全 文 ：大花萱草‘盛夏红酒’组织培养技术研究
李金霞1，2，储博彦1，2，尹新彦1，2，田银萍1，赵玉芬1，2
(1．河北省林业科学研究院，河北石家庄 050061;2．河北省林木良种工程技术研究中心，河北石家庄 050061)
摘要 ［目的］研究大花萱草‘盛夏红酒’的组织培养技术。［方法］以‘盛夏红酒’的健壮花梗为外植体，研究不同激素配比及浓度对外
植体愈伤组织诱导和生根的影响。［结果］0． 1%升汞消毒 10 min为最佳外植体消毒时间，成活率达 82． 22%;愈伤组织诱导的最佳培养
基为 MS +2． 0 mg /L 6-BA +0． 2 mg /L IBA;最佳增殖培养基为MS +1． 5 mg /L 6-BA +0． 2 mg /L IBA，繁殖系数达 4． 9;最佳生根培养基为
1 /2MS +0． 5 mg /L NAA，生根率达 92． 5%;最适移栽基质为蛭石∶草炭(V/V)=1∶ 1，苗成活率可达 95%。［结论］该研究为‘盛夏红酒’的
工厂化育苗提供了理论依据。
关键词 ‘盛夏红酒’;花梗;培养基
中图分类号 S682． 1 + 9 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611(2013)11 －04727 －02
Study on Tissue Culture Technique of Hemerocallis middendorffii‘Summer Wine’
LI Jin-xia et al (Hebei Academy of Forestry Science，Shijiazhuang，Hebei 050061)
Abstract ［Objective］ The paper was to study the tissue culture technique of Hemerocallis middendorffii‘Summer Wine’． ［Method］ The
effects of hormones with different ratios and concentrations on callus induction and rooting were studied by using the robust pedicel of‘Summer
Wine’as explants． ［Ｒesult］0． 1% HgCl2 disinfection for 10 min was the best sterilization time of explants，and the survival rate was up to
82． 22% ． The best medium for callus induction was MS +2． 0 mg /L 6-BA +0． 2 mg /L IBA． The best medium for proliferation was MS +1． 5 mg /
L 6-BA +0． 2 mg /L IBA，and the propagation coefficient was 4． 9． The best rooting medium was 1 /2MS +0． 5 mg /L NAA，and the rooting rate
was up to 92． 5% ． The suitable transplanting medium was vermiculite:turf (V/V)=1∶ 1，and the seedlings survival rate reached 95% ． ［Con-
clusion］The study provided a theoretical basis for the industrial seedling of H． middendorffii‘Summer Wine’．
Key words H． middendorffii‘Summer Wine’;Pedicel;Medium
基金项目 河北省林业科学技术研究项目(1208432)。
作者简介 李金霞(1978 － )，女，辽宁朝阳人，工程师，从事园林植物与
生物质能源树种的开发利用研究，E-mail:lijinxia299@ 163．
com。
收稿日期 2013-03-26
大花萱草(Hemerocallis middendorffii Traut v． et Mey)是百
合科(Liliaceae)萱草属(Hemerocallis)多年生宿根草本植物。
其花姿优美、花色鲜艳、花期长、耐寒、耐旱，融观叶与观花于
一体，是优良的园林绿地宿根花卉［1］。
大花萱草‘盛夏红酒’株高 60 ～ 70 cm，叶绿色，叶长 50
～60 cm，叶宽 3 cm，花红色，花朵硕大，花径达 11 ～12 cm，花
期 6月上旬至 8 月上旬。其特点是花大、花色艳丽，具有抗
寒、抗旱、抗病虫害、耐盐碱、花期长和绿期长等优点，是理想
的观花赏叶植物和优良的园林绿化材料。但‘盛夏红酒’自
然结实率极低，目前生产中采用的分株繁殖法繁殖率低，难
以满足市场需求。而采用组织培养繁殖，不仅可提高繁殖
倍数，而且可打破季节局限，加快繁殖速度，实现工厂化育
苗［2 －7］。该试验探索了利用组织培养技术繁育大花萱草‘盛
夏红酒’的方法和技术，旨在为其工厂化育苗提供理论依据。
1 材料与方法
1． 1 材料 2011年 7月 20日，以大花萱草品种‘盛夏红酒’
的健壮花梗为外植体。将采取的健壮花梗切成 1 ～ 3 cm 的
留芽小段，先用洗衣粉清洗材料，再用自来水冲洗 30 min后，
在超净工作台上用 75%酒精消毒 30 s，无菌水冲洗 4 次，再
用 0． 1%升汞分别消毒 8、9、10、11 min，无菌水冲洗 5 次，整
个消毒过程不断震荡消毒液。将消毒好的外植体材料放入
启动培养基里诱导不定芽。
1． 2 方法
1． 2． 1 初代培养。将外植体分别接种至 4 种添加不同浓度
激素的培养基上:①MS +6-BA 1． 0 mg /L + IBA 0． 2 mg /L;②
MS +6-BA 1． 5 mg /L + IBA 0． 2 mg /L;③MS +6-BA 2． 0 mg /L
+ IBA 0． 2 mg /L;④MS +6-BA 2． 5 mg /L + IBA 0． 2 mg /L，每
个处理 10瓶，每瓶 1 个外植体，重复 3 次。以 MS为基本培
养基，添加白砂糖 30 g /L，琼脂 6 g /L，pH值调至 5． 8，培养温
度 23 ～25 ℃，空气相对湿度控制在 40% ～ 60%，光照强度
1 000 ～2 000 lx，光照时数 12 ～ 14 h /d。培养一定时间后调
查污染情况和统计愈伤组织诱导情况。
1． 2． 2 增殖培养。将诱导出的‘盛夏红酒’不定芽接于增殖
培养基上，试验设3个处理:a:MS +6-BA1． 5 mg /L + IBA 0． 2
mg /L;b:MS +6-BA 2． 0 mg /L + IBA 0． 2 mg /L;c:MS + 6-BA
2． 5 mg /L + IBA 0． 2 mg /L，通过调查繁殖系数及抽生不定芽
的质量来确定最佳生长调节剂的浓度配方。
1． 2． 3 生根培养。将生长健壮的试管苗转接至附加不同浓
度 NAA(0． 1、0． 3、0． 5、0． 7 mg /L)的 1 /2MS培养基上，25 d后
调查生根率、生根条数及根长度。
1． 2． 4 炼苗和移栽。当生根苗长高至 3 cm 左右时，将三角
瓶封口膜逐渐打开，炼苗 2 d，取出小苗，洗净根部残留的培
养基，移栽至灭过菌的基质中:①草炭;②蛭石;③蛭石 +草
炭(体积比 1∶ 1)，塑料薄膜覆盖保湿，10 d后揭膜，20 d后调
查移栽成活率。
1． 2． 5 统计分析。试验数据采用 DPS 处理软件处理，并进
行显著性测验。
2 结果与分析
2． 1 不同升汞消毒时间对外植体接种的影响 由表 1 可看
出，‘盛夏红酒’外植体最适宜的消毒时间为 10 min，此时外
植体成活率最高，且显著地高于其他 3 个处理，达 82． 22%。
安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2013，41(11):4727 － 4728 责任编辑 朱琼琼 责任校对 况玲玲
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2013.11.144
随着消毒时间的增加，外植体污染率降低，成活率升高，当消
毒时间为 11 min 时，成活率开始降低，为 73． 33%。
表 1 不同消毒时间对‘盛夏红酒’成活率的影响
消毒时间
min
处理
瓶数
污染数
个
污染率
%
成活数
个
成活率
%
8 45 21 46． 67 a 21 46． 67 c
9 45 16 35． 56 b 27 60． 00 d
10 45 8 17． 78 c 37 82． 22 a
11 45 9 20． 00 c 33 73． 33 b
注:同列不同小写字母表示差异显著(P ＜0． 05)，下同。
2． 2 不同浓度 6-BA对‘盛夏红酒’愈伤诱导的影响 由表
2可看出，‘盛夏红酒’在③号培养基上愈伤组织诱导率显著
高于其他 3 种培养基，愈伤组织诱导率最高，达 57． 14%。
①、②和④ 3 种培养基的愈伤组织诱导率差异不显著。因
此，‘盛夏红酒’初代培养最佳培养基为 MS + 6-BA 2． 0 mg /L
+ IBA 0． 2 mg /L。
表 2 不同培养基对‘盛夏红酒’愈伤诱导的影响
培养基
编号
接种数
个
成活数
个
愈伤块
数∥块
愈伤组织
诱导率∥%
① 30 22 7 31． 82 b
② 30 19 6 31． 57 b
③ 30 21 12 57． 14 a
④ 30 18 8 44． 44 b
2． 3 不同培养基对‘盛夏红酒’增殖的影响 将诱导出的愈
伤组织转入含不同激素配比的继代培养基中，1周后，淡黄色
的愈伤组织逐渐变绿，开始产生许多新生芽点。由表 3 可
知，‘盛夏红酒’在MS +6-BA 1． 5 mg /L + IBA 0． 2 mg /L培养
基上的繁殖系数最高，达 4． 9，且芽体健壮。因此确定 MS +
6-BA 1． 5 mg /L + IBA 0． 2 mg /L为最佳的增殖培养基。
表 3 不同浓度生长调节剂对‘盛夏红酒’继代培养的影响
增殖培养基 繁殖系数 不定芽生长状况
MS +6-BA 1． 5 mg /L + IBA 0． 2 mg /L 4． 9 叶翠绿，较健壮
MS +6-BA 2． 0 mg /L + IBA 0． 2 mg /L 3． 5 叶翠绿，苗弱
MS +6-BA 2． 5 mg /L + IBA 0． 2 mg /L 3． 0 叶翠绿，苗细，弱
2． 4 生根培养 从表 4可看出，NAA 0． 5 mg /L为‘盛夏红
酒’最适生根浓度，此时生根率、平均根数和平均根长度最
高，分别达 92． 5%、3． 35 条、3． 75 cm。当 NAA 的浓度超过
0． 5 mg /L时，生根率降低，因此最佳生根培养基为 1 /2MS +
NAA 0． 5 mg /L。
表 4 附加不同浓度生长调节剂对‘盛夏红酒’生根的影响
生根培
养基
接种数
个
生根
株数
条
生根率
%
每苗平
均根数
条
平均根
长度
cm
1 /2MS + NAA 0． 1 mg /L 80 60 75． 0 b 2． 45 3． 14
1 /2MS + NAA 0． 3 mg /L 80 62 77． 5 b 2． 87 3． 35
1 /2MS + NAA 0． 5 mg /L 80 74 92． 5 a 3． 35 3． 75
1 /2MS + NAA 0． 7 mg /L 80 56 70． 0 b 2． 55 2． 30
2． 5 炼苗和移栽 表 5结果表明，移栽苗在蛭石∶草炭体积
比1∶ 1基质中的成活率高于草炭和蛭石处理，达 95%，因此蛭
石∶草炭 =1∶ 1是最佳的移栽基质。
表 5 不同基质类型对‘盛夏红酒’出苗的影响
基质类型 出苗率∥% 死亡率∥%
草炭 90 10
蛭石 91 9
蛭石∶草炭 = 1∶ 1 95 5
3 结论
试验以大花萱草‘盛夏红酒’健壮花梗为外植体进行组
织培养，发现:0． 1%升汞消毒 10 min 是最佳的处理时间，成
活率为 82． 22%;初代培养最佳培养基为 MS + 6-BA 2． 0
mg /L + IBA 0． 2 mg /L;MS +6-BA 1． 5 mg /L + IBA 0． 2 mg /L
为最佳增殖培养基;1 /2MS + NAA 0． 5 mg /L是最佳生根培养
基，生根率达 92． 5%;移栽基质采用蛭石∶草炭 = 1∶ 1最好，成
活率高，达 95%。
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