全 文 ：型树脂 3份 ,每份 4 g(湿质量),准确吸取已调节 pH
为 3.0的样品液 9.28 mg· mL-1 (25 mL), 以流速
1 mL· min-1上柱 ,吸附完全后 , 先以纯化水洗脱至无
色 ,然后分别以 40%, 55%, 70%的乙醇各 30 mL进行
洗脱 ,收集洗脱液 ,浓缩 ,干燥 ,称质量。按 “1.4.3”项
下操作测定总黄酮含量 ,结果如表 4所示 。
由表 4可见 , 55%乙醇洗脱总黄酮量及浸膏量都
较高 ,所以选择 55%乙醇作为洗脱溶剂 。
表 4　不同浓度乙醇洗脱的测定结果　
Tab. 3 　 The results of elution with different
concentrationsofethnol　 g
乙醇浓度 总黄酮量 浸膏量
40% 0.247 7 0.126 6
55% 0.260 9 0.128 9
70% 0.256 4 0.125 9
2.3.4　洗脱用水体积的考察　称取处理好的 HPD-
400型树脂 3份 ,每份 4 g(湿质量),准确吸取已调节
pH值为 3.0的上柱液 9.28 mg· mL-1 (25 mL), 以
1 mL· min-1的流速上柱 。吸附完全后 ,分别以 20, 40,
60 , 80mL纯化水洗脱 。然后以 55%乙醇 30mL洗脱 ,
收集洗脱液 ,浓缩 ,干燥 ,称质量 。按 “1.4.3”项下操
作测定总黄酮含量 ,结果如表 5所示 。
由表 5可见 ,随着洗脱用水量增加时 ,总黄酮量及
浸膏量都下降 , 通过比较 ,洗脱用水量为 20 mL(2.9
倍柱体积)时较合适。
表 5　不同体积洗脱用水的测定结果　
Tab.5　Theresultsofelutionwithdiferentvolumeof
elutingwater　 g
用水量 /mL 总黄酮量 浸膏量
20 0.278 0 0.137 3
40 0.266 0 0.123 1
60 0.257 8 0.121 4
80 0.256 7 0.120 5
3　讨论　
大孔吸附树脂是近年来发展起来的一类有机高聚
物吸附剂 ,是吸附性和分子筛性原理相结合的分离材
料 ,它的吸附性是由于范德华引力或产生氢键的结果 ,
分子筛性是由于其本身多孔性结构的性质所决定 [ 7] 。
由于其具有比表面积大 ,选择性高 ,吸附速度快 ,吸附
容量大 ,理化性质稳定 ,使用周期长 ,再生处理简便等
优点 ,被广泛应用于黄酮(苷)类 、皂苷类 、生物碱类 、
蒽醌类 、酚类物质及微量元素提取及纯化方面的研究。
而 HPD400型大孔树脂属于中等极性树脂 ,被广泛应
用在中药复方提取 ,辅酶 、尿激酶 、氨基酸 、蛋白质提纯
等方面 。
笔者通过研究和比较确定选用 HPD400型树脂纯
化拳参总黄酮 , 其最佳纯化条件为采用浓度为
9.28mg·mL-1 , pH为 3.0的上样液 , 2.9倍柱体积纯
化水洗脱 , 4.3倍柱体积 55%乙醇洗脱 ,纯化后总黄酮
量约为纯化前总黄酮量的 45%,方法简单 、易行 ,效果
好 ,具有良好的应用前景。
[ DOI] 　10.3870/yydb.2011.02.016
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荜澄茄超临界二氧化碳萃取提取物的药效学研究
汤杰 ,万进 ,施春阳
(华中科技大学同济医学院附属同济医院药学部 ,武汉　430030)
[摘　要 ] 　目的　以超临界二氧化碳(SC-CO2)技术萃取荜澄茄挥发性成分 , 并观察其药效。方法　以管碟法考察
荜澄茄超临界二氧化碳萃取提取物体外抑菌活性 ,采用醋酸致腹腔毛细血管通透性增加及二甲苯致耳廓肿胀试验观察
其抗炎活性 , 并观察其对化学及物理刺激所致疼痛的抑制作用。结果　荜澄茄 SC-CO2提取物体外对金黄色葡萄球菌 、
铜绿假单胞菌有一定的抑菌活性 ,能够抑制醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增加 ,明显减轻二甲苯所致小鼠耳廓肿胀
·193·医药导报 2011年 2月第 30卷第 2期
的程度 , 显著抑制醋酸及高热所致疼痛反应。结论　将 SC-CO2工艺应用于荜澄茄挥发性组分提取具有显著优势 , 所得
提取物具有良好的药理活性。
[关键词 ] 　荜澄茄;超临界二氧化碳萃取;抑菌;抗炎;镇痛
[中图分类号 ] 　R285.5;R965 　　　[文献标识码 ] 　A　　　[文章编号 ] 　1004-0781(2011)02-0193-04
PharmacodynamicStudyonSupercriticalCO2 ExtractfromFructusLitseaeTANGJie, WANJin, SHIChun-yang(DepartmentofPharmacy, TongjiHospitalAfiliatedwiththeTongji
MedicalColege, HuazhongUniversityofScienceandTechnology, Wuhan430030, China)
ABSTRACT　Objective　ToextractthevolatilecomponentsfromFructusLitseaewithasupercriticalCO
2
extraction
techniqueandobserveitspharmacodynamicactivity.　Methods　ThesensitivityofextractsfromFructusLitseaeagainst
StaphylococcusaureusandPseudomonasaeruginosawasdeterminedwithanagardifusionmethod.Itsanti-inflammationeffect
wasstudiedbymeasuringcapillarypermeabilityinducedbyintraperitonealinjectionwithaceticacid, swelingofthepinnain
miceinducedbyxylene.Itsanalgesiaeffectwasinvestigatedinthemurinepainmodelsinducedbychemicalandphysical
stimulations.　Results　ThebacteriostasisactivityofthesupercriticalCO2 extractsfromFructusLitseaeinvitrowasconfirmed.Theextractssignificantlyinhibitedtwoexperimentalanimalinflammatorymodelsandaleviatedpaininducedbyaceticacidand
fever.　Conclusion　ItispreferableandreasonabletoextractvolatilecomponentsfromFructusLitseae, theextractofwhichis
showntohaveremarkableactivity.
KEYWORDS　FructusLitseae;SupercriticalCO2 extraction;Bacteriostasis;Anti-inflammatory;Analgesic
　　荜澄茄(FructusLitseae)为樟科植物山鸡椒 [ Litsea
cubeba(Lour.)Pers.]的干燥成熟果实 ,具有温中散寒 、
行气镇痛之功效 ,中医主治胃寒呕逆 、脘腹冷痛 、寒疝腹
痛等症[ 1] 。荜澄茄含有多种化学成分 ,以柠檬醛
(citral)、柠檬烯(limonene)、香茅醛(citronelal)等为主
的挥发油组分功效最为显著 ,其果实挥发油含量较高 ,
可达 3% ～ 4%[ 2-5] 。因此 ,笔者在本实验中借助超临界
二氧化碳萃取(SC-CO2)技术提取分离荜澄茄挥发性有
效成分 ,并采用多种实验动物模型观察荜澄茄 SC-CO2
提取物的抑菌 、抗炎及镇痛活性 ,对其药效学进行初步
研究 ,为荜澄茄药材相关基础研究提供科学依据[ 6] 。
1　材料　
1.1　试药　荜澄茄(购于武汉市汉口国药有限公司 ,
产地:广西 ,经华中科技大学同济医学院附属同济医院
药学部方建国教授鉴定为樟科植物山鸡椒的干燥成熟
果实),金黄色葡萄球菌 [ CMCC(B)26003] 、铜绿假单
胞菌 [ CMCC(B)10104,湖北省食品药品监督检验研究
院提供 ] ,诺氟沙星滴眼液(华中科技大学同济医学院
附属同济医院药学部 ,批号:20090124),阿司匹林肠溶
片(河北神威药业有限公司 ,批号:0704121),伊文思
蓝(上海化学试剂有限公司 ,批号:20020913),其余试
剂均为国产分析纯。
1.2　仪器　JH-121-50-01型超临界 CO2萃取装置(武
汉景宏高新技术开发有限公司), SZK-202型净化工作
[收稿日期] 　2010-09-01　[修回日期] 　2010-10-21
[作者简介 ] 　汤杰(1979-), 男 ,湖北武汉人 ,主管药师 ,
硕士 , 主要从事中药新制剂及其药效学评价 。电话:027 -
83663234, E-mail:tangjie100@sina.com。
台(安徽蚌埠净化设备厂), UV-265FW型紫外 -可见分
光光度计(日本岛津公司), LRH-150B型生化培养箱
(广东省医疗器械厂)。
1.3　动物　昆明种小鼠 ,清洁级 ,体质量 23 ～ 27 g,由
华中科技大学同济医学院实验动物中心提供 ,动物合
格证号:SCXK(鄂)2004-0007。
2　方法与结果　
2.1　荜澄茄 SC-CO2提取物的制备 　取荜澄茄药材
200g,经适当粉碎(过 24目筛 ,筛孔内径 710μm)后 ,
按压力 20 MPa、温度 40 ℃、CO2流量 6kg· h-1、时间
2 h的工艺条件进行 SC-CO2萃取 。所得荜澄茄 SC-CO2
提取物为棕红色至棕黄色的油脂 ,收得率 22.3%,气味
清香 ,稳定性良好 。
2.2　供试药液的制备　取荜澄茄 SC-CO2提取物适
量 ,称质量 ,以聚山梨酯-80增溶 ,加注射用水搅匀 ,分
别制成浓度为 2.0, 1.0, 0.5 g· mL-1(按生药材计算)
的混悬液 ,封存 ,流通蒸气灭菌 30 min,备用 。
2.3　体外抑菌活性测定(管碟法)[ 7] 　取已消毒的琼
脂培养基加热融化 ,量取 10mL注入直径 9 cm平皿中 ,
冷却使凝固 ,作为底层 。分别吸取 0.2%试验菌悬液
(金黄色葡萄球菌 、铜绿假单胞菌)10mL于底层上均匀
摊布 ,作为菌层 。各平皿中对称放置钢圈 4个 ,于钢圈
内以微量移液器分别加入 10 mg· L-1诺氟沙星溶液和
各浓度供试药液 0.2 mL,每一菌株平行作 5个 ,平皿以
陶瓦圆盖覆盖 ,置生化培养箱中 37 ℃培养24 h,取出 ,
游标卡尺测定抑菌圈直径 ,计算抑菌系数 ,结果见表 1。
抑菌系数 =供试药液的抑菌圈直径 /该试验平皿中诺氟
沙星的抑菌圈直径 。结果表明 ,荜澄茄 SC-CO2提取物
具有一定的体外抑菌活性 ,其浓度在2.0g·mL-1时与化
·194· HeraldofMedicineVol.30No.2 February2011
学对照药物 10mg·L-1诺氟沙星活性强度相当。
2.4　抗炎活性评价(醋酸法)　昆明种小鼠 50只 ,雄
性 ,随机分成 5组 ,分设模型组(纯化水),药物(荜澄
茄 SC-CO2提取物)高 、中 、低剂量组 ,阳性对照组(阿司
匹林),每组 10只。药物高 、中 、低剂量组分别按10.0,
5.0, 2.5 g·kg-1剂量灌胃 ,阳性对照组按 0.1 g· kg-1
剂量灌胃 ,每日 1次 ,共 3d;模型组同法给予同体积纯
化水。末次给药后 1h,各组小鼠静脉注射 0.6%伊文
思蓝 ,随即腹腔注射 0.6%醋酸致炎 ,注射体积均为
10 mL· kg-1 , 30 min后各组小鼠脱颈椎处死 ,腹腔注
射 0.9%氯化钠溶液 5 mL,轻揉小鼠腹部 ,抽出腹腔
液 ,离心 ,取上清液于 590 nm波长处测定吸光度值
(A),记录 A,将药物组与模型组进行比较 ,计算抑制
率 ,结果见表 2。抑制率(%)=(模型组 A-药物组
A)/模型组 A×100%。
结果表明 ,荜澄茄 SC-CO2提取物各剂量组呈不同
强度抑制醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加 ,其中
药物中 、高剂量组的抑制作用与模型组比较差异有统
计学意义(P<0.05或 P<0.01)。
表 1　荜澄茄 SC-CO2提取物体外抑菌活性测定结果　
Tab.1　Determinationonthebacteriostasisactivityof
supercriticalCO2 extractfromFructusLitseaeinvitro　
n=5, x±s
组别 对金黄色葡萄球菌抑菌系数
对铜绿假单胞菌
抑菌系数
荜澄茄 SC-CO
2
提取物
　2.0 g· L-1组 0.965±0.009 0.991±0.064
　1.0 g· L-1组 0.846±0.021 0.870±0.073
　0.5 g· L-1组 0.704±0.061 0.755±0.069
诺氟沙星 1.000±0.000 1.000±0.000
　　表 2　荜澄茄 SC-CO2提取物对醋酸致小鼠腹腔毛细血管
通透性的影响　
Tab.2　EffectofsupercriticalCO2 extractfrom Fructus
Litseae on the capillary permeability induced by
intraperitonealinjectionwithaceticacid　 x±s
组别 小鼠 /只
剂量 /
(g· kg-1) A
抑制率 /
%
荜澄茄 SC-CO2提取物
　高剂量组 10 10.0 0.049±0.016 ＊1 39.5
　中剂量组 10 5.0 0.059±0.024 ＊2 27.2
　低剂量组 10 2.5 0.069±0.020 14.8
阳性对照组 10 0.1 0.036±0.010 ＊1 55.6
模型组 10 … 0.081±0.017 …
　　与模型组比较 , ＊1 P<0.01, ＊2P<0.05
Comparedwithmodelgroup, ＊1 P<0.01, ＊2P<0.05
2.5　抗炎活性评价(二甲苯法)　昆明种小鼠 50只 ,
雄性 ,分组及给药方式同 “2.4”项。末次给药后 1 h,
各组小鼠右耳以二甲苯 0.1 mL涂抹致炎 ,左耳为对
照 。 30 min后各组小鼠颈椎脱臼处死 ,沿耳廓基线剪
下双耳 ,以 7 mm打孔器于两耳相同部位冲出耳片 ,分
析天平称质量 ,以两耳质量差为肿胀度 ,将药物组与模
型组进行比较 ,计算肿胀抑制率 ,结果见表 3。抑制率
(%)=(模型组肿胀度 -药物组肿胀度)/模型组肿胀
度 ×100%。
结果表明 ,药物各剂量组可抑制二甲苯所致小鼠
耳廓的炎性肿胀 ,其中 ,中 、高剂量组对于小鼠耳廓肿
胀的抑制作用与模型组差异有统计学意义(P<0.05
或 P<0.01)。
表 3　荜澄茄 SC-CO2提取物对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀
的影响　
Tab.3　EffectofsupercriticalCO2 extractfrom Fructus
Litseaeontheswelingofthepinnainmiceinducedbyxylene
　 x±s
组别 小鼠 /只
剂量 /
(g· kg-1) A
抑制率 /
%
荜澄茄 SC-CO2提取物
　高剂量组 10 10.0 2.84±0.90＊1 41.9
　中剂量组 10 5.0 3.52±1.30＊2 28.0
　低剂量组 10 2.5 4.18±1.01 14.5
阳性对照组 10 0.1 2.36±0.61＊1 51.7
模型组 10 … 4.89±1.04 …
　　与模型组比较 , ＊1 P<0.01, ＊2P<0.05
Comparedwithmodelgroup, ＊1 P<0.01, ＊2P<0.05
2.6　镇痛活性评价(扭体法)　昆明种小鼠 50只 ,雄
性 ,体质量 23 ～ 27 g,将动物随机分成 5组 ,每组 10
只 ,分设模型组(0.9%氯化钠溶液),阳性对照组(阿
司匹林),药物(荜澄茄 SC-CO2萃取物)高 、中 、低剂量
组 。药物高 、中 、低剂量组按 8.0, 4.0, 2.0g· kg-1剂量
灌胃 ,阳性对照组按 0.1 g· kg-1剂量灌胃 ,模型组给予
同体积 0.9%氯化钠溶液 ,每天 1次 ,连续 5 d。末次
给药后 1h各组小鼠腹腔注射 0.6%醋酸溶液 0.2 mL,
5 min后开始观察 10 min内小鼠是否出现扭体反应及
记录各鼠的扭体次数 ,计算镇痛率 ,结果见表 4。镇痛
率(%)=(模型组扭体次数 -药物组扭体次数)/模型
组扭体次数 ×100%。
2.7　镇痛活性评价(热板法)　取经筛选合格痛阈
(舔后足时间 5 ～ 30 s内)的昆明种小鼠 50只 ,雌性 ,
体质量 23 ～ 27 g,分组及给药方式同 “ 2.6”项 。末次
给药后 1h,将小鼠置于 55℃水浴锅自制热板中 ,测定
其痛阈值 ,计算镇痛率 ,结果见表 5。镇痛率(%)=
(药物组痛阈值 -模型组痛阈值)/模型组痛阈值 ×
100%。
·195·医药导报 2011年 2月第 30卷第 2期
根据小鼠醋酸扭体法 、热板法实验 ,荜澄茄 SC-
CO2提取物在高 、中剂量下对于醋酸及高热所致疼痛
反应具有抑制作用 ,与模型组差异有统计学意义(P<
0.05, P<0.01),但各剂量组药效均略逊于阿司匹林 。
表 4　荜澄茄 SC-CO2提取物对醋酸所致疼痛反应的影响　
Tab.4 　EffectofsupercriticalCO2 extractfrom Fructus
Litseaeonpaininducedbyaceticacid　 x±s
组别 小鼠 /只
剂量 /
(g· kg-1)
10min内扭
体次数 /次
镇痛率 /
%
荜澄茄 SC-CO2提取物
　高剂量组 10 8.0 11.6±3.9＊1 36.6
　中剂量组 10 4.0 12.8±3.5＊2 30.1
　低剂量组 10 2.0 16.9±4.2 7.7
阳性对照组 10 0.1 8.4±3.1＊1 54.1
模型组 10 … 18.3±5.8 …
　　与模型组比较 , ＊1 P<0.01, ＊2P<0.05
Comparedwithmodelgroup, ＊1 P<0.01, ＊2P<0.05
表 5　荜澄茄 SC-CO2提取物对高热所致疼痛反应的影响　
Tab.5 　EffectofsupercriticalCO2 extractfrom Fructus
Litseaeonpaininducedbyhotplate　 x±s
组别 小鼠 /只
剂量 /
(g· kg-1)
痛阈值 /
s
镇痛率 /
%
荜澄茄 SC-CO2提取物
　高剂量组 10 8.0 25.7±3.2＊1 45.2
　中剂量组 10 4.0 24.3±8.0＊2 37.3
　低剂量组 10 2.0 19.4±5.5 9.6
阳性对照组 10 0.1 26.8±6.5＊1 51.4
模型组 10 … 17.7±5.0 …
　　与模型组比较 , ＊1 P<0.01, ＊2P<0.05
Comparedwithmodelgroup, ＊1 P<0.01, ＊2P<0.05
3　讨论　
笔者在本实验中采用多种实验动物模型观察并确
证了荜澄茄 SC-CO2提取物具有抑菌 、抗炎 、镇痛等多
重药理活性 ,表明荜澄茄中以挥发性组分为代表的有
效成分是通过作用于机体多个环节发挥其行气镇痛功
效 ,从而有助于综合治疗临床常见胃肠道疾患 [ 8] 。
　　目前 ,提取分离荜澄茄挥发性组分的常规方法包
括水蒸馏法 、压榨法以及有机溶剂萃取法 [ 6] 。其中 ,
水蒸馏法操作简单 ,可提取低沸点挥发性精油 ,但容易
造成含量丰富 、疗效显著的高沸点挥发性成分及热敏
性组分的大量损失 ,影响其临床应疗效;压榨法适合工
业化生产 ,但所得产品杂质多 ,易变质 ,提取效率低;有
机溶剂萃取法产物得率高 ,但易造成化学溶剂及重金
属残留 ,严重影响产品的纯度和质量 ,使其药用价值降
低 。在活性强度方面 ,荜澄茄 SC-CO2提取物与传统水
蒸馏法提取荜澄茄挥发油未见显著差异 [ 8] ,表明以超
临界提取法萃取荜澄茄有效成分是一种良好的选择 ,
一旦相关硬件设备充分普及 ,将具有无可比拟的优势 ,
可用于开展相关中成药的开发;其缺憾之处在于荜澄
茄药材尚缺乏法定含量测定指标 ,所得 SC-CO2提取物
纯度仍需采用分子蒸馏等方法作进一步精制。
[ DOI] 　10.3870/yydb.2011.02.017
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过表达 SATB1对
人原发性肝癌细胞 HepG2增殖的促进作用
罗敏1 ,涂炜1 ,刘永健2 ,邓欢 1 ,周珍珍 1 ,朱倩 1 ,林海华 1 ,夏丽敏 1 ,晏维 1 ,田德安 1
(1.华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科 ,武汉　430030;2.华中科技大学同济医学院附属普爱医院
内分泌科 ,武汉　430033)
[摘　要 ] 　目的　研究核基质结合蛋白 SATB1对人原发性肝癌 HepG2细胞增殖的影响。方法　脂质体介导
pEGFP1-SATB1真核表达全长基因质粒转染人原发性肝癌 HepG2细胞 , 分为实验组(pEGFP1-SATB1)、对照组(pEGFP1
·196· HeraldofMedicineVol.30No.2 February2011