全 文 ：山东中医杂志 2010 年 7 月第 29 卷第 7 期
宁的测定方法，测定 10个批次蒙脱石及其制剂的吸
附力，测定结果见表 3。 根据蒙脱石阳离子交换容
量计算，得到的检测标准为 0.3～0.5 g/g。
3 讨论
3. 1 试验证明，蒙脱石中非水溶性镁类杂质对硫酸
士的宁的吸附力大于蒙脱石几倍到几十倍，这意味
着即使蒙脱石中含有少量的非水溶性镁类杂质也能
严重影响蒙脱石吸附力的测定结果。 如不排除非水
溶性镁类杂质对吸附力的干扰，不可能准确测定蒙
脱石的吸附力。 也就是说现有的国家药品标准中检
测蒙脱石吸附力的方法专属性较差，不能有效控制
药品质量，方法有待改进。
3. 2 蒙脱石在水或稀碱或稀酸溶液中几乎不溶，在
浓酸中略溶。 用稀盐酸溶去蒙脱石中的非水溶性镁
类杂质，不能溶出蒙脱石结构中的镁，不会改变蒙脱
石的结构。 用稀酸去除了蒙脱石非水溶性镁类杂质
对蒙脱石吸附力测定的干扰，专属性强，稳定性好，
准确度高，能准确检测蒙脱石的吸附力，能有效控制
产品质量，从而确保药用蒙脱石的疗效。
［参考文献］
［1］ 张为胜，李诗标，任海霞，等. 一种药用蒙脱石及其制剂吸附力
的测定方法［P］. 中国专利：CN200910016359.7，2009-06-18.
［2］ 卫生部. 国家药品标准［S］. 第 55 册. 2006：122.
［3］ 侯梅芳，马北雁，李芳柏，等. 我国各地膨润土化学组成及其矿
床矿样间差异性［J］. 地质地球化学，2003，30（1）：70-73.
［4］ 翟永功，次向明，邹星，等. 药用蒙脱石粘土的矿物组成与化学
成分分析［J］. 中草药，2002，33（4）：5-7.
翼果苔草系莎草科苔草属植物 Carex neuro-
carpa Maxim.。 山东民间应用其治疗感冒疗效显著。
目前中医药书籍均未见翼果苔草的药用记载，国内
外亦未有其抗病毒作用的报道。 我们采用丙酮、乙
酸乙酯依次提取的方法获得翼果苔草粗提物，用体
外病毒感染模型研究，初步证实其对单纯疱疹病毒
有抑制作用［1］。 由于中草药的疗效与采收季节密切
相关，所以我们对不同季节（3 月中旬、5 月中旬、7
月中旬、9 月中旬）采收的翼果苔草抗病毒作用的差
异进行了进一步的研究。
1 材料与仪器
1. 1 药材 翼果苔草采自山东济南南部山区黄巢
水库（北纬 36°22′02″，东经 117°09′27″，海拔高度
437 m；鉴定资料：《中国植物志》），采集时间分别为
3月中旬、5月中旬、7月中旬、9月中旬；阳性对照药
利巴韦林针剂（100 mg/ml，山东鲁抗医药集团有限
公司，国药准字 H20013147）。
1. 2 细胞株与病毒株 HEK293 细胞购自美国
Clontech 公司；单纯疱疹病毒（herpes simplex virus
I，HSV- I）引自中国 CDC病毒研究所。
1. 3 主要试剂 MEM 培养基（Gibco 公司）；新生牛
血清（济南劲牛生物材料有限公司）；细胞维持液为
含有 2%新生牛血清的 MEM；细胞培养液为含有
10%新生牛血清的 MEM；其他化学试剂均为分析
纯。
1. 4 仪器 KQ-250E型医用超声波清洗器（群山市
不同季节采收的翼果苔草提取物体外抗病毒作用的实验研究
张少华 1，孟 红 2
（1.山东中医药大学 基础医学院，山东 济南 250355； 2.山东省医学科学院 基础医学研究所，山东 济南
250062）
［摘要］ 目的：探讨不同季节采收的翼果苔草粗提物体外抑制单纯疱疹病毒-I 作用的差异。 方法：将不同季节采集的翼果苔
草采用超声提取，分别获得丙酮-水提取物，以 HEK293-单纯疱疹病毒-I 体外感染模型，通过显微镜下观察细胞病变，酶标仪测
定中性红染色 A540值，计算抑毒指数，评价抗病毒效果。 结果：不同季节采收的翼果苔草丙酮-乙酸乙酯粗提物可抑制单纯疱疹病
毒的细胞病变效应，抑毒指数分别为 6.19，85.63，38.05，8.06。 结论：不同季节采收的翼果苔草对单纯疱疹病毒-I 均有抑制作用，
但以 5 月中旬采集者抗病毒作用最强。
［关键词］ 翼果苔草；采集季节；抗病毒；实验研究
［中图分类号］ R285.5 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 0257-358X（2010）07-0486-02
［收稿日期］ 2010-03-04
表 3 10 批蒙脱石及其制剂的吸附力测定结果
品 种 批号 吸附力（m/g·g-1）
蒙脱石 090101 0.313
蒙脱石 090102 0.379
蒙脱石 090103 0.418
蒙脱石散 090301 0.346
蒙脱石散 090302 0.311
蒙脱石散 090303 0.363
蒙脱石散 090304 0.471
蒙脱石混液 090501 0.316
蒙脱石混液 090502 0.298
蒙脱石分散片 090501 0.314
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DOI:10.16295/j.cnki.0257-358x.2010.07.029
山东中医杂志 2010 年 7 月第 29 卷第 7 期
超声仪器有限公司产品）；MK3 酶标仪（Labsystems
公司）；CKX-31 倒置显微镜（Olympus 公司）；隔水式
二氧化碳培养箱（美国 Forma 公司）；BHL-1300IIA
生物安全柜（上海康为公司）；R5003KE2 旋转蒸发
仪（上海申生科技有限公司）。
2 方法
2. 1 翼果苔草提取物的制备 取 3 月中旬、5 月
中旬、7 月中旬、9 月中旬采集的翼果苔草鲜品各
500 g，粉碎后两倍量 50%丙酮室温下 20 kHz超声提
取 2次，每次 50 min。 合并提取液，减压回收各得棕
色膏状提取物 280 mg、370 mg、360 mg和 320 mg。将
膏状提取物溶于细胞维持液中，浓度为 1 mg/ml，以
2倍比做系列稀释（2-1～2-11）备用。
2. 2 细胞毒性测定 参照文献方法［1］。 将不同月
份采集的翼果苔草提取物分别用甲醇溶解，并调整
浓度为 0.5 g/ml，然后用细胞维持液以 2 倍比系列
稀释的利巴韦林和备用样品按稀释顺序横向接种于
96 板孔中的单层细胞上，每孔 100 μl，每稀释度纵
向重复 3 孔，平行设微孔板 H 行为细胞对照，37℃、
5%CO2培养，每日于显微镜下观察细胞生长情况和
形态学变化，连续观察 7 d，中性红染色，用酶标仪测
定 A540值，将实验组与细胞对照组 A 值相比计算细
胞存活率，用 Reed-Muench 方法计算药物半数细胞
中毒浓度（median toxic concentration，TC50）。
2. 3 抑毒试验 参照文献方法［2］。 将上述不同季
节采集的翼果苔草提取物自 0.5 g/ml 始，用细胞维
持液做 2 倍比系列稀释，然后按稀释顺序横向接种
于 96 板孔中的单层细胞上，每孔 100 μl，每稀释度
纵向重复 4 孔，微孔板的 A、B、C 行加 100 μl 含有
100 个 TCID50病毒的稀释液作为试验组，D 行补充
等容量细胞维持液为不同浓度药物对照，平行设有
病毒对照、细胞对照、阳性药物利巴韦林对照组，最
后 2孔为空白对照。 37℃、5%CO2培养，每日观察细
胞病变效应（cytopathogenic effect，CPE），连续观察
4 d。 病毒对照出现 CPE 90%以上时（72 h），加 1％
中性红平衡盐水溶液染色 2 h 后，用磷酸盐平衡盐
水洗 3 次，加脱色液 100 μl，用酶标仪测定 A540值，
实验组 A 值比细胞对照组 A 值获得细胞存活率，用
Reed-Muench方法计算半数抑毒浓度 （median effi-
cacious concentration，EC50），最终将 TC50 和 EC50 相
比获得治疗指数（therapeutic index，TI）。
3 结果
3. 1 样品半数中毒浓度的测定 显微镜下观察对
照组细胞贴壁生长致密、形态良好。 利巴韦林组第 1
稀释度细胞生长稀疏，未见细胞变圆、脱落或皱缩等
坏死现象，细胞透明度好，未见遮光性增强；各组翼
果苔草提取物毒性试验组则在第 2稀释度细胞出现
80%细胞脱落坏死，而第 3 孔稀释度细胞贴壁生长
良好。 根据 A540值计算利巴韦林 TC50为小于 2-1；3
月中旬、5 月中旬、7 月中旬、9 月中旬翼果苔草粗提
物半数中毒浓度为分别为 2-2.7、2-2.3、2-2.4、2-2.8。
3. 2 抑毒试验 显微镜下观察发现， 正常对照组
细胞贴壁致密、形态良好；而 HSV- I 病毒对照组在
第 3 天出现 90%以上的 CPE，CPE 以细胞融合为主
要特征，随后脱落。 利巴韦林对照组细胞按照稀释
浓度的递减，逐渐出现 CPE 并梯度加重，在第 3 稀
释度之前细胞完全被保护 ，细胞贴壁致密 ，形态
规整 ，之后稀释度孔中细胞出现 CPE，且随样品
浓度减小逐渐加重。 不同月份采集的翼果苔草粗提
物抑毒试验组分别在第 4，7，6，4 稀释度之前未见
CPE，之后 CPE 随样品浓度减小逐渐加重。 中性红
染色 、测 A540 值并计算获得利巴韦林对 HSV- I 的
EC50为 2-3.5（11.66 mg·ml-1），TI 为 12.55；不同采集时
间的翼果苔草粗提物对 HSV- I 的 EC50 分别为 2-5.33
（12.34 mg·ml-1），2-8.72（1.19mg·ml-1），2-7.65（2.49mg·ml-1），
2-5.81（8.91 mg·ml-1）；TI分别为 6.19，85.63，38.05，8.06。
4 讨论
我们已经报道了翼果苔草对 HSV- I 的抑制作
用［1］。众所周知，植物药的疗效高低与其采收季节密
切相关。 唐代著名医家孙思邈在《千金翼方》中说：
“夫药采收，不知时节，不以阴干曝干，虽有药名，终
无其实。 故不以时采取，与朽木不殊，虚费人工，卒
无裨益。”《千金要方》也谓：“早则药势未成，晚则盛
时已歇。”金元时期名医李东垣在《用药法象》中说：
“凡诸草木昆虫，产之有地；根叶花实，采之有时。 失
其地则性味少异，失其时则性味不全。”为了探讨不
同采集时间对药效的影响，本研究对采收于 3 月中
旬、5 月中旬、7 月中旬和 9 月中旬的翼果苔草抗病
毒效果进行了比较研究。 结果发现，不同采集时间
的翼果苔草粗提物对 HSV- I 的抑制活性有差别，3
月中旬、5 月中旬、7 月中旬、9 月中旬采收的翼果苔
草提取物的 EC50分别为 2-5.33 （12.34 mg.ml-1），2-8.72
（1.19 mg·ml-1），2-7.65（2.49 mg·ml-1），2-5.81（8.91 mg·ml-1）；
TI 分别为 6.19，85.63，38.05，8.06。 以 5 月份活性最
高。 一般来说，全草类中药的采集时间应以植物枝
叶茂盛、花穗初开时为最佳 ［3］。 本实验初步证实，5
月中旬采集的翼果苔草抗 HSV- I 的活性最强，符合
全草类中药采集时间的基本规律。
［参考文献］
［1］ 张少华，孟红. 翼果苔草提取物抗病毒作用的实验研究［J］. 山
东中医杂志，2010，29（4）：262-263.
［2］ 汪受传，王霖，陈超，等. 清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病
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［3］ 高学敏. 中药学（十一五国家级规划教材）［M］. 2 版. 北京：中
国中医药出版社，2007：4.
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