全 文 ：第 30卷第 5期　　　　　　　　　西 南 大 学 学 报(自然科学版)　　　　　　　　　　　2008年 5 月
Vol.30　No.5 Journal of Southw est Unive rsity (N atural Science Edi tion) May　2008
文章编号:1673-9868(2008)05-0040-04
铊 (Ⅲ)-赤藓红体系分光光度法测定万古霉素①
伊奥尔 , 　刘忠芳 , 　胡小莉 , 　刘绍璞
西南大学 化学化工学院 , 重庆 400715
摘要:在 pH 为 5.3 ～ 5.5 的乙酸-乙酸钠缓冲液中 , 铊(Ⅲ)能氧化赤藓红而使之褪色 , 其最大褪色波长位于 526 nm
处 , 而加入万古霉素能抑制该褪色反应的进行.基于此反应 , 发展了一种简便 , 灵敏和快速的测定万古霉素的分光
光度法.该方法线性范围 0.2 ～ 2.0 μg/ mL , 摩尔吸光系数 7.02×105 L/(mo l· cm), 检出限 66.0 ng/ mL.文中考
察了方法适宜的反应条件和影响因素 , 检验了共存物质的影响 , 表明方法具有良好的选择性 , 可应用于市售万古霉
素针剂中万古霉素含量测定.
关　键　词:万古霉素;铊(Ⅲ);赤藓红;分光光度法
中图分类号:O657.32 文献标识码:A
万古霉素(VCM), 作为一种从微生物 Streptomyces oriental is分离得到的糖肽类抗生素 , 它对格兰氏
阳性菌有很好的抑制作用 , 但因其不能穿透外部的渗透屏障 , 它对格兰氏阴性菌没有疗效.它特别适用于
患者对盘尼西林抵抗或耐药性的情况 , 也用于对 β-内酰胺类抗生素过敏患者的治疗.万古霉素为治疗耐甲
氯西林金葡萄菌感染的首选药 , 也是治疗难辨梭状芽孢杆菌引起的伪膜性结肠炎的特效药.因此是临床上
使用的一种重要抗生素[ 1] .
目前测定万古霉素的方法主要有:高效液相色谱法(HPLC)[ 2-6] 、毛细管电泳[ 7 , 8] 、液相色谱-质谱法[ 9] 、
荧光偏振免疫分析(FPIA)[ 10-13] 和分光光度法[ 14-16] .其中使用较多的是 HPLC 和 FPIA.但是 , HPLC 往往
需要复杂的样品前处理和相对大的样品使用量.FPIA 则需要昂贵的仪器和试剂.分光光度法仪器价廉 , 使
用方便 , 在药物分析中得到了广泛的应用[ 17 , 18] .然而已报道的分光光度法操作过程都仍显复杂 , 而且灵敏
度多数也不够高.所以 , 发展一种更简单更灵敏的测定万古霉素纯品或药剂的分光光度法仍然是有意义的
工作.
实验表明 , 在 pH 为 5.3 ～ 5.5的乙酸-乙酸钠缓冲液中 , 铊(Ⅲ)能氧化赤藓红(Ery)而使之褪色 , 而加
入万古霉素能抑制该褪色反应的进行.体系变化的吸光度值与万古霉素的浓度成线性 , 最大褪色波长位于
526 nm处 , 该方法线性范围 0.20 ～ 2.0μg/mL , 摩尔吸光系数 7.02×105 L/(mol·cm), 检出限66.0 ng/mL ,
灵敏度高于目前常用的分光光度法[ 14-16] .本文考察了方法适宜的反应条件和影响因素 , 实验了共存物质的
影响 , 表明方法具有良好的选择性 , 基于此反应 , 发展了一种灵敏 , 高效和快速的测定万古霉素的新分光
光度法.
1　实验部分
1.1　仪器与试剂
UV-8500型紫外-可见分光光度计(上海天美公司);用于记录吸光强度和测量吸光度.PHS-3C 型酸度
① 收稿日期:2007-07-25
基金项目:国家自然科学基金资助项目(20475045).
作者简介:伊奥尔(1983-), 男 , 云南玉溪人 , 硕士研究生 , 主要从事分子光谱分析的研究.
通讯作者:刘绍璞 , 教授 , 博士生导师.
DOI :10.13718/j.cnki.xdzk.2008.05.027
计(上海分析仪器三厂), 用于校正溶液 pH 值.
万古霉素(Sigma)标准溶液:准确称取相应量的万古霉素配制 500.0 μg/mL 的贮备溶液 , 使用时稀释
至 50.0 μg/mL作为工作溶液.
赤藓红(E M erck)溶液:配制4.0×10-4 mol/ L 的贮备溶液 , 使用时稀释至8.0×10-5 mol/ L 作为工作
溶液.
Tl(Ⅲ)溶液:准确称取 0.117 5 g T l2O3(北京化工厂)于烧杯中 , 加入 0.5mL 盐酸(1+1)溶解后定容
至 100m L , 使用时稀释至 100.0 μg/mL 作为工作溶液.
乙酸-乙酸钠缓冲溶液:用 0.2 mol/ L 的 CH3 COONa 和 CH3COOH 溶液按一定比例混合 , 配成不同
pH 值的缓冲溶液 , 并用酸度计校正其 pH 值.
所有试剂均为分析纯 , 实验用水为二次蒸馏水.
1.2　实验方法
在 10.0 mL 比色管中 , 依次加入 pH =5.2的乙酸-乙酸钠缓冲溶液 1.0 mL , 100.0 μg/mL 的 Tl(Ⅲ)
溶液 0.5 mL , 8.0×10-5 mol/L 的赤藓红溶液2.0 mL , 最后加入适量的万古霉素标准溶液 , 加水稀释至刻
度 , 摇匀 , 放置 30 min.记录吸收光谱.并于最大吸收波长 526 nm处测量吸收值.
1.E ry;2-5.Tl(Ⅲ)-Ery-VCM;6.Tl(Ⅲ)-Ery;
c(VCM)2-5:2.0 , 1.5 , 1.0 , 0.5μg/mL;
c(Tl):5.0 μg/mL;c(E ry):1.6×10-5 m ol/ L.
图 1　Tl(Ⅲ)-Ery-VCM体系吸收光谱
2　结果与讨论
2.1　吸收光谱
图 1为 Tl(Ⅲ)-E ry-VCM 反应体系的吸收光谱.从
图中可以看出赤藓红在最大吸收波长 526 nm 处有很强
的吸收峰(曲线 1).加入一定量的 Tl(Ⅲ)后 , 由于 Tl
(Ⅲ)氧化 Ery 而褪色 , 其最大吸收波长处吸收值急剧降
低(曲线 6).但是当加入不同量的万古霉素后 , 褪色反应
被抑制 , 并且随着 VCM 浓度的增大 , 吸光度线性增加.
因此基于 VCM 对褪色反应的抑制作用 , 可建立一种定
量测定 VCM 的分光光度法.
2.2　酸度的影响
实验了 BR、柠檬酸钠-HCl 、酒石酸-酒石酸钠和乙
酸-乙酸钠等不同缓冲溶液对反应体系的影响 , 结果表明
图 2　酸度的影响
乙酸-乙酸钠作反应介质时效果最好.当用乙酸-乙酸钠
缓冲溶液作为反应介质时 , 适宜的 pH值的范围是 5.3 ～
5.5(图 2).故实验选用 pH 为 5.4的缓冲溶液作为反应
介质.缓冲溶液的用量对 ΔA 强度也有一定影响 , 以加
入 1.0 mL 为宜.
2.3　铊(Ⅲ)用量的影响
实验了 Tl(Ⅲ)浓度对 ΔA 强度的影响.结果表明 ,
当 Tl浓度在 5.0 μg/mL 时 , ΔA 达到最大 , 并且在 4.0
～ 6.0 μg/mL 之间对 ΔA 影响很小.Tl(Ⅲ)浓度过低 ,
染料的褪色反应不完全;但 Tl(Ⅲ)浓度过高 , 会影响
VCM 对褪色反应的抑制作用 , 也对反应产生不利影响.
故以下实验 Tl(Ⅲ)的浓度使用 5.0μg/mL.
2.4　赤藓红用量的影响
实验表明 Ery 适宜的浓度在1.2 ～ 2.0×10-5 mol/L 之间.故以下实验选用1.6×10-5 mol/ L 为Ery 的
反应浓度.
41第 5期　　　　　　　　伊奥尔 , 等:铊 (Ⅲ)-赤藓红体系分光光度法测定万古霉素
2.5　反应时间的影响
在最大吸收波长 526 nm 处 , 考察了反应时间对吸光度的影响.结果表明 , 反应完全需 30 min , 此后
ΔA 在 10 min内基本不变 , 随后稳定下降.故实验中采用反应后 30 min进行测量.
2.6　标准曲线
在优化后的条件下 , 按照实验方法测量不同浓度万古霉素下的吸光度 , 并绘制标准曲线.
其一元线性回归方程为:ΔA=-0.007 8+0.434 1c , 线性范围 0.2 ～ 2.0μg/mL , 相关系数 r=0.999 1.
其摩尔吸光系数ε=7.02×105 L/(mo l·cm), 检出限 66.0 ng/mL.方法具有很高的灵敏度 , 摩尔吸光系数
都高于已知一些已经发表的其它测定万古霉素的分光光度法.如 El-Ashry 等[ 19] 使用重氮苯唑卡因直接测
定万古霉素 , 摩尔吸光系数为 5.49×104 L/(mo l· cm);Sast ry 等[ 20] 使用先使用高碘酸钠氧化万古霉素 ,
再用 A(3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙)或 B(对甲氨基苯酚硫酸盐 , 磺胺 , 钼(VI))或 C(天青石蓝 , 碲(IV))三
种方法测定万古霉素 , 摩尔吸光系数在 3.08 ～ 4.27×104 L/(mol· cm)之间;El-Didamony 等[ 21] 采用高锰
酸钾氧化万古霉素 , 再用苋菜红或橙黄 II或靛红亚或甲基蓝四种方法测定万古霉素 , 摩尔吸光系数在 3.23
～ 4.96×105 L/(mo l·cm)之间.
2.7　方法的选择性
在选择的实验条件下 , 考察了某些共存物质的影响.当 VCM 浓度为 1.0 μg/mL , 允许误差在(5%以
内时 , 下列物质的允许量(μg/mL)为:麦芽糖 ,蔗糖 ,葡萄糖 ,淀粉(800);Zn2+ , Mn2+ ,K + ,Cl- ,N a+ , SO2-4
(500);Al3+ ,Fe3+ , Al3+ ,Ca2+ ,NO -3 (150);人血清白蛋白 ,DL-天冬酸 , L-色氨酸(1).可见 , 除人血清白蛋
白和 DL-天冬酸 、 L-色氨酸干扰较大外 , 一定量的常见的糖类 , 金属离子和无机酸根都不干扰测定.
3　注射液中万古霉素的测定
取万古霉素注射液(Eli Li lly Japan K K公司生产 , 500 mg/瓶)适量 , 稀释至不同浓度进行测定 , 计算
后得出注射液中万古霉素含量 , 并根据中国药典高效液相色谱法[ 19] 进行对照 , 结果列于表 1.可以看出两
种方法测定结果是吻合的.
表 1　针剂中万古霉素的测定结果
Taken/(μg·m L-1) 本法/(mg ·瓶-1) 药典法[ 19] /(mg·瓶-1)
1 1.0 497.12±4.35
2 1.5 499.54±2.14 499.15±1.73
3 2.0 498.31±5.21
　　注:n=5.
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Spectrophotometric Determination of
Vancomycin Using Thallium(Ⅲ)-Erythrosin System
YI Ao-er , 　LIU Zhong-fang , 　HU Xiao-li , 　LIU Shao-pu
School of Chemistry and Chemical Engineering , Southwest University , Chongqing 400715 , China
Abstract:In pH 5.3-5.5 HAc-NaAc buffer solution , thallium(Ⅲ)could oxide ery throsin , which resulted
in the hypochromici ty and the max imum fading w aveleng th w as lo cated at 526 nm .Adding vancomycin into
the system could inhibi t this fading reaction.Based on the above phenomena , a simple , sensi tive and fast
spect ropho tometric me thod has been developed fo r the determinat ion of vancomycin.The linear range of
this method w as 0.2-2.0μg/mL and the mo lar abso rpitivi ty w as 7.02×105 L/(mol·cm)and the detec-
tion limi t w as 66.0 ng/mL.T he optimum conditions fo r the reaction and the impact factor w ere investig a-
ted.The interference of foreign substances was examined and it showed this method obtained good selectivity.The
proposed method can be applied to the determination of vancomycin in the commercial injection.
Key words:vancomycin;thallium(Ⅲ);ery throsin;spect ropho tome try
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