全 文 ：第29卷　第 3期　　　　　　　 　西南 大学学 报(自然科学版)　　　　　　　　　　　2007年3月
Vol. 29　N o. 3 Journal of Southw est Unive rsity (N atural Science Edi tion) Mar. 2007
文章编号:1000-2642(2007)03-0037-04
阿米卡星对赤藓红的褪色反应及其分析应用①
安兰香1 , 　刘绍璞1 , 　谢锂纱2 , 　江　虹3 , 　胡小莉1
1. 西南大学 化学化工学院 , 重庆 400715;
2. 四川出入境检验检疫局 , 成都 610041;3. 涪陵师范学院 化学系 , 重庆 408003
摘要:在酸性介质中 , 阿米卡星(AMK)与赤藓红(T IF)反应生成离子缔合物 , 导致赤藓红褪色. 其最大褪色波长位于
527 nm , AMK 在0. 064～ 2. 500μg /mL浓度范围内遵从比尔定律, 表观摩尔吸光系数(ε)为 1. 46×105 L mol- 1 cm- 1 .
考察了褪色反应的光谱特征 、适宜的反应条件和共存物质的影响. 方法具有良好的选择性 , 用于人体血清及尿样中
阿米卡星的测定 , 结果满意.
关　键　词:阿米卡星;赤藓红;分光光度法
中图分类号:O657. 32 文献标识码:A
硫酸阿米卡星(丁胺卡那霉素 , AMK)是第三代半合成的氨基糖苷类(AGs)抗生素 , 临床上主要用
于革兰氏阴性杆菌严重感染的治疗. AMK对肠杆菌科细菌及绿脓杆菌产生的多种钝化酶稳定 , 因此特
别用作对庆大霉素和妥布霉素等耐药的菌株的首选药物. 由于 AMK具有较严重的耳 、肾毒性和明显的
量效依耐关系[ 1] , 因此有必要对它进行定量测定. 目前 , 测定阿米卡星等 AGs的方法主要有微生物
法[ 2] 、荧光法[ 3] 、化学发光法[ 4] 、 HPLC 法[ 5] 、毛细管电泳法[ 6] 、分光光度法[ 7 - 9] 和共振瑞利散射方
法[ 10] 等. 其中 , 分光光度法因其方法简便 、分析精度高 、重复性好 、可测范围广和仪器价廉等优点 , 在
药物分析领域得到了广泛的应用. 本文研究了赤藓红与阿米卡星的相互作用 , 发现二者反应后最大褪色
波长位于 527 nm , 并于 561 nm 处出现新的吸收峰. 其褪色峰和吸收峰处吸光度值的改变与阿米卡星的
浓度成正比 , 可用于阿米卡星抗生素的测定 , 但前者的灵敏度大大高于后者. 因此 , 实验选用 527 nm 作
为测定波长. 据此建立了褪色光度法测定阿米卡星的新体系 , 线性范围为 0. 064 ～ 2. 5 μg /mL , 表观摩
尔吸光系数(ε)为 1. 46×105 L mol - 1 cm - 1 . 方法具有较高的灵敏度和较好的选择性 , 操作简便 、快
速 , 可用于人体血清样品及尿样中阿米卡星含量的测定.
1　实验部分
1. 1　主要仪器与试剂
UV-8500型紫外-可见分光光度计(上海天美公司);721A 型分光光度计(上海分析仪器厂);PHS-3C
酸度计(上海大中分析仪器厂).
硫酸阿米卡星(amikacin sulphate , AMK;苏州第六制药厂)标准溶液:储备液浓度 400. 0 μg /mL , 工
作液浓度 10. 0 μg /mL.
赤藓红(ery thro sin , TIF ;E.Merck 公司)标准溶液:储备液浓度 2. 5×10- 3 mol /L , 工作液浓度 2. 5×
10- 4 mo l/L .
Brit ton-Robinson (BR)缓冲溶液:0. 04 mo l /L H 3PO 4 , H 3BO 3 和 HAc与 0. 2 mol /L NaOH 溶液按一
① 收稿日期:2006-04-17
基金项目:国家自然科学基金资助项目(20475045);重庆市教委资助项目(KJ051304).
作者简介:安兰香(1981-), 女 , 山东日照人 , 硕士研究生 , 主要从事药物分析的研究.
通讯作者:胡小莉 , 教授.
DOI牶牨牥牣牨牫牱牨牳牤j牣cnki牣xdzk牣牪牥牥牱牣牥牫牣牥牥牴
定比例混合 , 配成不同 pH 的缓冲溶液 , 并用酸度计校正 pH 值.
阿米卡星标准品为生化试剂 , 其余试剂均为分析纯 , 实验用水为二次蒸馏水.
1. 2　实验方法
于 10 mL 比色管中 , 加入 1. 0 mL 2. 5×10- 4 mo l/L 赤藓红溶液 , 再加入 1. 0 mL pH 为 4. 2的 BR缓
冲液 , 一定量的10. 0μg /mL 的硫酸阿米卡星标准溶液 , 用水稀释至刻度 , 摇匀 , 静置15 min后 , 在最大褪
色波长处用 1 cm 液池 , 以试剂空白为参比测量吸光度.
2　结果与讨论
2. 1　吸收光谱
图 1(a)和(b)是赤藓红与阿米卡星结合产物的吸收光谱. 由图 1(a)可知 , 在 pH =4. 2的 BR缓冲溶液
中 , 以水作参比时 , 硫酸阿米卡星在可见光区几乎无吸收 , 赤藓红在此区间有较强的吸收 , 最大吸收波长
为 527 nm. 当赤藓红与阿米卡星反应形成离子缔合物后 , 以试剂空白为参比 , 则在 527 nm 处有一强的负
吸收峰 , 并在 561 nm 处出现新的正吸收峰 , 褪色峰处吸光度值的降低与阿米卡星浓度成正比 , 用于阿米卡
星的测定其灵敏度大大高于显色峰(图 1(b)). 因此选择 527 nm 为测定波长 , 以褪色法测定阿米卡星.
(a) 1. AMK;2. T IF;3. AMK-TIF(1～ 3以水为参比);cAMK:2. 5μg /mL;cTIF:2. 5×10 - 4 m ol /L;pH 为 4. 2.
(b) 1～ 5(以试剂空白为参比). cAMK /(μg /mL)分别为 0. 5 , 1. 0 , 1. 5 , 2. 0 , 2. 5;cTIF:2. 5×10 - 4 m ol /L;pH 为 4. 2.
图 1　吸收光谱
Fig. 1　Abso rption Spectra
cAMK:1. 5μg /mL;cTIF:2. 5×10 - 4 m ol /L
(以试剂空白为参比)
图 2　酸度的影响
Fig. 2　Effect of the Acidity
2. 2　溶液酸度的影响
实验了 BR , HA c-N aAc 缓冲溶液对于 AMK-TIF 体系
的显色反应及褪色反应的影响. 结果表明 , 在 BR缓冲溶液
中 , 体系的灵敏度较高 , 故选用 BR为缓冲溶液(图 2). 适
宜的酸度是 pH 为 4. 0 ～ 4. 5. 实验选用 pH 为 4. 2的 BR缓
冲溶液 , 用量以 1. 0 mL 为宜.
2. 3　赤藓红用量的影响
实验了染料用量的影响 , 当染料用量为 0. 75 ～ 1. 25 mL
时 , 体系的吸光度差值较大且恒定 , 本实验选用 1. 0 mL.
2. 4　反应时间及离子缔合物的稳定性
在室温 15 min内显色完全 , 吸光度差值达最大 , 此后
ΔA 在 2 h内稳定.
2. 5　离子缔合物的组成
用摩尔比法测定了 AMK-TIF 的组成比 , 结果表明
nAM K ∶nTIF =1∶1.
2. 6　标准曲线
在选定的实验条件下 , AMK的浓度在 0.064～ 2.5μg /mL范围内与 ΔA呈线性关系 , 回归方程为 ΔA=0. 006
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+0. 250c(μg /mL), 相关系数 r=0. 999 4 (n=5), 最大摩尔吸光系数ε527为1. 46×105 L mol - 1 cm -1 . 本
方法的检出限为 0. 02 μg /mL(以 3σ计).
2. 7　共存物质的影响
在最佳实验条件下 , 实验了 24种共存物质对本法的影响. 当阿米卡星浓度为 1. 5 μg /mL 时 , 允许误
差在±5%以内 , 下列物质的允许量(μg /mL)为:氨基乙酸 , 烟酸 , Fe3+ ,NO -3 ,Mg2+ ,SO 2 -4 (10);人血清白
蛋白 , DL-天冬酸(1);Mn2+ ,SO 2 -4 (132);K + ,Cl -(745);Na+ ,CO 2 -3 (1060);Ca2+ , Cl - (560);淀粉(5);
葡萄糖 , 苯丙氨酸 , 蔗糖 , 麦芽糖 , 乳糖(100);尿素(60);A l3+ ,C l - (4);Cu2+ ,SO 2 -4 (250);Na+ , SO2 -4
(170);K+ ,Br -(714);Zn2+ ,Ac -(22);Na+ ,Cl -(585);NH+4 ,Fe2+ ,SO 2 -4 (162). 可见 , 除人血清白蛋白
和 DL-天冬酸干扰较大外 , 其余常见的物质均不干扰测定 , 故本方法具有良好的选择性.
3　分析应用
在 10份人血清样品(由西南大学校医院提供)中各取 1. 0 mL , 每份加入 0. 25 mL 10%三氯乙酸溶液 ,
混合后 , 3 000 r /min离心 15 min , 使血清中的蛋白质沉淀完全[ 11] . 取上层清液 0. 50 mL , 按实验方法每种
浓度平行测定 5份 , 结果列于表 1中.
取 10. 0 mL 新鲜的正常人尿样 , 抽滤除去尿样中杂质 , 然后取 0. 5 mL 尿样于 10. 0 mL 比色管中 , 按
实验方法测定 AMK含量 , 并用标准加入法检验了方法的相对标准偏差(RSD)和回收率 , 结果见表 1.
从表 1可以看出 , 方法具有较好的重复性:人血清样品 5次测定值的相对标准偏差(RSD)在 3. 0%
～ 3. 6%之间;人血清样品的加标回收率为 99. 6%～ 101. 6%;人尿样 5次测定值的相对标准偏差(RSD)
在 1. 5%～ 2. 2%之间;人尿样的加标回收率为 99. 7%～ 102. 2%. 故此法可用于人血清及尿样中 AMK
的测定.
表 1　人血清样品及尿样中 AMK 含量的测定结果
Table 1　Results for the De te rmination o f AMK in H uman Serum and Urine Sam ples
样品 测定值
/(μg m L - 1)
加入量
/(μg mL - 1)
测　定　值
/(μg mL - 1)
相对标准偏差
/%
回收率
/%
血样 1 ND 0. 50 0. 50 0. 46 0. 54 0. 51 0. 48 3. 0 99. 6
血样 2 ND 1. 00 1. 02 1. 06 0. 99 1. 04 0. 97 3. 6 101. 6
尿样 1 ND 1. 00 1. 03 1. 02 1. 05 0. 99 1. 02 2. 2 102. 2
尿样 2 ND 1. 50 1. 51 1. 50 1. 51 1. 48 1. 48 1. 5 99. 7
　　注:ND表示未测出;n=5.
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Fading Reaction of Amikacin to Erythrosin
and Its Analytical Applications
AN Lan-xiang1 , 　LIU Shao-pu1 , 　XIE Li-sha2 ,
JIANG　Hong3 , 　HU Xiao-li1
1. School of Chemistry and Chemical Engineering , Southwest University , Chongqing 400715 , China;
2. Sichuan Entry-Exit Inspection and Quarantine , Chengdu Sichuan 610041 , China;
3. Department of Chemistry , Fuling Normal College , Chongqing 408003 , China
Abstract:In an acid medium , amikacin (AMK) reacts w ith ery thro sine (TIF) to form an ion-association
complex , which makes the dye fade. The max imum fading w aveleng th is located at 527 nm. The maximum
molar absorptivi ty εis 1. 46×105 L mol - 1 cm -1 . AMK follow s Beers law in the concentration range of
0. 064 - 2. 500 μg /mL. The spect ra characteristics , optimum reaction conditions and the inf luence of fo r-
eign substances have been investig ated. T he method has good selectivi ty and has been applied fo r the de-
termination of the amikacin in human serum samples and urine samples w ith sati sfactory results.
Key words:amikacin;ery throsine;spect ropho tometry
责任编辑　潘春燕　　　　
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(上接第 31页)
Preparation of Linear Sulfonated
Poly(styrene-Acrylic Acid)with Twice Sulfonation
MA Li-hua , 　FU Xiang-kai , 　ZHAO 　Ge
School of Chemistry andChemical Engineering Southwest Universi ty , Chongqing 400715 , China;
The Key Laboratory of Eco-environments inTree Gorges Reservoir Region (Ministry of Education), Chongqing 400715 , China;
Research Institute of Applied Chemistry Southwest Universi ty , Chongqing 400715 , China;
The Key Laboratory of Appl ied Chemistry of Chongqing Municipality , Chongqing , 400715 , China
Abstract:Low sulfonated copolyme r w as prepared by react ion of copolymer of po ly (styrene-acry lic acid)
with fuming sulfuric acid in py ridine. H igh sulfonated copolymer w as then prepared by a second sulfona-
tion reaction in sulfuric acid w ith silver sulfate as the cataly st . Neutraliza tion ti trat ion indicated that the
sulfonat ion level o f the product w as above 80%.
Key words:sulfonated po ly(sty rene-acrylic acid);sulfonation;polyelectro ly te;water-so luble polymer
责任编辑　潘春燕　　　　
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