全 文 ：第３４卷第２期　　　　　　　　　 西 南 大 学 学 报 （自然科学版）　　　　　　　　　　　２０１２年２月
Ｖｏｌ．３４　Ｎｏ．２ Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ） Ｆｅｂ．　２０１２
文章编号：１６７３－９８６８（２０１２）０２－００１７－０６
生防细菌Ｃ３的鉴定及对
魔芋软腐病的防效研究
＊
王永吉１，　张丽辉１，　魏兰芳２，
姬广海１，　廖　林１，　林　琳１
１．云南农业大学 植物保护学院，昆明６５０２０１；
２．云南农业大学 农科基础实验教学中心，昆明６５０２０１
摘要：从魔芋根际土壤中分离得到一株具有强烈抑菌活性，并具有较广抑菌谱的革兰氏阳性生防细菌菌株Ｃ３．
经形态特征、常规生理生化特征和Ｂｉｏｌｏｇ鉴定，发现该菌株与解淀粉芽孢杆菌Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ特征很
相似．采用细菌通用引物２７ｆ和１　４９２ｒ扩增１６ＳｒＤＮＡ基因片段，得到１　１０５ｂｐ　ＤＮＡ片段，其序列与已报道的
解淀粉芽孢杆菌ＦＺＢ４２的同源性高达１００％，故将生防细菌菌株Ｃ３鉴定为解淀粉芽孢杆菌Ｂ．ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ．
田间防效测试结果显示，在对照病情指数为４１．２０的情况下，生防细菌Ｃ３对魔芋细菌性软腐病的控制效果达到
了５７．７６％．
关　键　词：解淀粉芽孢杆菌Ｃ３；Ｂｉｏｌｏｇ鉴定；１６ＳｒＤＮＡ测序；田间防效
中图分类号：Ｓ６３２．３ 文献标志码：Ａ
魔芋富含葡甘露聚糖，是唯一分布广、适应性强、可大量提取葡甘露聚糖的植物［１］．但随着种植年限的延
长，栽培面积的扩大，由胡萝卜软腐欧文氏菌胡萝卜亚种Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ　ｓｕｂｓｐ．ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ引起的
魔芋细菌性软腐病近年来频繁发生，仅云南省的发病率就高达３０％～５０％［２］．随着危害程度的增加，魔芋软
腐病也越来越受到重视．然而，迄今为止少有高效控制软腐病的报道，特别是采用生物防治措施成功地控制该
病害的报道更少．
芽孢杆菌属于土壤习居类细菌之一，占土壤中菌类的很大比例，其中许多种类独立地或与其他微生物
菌株混合具有抑制土传病害的作用，并被生产成植物病害生防制剂．生防细菌Ｃ３是本实验室从魔芋根际
土壤分离筛选出的，对魔芋软腐病菌具有较强抑制作用的生防菌株．为了进一步开发应用该菌株，本文从
表型特征、生理生化及系统发育等方面入手，确定其分类地位，并初步研究了其在田间对魔芋软腐病的防
治效果，为田间高效控制病害，提高魔芋产量和品质提供理论依据．
１　材料和方法
１．１　供试菌株
生防细菌菌株Ｃ３由本实验室采用平板稀释法从魔芋根际土壤中分离得到．植物病原细菌、病原真菌
均由本实验室保存（表１）．
＊
收稿日期：２０１１－０５－０５
基金项目：国家自然科学基金资助项目（３０７６０１３９）；农业部公益性行业专项基金资助项目（２０１００３０２９）．
作者简介：王永吉（１９８６－），男，山西霍州人，硕士研究生，主要从事植物细菌病害生物防治研究．
通信作者：姬广海，教授．
１．２　抑菌谱测定
具体方法参照姬广海等的报道［３］．
１．３　培养性状和菌体形态特征观察
将生防细菌菌株Ｃ３分别在ＮＡ和Ｒ２Ａ培养基上培养，观察菌落形态、颜色、质地和色素等．革兰氏
染色采用氢氧化钾（ＫＯＨ）溶解法和结晶紫草铵染色法．鞭毛采用ＥＭ－１２００ＥＸⅡ型透射电子显微镜观察并
拍照．芽孢染色、滑行运动观察和常规生理生化鉴定参照文献［３－５］．
１．４　Ｂｉｏｌｏｇ微生物自动鉴定系统鉴定
采用ＢＩＯＬＯＧ公司提供的ＭｉｃｒｏｓｔａｔｉｏｎＴＭＶ４．０１系统和革兰氏阳性菌微板来鉴定．具体鉴定方法参照
吴亚鹏等的报道［６］．
１．５　１６ＳｒＤＮＡ序列测定及系统发育学分析
采用裂解法提取菌株Ｃ３基因组总ＤＮＡ，用引物２７ｆ（５－ＡＧＡＧＴＴＴＧＡＴＣＣＴＧＧＣＴＣＡＧ－３）和１　４９２ｒ
（５－ＧＧＣＴＡＣＣＴＩＧＴＩＡＣＧＡＣＴＴ－３）进行ＰＣＲ扩增．ＰＣＲ反应体系如下（５０μＬ）：缓冲液１０×ｂｕｆｆｅｒ　５μＬ，
ｄＮＴＰ（２．５ｍｍｏｌ／ｍＬ）４μＬ，引物２７ｆ（１０μｍｏｌ／ｍＬ）２μＬ，引物１　９４２ｆ（１０μｍｏｌ／ｍＬ）２μＬ，模板ＤＮＡ
２μＬ，Ｔａｐ酶（５Ｕ／μＬ）０．８μＬ，ｄｄ　Ｈ２Ｏ　３４．２μＬ．ＰＣＲ扩增程序为：９４℃５ｍｉｎ；９４℃３０ｓ，５０℃３０ｓ，
７２℃１．５ｍｉｎ，３５个循环；最后７２℃１０ｍｉｎ．扩增产物于１％琼脂糖凝胶上切下，采用ＧｅｎＣｌｅａｎ琼脂糖
凝胶ＤＮＡ回收试剂盒（离心柱型）进行回收，纯化后送上海生物工程有限公司进行ＰＣＲ产物测序，测序仪
器为ＡＢＩ　ＰＲＩＳＭ　３７７－９６自动测序仪．将测得的基因序列通过Ｂｌａｓｔ程序与ＧｅｎＢａｎｋ中核酸数据库进行比
对分析．
１．６　１６ＳｒＤＮＡ序列分析和系统发育树的构建
所测序列递交Ｇｅｎｂａｎｋ数据库，使用Ｂｌａｓｔ程序进行相似性比较（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｌｍ．ｇｏｖ／
ｂｌａｓｔＮ），调取Ｇｅｎｂａｎｋ数据库中与之同源性较高的一些细菌的１６ＳｒＤＮＡ序列，使用软件ＣＬＵＳＴＡＬＸ进
行多序列匹配排列，删除序列匹配排列中出现的插入和缺失．用邻接法（Ｎｅｉｇｈｂｏｒ－ｊｏｉｎｉｎｇ　ｍｅｔｈｏｄ）获得分
支系统发育树，从而得知各菌株间亲缘关系的远近．设定ｂｏｏｔｓｔｒａｐ为１　０００，用于构建系统发育树菌株的
细菌名称、编号及它们的亲缘关系（图１）．
１．７　田间防效测定
本试验在云南省曲靖市富源县完成．试验设生防菌单独处理、清水对照、农药对照３个处理，每个
处理重复３次，小区完全随机排列．每小区面积为３０ｍ２，施药方法采用灌根法．每株魔芋根部灌药液
１００ｍＬ，发病初期前１周施第１次药，间隔１５ｄ施第２次药，共施药２次．
１．８　调查方法及病害分级
采用五点取样法进行调查．第２次施药后２０ｄ，分别调查各小区的病情指数，计算防治效果．
防治效果＝（对照病情指数－处理后病情指数）／对照病情指数×１００％．
魔芋软腐病分级标准参照吴亚鹏等的报道［６］．
２　结果与分析
２．１　生防细菌Ｃ３的抑菌谱测定
试验结果表明，生防细菌Ｃ３对不同寄主的软腐病原菌都具有抑菌作用，尤其是对魔芋软腐病菌
ＭＹ１６抑制作用最强，其抑菌圈直径达到１５．３ｍｍ．对其他病原细菌如红掌叶疫病菌（８．３ｍｍ）、马铃薯青
枯病（１０．５ｍｍ）及其病原真菌如烟草黑胫病菌（１７．５ｍｍ）等也有较强的抑菌效果，表明该生防细菌Ｃ３具
有广谱的抑菌作用（表１）．
２．２　培养性状及形态特征观察结果
在ＮＡ培养基上菌落呈不规则圆形，边缘不整齐，菌落初期粘稠，后期起皱，乳白色，不透明，菌落边
８１ 西南大学学报（自然科学版）　　　　　ｈｔｔｐ：／／ｘｂｂｊｂ．ｓｗｕ．ｃｎ　　　　　第３４卷
缘裂页状，质地为粗颗粒状或泡沫状，中心为乳突状凸出，菌体在液体中不易分散，不产生色素，产生芽
孢．２４ｈ内菌落直径为２ｍｍ，４８ｈ菌落直径为４ｍｍ．菌体为直杆状，大小为（０．７～０．８）×（２．０～２．４）μｍ
２，
周生鞭毛，芽孢中生，椭圆形，孢囊不膨大，原生质染色均匀，可运动．
表１　生防细菌Ｃ３抑菌谱测定
植物病原细菌（真菌） 学　　名 菌株编号 抑菌圈直径／ｍｍ 寄主
魔芋软腐病菌 Ｅｒｗｉｎｉａ　ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ　ｓｕｂｓｐ．ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ　 ＭＹ１６　 １５．３±０．１９ 魔芋
马铃薯青枯病菌 Ｒａｌｓｔｏｎｉａ　ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ　 Ｐ２　 １０．５±０．３４ 马铃薯
水稻白叶枯病菌 Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ　ｏｒｙｚａｅ　ｐｖ．ｏｒｙｚａｅ　 ＹＮ７，ＹＮ１１　 １９～２４ 水稻
烟草野火病菌 Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｓｙｒｉｎｇａｅ　ｐｖ．ｔａｂａｃｉ　 ＣＸ１　 ６．５±０．１６ 烟草
细菌性条斑病菌 Ｘ．ｏｒｙｚａｅ　ｐｖ．ｏｒｙｚｉｃｏｌａ　 Ｙｎｂ　 ６．９±０．１５ 水稻
红掌叶疫病菌 Ｘ．ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ　ｐｖ．ｄｉｅｆｆｅｎｂａｃｈｉａｅ　 ５Ｔ１１　 ８．３±０．１７ 红掌
香荚兰根腐病菌 Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｏｒｙｓｐｏｒｕｍＳｃｈｌｆ．ｓｐ．Ｖａｎｉｌｌａｅ　 ＤＬ－４　 １３±０．５１ 香荚兰
芦荟根腐病菌 Ｆ．ｓｏｌａｎｉ　 ＬＨ５　 ８．３±０．３４ 芦荟
烟草黑胫病菌 Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ　ｐａｒａｓｉｔｉｃａ　ｖａｒ．ｎｉｃｏｔｉａｎａ　 ９７００９　 １７．５±０．３３ 烟草
水稻稻瘟病菌 Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｉａ　ｇｒｉｓｅａ　 ＤＷ　 ９．４±０．１６ 水稻
２．３　常规生理生化特征鉴定结果
生防细菌Ｃ３革兰氏反应为阳性，在ＮａＣｌ质量分数为１％～１０％的情况下都可以生长，在厌氧条件下
不能生长，且不产生Ｈ２Ｓ；能利用葡萄糖、阿拉伯糖、甘露糖、半乳糖和Ｄ－木糖等碳素化合物产酸；能够水
解淀粉，乙酰甲基醇试验（Ｖ．Ｐ试验）为阳性反应，硝酸盐还原反应呈阳性；能够液化明胶，过氧化物酶和
酪蛋白水解呈阳性，但不能利用氧化酶．根据上述结果，生防细菌Ｃ３应归入芽孢杆菌属Ｂａｃｉｌｌｕｓ．
２．４　Ｂｉｏｌｏｇ微生物鉴定系统鉴定结果
将生防细菌Ｃ３细菌悬浮液接种到９５种碳源的Ｂｉｏｌｏｇ微孔板中，培养２４ｈ后，测定菌株代谢情况．在
碳源利用方面，菌株Ｃ３能利用糖原（Ａ４）、吐温４０（Ａ５）、Ｎ－乙酰－Ｄ－葡糖胺（Ａ８）、核糖醇（Ａ９）、Ｌ－阿拉伯
糖（Ａ１０）、Ｄ－阿拉伯糖醇（Ａ１１）、Ｌ－岩藻糖（Ｂ３）、Ｄ－半乳糖（Ｂ４）、龙胆二糖（Ｂ５）、ｍｅｓｏ－肌醇（Ｂ７）、乳酮糖
（Ｂ９）、Ｄ－甘露醇（Ｂ１１）、Ｄ－阿洛酮糖（Ｃ３）、Ｄ－棉子糖（Ｃ４）、Ｌ－鼠李糖（Ｃ５）、Ｄ－山梨醇（Ｃ６）、甲基丙酮酸
（Ｃ１１）、乙酸（Ｄ１）、柠檬酸（Ｄ３）、甲酸（Ｄ４）、Ａ－羟基乙酸（Ｄ１０）、Ｙ－羟基乙酸（Ｄ１２）、衣康酸（Ｅ２）、ａ－丁
酮酸（Ｅ３）、ａ－酮基戊酸（Ｅ５）、丙酸（Ｅ８）、琥珀酸（Ｅ１２）、Ｄ－丙氨酸（Ｆ５）、Ｌ－丙氨酸（Ｆ６）、Ｌ－丙氨酰－甘氨酸
（Ｆ７）、Ｌ－天冬氨酸（Ｆ９）、Ｌ－谷氨酸（Ｆ１０）、Ｌ－亮氨酸（Ｇ３）、Ｌ－丝氨酸（Ｇ９）、Ｌ－苏氨酸（Ｇ１０）、ＤＬ－肉碱
（Ｇ１１）、Ｙ－氨基丁酸（Ｇ１２）、尿苷酸（Ｈ１）、次黄苷（Ｈ２）、尿苷（Ｈ３）、胸苷（Ｈ４）、苯乙胺（Ｈ５）、丁二胺
（Ｈ６）、２－氨基乙醇（Ｈ７）、芳糖－６－磷酸（Ｈ１２）共４５项．不能利用环化糊精（Ａ２）、糊精（Ａ３）、吐温８０（Ａ６
）、Ｎ－乙酰－Ｄ－半乳糖（Ａ７）、纤维二糖（Ａ１２）、ｍｅｓｏ－赤鲜糖醇（Ｂ１）、Ｄ－果糖（Ｂ２）、ａ－Ｄ－葡萄糖（Ｂ６）、ａ－Ｄ－
乳糖（Ｂ８）、麦芽糖（Ｂ１０）、Ｄ－甘露糖（Ｂ１２）、Ｄ－蜜二糖（Ｃ１）、Ｂ－甲基芳糖苷（Ｃ２）、蔗糖（Ｃ７）、Ｄ－海藻糖
（Ｃ８）、松二糖（Ｃ９）、木糖醇（Ｃ１０）、单甲基琥珀酸（Ｃ１２）、ｃｉｓ－乌头酸（Ｄ２）、ａ－Ｄ－半乳糖酸内酯（Ｄ５）、Ｄ－
半乳糖醛酸（Ｄ６）、Ｄ－芳糖酸（Ｄ７）、Ｄ－芳糖胺酸（Ｄ８）、Ｄ－芳糖醛酸（Ｄ９）、Ｐ－羟基乙酸（Ｄ１１）、Ｐ－羟基苯酸
（Ｅ１）、α－酮戊二酸（Ｅ４）、ＤＬ－乳酸（Ｅ６）、丙二酸（Ｅ７）、奎尼酸（Ｅ９）、Ｄ－芳糖二胺（Ｅ１０）、睽二胺（Ｅ１１）、
溴琥珀酸（Ｆ１）、琥珀酰胺酸（Ｆ２）、芳糖醛酰胺（Ｆ３）、丙胺酰胺（Ｆ４）、Ｌ－天冬酰氨（Ｆ８）、甘氨酰－Ｌ－天冬
氨酸（Ｆ１１）、甘氨酰－Ｌ－谷氨酸（Ｆ１２）、Ｌ－组氨酸（Ｇ１）、羟－Ｌ－脯氨酸（Ｇ２）、Ｌ－鸟氨酸（Ｇ４）、Ｌ－苯丙氨酸
（Ｇ５）、Ｌ－脯氨酸（Ｇ６）、Ｌ－焦谷氨酸（Ｇ７）、Ｄ－丝氨酸（Ｇ８）、２，３－丁二醇（Ｈ８）、甘油（Ｈ９）、ＤＬ－ａ－磷酸甘油
（Ｈ１０）、芳糖－１－磷酸（Ｈ１１）等（表２）．
Ｂｉｏｌｏｇ测定结果经与标准库已知细菌菌株比较，Ｃ３菌株的代谢特征图谱与解淀粉芽孢杆菌Ｂａｃｉｌｌｕｓ
ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ相似程度最高（相似值为０．６６３）．
９１第２期　　　　　　 　王永吉，等：生防细菌Ｃ３的鉴定及对魔芋软腐病的防效研究
表２　菌株Ｃ３在Ｂｉｏｌｏｇ阳性鉴定板上的碳源利用情况
测试项目
碳　源　利　用
１　 ２　 ３　 ４　 ５　 ６　 ７　 ８　 ９　 １０　 １１　 １２
Ａ － － － ＋ ＋ － － ＋ ＋ ＋ ＋ －
Ｂ － － ＋ ＋ ＋ － ＋ － ＋ － ＋ －
Ｃ － － ＋ ＋ ＋ ＋ － － － － ＋ －
Ｄ ＋ － ＋ ＋ ＋／－ － － － － ＋ － ＋
Ｅ － ＋ ＋ － ＋ － － ＋ － － － ＋
Ｆ － － － － ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ － －
Ｇ － － ＋ － － － － － ＋ ＋ ＋ ＋
Ｈ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ － － － － ＋
　　注：“＋”为阳性反应；“－”为阴性反应；“＋／－”为可变．
２．５　１６ＳｒＤＮＡ的序列测定及系统发育学分析结果
２．５．１　生防细菌Ｃ３　１６ＳｒＤＮＡ的序列测定
用引物２７ｆ和１　４９２ｒ对生防细菌Ｃ３的１６ＳｒＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增，得到约１　５００ｂｐ的ＰＣＲ产物，经
测序得到生防细菌Ｃ３菌株１６ＳｒＤＮＡ部分序列大小为１　１０５ｂｐ，Ｇｅｎｂａｎｋ登录号为 ＨＱ６６８１７８．
２．５．２　系统发育学分析
Ｇｅｎｂａｎｋ序列同源性比对结果显示，生防细菌 Ｃ３与解淀粉芽孢杆菌Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ
ＦＺＢ４２　１６ＳｒＤＮＡ序列的相似性为１００％，通过Ｎ－Ｊ法构建系统发育进化树（图１），结果显示生防菌Ｃ３与
Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ　ＦＺＢ４２聚类在一起，构成１个分支．结合其培养特性和生理生化反应，将生防
细菌Ｃ３鉴定为解淀粉芽胞杆菌Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ．
括号中为ＧｅｎＢａｎｋ　１６ＳｒＤＮＡ登录号．
图１　生防菌株Ｃ３的系统发育树
２．６　田间防效试验结果
田间试验结果表明，生防细菌Ｃ３平均病株率和平均病情指数都明显低于对照田块，分别为１６．７％和
１７．４％；其防效为５７．７６％．其中生防细菌Ｃ３的防效与水合霉素的防效相比较，差异具有高度统计学意义
（ｐ＝０．０１），对魔芋软腐病具有较好的防治效果（表３）．
表３　生防细菌Ｃ３的田间防效测定结果
处理 病株率／％ 病情指数 防效／％
ＣＫ　 ４０．００±１．２１Ａ ４１．２０±６．３７Ａ
水合霉素 ３６．３０±４．７１ＡＢ　 ２６．１４±４．９７Ｂ ３５．９０Ｂ
Ｃ３　 １６．７０±５．７２Ｂ １７．４０±３．９７Ｃ ５７．７６Ａ
　　注：同列数据后不同大写字母表示处理间差异具有高度统计学意义（ｐ＝０．０１）．
０２ 西南大学学报（自然科学版）　　　　　ｈｔｔｐ：／／ｘｂｂｊｂ．ｓｗｕ．ｃｎ　　　　　第３４卷
３　讨　论
菌落形态、革兰氏染色、芽孢染色和生理生化指标表明，Ｃ３菌株属于芽孢杆菌属．采用Ｂｉｏｌｏｇ对
生防细菌Ｃ３的鉴定结果表明，生防细菌Ｃ３与解淀粉芽孢杆菌Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ的相似程度
最高（相似值为０．６６３），达到鉴定结果的临界值（革兰氏阳性细菌培养１６～２４ｈ的相似值≥０．５）．而
且，１６ＳｒＤＮＡ的序列测定与比对结果也表明，生防细菌Ｃ３与解淀粉芽孢杆菌Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａ－
ｃｉｅｎｓ　ＦＺＢ４２　１６ＳｒＤＮＡ序列的相似性为１００％，所以将生防细菌Ｃ３鉴定为解淀粉芽胞杆菌Ｂａｃｉｌｌｕｓ
ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ．
由于生防细菌 Ｃ３对魔芋细菌性软腐病有非常好的防治效果，因此被申请专利保护（专利号：
ＺＬ２００５　１　００４８７５５．Ｘ）．魔芋细菌性软腐病是一种极其难防的土传病害，除轮作行之有效外，其他防
治措施效果均不理想．土壤消毒虽然高效，但因其对土壤生态环境的破坏和高昂的成本而不能被广泛
应用；化学药剂因效果不好和防效不稳定也难被采用；而生物防治措施至今仍然停留在实验室和温
室［７－９］．事实上，解淀粉芽孢杆菌是一类应用广泛且具有应用前景的植物病害生防菌，其产生的抗菌
蛋白［１０］、表面活性素［１１－１２］、伊枯草菌素［１３－１４］和几丁质酶［１５］等抗菌物质可以有效地控制植物病害，
并且对植株本身不会带来副作用，这也有助于实现植物病害无害化防治的目标．
田间试验结果显示生防细菌Ｃ３对魔芋软腐病的防效达到了５７．７６％，明显优于周燚等［１６］利用抗病苏
云金芽孢杆菌工程菌ＢＭＢ６８６和ＢＭＢ３４３９对魔芋软腐病３０％～４０％的相对防效．对照水合霉素对魔芋软
腐病的防效只有３５．９０％，说明生防细菌Ｃ３相对于其他生防菌株和杀菌剂水合霉素都具有明显的优势，是
一种有潜力的生防细菌．本研究表明，解淀粉芽孢杆菌Ｃ３对多种病原细菌和真菌都具有较好的抑菌作用，
特别是对水稻白叶枯病菌和烟草黑胫病菌等影响较大的病菌有较强的抑制作用．有关其抗菌物质的组分和
结构，还有待进一步研究．
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１２第２期　　　　　　 　王永吉，等：生防细菌Ｃ３的鉴定及对魔芋软腐病的防效研究
［１２］ＳＯＵＴＯ　Ｇ　Ｉ，ＣＯＲＶＥＡ　Ｏ　Ｓ，ＭＯＮＴＥＣＣＨＩＡ　Ｍ　Ｓ，ｅｔ　ａｌ．Ｇｅｎｅｔｉｃ　ａｎｄ　Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓｐ．
Ｓｔｒａｉｎ　Ｅｘｃｒｅｔｉｎｇ　Ｓｕｒｆａｃｔｉｎ　ａｎｄ　Ａｎｔｉｈｍｇａｌ　Ｍｅｔａｂｏｌｔｅｓ　Ｐａｒｔｉａｌｙ　Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ａｓ　Ｉｔｕｒｉｎ－Ｌｉｋｅ　Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｐ－
ｐｌｉｅｄ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００４，９７（６）：１２４７－１２５６．
［１３］ＨＩＲＡＤＡＴＥ　Ｓ，ＹＯＳＨＬＤＡ　Ｓ，ＳＵＧＩＥ　Ｈ，ｅｔ　ａｌ．Ｍｕｌｂｅｒｒｙ　Ａｎｔｈｒａｅｎｏｓｅ　Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ（Ｉｔｕｒｉｎｓ）Ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｂｙ　Ｂａｃｉｌｕｓ
Ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ　ＲＣ－２［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｃｂｅｍｉｓｔｒｙ，２００２，６１（６）：６９３－６９８．
［１４］ＹＵ　Ｇｕｏ－ｙｕｎ，ＳＩＮＣＬＡＩＲ　Ｊ　Ｂ，ＨＡＲＴＭＡＮ　Ｇ　Ｌ，ｅｔ　ａｌ．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｉｔｕｒｉｎ　Ａ　ｂｙ　Ｂａｃｉｌｕｓ　Ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ　Ｓｕｐｐｒｅｓｓ－
ｉｎｇ　Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｎｌａ　Ｓｏｌａｎｉ［Ｊ］．Ｓｏｉｌ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　＆Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００２，３４（７）：９５５－９６３．
［１５］ＷＡＮＧ　Ｓａｎ－ｌａｎｇ，ＳＨＩＨ　Ｉｎｇ－ｌｕｎｇ，ＬＡＮＧ　Ｔｚｅ－ｗｕｎ，ｅｔ　ａｌ．Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔｗｏ　Ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ　Ｃｈｉｔｉｎａｓ－
ｅｓ　Ｅｘｔｒａｃｅｌｕｌａｒｌｙ　Ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｂｙ　Ｂａｃｉｌｕｓ　Ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ　Ｖ６５６ｉｎ　ａ　Ｓｈｒｉｍｐ　ａｎｄ　Ｃｒａｂ　Ｓｈｅｌ　Ｐｏｗｄｅｒ　Ｍｅｄｉｕｍ ［Ｊ］．Ａｇｒｉｃ
Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍ，２００２，５０（８）：２２４１－２２４８．
［１６］周　燚，喻子牛，孙　明．苏云金芽孢杆菌ＡＨＬ内酯酶功能及其抗魔芋软腐病研究 ［Ｊ］．武汉大学学报：自然科学版，
２００４，５０（６）：７６１－７６４．
Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎ　Ｃ３
ａｎｄ　ｔｈｅ　Ｃｏｎｔｒｏｌ　Ｅｆｆｉｃａｃｙ　Ａｇａｉｎｓｔ　Ｓｏｆｔ　Ｒｏｔ
Ｐａｔｈｏｇｅｎ　ｏｆ　Ａｍｏｒｐｈｏｐｈａｌｌｕｓ　ｋｏｎｊａｃ
ＷＡＮＧ　Ｙｏｎｇ－ｊｉ　１，　ＺＨＡＮＧ　Ｌｉ－ｈｕｉ　１，　ＷＥＩ　Ｌａｎ－ｆａｎｇ２，
ＪＩ　Ｇｕａｎｇ－ｈａｉ　１，　ＬＩＡＯ　Ｌｉｎ１，　ＬＩＮ　Ｌｉｎ１
１．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｐｌａｎｔ　Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，Ｙｕｎｎａｎ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋｕｎｍｉｎｇ　６５０２０１，Ｃｈｉｎａ；
２．Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ－ｂａｓｅｄ　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ｃｅｎｔｅｒ，Ｙｕｎｎａｎ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋｕｎｍｉｎｇ　６５０２０１，Ｃｈｉｎａ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａ　ｇｒａｍ－ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｓｔｒａｉｎ（Ｃ３）ｗａｓ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ　ｓｏｉｌ　ｏｆ　Ａｍｏｒ－
ｐｈｏｐｈａｌｌｕｓ　ｋｏｎｊａｃ，ｗｈｉｃｈ　ｗａｓ　ｓｈｏｗｎ　ｔｏ　ｈａｖｅ　ｓｔｒｏｎｇ　ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　ａ　ｗｉｄｅ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｓｐｅｃ－
ｔｒｕｍ．Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ，ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｎｄ　ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｔｅｓｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　Ｃ３ｗａｓ　ｖｅｒｙ　ｓｉｍｉｌａｒ　ｔｏ　Ｂａｃｉｌｌｕｓ
ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ．Ｔｈｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ　１６ＳｒＤＮＡ　ｇｅｎｅ　ｈａｄ　１００％ｉｄｅｎｔｉｔｙ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ　Ｂ．
ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ　ＦＺＢ４２，ａｃｃｏｒｄｉｎｇ　ｔｏ　ｔｈｅ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｆｒａｇｍｅｎｔ　ｏｆ　１１０５ｂｐ　ｗｉｔｈ　ａ　ｐａｉｒ　ｏｆ　ｕｎｉｖｅｒｓａｌ　ｐｒｉｍｅｒｓ，
２７ｆａｎｄ　１　４９２ｒ，ｏｆ　ｂａｃｔｅｒｉａ．Ｓｏ　ｔｈｅ　ｓｔｒａｉｎ　Ｃ３ｗａｓ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ａｓ　Ｂ．ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ．Ｓｔｒａｉｎ　Ｃ３ｓｉｇｎｉｆｉ－
ｃａｎｔｌｙ　ｒｅｄｕｃｅｄ　ｔｈｅ　ｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｓｏｆｔ　ｒｏｔ　ｉｎｄｅｘ　ｏｆ　Ａ．ｋｏｎｊａｃｉｎ　ｆｉｅｌｄｓ　ｂｙ　５７．７６％．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎ　Ｃ３；Ｂｉｏｌｏｇ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ；１６ＳｒＤＮＡ；ｃｏｎｔｒｏｌ　ｅｆｆｉｃａｃｙ
责任编辑　夏　娟　　　　
２２ 西南大学学报（自然科学版）　　　　　ｈｔｔｐ：／／ｘｂｂｊｂ．ｓｗｕ．ｃｎ　　　　　第３４卷