全 文 ：第３０卷第６期
２０１２年１２月
上 海 交 通 大 学 学 报 （农 业 科 学 版）
ＪＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＳＨＡＮＧＨＡＩ　ＪＩＡＯＴＯＮＧ　ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ（ＡＧＲＩＣＵＬＴＵＲＡＬ　ＳＣＩＥＮＣＥ）
Ｖｏｌ．３０Ｎｏ．６
　Ｄｅｃ．２０１２
文章编号：１６７１－９９６４（２０１２）０６－００１８－０４　 ＤＯＩ：１０．３９６９／Ｊ．ＩＳＳＮ．１６７１－９９６４．２０１２．０６．００４
收稿日期：２０１２－０５－０７
基金项目：浙江省重点科研农业项目（２０１０Ｃ２００４－３）；丽水市科技招标项目（２００９ＮＣＨ０２０９）
作者简介：吕秀立（１９８０－），女，博士生，工程师，专业方向：林木遗传育种，Ｅ－ｍａｉｌ：ｔｋｄｙｕｎ＠１６３．ｃｏｍ；
练发良（１９６５－）为本文通讯作者，男，博士，教授级高工，专业方向：园林植物，Ｅ－ｍａｉｌ：ｑｙｌｆｌ＠１６３．ｃｏｍ
墨西哥橘离体培养和植株再生
吕秀立１，陆　亮１，张庆费１，练发良２
（１．上海市园林科学研究所，上海２００２３２；２．丽水市林业科学研究院，浙江 丽水３２３０００）
摘　要：采用墨西哥橘带腋芽的茎段或者顶芽做为外植体，进行立体培养和植株再生，结果表明，
在 ＷＰＭ培养基上，当ＮＡＡ浓度为０．１ｍｇ／Ｌ（单位下同），ＢＡ浓度取１．０时，墨西哥橘增殖系数
为３．０５；试管内生根率低，采用试管外生根，生根率可达到８０％。本研究建立了墨西哥橘离体培养
和植株再生技术体系，为推广墨西哥橘良种奠定坚实基础。
关键词：墨西哥橘；离体培养；植株再生
中图分类号：Ｓ６６６．２　　　　文献标识码：Ａ
Ｔｉｓｓｕｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｐｌａｎｔｌｅｔ　Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｆｉｃｕｓｐｅｔｉｏｌａｒｉｓ
ＬＶ　Ｘｉｕ－ｌｉ１，ＬＵ　Ｌｉａｎｇ１，ＺＨＡＮＧ　Ｑｉｎｇ－ｆｅｉ１，ＬＩＡＮ　Ｆａ－ｌｉａｎｇ２
（１．Ｓｈａｎｇｈａｉ　Ｌａｎｄｓｃａｐｅ　Ｇａｒｄｅｎｉｎｇ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｓｈａｎｇｈａｉ　２００２３２，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｌｉｓｈｕｉ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｚｈｅｊｉａｎｇ，Ｌｉｓｈｕｉ　３２３０００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｒａｐｉｄ　ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｆｉｃｕｓ　ｐｅｔｉｏｌａｒｉｓ　ｗａｓ　ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ　ｕｓｉｎｇ　ｎｏｄａｌ
ｓｅｇｍｅｎｔｓ　ｏｒ　ｔｏｐ　ｓｐｒｏｕｔｓ　ａｓ　ｅｘｐｌａｎｔｓ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　Ｆｉｃｕｓ
ｐｅｔｉｏｌａｒｉｓ　ｓｈｏｏｔｓ　ｒｅａｃｈｅｄ　ｔｏ　３．０５ｕｓｉｎｇ　ＷＰＭ　ａｓ　ｔｈｅ　ｍｅｄｉａ　ｉｎ　ｗｈｉｃｈ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ＮＡＡ　ａｎｄ　ＢＡ
ｗｅｒｅ　０．１ａｎｄ　１．０ｍｇ／Ｌ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｌｏｗ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　ｄｉｓｐｌａｙｅｄ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ｉｎ－ｔｕｂｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｔｈｏｄｓ．
Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　ａｂｏｕｔ　８０％ｂｙ　ｏｕｔｓｉｄｅ－ｔｕｂｅ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ．Ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ
ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｐｌａｎｔｌｅｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｆｉｃｕｓｐｅｔｉｏｌａｒｉｓ，ｐｒｏｖｉｄｉｎｇ　ａ　ｓｏｌｉｄ　ｂａｓｅ　ｆｏｒ
ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ　ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｆｉｃｕｓ　ｐｅｔｉｏｌａｒｉｓ　ｂｒｅｅｄｉｎｇ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｆｉｃｕｓ　ｐｅｔｉｏｌａｒｉｓ；ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ；ｐｌａｎｔｌｅｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ
　　墨西哥橘（Ｆｉｃｕｓ　ｐｅｔｉｏｌａｒｉｓ）是芸香科、墨西哥
橘属常绿灌木，原产墨西哥，茎叶紧凑，浓密球状，株
高可达２．５ｍ。叶亮绿色，掌状，由３枚小叶组成，
叶片披针形至指形，长约４～８ｃｍ，对生，芳香，具光
泽。新叶叶色金黄，在阳光下灿烂耀眼，宛如金色的
手指，因此俗名为“金手指”。花白色，亦芳香，伞房
花序腋生，由３～６朵花组成，一般于春末、夏末及秋
季多个时节开放。喜阳，耐旱，耐寒，适应力强，在瘠
薄的土壤中也能生长，适合丛植于花坛边缘，与其他
绿色植物搭配，也可种植于浅色墙前，与墙面形成色
彩上的强烈对比。在我国目前应用于园林绿化的墨
西哥橘数量很少，但已经受到行业内关注，扦插、切
根繁育成活率低是限制其广泛应用的瓶颈所在，引
种费用高，而且运输损耗大，因此利用组织培养技术
快速繁殖，是解决墨西哥橘市场应用需求的有效途
径。本试验已经筛选出适合的培养基配方，为墨西
第６期 吕秀立，等：墨西哥橘离体培养和植株再生
哥橘的工厂化生产提供坚实基础。
１　材料与方法
１．１　试验材料
春季取带腋芽的茎段或者顶芽做为外植体
材料。
１．２　试验方法
１．２．１　培养基配方设计
增殖阶段，分别采用 ＭＳ、１／２ＭＳ、ＷＰＭ 为基
础培养基，ＮＡＡ　０．１ｍｇ／Ｌ，ＢＡ设置为０．１、０．５、１．
０、２．０ｍｇ／Ｌ计４种浓度梯度。
试管内生根，采用 １／２ ＭＳ 为基础培养基，
ＮＡＡ、ＩＢＡ分别设置为０．１、０．５、１．０、２．０ｍｇ／Ｌ计
４种浓度梯度。
试管外生根，将墨西哥橘无根组培苗在不同浓
度（０、２００、５００、８００、ｌ　０００、ｌ　５００、２　０００ｍｇ／Ｌ）的
ＩＢＡ、ＩＡＡ、ＮＡＡ溶液中浸泡５ｓ，筛选出试管外生
根的最佳生长素及浓度；再设置蘸取时间分别为１、
５、１５、３０、６０、８０、１００、１２０ｓ，探索蘸取时间对试管外
生根的影响。
１．２．２　培养条件
无菌苗于光照条件下培养，光照度１　５００ｌｘ，光
周期１２ｈ／ｄ，温度２５℃。各种培养基的ｐＨ 调为
５．７５，蔗糖３％，琼脂０．６４％，分装后在高压灭菌锅
中１２１℃条件下保持１８ｍｉｎ。
１．２．３　数据统计
统计数据时，每种处理调查２０个，重复３次，统
计增殖系数、生根率。
增殖系数＝增殖芽数／接种数
生根率＝生根株数／接种数×１００％
２　结果与分析
２．１　无菌苗的获得
带腋芽的茎段或者顶芽，去叶后剪成２ｃｍ长的
外植体，用自来水洗净，于超净工作台上，用７２％的
乙醇浸泡３０ｓ，１０％的“８４消毒液”浸泡１２ｍｉｎ，无
菌水冲洗５～６次后，接种于初代培养基 ＷＰＭ＋
ＢＡ　０．１＋ＮＡＡ　０．１中，诱导出芽。
２．２　分化和增殖
将初代培养诱导出的试管苗接种于增殖培养
基，培养至第１０天可观察到，接种在以 ＭＳ、１／２ＭＳ
为基础培养基的外植体均生长不良，黄弱纤细，叶片
下垂，培养３０ｄ后，逐渐衰弱；而 ＷＰＭ为基础培养
基的几种培养基，生长良好，生长迅速；由此可见大
量元素的含量以及种类对墨西哥橘组培苗的生长状
态影响明显。
增殖培养一般以２～３个芽为一丛，粗壮的大芽
可切成带２个节位的茎段，插植于增殖培养基上诱
导不定芽的分化。随着细胞分裂素浓度的提高，增
殖系数随之升高，当ＢＡ浓度达到１．０时，达到最高
值（表１）。当ＢＡ浓度为２．０时，腋芽也容易萌发形
成丛生芽，但叶柄基部易产生愈伤组织，致使叶片从
产生愈伤组织的地方脱落，继续培养，在丛生芽的基
部也形成愈伤组织团块，进而影响丛生芽从培养基
中吸收营养，致使生长变缓慢，降低了增殖系数。这
与同科异属的日本无刺花椒［１］、考来木［２］、两面针［３］
组培时情况类似。
表１　不同激素及不同激素水平对芽增殖的影响
Ｔａｂ．１　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｈｏｒｍｏｎｅ　ａｎｄ　ｈｏｒｍｏｎｅ　ｌｅｖｅｌｓ
ｏｎ　ｂｕｄ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ－ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ
培养基／（ｍｇ·Ｌ－１）
Ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍ
接种数
Ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ
ｐｌａｎｔｓ
增殖芽数
Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｅ
ｂｕｄｓ
增殖系数
Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｅ
ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ
ＭＳ＋ＢＡ　０．１＋ＮＡＡ　０．１　 ２０　 ２７　 １．３５
ＭＳ＋ＢＡ　０．５＋ＮＡＡ　０．１　 ２０　 ３１　 １．５５
ＭＳ＋ＢＡ　１．０＋ＮＡＡ　０．１　 ２０　 ３４　 １．７
ＭＳ＋ＢＡ　２．０＋ＮＡＡ　０．１　 ２０　 ３３　 １．６５
１／２ＭＳ＋ＢＡ　０．１＋ＮＡＡ　０．１　 ２０　 ２９　 １．４５
１／２ＭＳ＋ＢＡ　０．５＋ＮＡＡ　０．１　 ２０　 ３９　 １．９５
１／２ＭＳ＋ＢＡ　１．０＋ＮＡＡ　０．１　 ２０　 ３７　 １．８５
１／２ＭＳ＋ＢＡ　２．０＋ＮＡＡ　０．１　 ２０　 ３５　 １．７５
ＷＰＭ＋ＢＡ　０．１＋ＮＡＡ　０．１　 ２０　 ３８　 １．９
ＷＰＭ＋ＢＡ　０．５＋ＮＡＡ　０．１　 ２０　 ４９　 ２．４５
ＷＰＭ＋ＢＡ　１．０＋ＮＡＡ　０．１　 ２０　 ６１　 ３．０５
ＷＰＭ＋ＢＡ　２．０＋ＮＡＡ　０．１　 ２０　 ４５　 ２．２５
　　综合考虑，增殖培养以培养基 ＷＰＭ＋ＢＡ
１．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．１ｍｇ／Ｌ比较适宜，在该培养基
上墨西哥橘的增殖系数为３．０５（图３Ａ）。
２．３　生根培养
２．３．１　试管内生根
墨西哥橘试管内生根培养时，在所试验的范围
内，发现调整矿质元素以及不同种类生长素，如
ＮＡＡ、ＩＢＡ等，生根效果不理想，有的不生根，有的
生根率很低（最高仅为１０％），而且生根时间长达４
个月，生根状态也不好，基部容易愈伤化（表２）。因
此，在生根过程中我们采用试管外生根，采用不同质
量浓度的ＮＡＡ、ＩＢＡ、ＩＡＡ进行不同时间的处理，效
果比较好。
９１
上 海 交 通 大 学 学 报 （农 业 科 学 版） 第３０卷
表２　不同激素及不同激素水平对生根的影响
Ｔａｂ．２　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｈｏｒｍｏｎｅ　ａｎｄ　ｈｏｒｍｏｎｅ
ｌｅｖｅｌｓ　ｏｎ　ｒｏｏｔｉｎｇ
培养基／
（ｍｇ·Ｌ－１）
Ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍ
接种数
Ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ
ｐｌａｎｔｓ
生根外植体
Ｐｌａｎｔｓ
ｗｉｔｈ　ｒｏｏｔｓ
生根率／％
Ｒｏｏｔｉｎｇ
ｒａｔｅ
生根时间／ｄ
Ｒｏｏｔｉｎｇ
ｄａｙｓ
１／２ＭＳ＋ＮＡＡ　０．１　 ２０　 ０　 ０ ———
１／２ＭＳ＋ＮＡＡ　０．５　 ２０　 ０　 ０ ———
１／２ＭＳ＋ＮＡＡ　１．０　 ２０　 １　 ５　 １０８
１／２ＭＳ＋ＮＡＡ　２．０　 ２０　 ２　 １０　 １２０
１／２ＭＳ＋ＩＢＡ　０．１　 ２０　 ０　 ０ ———
１／２ＭＳ＋ＩＢＡ　０．５　 ２０　 ０　 ０ ———
１／２ＭＳ＋ＩＢＡ　１．０　 ２０　 ０　 ０ ———
１／２ＭＳ＋ＩＢＡ　２．０　 ２０　 １　 ５　 １１３
２．３．２　试管外生根
选择生长健壮的试管苗，切取成２ｃｍ的长度，
切口需平整，将基部浸入不同浓度的ＩＢＡ、ＩＡＡ和
ＮＡＡ溶液中浸泡５ｓ，然后移栽至珍珠岩∶草炭为
１∶１的混合基质中，初期保持湿度９５％以上，温度控
制在２５℃左右，２０ｄ后各种处理的生根率情况见
图１。图１显示，ＩＡＡ对墨西哥橘组培苗试管外生
根的促进效果不显著，最高诱导率仅为５．３％；ＩＢＡ
和ＮＡＡ的促进效果比较好，最高诱导率分别为
１６．３％和１３．７％；ＩＢＡ又优于 ＮＡＡ的促进作用。
ＩＡＡ、ＩＢＡ和 ＮＡＡ达到最高诱导生根率的浓度都
为８００ｍｇ／Ｌ。
ＩＢＡ（８００ｍｇ／Ｌ）蘸取时间对墨西哥橘组培苗生
根的影响由图２显示，适合墨西哥橘组培苗瓶外生
根的最适蘸取时间为６０ｓ，诱导率可达８０％（图
３Ｂ），１５ｄ发新叶，至６０ｄ时，根系发育完整（图
３Ｃ），即可移栽入大田或者盆栽，给予肥水管理。蘸
取时间过长或过短都不利于墨西哥橘组培苗试管外
生根，这可能是由于生长素ＩＢＡ的“双重作用”引起
的，即在较低质量浓度下生长素可促进组培苗生长，
在高质量浓度下对生长有抑制作用。
图１　不同生长素浓度对生根的影响
Ｆｉｇ．１　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｈｏｒｍｏｎｅ　ａｎｄ　ｈｏｒｍｏｎｅ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｎ　ｒｏｏｔｉｎｇ
图２　不同生长素浓度对生根的影响
Ｆｉｇ．２　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ＩＢＡ　ｈａｎｄｌｅ　ｔｉｍｅ　ｏｎ　ｒｏｏｔｉｎｇ
图３　墨西哥橘组织培养过程
Ａ．增殖培养；Ｂ．试管苗瓶外生根；Ｃ．生根情况；Ｄ．移栽成活６月的墨西哥橘；Ｅ．两年生组培苗开花
Ｆｉｇ．３　Ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｆ　Ｆｉｃｕｓ　ｐｅｔｉｏｌａｒｉｓ
Ａ．Ｂｕｄ　ｍｕｔｉｐｌｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ；Ｂ．Ｒｏｏｔｉｎｇ　ｏｕｔ－ｔｕｂｅ；Ｃ．Ｒｏｏｔｉｎｇ；Ｄ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｉｎｇ　ａｆｔｅｒ　ｓｉｘ　ｍｏｎｔｈｓ；Ｅ．Ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ
０２
第６期 吕秀立，等：墨西哥橘离体培养和植株再生
３　讨论
植物组织培养能直接形成完整的再生植株是该
技术的优越性，但有些植物试管内诱导生根较难，利
用试管外扦插生根可获得较好的效果，同时试管外
生根较试管内生根有更多优点［４－９］。由于墨西哥橘
在试管内按常规方法诱导生根效果不理想，而采用
试管外扦插生根能获得良好根系，移栽入大田成活
率高。墨西哥橘组培苗试管外生根的最佳处理为
ＩＢＡ浓度为８００ｍｇ／Ｌ，蘸取时间为６０ｓ，生根率可
以达到８０％。
从本研究的结果看，在生产过程中，采用直接器
官发生形式，以芽繁芽进行组培快繁生产出来的试
管苗经大田种植或盆栽，无变异发生（图３Ｄ）。由于
取材母本已经开花，经此母本组培繁育得来的再生
植株，在种植的第２年也开始开放花朵（图３Ｅ）。
参考文献：
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櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅
１４９９２．
（上接第５页）
［４］　Ｂａｉ　Ｄ　Ｑ，Ｘｉａ　Ｘ　Ｓ，Ｙｏｗ　Ｃ　Ｍ　Ｎ，ｅｔ　ａｌ．Ｈｙｐｏｃｒｅｌｉｎ　Ｂ－
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Ｓｈｉｒａｉａ　ｂａｍｂｕｓｉｃｏｌａ：ｓｔａｂｉｌｉｔｙ　ａｎｄ　ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ
ｈｙｐｏｃｒｅｌｉｎ　ｅｘｔｒａｃｔ［Ｊ］．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｆｏｏｄ　Ｓｃｉ－
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ｔｈｅ　ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　ｆｕｎｇｕｓ　Ｓｈｉｒａｉａ　ｂａｍｂｕｓｉｃｏｌａ ［Ｊ］．Ｄｙｅｓ
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ＨＰＬＣ　ｍｅｔｈｏｄ　ｔｏ　ａｎａｌｙｚｅ　ａｎｄ　ｐｒｅｐａｒｅ　ｅｌｓｉｎｏｃｈｒｏｍｅ　Ｃ
ａｎｄ　ｈｙｐｏｃｒｅｌｉｎ　Ａ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｕｂｍｅｒｇｅｄ　ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ
ｂｒｏｔｈ　ｏｆ　Ｓｈｉｒｉａ　ｓｐ　ＳＵＰＥＲ－Ｈ１６８ ［Ｊ］．Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ
Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，２０１２，２６（６）：７３７－７４２．
［１５］　Ｄｏｕｎｇｐｏｒｎ　Ｍ，Ｈｉｒｏｋｏ　Ｋ，Ｔａｔｓｕｊｉ　Ｓ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｄｉｖｅｒｓｉ－
ｔｙ　ｏｆ　ｂａｍｂｏｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｆｕｎｇｉ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　Ｊａｐａｎ
［Ｊ］．Ｆｅｍｓ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ　Ｌｅｔｔ，２００７，２６６：１０－１９．
１２