全 文 ：山东中医杂志 2010 年 4 月第 29 卷第 4 期
翼果苔草，系莎草科苔草属植物 Carex neuro-
carpa Maxim.。 民间百姓广为应用其治疗感冒，疗效
显著。 而目前中医药书籍均未见翼果苔草的药用记
载，国内外亦未见其具有抗病毒作用的报道。 本研
究采用丙酮 - 乙酸乙酯依次提取的方法获得翼果
苔草粗提取物，用体外病毒感染模型研究其对单纯
疱疹病毒的抑制作用。
1 材料与仪器
1. 1 药品 翼果苔草采自山东济南南部山区黄巢
水库（北纬 36°22′02″，东经 117°09′27″，海拔高度
437 m）；阳性对照药利巴韦林针剂（100 mg·ml-1，山
东鲁抗医药集团有限公司，国药准字 H20013147）。
1. 2 细胞株与病毒株 HEK293 细胞购自美国
Clontech 公司；单纯疱疹病毒（herpes simplex virus
I，HSV- I）引自中国 CDC病毒研究所。
1. 3 主要试剂 MEM 培养基（Gibco 公司）；新生牛
血清（济南劲牛生物材料有限公司）；细胞维持液为
含有 2%新生牛血清的 MEM；细胞培养液为含有
10%新生牛血清的 MEM；其他化学试剂均为分析
纯。
1. 4 仪器 KQ-250E型医用超声波清洗器（群山市
超声仪器有限公司产品）；MK3 酶标仪（Labsystems
公司）；CKX-31 倒置显微镜（Olympus 公司）；隔水式
二氧化碳培养箱（美国 Forma 公司）；BHL-1300IIA
生物安全柜（上海康为公司）；R5003KE2 旋转蒸发
仪（上海申生科技有限公司）。
2 方法
2. 1 翼果苔草提取物的制备 翼果苔草鲜品 500 g，
粉碎，2 倍量 50%丙酮室温下 20 kHz 超声提取 2
次，每次 50 min。 合并提取液，减压回收丙酮，浓缩
液加等量乙酸乙酯萃取 2次，合并有机相，减压回收
乙酸乙酯，得棕色膏状提取物 350 mg。 将膏状提取
物溶于细胞维持液中，浓度为 1 mg·ml-1，以 2 倍比
做系列稀释（2-1～2-11），备用。
2. 2 细胞毒性测定 参照文献［1］，将细胞维持液
以 2倍比系列稀释的利巴韦林和备用样品按稀释顺
序横向接种于 96板孔中的单层细胞上，每孔 100 μl，
每稀释度纵向重复 3 孔，平行设微孔板 H 行为细胞
对照组，37 ℃、5% CO2培养，每日于显微镜下观察
细胞生长情况和形态学变化，连续观察 7 d，中性
红染色，用酶标仪测定 A540值，将实验组与细胞对照
组 A 值比较，计算细胞存活率，用 Reed-Muench 方
法计算药物半数细胞中毒浓度（TC50）。
2. 3 抑毒实验 参照文献［2］，将样品按稀释顺序
横向接种于 96板孔中的单层细胞上，每孔 100 μl，每
稀释度纵向重复 4 孔，微孔板的 A、B、C 行加含有
100个半数组织培养感染剂量（TCID50）的病毒 100 μl
作为实验组，D 行补充等容量细胞维持液为不同浓
度药物对照组，平行设有病毒对照组、细胞对照组、
阳性药物利巴韦林对照 （阳性对照）组，37 ℃、5%
CO2培养，每日观察细胞病变效应（CPE），连续观察
4 d。 病毒对照组 CPE出现 90%以上时（72 h），加 1%
中性红平衡盐水溶液染色 2 h 后，用磷酸盐平衡盐
水洗 3 次，加脱色液 100 μl，用酶标仪测定 A540值，
实验组 A 值与细胞对照组 A 值比值为细胞存活率，
用 Reed-Muench 方法计算半数抑毒浓度（EC50），TC50
与 EC50比值为治疗指数（TI）。
3 结果
3. 1 样品半数中毒浓度的测定 显微镜下观察各
对照组细胞贴壁生长致密、形态良好。 阳性对照组
·实验研究·
翼果苔草提取物体外抗病毒的实验研究
张少华 1，孟 红 2
（1.山东中医药大学 基础医学院，山东 济南 250355； 2.山东省医学科学院 基础医学研究所，山东 济南
250062）
［摘要］ 目的：探讨翼果苔草提取物对单纯疱疹病毒-I的体外抑制作用。 方法：采用超声提取，获得药物提取物，以 HEK293-
单纯疱疹病毒-I体外感染模型，通过显微镜下观察细胞病变，酶标仪测定中性红染色 A540值，计算抑毒指数，评价抗病毒效果。 结
果：翼果苔草丙酮-乙酸乙酯提取物可抑制单纯疱疹病毒的细胞病变效应，抑毒指数为 34.06。 结论：翼果苔草对单纯疱疹病毒有
抑制作用。
［关键词］ 翼果苔草；抗病毒作用；细胞病变作用；实验研究
［中图分类号］ R285.5 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 0257-358X（2010）04-0262-02
［收稿日期］ 2009-12-14
262· ·
DOI:10.16295/j.cnki.0257-358x.2010.04.032
山东中医杂志 2010 年 4 月第 29 卷第 4 期
表 1 翼果苔草体外抑制 HSV实验结果
翼果苔草提取物 利巴韦林
EC50 299（ρ/μg·ml-1） 3.98（ρ/mg·ml-1）
TI 34.06 12.55
细胞第 1稀释度细胞生长稀疏，未见细胞变圆、脱落
或皱缩等坏死现象，细胞透明度好，未见遮光性增
强；翼果苔草提取物毒性实验组则在第 2 稀释度细
胞出现 80%细胞脱落坏死，而第 3 孔稀释度细胞贴
壁生长良好，根据 A540值计算利巴韦林 TC50为小于
2-1；翼果苔草提取物 TC50为 2-2.47。
3. 2 抑毒实验 显微镜下观察，正常对照组细胞贴
壁致密、形态良好。 而病毒对照组在第 3天出现 90%
以上的 CPE，CPE以细胞融合为主要特征，随后脱落
（图 1）。 阳性对照组细胞按照稀释浓度的递减，逐渐
出现 CPE，并梯度加重，在第 3稀释度之前细胞完全
被保护，细胞贴壁致密，形态规整，之后稀释度孔中
细胞出现 CPE，且随样品浓度减小逐渐加重。 翼果
苔草提取物抑毒实验组在第 6稀释度之前未见 CPE
（图 2），之后出现 CPE，且随样品浓度减小逐渐加重。
中性红染色、测 A540值并计算获得利巴韦林对 HSV- I
的 EC50为 2-4.65（3.98 mg·ml-1），TI 为 12.55；翼果苔草
提取物对 HSV- I 的 EC50为 2-7.56（299 μg·ml-1），TI 为
34.06，结果见表 1。
4 讨论
我们依据民间治疗感冒的用药经验，通过实验
研究首次报道了白颖苔草的抗病毒作用 ［2］。 翼果苔
草和白颖苔草为同科同属植物，植株外形及其生态
环境十分相似，民间也常用于治疗感冒，推测可能有
抗病毒作用。
本实验采用细胞感染模型，初步探讨了翼果苔
草对 HSV- I 的抑制作用。 结果发现，翼果苔草粗提
物于 299 μg·ml-1 可抑制 100 个 TCID50·100 μl-1 的
HSV- I 50%的 CPE发生，抑毒指数为 34.06。
HSV属疱疹科病毒，临床以引起黏膜疱疹为主，
是引起散发性脑炎的病原，在新生儿、老年免疫力低
下人群中可引起严重感染甚至危及生命。 由于该病
毒具有整合感染特性，因此，多种肿瘤的发生与疱疹
病毒感染关系密切。 目前临床治疗疱疹病毒感染主
要依赖核苷类似物，通过干扰病毒核酸合成，抑制病
毒复制，但该类药物临床使用已接近 30 年，产生了
大量的耐药株，且该类药物毒性和不良反应强，连续
用药容易产生肝肾损伤，甚至影响儿童发育 ［3-4］。 因
此，急需新的抗 HSV 药物投放临床。 我国植物药物
学家长期以来重视抗疱疹病毒药物的筛选，研究发
现，许多植物提取物都具有抗 HSV 的作用 ，郝静
等 ［5］从云南 41 种植物提取物中，筛选到苦丁茶水提
取物具有开发出新的抗 HSV 新药的潜质；王小燕
等 ［6］从槟榔 9 种提取物中筛选出抗柯萨奇病毒 B3
和 HSV- I 型活性成分；赵高年等 ［7］报道甘草甜素对
HSV- I有抑制作用；喻淑庆等［8］报道大青叶提取物体
外有抗 HSV-Ⅱ型的作用；金楠等［9］对卷柏属 7 种药
用植物的 13 种提取物在体外抗 HSV- I 的作用进行
了比较研究，并对其抗病毒作用机制进行了初步探
讨；王辉等［10］报道荔枝核提取物有体外抗病毒活性，
并初步研究了其抗病毒的作用机制等。 上述药物均
具有可能发展为抗病毒中药制剂，并具有纯化分离
抗病毒先导化合物的潜质。
目前，尚未见翼果苔草抗病毒活性的报道，我们
希望从翼果苔草中分离出抗病毒先导化合物，为研
究新的抗病毒药物提供依据，也为翼果苔草作为抗
病毒药物应用于临床奠定基础。
［参考文献］
［1］ 汪受传，王霖，陈超，等. 清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病
毒抑制作用的实验研究［J］. 南京中医药大学学报，2008，24（1）：
25-27.
［2］ 高川，容蓉，孟红 . 白颖苔草提取物体外抗病毒作用的实验研
究［J］. 山东中医杂志，2009，28（1）：54-56.
［3］ 蒋文勇，杨静，耿红梅，等. 阿昔洛韦致急性肾功能衰竭 12 例临
床分析［J］. 贵州医药，2009，33（6）：541-542.
［4］ 王梅. 阿昔洛韦致过敏性休克 1 例［J］. 中国药物警戒，2009，6
（3）：183-184.
［5］ 郝静，张美英，王一飞，等 . 41 种南药提取物抗单纯疱疹病毒 I
型活性的实验研究［J］. 中药材，2008，31（8）：1226-1229.
［6］ 王小燕，张美英，王亚峰，等. 槟榔提取物体外抗柯萨奇病毒 B3
及单纯疱疹病毒 I 型和乙型肝炎病毒的研究［J］. 时珍国医国
药，2008，19（12）：2954-2955.
［7］ 赵高年，谢鹏. 草甜素抗单纯疱疹病毒 I 的实验研究［J］. 蛇志，
2008，20（3）：182-184.
［8］ 喻淑庆，陈湘漪，余凌. 大青叶提取物抗单纯疱疹病毒Ⅱ型的体
外实验研究［J］. 医药导报，2008，27（4）：394-396.
［9］ 金楠，陈科力，陈刚，等. 卷柏属药用植物提取物体外抗疱疹病
毒 I 型的研究［J］. 医药导报，2009，28（4）：415-418.
［10］ 王辉，陶小红，王洋，等. 荔枝核提取物体外抗病毒活性及其机
制研究［J］. 中国药科大学学报，2008，39（5）：437-441.
图 1 HSV- I 导致 CPE 图 2 翼果苔草抑制
HSV- I 发生 CPE
263· ·