全 文 ：[ 收稿日期] 2008-05-30
[ 基金项目] 国家科技部攻关项目(2004BA721A24)
[ 作者简介] 管雪梅(1983-),女 ,山东济宁人 ,硕士研究生 ,主
要从事中药质量资源的研究。
[ 通讯作者] 周凤琴(1951-),女 ,山东临沂人 , 教授 ,博士生导
师 ,主要从事中药鉴定学 、中药商品学和中药资源学的教学与研究。
Tel:13553190263 , E-mail:zfqsdzy@yahoo.com .cn。
·中药研究·
8个不同种质忍冬叶中绿原酸含量测定
管雪梅 ,郭庆梅 ,王秀凤 ,周凤琴 ,张永清
(山东中医药大学 , 山东 济南 250355)
[ 摘要] 目的:以绿原酸的含量为指标 ,评价不同种质忍冬叶的质量 , 为忍冬种质的划分和忍冬叶的开发应用
提供理论依据。方法:采用高效液相色谱法。结果:8 个种质忍冬叶绿原酸含量为0.79%～ 2.43%。结论:不同种
质忍冬叶中绿原酸含量存在差异。其中含量达到《中国药典》中金银花标准的有 24 , 32 , 34 三个种质 , 含量在 1%
以上的有 19 , 21 , 27 , 36 四个种质 , 种质 17 叶片中绿原酸含量最低。
[ 关键词] 高效液相色谱法;忍冬;叶;绿原酸;种质
[ 中图分类号] R282.71 [ 文献标识码] A [文章编号] 1007-659X(2008)05-0410-03
Determination of chlorogenic acid in the leaves of eight germplasm rescources of Lonicera japonica Thunb.GUAN Xue-
mei , GUO Qing-mei , WANG Xiu-feng , ZHOU Feng-qin , ZHANG Yong-qing (Shandong University of TCM , Jinan
250355 , China)
[ Abstract] Objective:To determine the contents of chlo rogenic acid in the leaves of Lonicera japonica from different
g ermplasm for division and screening the germplasm and for utilizing the leaves of Lonicera japonica .Methods:The
HPLC analy sis was used.Results:The contents of chlorogenic acid w ere different in eight germplasm rescources of
Lonicera japonica , ranging from 0.79% to 2.43%.Conclusions:The contents of chlorogenic acid in different germplasm
rescources of Lonicera japonica are different obviously.The contents w hich were higher than the criterion provided in
Chinese Pharmacopoeia were germplasm 24 , 32 and 34 , and the contents w hich w ere higher than 1% were germplasm
19 , 21 , 27 and 36 , the minimum of the content of chlo rogenic acid was germplasm 17.
[ Key words] HPLC;Lonicera japonica Thunb.;leaf;chlo rog enic acid;germplasm
忍冬叶为忍冬科植物忍冬(Lonicera japonica
Thunb.)的叶 ,忍冬叶和金银花在临床上均有清热
解毒之功效[ 1] 。近年来 ,随着金银花修剪整形技术
的推广 ,每年可得到大量的枝叶 ,但却被视为非药用
部位而弃之[ 2] 。忍冬叶的主要有效成分是绿原酸
类和黄酮类 ,据研究[ 3]同一时期的忍冬叶中绿原酸
类成分约为金银花的 60%～ 70%,并以 8 ～ 9 月份
忍冬叶中的含量最高;山东 、河南等地忍冬叶中的绿
原酸含量几乎超过了金银花 ,并发现其绿原酸的含
量受加工条件的影响[ 4] 。忍冬叶中黄酮类主要为
木犀草苷和忍冬苷 ,不同时期忍冬枝条不同部位黄
酮类的含量不同 ,节部和叶片 >花>茎[ 5] 。据报
道 ,忍冬叶的抑菌效果与花相同或高于花 ,对治疗急
性腹泻有很好的疗效[ 6] 。用忍冬叶制成的冲剂治
疗流行性感冒 、扁桃体炎 、上呼吸道感染等 ,疗效显
著 。
经过长期的自然选择与人工选择 ,忍冬种质发
生了明显的变异与分化 ,形成了很多农家品种或品
系 ,表现在植株形态上差异明显 ,叶片的形态不一。
不同种质忍冬叶的内在质量是否也有差异 ,目前尚
未见报道。笔者比较了不同种质忍冬叶中绿原酸的
含量 ,旨在为不同种质忍冬的划分和忍冬叶的开发
应用提供一定的科学依据。
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第 32 卷 第 5 期
2008 年 9 月
山东中医药大学学报
JOURNAL OF SHANDONG UNIVERSITY OF TCM
Vol.32 , No.5
Sep.2008
1 实验材料
1.1 仪器
Agilent 1100LC高效液相色谱仪(自动进样器 、
Agilent色谱工作站;美国 Agilent 公司);梅特勒
AG135型 1/10万电子分析天平;FA＊1104型电子
分析天平(上海天平仪器厂);KQ250E 型超声波清
洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
1.2 试剂
乙腈 、甲醇(色谱纯);甲醇 、磷酸(分析纯);纯净
水;绿原酸对照品(由中国药品生物制品检定所提
供 ,供含量测定用)。
1.3 样品
不同种质的忍冬叶分别于 2005年 9月份 、2005
年 11月份 、2006年 5月份采自山东省平邑县 、费县
金银花产地 ,取同一个地块的同一种质 ,在生长发育
正常 、大小基本一致的植株群中随机取样 5株 ,采收
成熟完整的忍冬叶 ,阴干 ,备用 。经周凤琴教授鉴
定 , 均 为忍冬 科植 物忍冬 (Lonicera japonica
Thunb.)的干燥叶。样品见表 1。
表 1 样品
编号 采收时间 性状
17 2006 年 5 月 叶片浓绿 , 卵状三角形 ,叶缘毛明显 ,质厚
19 2006 年 5 月 叶片绿色 , 长倒卵状 、椭圆形 , 叶两面疏被毛
21 2005 年 9 月 叶片绿色 , 卵形 、窄卵形 , 叶表面被毛较密
24 2005 年 11月 叶片绿色 , 卵状三角形 ,叶基平截
27 2006 年 5 月 叶片浓绿 , 卵状三角形 、椭圆形 , 叶两面疏被毛
32 2006 年 5 月 叶片绿色 , 长倒卵状 、椭圆形
34 2006 年 5 月 叶片绿色 , 叶狭椭圆形
36 2006 年 5 月 叶片绿色 , 长倒卵状 、椭圆形
2 实验方法和结果
2.1 色谱条件
色谱柱:Kromasil100A C18柱(250×4.6 mm ,
5μm);流动相:乙腈-0.4%磷酸溶液(13∶87);流速
1 ml/min;检测波长327 nm;理论塔板数按绿原酸
计算不低于1000。
2.2 样品制备
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照
品适量 ,置棕色容量瓶中 ,加 50%甲醇制成每1 ml
含33.6μg的溶液 ,即得 。
2.2.2 供试品溶液的制备 取药材粉末(过 4 号
筛)约0.25 g ,精密称定 ,置100 ml具塞锥形瓶中 ,精
密加入 50%甲醇25 ml ,称定重量 ,超声处理(功率
250 W ,频率35 kHz)30 min ,放冷 ,再称定重量 ,用
50%甲醇补足减失的重量 ,摇匀 ,滤过 ,精密量取续
滤液5 ml置25 m l棕色容量瓶中 ,加 50%甲醇至刻
度 ,摇匀 ,即得。
2.3 标准曲线的绘制与线性范围
精密吸取绿原酸对照品溶液 ,按 2.1项色谱条
件 ,依次进样 1 , 10 ,20 , 30 , 40 , 45 μl ,以峰面积对绿
原酸进样量进行线性回归 , 得回归方程:Y =
3210.6X -15.21 , r =0.9999 , 说明在 0.0336 ～
1.512 μg范围内 ,绿原酸含量与峰面积积分值呈良
好的线性关系。
2.4 精密度考察
将 19号样品按 2.2.2 项制得供试品溶液 ,在
2.1项色谱条件重复进样 6次 ,每次20μl ,测定峰面
积值 , RSD=0.32%(n=6),表明精密度良好。
2.5 稳定性考察
取 19号供试品溶液 ,设定进样体积20μl ,分别
在 0 , 2 ,6 ,8 ,12 ,16 h连续进样 ,测定峰面积值 , RSD
=2.63%,供试品溶液在16 h内稳定性良好 。
2.6 重现性考察
取 36号样品 ,按 2.2.2项制备成供试品溶液 ,
平行 6份 ,分别进样20 μl ,按 2.1项色谱条件测定
峰面积 ,测定含量 , RSD=0.82%,表明本试验重现
性良好 。
2.7 加样回收试验
分别取 6 份已知含量的忍冬叶(19 号)约
0.25 g ,分别加入绿原酸对照品2 mg ,按 2.2.2 供试
品溶液制备的方法配制 ,进样20 μl ,测定含量 ,计算
加样回收率 ,结果见表 2 。
2.8 样品测定
分别取各样品 ,按 2.2.2项制备成供试品溶液 ,
进样20 μl ,由线性方程计算不同种质忍冬叶中绿原
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2008 年 9 月 管雪梅等:8 个不同种质忍冬叶中绿原酸含量测定 第 32 卷第 5 期
酸的百分含量。
表 2 加样回收率试验结果
取样量(m/ g) 样品含量(m/ mg) 加样量(m/mg) 测得量(m/ mg) 回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%)
0.2505 2.20 2.02 4.18 98.02
0.2507 2.20 1.99 4.14 97.49
0.2495 2.19 2.08 4.23 98.08
0.2491 2.18 2.05 4.15 96.10
0.2508 2.20 2.01 4.22 100.50
0.2500 2.19 1.98 4.10 96.47
97.78 1.60
平均回收率=97.78%, RSD=1.60%, n =6 ,
表明准确度良好 。
3 结果与分析
本次实验测定了忍冬 8个种质的叶片 ,每个种
质选取了 5株样品 ,每株样品测得了 4个含量 ,不同
种质忍冬叶中绿原酸的平均含量(以干燥品计算)以
及SAS 统计学处理结果见表 3。
表 3 不同种质忍冬叶中绿原酸含量
样品编号 含量(%) 显著性差异＊
17 0.79±0.175 F
19 1.04±0.131 E
21 1.18±0.143 E
24 2.16±0.383 B
27 1.39±0.160 D
32 1.88±0.122 C
34 2.43±0.092 A
36 1.37±0.340 D
＊不同字母间表示 P <0.05
结果表明 ,不同种质间忍冬叶中绿原酸含量存
在显著性差异。
4 讨论与小结
4.1 不同种质忍冬叶中绿原酸的含量有差异
研究表明 ,不同种质忍冬叶中绿原酸的含量为
0.79%～ 2.43%,种质间差异显著 。不同采收期对
叶中绿原酸含量的影响尚不甚明显 。
4.2 忍冬叶可用于开发的几个种质
24 , 32 , 34 三 个种质 叶中绿原 酸含量 为
1.88%～ 2.43%,超过了《中国药典》金银花1.5%的
含量标准 ,值得开发应用或作为提取绿原酸的原料 。
种质 34的绿原酸含量达2.43%,属于含量最高的样
品。该种质花蕾的绿原酸含量也较高 ,但植株较矮
小 ,生物量较小 ,不抗蚜虫 ,而且花蕾基部红色 ,干燥
后色泽非传统的黄白色 ,不利于销售 ,有待于进行必
要的提纯复壮。种质 24的绿原酸含量达2.16%,是
近年来各地引种的一个种质 ,种植面积较大 ,花蕾中
绿原酸含量也较高 ,由于植株修剪成树型 ,枝条斜升
或直立少缠绕 ,便于采摘 ,是一个值得关注的种质。
种质 32是道地产地的一个主栽种质 , 植株生长旺
盛 ,叶片浓绿 ,枝条极度缠绕 ,在保持水土方面功不
可没 ,茎叶产量高 ,但因二茬花较少 ,需要进行优良
性状的定向培育与筛选 。
4.3 值得关注的几个种质
种质 19 , 21 , 27 , 36中绿原酸含量在 1%以上。
种质 19和 36均为当地传统的农家品种 ,种质 19具
有蔓生的红色营养枝 ,上部枝条缠绕 ,花蕾产量低;
种质 36花蕾形似种质 32而较长 。种质 21和 27为
经修剪而形成树状的种质 ,植株生物量大 。4个种
质叶中绿原酸含量虽然达不到《中国药典》中金银花
的含量 ,但这些种质的生物量大 ,茎叶产量较高 ,值
得开发利用 ,可以设计有效的提取分离工艺 ,将忍冬
叶作为提取绿原酸的原料 ,还可以加工成畜禽饲料
添加剂 。
4.4 绿原酸含量最低的种质
种质 17是近年来培育的一个种质 ,植株生物量
大 ,茎藤粗壮 ,叶片与花蕾肥大 ,毛茸浓集 ,与其他种
质的形态差异显著 ,叶中绿原酸含量最低 。据报道
花蕾中绿原酸含量较高 ,是否有其他因素的影响 ,有
待进一步研究。
[参考文献]
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