全 文 ：书第 41 卷 第 8 期 东 北 林 业 大 学 学 报 Vol． 41 No． 8
2013 年 8 月 JOURNAL OF NORTHEAST FORESTRY UNIVERSITY Aug． 2013
1)浙江省自然科学基金重点项目(Z2100435)。
第一作者简介:王丽华，女，1964 年 1 月生，浙江省水环境与海
洋生物资源保护重点实验室(温州大学) ，副教授。
通信作者:吴明江，浙江省水环境与海洋生物资源保护重点实验
室(温州大学) ，教授。E－mail:wumingjiang@ wzu． edu． cn。
收稿日期:2013 年 1 月 20 日。
责任编辑:戴芳天。
暴马丁香中桦木酸的鉴定及质量分数测定1)
王丽华 张 生 王少明 吴明江
(浙江省水环境与海洋生物资源保护重点实验室(温州大学) ，温州，325035)
摘 要 采用 HPLC和 UPLC－MS检测了暴马丁香树皮、枝条及叶片样品，在各部分样品中鉴定出桦木酸，并
测定了桦木酸的质量分数。枝条中桦木酸质量分数最高，为(1． 14±0． 03)mg /g;树皮中次之，为(0． 34±0． 03)mg /
g;叶片中桦木酸质量分数低于高效液相色谱方法的最低检出极限。
关键词 暴马丁香;桦木酸;鉴定;质量分数
分类号 Q946． 8
Identification and Determination of Betulinic Acid in Syringa amurensis /Wang Lihua，Zhang Sheng，Wang Shaom-
ing，Wu Mingjiang(Key Laboratory of Water Environment and Marine Living Resources，Zhejiang Province，Wenzhou U-
niversity，Wenzhou 325035，P． R． China)/ / Journal of Northeast Forestry University． －2013，41(8)． －144 ～ 145，159
An experiment was conducted to identify and determine the betulinic acid by high pressure liquid chromatography
(HPLC)and ultra pressure liquid chromatography-tandem mass spectrometry (UPLC-MS)in the bark，twigs and leaves of
Syringa amurensis． The content of betulinic acid is highest in the twigs (1． 14±0． 03 mg /g) ，followed by in the bark (0．
34±0． 03 mg /g)． The lowest is in leaves，lower than the detection limit．
Keywords Syringa amurensis;Betulinic acid;Identification;Content
暴马丁香(Syringa amurensis Rupr．)为木犀科
丁香属的落叶小乔木，在我国东北地区广泛分布，
既为绿化观赏树种，又可全株入药［1－2］。有关暴马
丁香化学成分的报道较少，目前分离、鉴定的成分
不超过 50 种，主要是丁香苷、鹅掌楸苷、橄榄苦
苷、异－橄榄苦苷等苷类化合物，以及齐墩果酸、熊
果酸、β－谷甾醇、6，7－二甲氧基香豆素和暴马醛酸
甲酯等［3－6］。
桦木酸(betulinic acid，化学名 3β－hydroxy－lup－
20(29)－en－28－oic acid，图 1)又称白桦脂酸，为羽
扇烷型五环三萜，桦木醇 C－28 羧酸衍生物［7］。桦
木酸及其衍生物具有很好的抗肿瘤、抑制 HIV－1 病
毒活性的特点，且毒性很低［8］，因而受到人们的关
注。桦木酸主要见于桦木科(Betulaceae)桦木属
(Betula)植物中，在其他多种植物中也有，但含量均
很低［9－10］，目前尚未见存在于暴马丁香中的报道。
笔者采用高效液相色谱法和超效液相色谱—质谱联
用技术确证了暴马丁香枝条、树叶及叶片样品中存
在桦木酸，并进一步测定了其质量分数。
1 材料与方法
1． 1 材料
2012 年 6 月采集暴马丁香叶片、枝条及树皮样
品，105 ℃杀青 30 min 后，60 ℃烘干至恒质量，粉碎
至 40 目，备用。
高效液相色谱系统(HPLC，美国 Waters 公司)
包括 1525 泵、2996 型二极管阵列检测器、717 型自
动进样器，依利特 Hypersil ODS2 C18 色谱柱(250
mm×4． 6 mm，5 μm，辽宁省大连伊利特公司) ;超效
液相色谱—质谱联用系统(UPLC－MS，美国 Waters
公司)包括 TQ MS XEVO 质谱仪和 ACQUITY 超效
液相色谱仪(UPLC) ，ACQUITY UPLC BEH 苯基柱
(2． 1 mm×50 mm，1． 7 μm，Waters，USA) ;桦木酸对
照品为实验室自制，经 HPLC 测定纯度大于 95%;
色谱纯乙腈(Sigma公司) ;娃哈哈纯净水(杭州娃哈
哈集团有限公司) ;其他分析纯试剂。
图 1 桦木酸化学结构式
1． 2 方法
1． 2． 1 桦木酸的确证
样品提取:精密称取 0． 4 g 暴马丁香样品于 10
mL 容量瓶中，加入 8 mL 乙醇溶液(体积分数
80%) ，室温下超声波(工作频率 40 kHz、功率 170
W)辅助提取 90 min，冷却至室温后定容、摇匀。取
1． 5 mL提取液于 2 mL离心管中，13 000 r /min 离心
15 min，取 1 mL 上清液，60 ℃下空气流吹干，加入
200 μL乙醇震荡溶解，13 000 r /min 离心 15 min，上
清液待测。
对照品溶液配制———精密称取桦木酸标准品
10 mg至 50 mL 容量瓶中，加乙醇超声溶解，冷却后
再用乙醇定容、摇匀，制成对照品储备液(200 mg /
L) ，分装后保存于－20 ℃冰箱备用。
HPLC条件———流动相为乙腈 /水(V(乙腈)∶
V(水)= 9 ∶ 1) ，等度洗脱，流速 1． 2 mL /min，检测波
长 210 nm，自动进样，进样量 20 μL，样品运行时间
20 min。
UPLC－MS检测———UPLC 条件:色谱柱柱温为
室温，流速 0． 25 mL /min，进样量 5 μL。流动相 A
(纯水，含 5 mmol 乙酸铵)与流动相 B(乙腈) ，梯度
洗脱程序:流动相 B 起始为 60%，保持 0． 7 min，然
后在 0． 1 min内由 60%线性增至 90%，并保持 1． 2
min，从 2 min开始在 0． 1 min内线性降至 60%，并保
持 0． 9 min，3 min 时准备下次进样。MS 条件:电喷
雾离子源负电离模式(ES－) ，电喷雾电压 2． 5 kV，锥
孔电压 75 V，去溶剂气流速 650 L /h，锥孔气流速 50
L /h，源温度 150 ℃，去溶剂气温度 400 ℃，扫描方式
为多反应检测(SIR) ，负分子离子［M—H］－质荷比
m/z为 455． 3。
1． 2． 2 桦木酸质量分数测定
标准曲线的建立———精密称取桦木酸标准品
10 mg于 25 mL 容量瓶中，乙醇超声溶解、定容，得
400 mg /L 储备液，逐步稀释得 12． 5、25、50、100、
200、400 mg /L的标准溶液。标准溶液浓度(x)与峰
面积(y)的线性回归方程为 y=4 789 589． 2x－5 803． 5
(R2 = 0． 999 9) ，线性范围 12． 5 ～ 400 mg /L。
精密度实验———标准品溶液连续进样 5 次，计
算峰面积的相对标准偏差(RSD)为 1． 31%，表明该
方法精密度良好。
稳定性实验———同一样品溶液分别在制备后
0、12、24 h进样测定，峰面积的 RSD为 1． 98%，表明
样品溶液在 24 h内稳定性良好。
重复性实验———平行 5 份样品溶液进行测定，
计算峰面积的 RSD为 2． 43%，表明重复性良好。
2 结果与分析
2． 1 色谱鉴定
HPLC 分析结果表明，在选定的检测条件下，
桦木酸保留时间为 5 ． 79 min。暴马丁香枝条和
树皮样品中均出现明显的桦木酸色谱峰，而叶片
样品在该保留时间仅有微小鼓起(图 2)。HPLC
检测仅以化学物质的色谱保留时间作为定性判
定依据，不同物质可能具有相同的保留时间。由
于此前无文献报道暴马丁香中含有桦木酸，因而
HPLC 分析结果只表明暴马丁香样品中可能含有
桦木酸。
a．树皮 b．枝条 c．叶片 d．桦木酸对照品
箭头示桦木酸峰。
图 2 暴马丁香样品 HPLC图
2． 2 UPLC－MS鉴定
在 HPLC检测的基础上，进一步采用 UPLC－MS
检测方法进行了结构确证。在对桦木酸对照品进行
LC－MS全扫描分析(图 3)基础上，选定分子离子峰
［M—H］－作为特征离子，采用 SIR 的检测模式，对
桦木酸以及暴马丁香样品进行了测定(SIR 色谱图
见图 4) ，结果进一步证明暴马丁香树皮、枝条及叶
片中均含有桦木酸。
2． 3 桦木酸质量分数测定
暴马丁香枝条中桦木酸质量分数最高，达到
(1． 14±0． 03)mg /g;树皮中桦木酸的质量分数次之，
为(0． 34±0． 03)mg /g;叶片中桦木酸(下转 159 页)
541第 8 期 王丽华等:暴马丁香中桦木酸的鉴定及质量分数测定
果证明，该方法具有较小的计算量，能够满足森林火
灾烟雾自动识别的准确性与实时性的要求。
参 考 文 献
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(上接 145 页)的质量分数最低，低于 HPLC 方法的 最低检出极限。
图 3 桦木酸全扫描质谱图
图 4 暴马丁香样品 SIR色谱图
3 结论与讨论
采用 HPLC 和 UPLC －MS 测定了暴马丁香树
皮、枝条及叶片样品，首次在各部分样品中鉴定出桦
木酸，并测定了桦木酸的质量分数。
相对 HPLC，UPLC－MS 技术灵敏度更高、特异
性更强。本研究通过 HPLC检测初步判定桦木酸存
在的可能性。进一步以 UPLC－MS 检测，采用 SIR
模式监测桦木酸的特异负分子离子( ［M－H］－) ，证
明了在 HPLC条件下检测得到的具有相同保留时间
的色谱峰为桦木酸。而且，暴马丁香叶片样品在
HPLC检测时桦木酸的色谱峰并不明显，但质谱检
测中桦木酸的响应却很强，表明该条件下质谱的灵
敏度更高。
参 考 文 献
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