全 文 ：书祁连圆柏对白血病 HL － 60 细胞增殖的
抑制作用及其有效部位筛选
王索安1 徐 涛2 包金风3 仇 容1 沈 健1 陈 健1 刘丹丹1
( 1浙江医学高等专科学校·杭州 310053 2 浙江理工大学生命科学院·杭州 310000 3 徐州医学院·徐州 221000)
摘 要 目的: 探讨祁连圆柏对白血病 HL － 60 细胞增殖的抑制作用并进行有效部位的筛选。方法: 选
用硅胶柱层析法，提取有效的抗瘤组分。采用台盼蓝拒染法及 MTT显色法，检测不同浓度祁连圆柏提取
物作用不同时间后对 HL － 60 细胞增殖的影响，光镜结合电镜观察凋亡细胞的形态特点，流式细胞术
( FCM) 检测其诱导细胞凋亡的细胞周期阻滞点，免疫组化 SP法对细胞周期蛋白 P27 及 P16 的表达水平
进行检测。结果: 祁连圆柏各提取物对 HL － 60 细胞增殖有明显的抑制作用，C液作用最明显，C液 － 3 组
分作用显著。光镜与电镜下均见凋亡细胞明显增多。流式细胞术检测 G0 /G1 期细胞增多，G2 /M期细胞
减少，细胞的半数抑制浓度( IC50) 为 3. 07μg /ml。实验组细胞周期蛋白 P27 及 P16 表达水平明显升高。
结论: 祁连圆柏对白血病 HL － 60 增殖有明显的抑制作用，其中醇提乙酸萃取物组分 － 3 作用最为显著，
其作用机制与诱导细胞凋亡，改变细胞周期，上调 P27、P16 蛋白水平有关。
主题词 祁连圆柏 /药理学 HL － 60 /药物作用 体外研究
祁连圆柏(Juniperus przewalskii，JP)系柏科植物，是常用
中藏药，既往体外研究资料表明，JP 醇提物对人乳腺癌、肺
癌、口腔上皮癌具有杀伤作用，但抗肿瘤机制不明［1］。本课
题组近期研究资料表明 JP醇提浸膏对人胃癌 SGC － 7901 细
胞有明显的增殖抑制和诱导凋亡作用［2］。本实验以体外培
养白血病 HL － 60 细胞为研究对象，主要采用硅胶层析法进
行药物筛选，观察不同浓度 JP提出物 C 液 －组分 1，2，3，4，
5，6 对 HL － 60 细胞生长的抑制作用，并对其作用机制进行
初步探讨。
1 材料 人白血病 HL － 60 细胞株:由兰州军区总医院药
局实验室惠赠。ＲPMI － 1640:Sigma公司产品，用前加双抗、
青霉素(100U /ml)、链霉素(100μg /ml) ;小牛血清:杭州四季
青生物工程公司产品，56℃水浴，－ 20℃保存;0. 25%胰酶、
0. 02% EDTA、Hanks液、3. 7% NaHCO3 等试剂:自行配制;碘
化丙啶(PI) :Sigma公司产品;凋亡相关基因蛋白(P27、P16)
过氧化物酶标记的链霉卵白素染色试剂盒:购自北京中山生
物技术有限公司。Coulter epics XL流式细胞仪:美国 Coulter
公司;CO2 培养箱:NATUＲE，USA;倒置相差显微镜:Olympus
CKX，Japan。祁连圆柏:青海大学医学院藏医系惠赠。
2 方法与结果
2. 1 JP提取物抗肿瘤活性部位的筛选
2. 1. 1 药物制备 取祁连圆柏 2000g，以 50%乙醇浸渍后
渗漉，得到 50%乙醇渗漉液和残渣。用 50%乙醇渗漉液减
压浓缩至浸膏，得 50%醇提浸膏。同上方法，取祁连圆柏
2000g，以 95%乙醇浸渍后渗漉，得 95%乙醇提总浸膏。将
总浸膏分散于 1000ml 水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁
醇萃取。另取祁连圆柏 2000g 水煎后乙酸乙酯、正丁醇萃
取。将以上提取 6 部分减压除去有机溶剂，50℃真空干燥，
回收溶剂得石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物、
乙醇提取物、水煎乙酸乙酯提取物、水煎正丁醇提取物。取
各提取物适量，用生理盐水配成所需浓度，脂溶物以二甲基
亚砜(DMSO)助溶，DMSO 最终浓度小于 0. 05%。过滤除
菌，4℃保存备用。
2. 1. 2 细胞复苏和培养 将冻存在离心管内的 HL － 60 细
胞用 37℃水浴解冻，吸出细胞悬液，装入另一支离心管中，
加入含 15%小牛血清的 ＲPMI1640 培养液(PH7. 2) ，吹打混
匀后离心(1000r /min，5 分钟) ，吸去冻存液。复苏细胞加入
含 15%小牛血清的 1640 培养液充分混匀，使其浓度为 2 ×
105 个 /ml，接种于培养瓶中。置孵箱内(37℃，5% CO2)培
养。
2. 1. 3 细胞传代 倒置显微镜下观察培养瓶内细胞长满单
层后弃掉培养液，加入适量 0. 25%胰酶液(覆盖瓶底) ，置
37° C环境中消化 1 ～ 2 分钟。加入适量的 Hank’s液轻洗 1
遍后加入含 15%小牛血清的 ＲPMI 1640 液 5ml，吹打制成细
胞悬液，按 2 × 105 个 /ml浓度接种培养。
2. 1. 4 细胞增殖抑制试验 MTT还原法。取培养细胞以 2
× 105 个 /ml的密度分别接种于 96 孔板，其中 2 孔只加 ＲP-
MI1640 培养液，每孔 100μl，作空白对照;其余每孔各加细胞
悬液 90μl。给药组:取已配制的 A液(50%醇提浸膏)、B 液
(醇提石油醚萃取)、C 液(醇提乙酸乙酯萃取)、D 液(醇提
正丁醇萃取)、E液(水煎乙酸乙酯萃取)、F 液(水煎正丁醇
萃取) ，选择 20. 0μg /ml剂量浓度的药液进行药理活性筛选，
每孔加药 10μl;5 － FU组:每孔加 5 － FU(10μg /ml)10μl;每
组设 4 个重复孔。置 5% CO2 孵育箱中 37℃、饱和湿度条件
培养 48 小时后，加 MTT，每孔 10μl，孵育 4 小时。移入
0. 5ml离心管，1000r /min 离心 5 分钟，弃去上清液，每孔加
·531·中国中医药科技 2013 年 3 月第 20 卷第 2 期 Mar. 2013 Vol. 20 No. 2
书DMSO100μl，气浴恒温振荡器 37℃振荡 10 分钟，用酶联免疫
检测仪在 490nm处测其 OD值，计算细胞生长抑制率(IＲ)。
抑制率 =(1 －试验组 OD 值)/对照组 OD 值 × 100%。结果
见表 1。
表 1 6 种 JP提取物对 HL －60 细胞的抑制作用(x ± s)
组别 OD IＲ(%)
空白组 0. 432 ± 0. 13 －
5 － Fu 0. 31 ± 0. 07 24. 6 ± 2. 6
A液 0. 270 ± 0. 05 37. 5 ± 4. 8
B液 0. 231 ± 0. 06 46. 6 ± 5. 7
C液 0. 200 ± 0. 021 53. 8 ± 7. 5
D液 0. 335 ± 0. 080 22. 5 ± 3. 5
E液 0. 296 ± 0. 060 31. 6 ± 4. 2
F液 0. 383 ± 0. 100 11. 3 ± 1. 9
实验结果表明，JP提取物 A ～ F液，以 C液(醇提乙酸乙
酯萃取)对 HL － 60 细胞的抑制作用最好，因此选用 C 液做
为硅胶层析法中的上样。
2. 2 JP提取物 C液各组分对白血病 HL － 60 细胞增殖的抑
制作用
JP提取物 C 液各组分分离:硅胶层析法。取 200 目硅
胶(70 倍上样量) ，装柱，用洗脱剂冲洗至平衡。溶剂洗脱系
统利用薄层层析选择，选用氯仿 －甲醇(1∶ 1)作为洗脱系统
展开，过柱和收集分离出 6 个色带，分别收集各色带，命名为
JP提取物 C液组分 1、2、3、4、5、6。各组分对 HL － 60 细胞增
殖的抑制实验:方法同 2. 1. 4。给药组选择 20. 0μg /ml 剂量
浓度的药液进行药理活性筛选，每孔加药 10μl。JP 提取物
C液 －组分 1、2、3、4、5、6(醇提乙酸乙酯萃取) ，在体外 24 小
时可明显抑制人白血病细胞株 HL － 60 细胞的增殖，以
10μg /ml以上浓度作用更为明显，且呈现明显的剂量依赖性
特点。以药物不同浓度的对数和抑制率作图，按 Y = ax + b
方程式求出 C液 －组分 1、2、3、4、5、6 对 HL － 60 细胞的半数
抑制浓度(IC50)依次分别为 58. 94、35. 88、3. 07、119. 7、
168. 21、63. 84μg /ml。结果表明 JP 提取物 C 液组分 － 3 效
果最好。
2. 3 不同浓度 JP提取物 C液 － 3 对白血病 HL － 60 细胞增
殖的抑制作用 方法同 2. 1. 4。5 － FU 组:每孔加 5 － FU
(10μg /ml)10μl;JP 提取物 C 液 － 3:设 5 个浓度(50. 0、
20. 0、10. 0、5. 0、1. 0μg /ml) ，每孔加药 10μl，培养 48 小时后
测得对 HL － 60 细胞的抑制率，结果见表 2。
表 2 JP提取物 C液组分 － 3 对 HL －60
细胞增殖的抑制作用(x ± s)
组别 剂量 n OD IＲ(%)
空白 － 4 0. 413 ± 0. 09
5 － FU 10μg /ml 4 0. 311 ± 0. 07* 24. 6 ± 2. 6
JPC － 3 1μg /ml 4 0. 269 ± 0. 03* 34. 8 ± 4. 3
5μg /ml 4 0. 187 ± 0. 02＊＊ 54. 7 ± 7. 1
10μg /ml 4 0. 131 ± 0. 04＊＊ 68. 2 ± 8. 1
20μg /ml 4 0. 105 ± 0. 03＊＊ 74. 6 ± 7. 5
50μg /ml 4 0. 079 ± 0. 02＊＊ 80. 9 ± 8. 2
t检验;与空白组比较* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01
2. 4 JP提取物 C液 －3对白血病 HL －60细胞的毒性作用
取 HL －60细胞(1 × 105 个 /ml) ，接种于 96 孔培养板，
90μl /孔，培养 24小时后，给药组 JP 提取物 C 液 － 3(50. 0、
20. 0、10. 0μg /ml)10μl /孔，对照组加 PBS 液，10μl /孔，阳性对
照组加 5 － FU(10μg /ml) ，10μl /孔，各设 4 个重复孔。置 5%
CO2 孵育箱中 37℃、饱和湿度条件培养，分别于培养 6、12、18、
24、48小时后各取 1板，加 0. 4%台盼蓝 10μl /孔，用血球计数
板在光镜下计数活细胞。结果为活细胞数随药物浓度的增加
和作用时间的延长而减少;抑制率则相反。各时间段 IC50分
别为 35、29、0. 84、2. 19、2. 72、1. 73μg /ml，见表 3。
2. 5 JP提取液 C组分 － 3 对白血病 HL － 60 细胞形态学的
影响
2. 5. 1 细胞形态的光镜观察 培养瓶中接种 1 × 105 个细
胞，培养 24 小时，生长良好者，用不同浓度(5、10、20、50μg /
ml)JPC － 3 分别处理 24、48、72 小时，每 12 小时用倒置显微
镜观察并照相记录用药组和对照组细胞的形态变化，结果可
见对照组 HL － 60 细胞生长良好，细胞呈圆形，细胞膜边缘
光滑，细胞大小形态一致;经 JPC － 3 诱导 12 小时后见有少
数细胞皱缩、变圆变小、胞质内出现颗粒、细胞膜完整;以
20μg /ml以上浓度作用更为明显，且呈现明显的剂量和作用
时间依赖性特点;24 小时后此类细胞进一步增多、部分细胞
呈圆形、细胞核与胞质分辨不清、细胞间隙增大、细胞数目减
少;48 小时后细胞数目已显著减少，少量细胞脱落，细胞皱
缩悬浮于培养液中，大部分细胞裂解成圆形小体，呈小体积、
碎裂状态;另有部分细胞体积增大，呈圆形或椭圆形，细胞内
见颗粒出现。
表 3 JP提取物 C液组分 － 3 对 HL －60 细胞的毒性作用(台盼蓝法)
组别
剂量
(μg /ml)
6h 12h 18h 24h 48h
活细胞数
(4 × 104·m －1)
IＲ
(%)
活细胞数
(4 × 104·m －1)
IＲ
(%)
活细胞数
(4 × 104·m －1)
IＲ
(%)
活细胞数
(4 × 104·m －1)
IＲ
(%)
活细胞数
(4 × 104·m －1)
IＲ
(%)
空白 － 68 ± 5. 7 86. 7 ± 13 67. 2 ± 6 67. 5 ± 7. 2 73. 8 ± 11
5 － FU 10 43. 5 ± 6. 6＊＊ 36. 0 32. 5 ± 7. 2＊＊ 62. 5 22. 5 ± 4. 7＊＊ 66. 5 20. 0 ± 1. 8＊＊ 70. 4 21. 0 ± 4. 1＊＊ 70. 2
JPC － 3 1 52. 5 ± 4. 0* 22. 8 43. 3 ± 4. 9＊＊ 50. 1 36. 3 ± 1. 7＊＊ 46. 1 36. 3 ± 4. 9＊＊ 46. 3 39. 3 ± 8. 8＊＊ 46. 8
5 44. 5 ± 5. 4＊＊ 34. 6 35. 5 ± 7. 0＊＊ 59. 1 31. 8 ± 13. 6＊＊ 52. 5 32. 5 ± 11. 6＊＊ 51. 9 28. 0 ± 6. 4＊＊ 62. 0
10 39. 0 ± 5. 9＊＊ 42. 6 30. 5 ± 4. 4＊＊ 64. 8 24. 5 ± 5. 8＊＊ 63. 6 29. 5 ± 13. 0＊＊ 56. 3 24. 5 ± 5. 3* 66. 8
20 38. 3 ± 2. 1＊＊ 43. 8 29. 3 ± 2. 8＊＊ 66. 3 18. 3 ± 2. 9＊＊ 72. 9 24. 0 ± 10. 0＊＊ 64. 4 21. 5 ± 4. 2＊＊ 70. 8
50 32. 5 ± 2. 9＊＊ 52. 2 27. 0 ± 6. 6＊＊ 68. 9 12. 0 ± 6. 8＊＊ 82. 2 12. 8 ± 3. 3＊＊ 81. 1 9. 5 ± 3. 8＊＊ 87. 1
与空白组比较* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01
·631· 中国中医药科技 2013 年 3 月第 20 卷第 2 期 Mar. 2013 Vol. 20 No. 2
书2. 5. 2 HL － 60 细胞超微结构的透射电镜观察 收集实验
及对照组离心细胞各约 1 × 107 个，PBS清洗 10 分钟 × 2 遍;
2. 5%戊二醛 4℃前固定 2 小时，PBS 漂洗 15 分钟 × 3 遍;
1%锇酸 4℃后固定 2 小时;PBS漂洗 5 分钟 × 2 遍;1%醋酸
铀快染 2 小时;50%、70%、90%、100%丙酮 4℃下逐级脱水
各 15 分钟;丙酮与包埋剂 1:1 室温 1. 5 小时，用丙酮与包埋
剂 1:2 室温 1. 5 小时及纯包埋剂 37℃浸渍 3 小时后用纯包
埋剂包埋;60℃聚合 36 小时;LKB 超薄切片机切片(50 ～
100nm) ，柠檬酸铅染色，透射电镜观察。用 20μg /mlJP 提取
物 C液组分 － 3 诱导 HL － 60 细胞 48 小时后有凋亡细胞出
现，其特征是胞质浓缩，核固缩，染色质浓缩致密，并凝集成
块，聚集于核膜下呈边聚的新月状态(图 2) ;某些细胞核形
态不规则，核发生碎裂，染色质呈高度浓缩的致密核，同时可
见凋亡早期个别细胞内线粒体变大、嵴增多，空泡化、呈基质
性肿胀，基质变淡、双层膜结构不清、嵴断裂、减少、缩短、消
失。
图 1 对照组(× 10000) 图 2 实验组(× 10000)
2. 6 JP提取物 C液 － 3 对白血病 HL － 60 细胞细胞周期的
影响 收集实验组和对照组细胞各约 1 × 105 个，用 PBS 洗
涤后离心 3 次。用 70%冰乙醇在 － 20℃冰箱固定 24 小时，
离心去乙醇，PBS 洗涤(5 分钟 × 2 次)、离心(1000r /min)3
分钟，弃上清液。加入 Ｒnase A(50μg /ml)37℃温育 30 分钟
后，加 10μlPI(50μg /ml)置 4℃ 暗处作用 20 分钟。采用
Coulter epics XL流式细胞仪进行细胞周期分析，检测计算细
胞亚二倍体的百分率，计算细胞增殖指数(PI)。细胞增殖指
数(PI)=
G2 /M + S
G0 /G1 + G2 /M + S
。结果表明不同浓度的 JP 提取
物 C液组分 － 3 对 HL － 60 细胞具有显著的细胞周期阻滞作
用，药物作用 48 小时后，随药物浓度的增加、细胞增殖指数
(PI)降低，G2 /M期细胞明显减少，HL － 60 细胞主要被阻滞
在 G0 /G1 期。HL － 60 细胞经不同浓度的 JP 提取物 C 液组
分 － 3 48 小时诱导后在 FCM检测的含量图中，在 G1 期细胞
前出现亚二倍体峰，既凋亡峰，表明细胞 DNA 降解，渗漏导
致 DNA染色能力下降，凋亡峰随药物剂量增加而升高，见表
4。
表 4 JP提取物 C液 － 3 对 HL －60 细胞周期的影响
组别 剂量 G0 /G1(%) S(%) G2 /M 凋亡率(%) PI
空白组 — 37. 8 39. 3 22. 9 0. 62
JPC － 3 1. 0μg /ml 67. 0 24. 5 8. 5 5. 1 0. 33
5. 0μg /ml 61. 6 10. 8 27. 6 11. 9 0. 38
10. 0μg /ml 59. 8 16. 4 23. 8 17. 3 0. 40
20. 0μg /ml 61. 3 32. 5 6. 2 21. 3 0. 39
50. 0μg /ml 54. 8 33. 7 12. 3 29. 1 0. 46
2. 7 JP提取物 C液 － 3 对白血病 HL － 60 细胞 P27、P16 蛋
白表达的影响
取对数生长期细胞，调整细胞密度接种在置有载玻片
24 孔的培养皿上，实验组加入 20μg /ml JP 提取物 C 液组分
－ 3，对照组加等量 ＲPMI1640 培养液，常规培养，于加药后
48 小时终止培养，取出爬有细胞的玻片，0. 01mol /L PBS 洗
涤 3 次，以 95%乙醇固定 20 分钟，染色步骤严格按 SP 免疫
组化染色法试剂盒说明书操作，以 PBS 代替一抗作阴性对
照，检测细胞周期蛋白 P27 及 P16 表达水平。染色结果判
断:用 NYD － 1000 型图像分析仪处理，随机选取 10 个高倍
视野的肿瘤细胞共 1000 个，计算每 100 个细胞中的阳性细
胞数，P27 阳性信号位于核内，呈棕黄色细颗粒状;P16 蛋白
阳性染色呈棕黄色细颗粒状，大多弥漫分布于细胞浆中，强
阳性可呈簇状分布并覆盖细胞核。经 JP提取物 C液组分 － 3
诱导后实验组与对照组相比较表达明显升高。结果见表 5。
表 5 各组 HL －60 细胞 P27、P16 表达
的免疫组化检测结果(x ± s，%)
组别 剂量 n P27 P16
空白组 — 6 25. 10 ± 4. 13 19. 23 ± 2. 13
JPC － 3 20μg /ml 6 39. 68 ± 3. 11＊＊ 31. 25 ± 2. 98＊＊
50μg /ml 6 48. 12 ± 4. 16＊＊ 43. 62 ± 4. 56＊＊
t检验;与对照组比较* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01
3 讨论
本文实验结果表明，JP提取物 A ～ F液，以 C液(醇提乙
酸乙酯萃取)对 HL － 60 细胞的抑制作用最强，因此选用 C
液(醇提乙酸乙酯萃取)做为硅胶层析法中的上样;经硅胶
柱层析法分离出 6 个色带，分别收集各色带，命名为 JP提取
物 C液组分 1、2、3、4、5、6。MTT实验结果表明，JP提取物 C
液组分 1、2、3、4、5、6 在体外可明显抑制人白血病细胞株 HL
－ 60 细胞的增殖，以 10μg /ml以上浓度作用更为明显，且呈
现明显的剂量与时间依赖性的特点，以 JP提取物 C组分 － 3
效果显著。JPC提取物组分 － 3 不同浓度对 HL － 60 细胞增
殖均呈现抑制作用，且呈剂量依赖性，台盼蓝拒染法实验结
果提示各浓度均有细胞毒性作用。电镜下可见凋亡细胞特
征。
细胞周期调控与肿瘤发生发展的关系是当前抗肿瘤研
究领域的热点。细胞周期是一个高度有序的运转过程、并且
受多种蛋白的调节［3］。这种高度有序的运转是通过 Cyelin /
CDKs复合物来实现的，其中 P27 与 P16 蛋白是两种重要的
细胞周期依赖性激酶，P27 蛋白细胞周期性激酶抑制剂，其
主要作用是抑制 CDK 的激活过程和抑制已激活的 cyclin －
CDK的激酶活性［4］;P16 蛋白的主要作用在于能够抑制
CDK4 /CDK6 介导的 Ｒb蛋白产物的磷酸化
［5］。此二种蛋白
均可通过抑制 Cyclin /CDK4、CyclinE /CDK2 复合物的活性，
阻断细胞由 G1 期转向 S期，从而抑制细胞增殖，细胞才有可
能停止增殖分裂，启动分化或者凋亡。细胞生物学研究发现
肿瘤细胞的细胞周期动力学特点是 G1 期→S 期控制点失
常，细胞群主体分布于 DNA合成期(S期) ，而分化细胞群则
主要分布于 DNA 静止期(G0 /G1 期)。有文献报道位于 G1
·731·中国中医药科技 2013 年 3 月第 20 卷第 2 期 Mar. 2013 Vol. 20 No. 2
书期的细胞数量则可作为诱导分化的判断指标［6］。因此设法
诱导肿瘤细胞调亡，抑制其增殖，增加“死亡与增生”的比
值，成为新的综合治疗的目标，细胞凋亡的程度则成为评估
疗效的一项新指标［7］。本实验结果表明，JP 提取物 C 液组
分 － 3 在体外对 HL － 60 细胞具有显著的细胞周期阻滞作
用，处于 G0 /G1 期的细胞比例在诱导后明显增加，而处于 S
期的细胞比例则显著下降，肿瘤细胞增殖指数明显降低，并
可诱导该细胞系凋亡发挥抗肿瘤作用。免疫组化结果提示
JP提取物 C 液组分 － 3 可明显增加 HL － 60 细胞 P27、P16
蛋白的表达。提示其可能是通过上调 P27 及 P16 蛋白表达
水平，激活细胞周期蛋白激酶抑制因子及 G0 /G1 期阻滞触
发人白血病 HL － 60 细胞凋亡的主要机制。
参考文献
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( 修回: 2012 － 10 － 29
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外阴白色病变患者中医证侯分布特征调查
刘桂兰 李淑英 赵铬宇
( 黑龙江省中医研究院·哈尔滨 150036)
1 一般资料 对 2003 － 01 ～ 2011 － 12 就诊于黑龙江省中医研究院
及哈医大一、二院、黑龙江中医药大学附属第一医院、哈尔滨 242 医
院的 231 例中国汉族女性外阴白色病变患者进行随机调查，年龄 11
～ 69 岁，患者对调查知情、同意。
西医诊断标准:根据《妇产科学》相关内容。中医辨证分型标
准:①肝肾阴虚型:阴部干涩、灼热瘙痒、夜间加重，伴五心烦热、头晕
目眩、时有烘热汗出、口干不欲饮、腰膝酸软、耳鸣、月经先期或紊乱、
经量或多或少、经色或鲜或淡、大便干、小便黄、舌红少苔或苔薄黄、
脉细或细数无力。②肝经湿热型:阴部瘙痒、带下多而臭秽、局部灼
热疼痛、心烦易怒、胸胁胀痛、胸闷不适、口苦口干、目赤肿痛、大便干
结、小便短黄、舌苔黄腻、脉弦数或滑。③脾肾阳虚型:阴部瘙痒较
轻、面色白光白、全身乏力、四肢不温、腰膝酸软、下肢无力、小便频数、
大便溏薄、性欲淡漠、舌质胖嫩、边有齿痕、苔薄白、脉沉弦。④肾阴
阳两虚型:阴部瘙痒、夜间重，时而烘热汗出、时而畏寒、腰背冷痛、头
晕耳鸣、自汗、盗汗、小便频数、舌淡苔白脉沉细。⑤血虚生风型:阴
部瘙痒、干涩难忍、头晕眼花、心悸心慌、神疲乏力、失眠健忘、面色萎
黄、舌质红、舌苔薄白或薄黄、脉细或细数。⑥肝郁气滞型:阴部瘙
痒、情志抑郁或易怒、胸胁乳房胀痛、或少腹胀满窜痛、或见咽部异物
感、善太息、舌淡苔薄脉弦。⑦肝郁脾虚型:阴部瘙痒时轻时重、情志
欠佳、抑郁或易怒、食少纳呆、脘腹胀闷、四肢倦怠、胸胁胀痛、腹胀、
食欲不振、大便时溏时秘、舌苔白腻脉弦。⑧肺肾阴虚型:阴部瘙痒、
腰酸膝软、形体消瘦、咳嗽频作、咳嗽声小痰少、口燥咽干、骨蒸潮热、
盗汗消瘦、颧红、舌红少苔、脉细数。
2 方法 调查主要内容:①一般项目:包括年龄、病程、家族免疫疾
病史等。②外阴白色病变西医临床分型判定。③中医四诊信息:全
面收集望、闻、问、切临床资料，分为主症、兼症。
3 结果
3. 1 基本情况 231 例患者中，外阴硬化性苔癣 123 例，占总患者
数的 53. 25%，外阴鳞状上皮增生患者 92 例，占总患者数的
39. 83%，外阴硬化性苔癣与外阴鳞状上皮增生混合型 16 例，占总患
者数的 6. 93%，1 例合并有白癜风，1 例合并有过敏性紫癜。
3. 2 中医证候分布 231 例外阴白色病变患者的 主要中医证型排
列次序依次是肝肾阴虚型 115 例(49. 78%)、肝经湿热型 82 例
(35. 50%)、脾肾阳虚型 12 例(5. 19%)、肾阴阳两虚型 10 例
(4. 33%)、血虚生风型 7 例(3. 03%)、肝郁气滞型 2 例(0. 866%)、
肝郁脾虚型 2 例(0. 866%)、肺肾阴虚型 1 例(0. 433%)。
123例外阴硬化性苔癣患者中，肝肾阴虚型 69 例(56. 10%) ，肝
经湿热型 36 例(29. 27%) ，脾肾阳虚型 8 例(6. 50%) ，肾阴阳两虚
型 4 例(3. 25%) ，肝郁气滞型 2 例(1. 63%) ，血虚生风型 1 例，
(0. 813%) ，肺肾阴虚型 1 例(0. 813%)。
92 例外阴鳞状上皮增生患者中，肝经湿热型 42 例(45. 65%) ，
肝肾阴虚型 38 例(41. 30%) ，肾阴阳两虚型 6 例(6. 52%) ，血虚生
风型 4 例(4. 35%) ，脾肾阳虚型 2 例，(2. 17%)。
外阴硬化性苔癣与外阴鳞状上皮增生混合型 16 例，其中肝肾阴
虚型 8 例(50%) ，肝经湿热型 4 例(25%) ，脾肾阳虚型 2 例
(12. 5%) ，血虚生风型 2 例(12. 5%)。
4 讨论 在调查的 231 例患者中，肝肾阴虚型占绝大多数，在外阴
硬化性苔癣患者中尤为明显(56. 10%) ，说明外阴硬化性苔癣的发
病与肝肾阴虚有着极其密切的关系;并由此推测肝肾阴虚可能是外
阴硬化性苔癣中外阴皮肤萎缩、干涩不适的重要物质基础。
肝经湿热型则为第二位，占外阴鳞状上皮增生患者总数的
45. 65%。由此可见，肝经湿热型可能与外阴鳞状上皮增生关系密
切，可能是外阴鳞状上皮增生局部痛痒重、皮肤变厚的物质基础。
( 修回: 2013 － 01 － 15)
·831· 中国中医药科技 2013 年 3 月第 20 卷第 2 期 Mar. 2013 Vol. 20 No. 2