良好。
2. 4. 6 加样回收率试验 精密称定 6 份子根粗粉
各 0. 1 g，按 2. 4. 1 项下方法制备供试品溶液，加入
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中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 17，No. 7
Apr.，2011
葡萄糖对照品 17 mg，照 2. 4. 2 项下条件显色并测定
吸收 度，计 算 回 收 率，结 果 平 均 加 样 回 收 率
101. 02%，RSD 4. 35%(n = 6)。
2. 4. 7 多糖含量的测定 分别精密称定母根粗粉
0. 5 g、子根粗粉 0. 2 g、须根粗粉 0. 5 g，按 2. 4. 1 项
下方法制备供试品溶液和 2. 4. 2 项下方法显色并测
定吸收度，由回归方程计算供试品溶液中葡萄糖浓
度，按含量(%)=(CD /W)× 100%计算供试品中多
糖的含量。式中:C 为供试品溶液中葡萄糖的浓度，
D 为稀释倍数，W 为供试品干重质量。结果见表 2。
表 2 母根、子根、须根多糖质量分数(n = 2)
样品 多糖含量 /mg·g － 1 RSD /%
母根 60. 60 3. 17
子根 98. 20 2. 44
须根 61. 80 1. 31
3 讨论
乌头总生物碱成分种类多样，包括双酯型生物
碱、单酯型生物碱、胺醇型生物碱、脂碱等。这些生
物碱的毒性强弱均不同，甚至相差较远，其中双酯型
生物碱是剧毒成分，单酯型生物碱毒性较小，仅为双
酯型生物碱的 1 /200 ～ 1 /500［7］，胺醇型生物碱几乎
无毒。本课题组还做了母根、子根、须根的急性毒性
实验，实验结果表明子根毒性是母根的 0. 94，而子
根 3 种双酯型生物碱的含量是母根的 1. 19 倍。3 种
双酯型生物碱虽然是乌头的主要毒性成分，但并不
等同于样品毒性。在对乌头的成分和毒性尚未研究
清楚前，仅仅以 3 种双酯型生物碱含量之和来衡量
其毒性，并以此作为川乌和附子的质量控制指标是
不够完善的。现阶段仍需结合总生物碱含量、酯型
生物碱含量等来作为川乌、附子的质量控制指标，确
保临床用药的安全有效。
川乌性味，功效与附子相近，可散在表之风邪逐
在里之寒湿，但补阳之力不及附子，而祛风通痹之功
较附子为胜，因此古有“附子逐寒，乌头祛风”之
说［8］。母根、子根虽同来源于乌头，但是经分离分别
加工成川乌、附子。子根总生物碱、酯型生物碱、3
种双酯型生物碱含量分别是母根的 1. 04，0. 75，1. 19
倍，高效液相色谱图中母根主要色谱峰有 23 个，子
根主要色谱峰有 11 个，母根色谱图中包含了子根的
11 个色谱峰，子根多糖含量是母根的 1. 62 倍。川
乌、附子功效的不同，是因母根、子根中生物碱和多
糖的差别产生的，还是因炮制方法的不同导致的，有
待于炮制后结合药理进一步研究。
须根总生物碱、酯型生物碱、3 种双酯型生物碱
含量分别是母根的 1. 64，1. 88，2. 41 倍，高效液相色
谱图中须根主要色谱峰有 15 个，母根都含有须根的
15 个色谱峰，须根的多糖含量是母根的 1. 02 倍，其
毒性是母根的 1. 46 倍。须根的多糖含量和母根相
近，但生物碱含量和毒性都高于母根，因此《中国药
典》2010 年版规定除去须根具有一定的科学性。
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