全 文 :[收稿日期] 20120806(002)
[基金项目] 国家自然科学基金项目(81060347)
[第一作者] 欧水平,在读博士,从事中药炮制与制剂研究,Tel:0791-87118614,E-mail:oushuiping1208@ 126. com
[通讯作者] * 杨明,博士,教授,博士生导师,从事中药新技术、新制剂与新剂型研究,Tel:028-61800127,E-mail:yangming@ 126. com
乌头全植株各组织部位粗多糖含量的动态差异性考察
欧水平1,2,王森2,郑琴2,胡鹏翼2,陈振华3,杨明1,2*
( 1. 成都中医药大学,成都 610075; 2. 江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室,南昌 330004;
3. 江西科技师范大学,南昌 330013)
[摘要] 目的:比较不同采收期乌头不同组织部位中粗多糖的含量。方法:采用苯酚-硫酸分光光度法测定粗多糖的含
量,比较不同采收期乌头母根、子根、须根、茎、叶的粗多糖含量。结果:乌头全植株各组织部位粗多糖含量顺序为子根 >母
根 >须根 >叶 >茎,地下部分含量 >地上部分,6 月 4 日子根粗多糖含量最高,6 月 18 日茎、叶、须根粗多糖含量较其他采收期
高,6 月 18 日与 7 月 3 日母根粗多糖含量接近。结论:该研究初步探索了乌头各组织部位粗多糖的动态变化,为乌头资源的
综合利用提供科学依据。
[关键词] 乌头;粗多糖;子根;母根;须根;叶;茎
[中图分类号] R283. 6 [文献标识码] A [文章编号] 1005-9903(2013)05-0007-03
Investigation of Dynamic Differences of Crude Polysaccharides Content
in Various Tissues of Aconitum carmichaeli
OU Shui-ping1,2,WANG Sen2,ZHENG Qin2,HU Peng-yi2,CHEN Zhen-hua3,YANG Ming1,2*
(1. Chengdu University of Traditional Chinese Medicine (TCM) ,Chengdu 610075,China;
2. Key Laboratory of Modern Preparation of TCM,Ministry of Education,
Jiangxi University of TCM,Nanchang 330004,China;
3. Jiangxi Science and Technology Normal University,Nanchang 330013,China)
[Abstract] Objective:To compare the content of crude polysaccharides from different tissues of Aconitum
carmichaeli in different harvest time. Method:The content of crude polysaccharides was determined by sulfuric-
phenol method,crude polysaccharides content from different tissues of A. carmichaeli in different harvest timewas
compared,including mother root, sub-root, fibrous root, stem and leaves. Result:The content of crude
polysaccharides in different tissues of A. carmichaeli were in the sequence of sub-roots > mother roots > fibrous roots
> leaves > stems,the content of crude polysaccharides from aboveground part was less than underground part,the
content of crude polysaccharides in sub-roots on June 4 was the highest,the content of crude polysaccharides in
leaves and stems and fibrous roots on June 18 were more than other harvest period, the content of crude
polysaccharides of in mother roots was the same on June 18 and July 3. Conclusion:This study was a preliminary
exploration of dynamic variation about crude polysaccharides content from various tissues of A. carmichaeli, it
could provide a scientific basis for comprehensive utilization of A. carmichaeli resources.
[Key words] Aconitum carmichaeli;crude polysaccharides;sub-roots;mother roots;fibrous rootrs;
leaves;stems
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第 19 卷第 5 期
2013 年 3 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 19,No. 5
Mar.,2013
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2013.05.032
乌头是我国常用中药和四川道地药材川乌和附
子的原植物。川乌为母根,辛、苦,热,有大毒,归心、
肝、肾、脾经,具有祛风除湿、温经止痛的功效。附子
为子根的加工品,辛、甘,大热,有毒,归心、肾、脾经,
具有回阳救逆、补火助阳、散寒止痛的功效。研究表
明,附子多糖可抵抗过度运动所致的心肌氧化应激
损伤等[1];生乌头多糖具有显著降血糖作用,能延
长小鼠常压缺氧条件下的存活时间及抗癌的功
效[2]。因此,乌头中粗多糖含量可作为评价乌头品
质好坏的重要指标之一。
根据人们长期的用药习惯,子根(附子)和母根
(川乌)是乌头的主要收获和药用部位,而占全植物
生物量 44%左右的茎叶和须根通常被遗弃不用。
本研究比较不同发育期乌头全植株不同部位(母
根、子根、须根、茎、叶)粗多糖的动态差异性,为乌
头药用植物资源的综合利用提供科学依据。
1 材料
UV2550 型紫外分光光度计(日本岛津) ,BS
1245 型电子分析天平(Sartofius公司) ,SZ93 型超纯
水制造系统(上海亚荣生化仪器厂) ,6202 型中草药
粉碎机(北京环亚天元机械技术有限公司) ,GZX-
9140MBE型数显恒温鼓风干燥箱(上海博迅实业有
限公司)。
乌头为江油河西月爱村产品,经成都中医药大
学杨明教授鉴定为 Aconitum carmichaeli Debx.,于
2011 年 3 月 18 日 ~ 2011 年 7 月 3 日(每 15 d 采收
1 次)直接采收鲜乌头,净制,分离得到母根、子根、
须根、茎、叶,洗净,晒干,粉碎,备用。D-无水葡萄
糖对照品(中国药品生物制品检定所,批号 110833-
200904) ,试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 供试品溶液的制备[3-4] 精密称取乌头各部位
粉末 1. 0 g,加入 80%乙醇回流提取 2 次,每次 2 h,
抽滤。待残渣挥干乙醇后,加入 60 mL去离子水,回
流提取 3 次,每次 1 h,冷却,抽滤,上清液收集至
200 mL量瓶中,双蒸水定容,即得。
2. 2 对照品溶液的制备 精密称取葡萄糖对照品
9. 36 mg,置于 100 mL 量瓶中,加双蒸水至刻度,
即得。
2. 3 检测波长的确定 精密移取供试品溶液各 1
mL,置具塞试管中,加入 5%苯酚溶液 1. 0 mL,浓硫
酸 6 mL,混匀,室温下放置 5 min,沸水加热 15 min,
冷却至室温,以双蒸水替代供试品溶液,如上法配制
空白对照溶液,于紫外分光光度计上从 300 ~ 750
nm进行全波长扫描,确定最大吸收波长 484. 5 nm。
2. 4 标准曲线的建立 精密吸取葡萄糖对照品液
8,10,14,16,18,25 mL,分别置 25 mL 量瓶中,加水
稀释至刻度,摇匀,配成系列对照品溶液。精密移取
各溶液 1 mL,按 2. 3 项下方法处理,于 484. 5 nm 处
测定吸收度(A) ,以葡萄糖质量浓度为横坐标,A 为
纵坐标,得回归方程 Y = 0. 062 1X + 0. 016 7(r =
0. 999 7) ,表明葡萄糖质量浓度在 3. 73 ~ 11. 67 mg·
L -1线性关系良好。
2. 5 精密度试验 取已知含量的样品溶液连续测
定 5 次,按 2. 4 项下方法测定 A,结果 RSD 0. 28%。
2. 6 稳定性试验 取同一供试品溶液,按 2. 4 项下
方法测定 A,每隔 1 h 测 1 次,结果在 4 h 内供试品
溶液稳定,RSD 1. 50%。
2. 7 加样回收率试验 精密量取已知含量的供试
品溶液共 9 份,每份 0. 5 mL(粗多糖质量 24. 74
μg) ,分 3 组,分别精密加入 D-无水葡萄糖对照品溶
液(99. 9 mg·L -1)0. 20,0. 25,0. 3 mL,加水至 1 mL,
按 2. 3 项下方法处理,于 484. 5 nm 处测定 A。结果
见表 1,平均回收率 98. 95%,RSD 3. 14%。
表 1 乌头中粗多糖的加样回收率试验
加入量 /μg 测得量 /μg 回收率 /%
19. 98 43. 65 97. 61
19. 98 45. 84 102. 50
19. 98 46. 45 103. 86
24. 975 48. 17 96. 90
24. 975 48. 88 98. 33
24. 975 47. 36 95. 26
29. 97 52. 85 96. 59
29. 97 53. 15 97. 15
29. 97 55. 99 102. 35
注:样品中粗多糖均为 24. 74 μg。
2. 8 不同采收期乌头各组织部位粗多糖的含量比
较 精密吸取 2. 2 项下供试品溶液 1. 0 mL,置于试
管中,按 2. 4 项下方法测定 A,计算葡萄糖质量浓度
和粗多糖含量,结果见表 2,图 1,2。
3 讨论
紫外-可见分光光度法是目前测定粗多糖含量
最常用的方法[4],常用的显色剂有苯酚,蒽酮-硫酸
和 3,5-二硝基水杨酸(DNS)。前两者主要利用粗
多糖在强酸性条件下脱水生成糠醛或其衍生物,然
后与酚类或者胺类反应缩合,生成有特定吸收波长
的有色物质进行测定;DNS 法则是利用粗多糖的还
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第 19 卷第 5 期
2013 年 3 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 19,No. 5
Mar.,2013
表 2 不同采收期乌头各组织部位中粗多糖含量的比较(n = 3)
采收时间 部位 质量 / g 质量分数 /% RSD /%
3 月 18 日 地上 1. 001 5 2. 654 1. 85
地下 1. 000 2 6. 083 2. 24
4 月 3 日 地上 1. 000 9 3. 054 1. 93
地下 0. 999 9 5. 737 1. 79
4 月 18 日 地上 1. 000 7 3. 145 2. 02
地下 1. 000 8 5. 127 1. 18
5 月 3 日 叶 1. 000 6 1. 987 1. 28
子根 1. 001 0 10. 381 2. 97
须根 1. 001 0 3. 170 1. 63
茎 1. 001 0 1. 317 1. 54
母根 1. 000 7 3. 119 1. 49
5 月 18 日 叶 1. 001 3. 328 1. 88
子根 1. 001 9. 454 2. 15
须根 1. 001 3 4. 176 1. 57
茎 1. 000 4 2. 300 1. 49
母根 1. 000 4 7. 605 2. 37
6 月 4 日 叶 1. 001 4 2. 911 1. 42
子根 1. 001 1 16. 067 2. 33
须根 1. 001 1 4. 383 1. 50
茎 1. 000 5 2. 708 1. 32
母根 1. 000 3 6. 576 1. 97
6 月 18 日 叶 1. 000 8 4. 947 1. 13
子根 1. 001 5 13. 977 2. 64
须根 1. 000 3 8. 945 1. 65
茎 1. 001 4 2. 976 1. 37
母根 1. 001 4 9. 167 2. 05
7 月 3 日 叶 1. 000 4 3. 919 1. 14
子根 1. 001 0 10. 587 2. 35
须根 1. 001 5 7. 726 2. 01
茎 1. 000 8 2. 424 1. 36
母根 1. 001 5 9. 707 1. 89
注:3 月 18 日-4 月 18 日全植株各部位不明显,不能分离,故比较
的是地上与地下的含量差异。从 5 月 3 日起全植株各部位才能明显
分离。
原性;目前多采用苯酚-硫酸法。本实验建立的硫
酸-苯酚法比较乌头不同组织部位的粗多糖含量,具
有精密度良好、重复性强、方便快捷的特点,且回收
率高,能准确快速地进行含量测定。
图 1 不同采收期(3 月 18 日 ~ 4 月 18 日)乌头各组织
部位粗多糖的含量比较
图 2 不同采收期(5 月 3 日 ~ 7 月 3 日)
乌头各组织部位粗多糖的含量比较
乌头各组织部位粗多糖含量顺序为子根 >
母根 >须根 >叶 >茎,地下部分含量大于地上部分,
不同采收期中,6 月 4 日子根粗多糖含量最高
(16. 067%) ,6 月 18 日茎、叶、须根粗多糖含量(分
别为 2. 976%,4. 947%,8. 945%)较其他采收期高,
6 月 18 日与 7 月 3 日母根粗多糖(分别为 9. 167%,
9. 707%)含量接近,故从粗多糖质量分数角度考
虑,乌头最佳采收期可确定为 6 月 18 日至 7 月 3
日,与民间习惯的 6 月底至 7 月初采收相符。
[参考文献]
[1] 刘颖,纪超,吴伟康.金属硫蛋白介导附子多糖对缺氧
复氧心肌细胞的保护[J]. 中国实验方剂学杂志,
2012,18(4) :172.
[2] 赵莉,高长健,王刚,等. 不同气候环境对乌头粗多糖
含量的影响[J]. 绵阳师范高等专科学校学报,2000,
19(5) :49.
[3] 舒晓燕,侯大斌,李凤.不同品种附子生物碱和多糖含
量的比较[J].中国药房,2010,31(21) :2916.
[4] 吕永磊,卜海博,杨蕾,等. 乌头母根、子根、须根多糖
的比较[J].中国中药杂志,2011,36(9) :1154.
[责任编辑 仝燕]
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欧水平,等:乌头全植株各组织部位粗多糖含量的动态差异性考察