全 文 :2016 年 6 月 第 41 卷第 12 期 Vol. 41,No. 12 June,2016
[收稿日期] 2016-03-17
[基金项目] 国家重点基础研究发展计划(973)计划项目(2013CB531801) ;教育部博士点基金项目(20132327120002) ;黑龙江中医药大学
“优秀创新人才”支持项目(2012RCD05) ;黑龙江中医药大学“杰出人才培养”基金项目(2012cj02)
[通信作者] * 王知斌,副教授,硕士生导师,主要从事中药及复方药效物质基础研究和新药临床前药学研究,E-mail:wzbmailbox@ 126. com
[作者简介] 匡海学,教授,博士生导师,主要从事中药性味理论研究、中药及复方药效物质基础及其作用机制研究,E-mail:hxkuang@ yahoo. com
尖叶假龙胆中 酮类成分的分离与鉴定
匡海学,吴高松,刘华,于莹,吴琼,王秋红,杨炳友,王知斌*
(黑龙江中医药大学 教育部北药基础与应用研究重点实验室 /黑龙江省中药天然
药物药效物质基础研究重点实验室,黑龙江 哈尔滨 150040)
[摘要] 采用硅胶、ODS柱色谱和制备型 HPLC等色谱技术从尖叶假龙胆乙醇提取物中分离得到 12 个 酮类成分,经 MS和
NMR等波谱技术分别鉴定为 1,7-二羟基-3-甲氧基 酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(1) ,紫药苷(2) ,1 3,8-三羟基-4,5-二甲氧基
酮-1-O-β-D-吡喃葡萄糖基(6→1)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(3) ,1 2,8-三羟基-5,6-二甲氧基 酮-2-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(4) ,
1,3,7,8-四羟基 酮-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(5) ,1 3,5,8-四羟基-5,6,7,8-四羟基 酮(6) ,1 3,5-三羟基 酮(7) ,1 3,5,8-
四羟基 酮(8) ,1 2,8-三羟基-5,6-二甲氧基 酮(9) ,雏菊叶龙胆 酮(10) ,芒果苷(11) ,当药醇苷(12)。化合物 1 ~ 9 均为
首次从假龙胆属中分离得到。
[关键词] 尖叶假龙胆; 酮类;结构鉴定
Isolation and identification of xanthones from Gentianella acuta
KUANG Hai-xue,WU Gao-song,LIU Hua,YU Ying,WU Qiong,WANG Qiu-hong,YANG Bing-you,WANG Zhi-bin*
(Key Laboratory of Chinese Materia Medica(Ministry of Education) ,Heilongjiang University
of Chinese Medicine,Heilongjiang Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine
Pharmacodynamic Material Bases,Harbin 150040,China)
[Abstract] Twelve xanthones compounds were isolated from the ethanol extract of Gentianella acuta by means of reversed-phase pre-
parative HPLC and various kinds of column chromatography including silica gel and ODS . Their structures were fully elucidated on the
basis of MS,1D and 2D-NMR data. The structures of xanthones were identified as 1,7-dihydroxy-3-methoxyxanthone-7-O-β-D-gluco-
pyranoside (1) ,swertiapuniside (2) ,1,3,8- trihydroxy -4,5-dimethoxyxanthone-1-O-β-D-glucopyranosyl(6→1)-O-β-D-glucopyr-
anoside (3) ,1,2,8-trihydroxy-5,6-dimethoxyxanthone-2-O-β-D-glucopyranoside (4) ,1,3,7,8-tetrahydroxyxanthone-1-O-β-D-
glucopyranoside (5) ,1,3,5,8-tetrahydroxy-5,6,7,8-tetrahydroxanthone (6) ,1,3,5-thihydroxyxanthone (7) ,1 3,5,8-tetra-
hydroxyxanthone (8) ,1,2,8-trihydroxy-5,6-dimethoxyxanthone (9) ,bellidifolin (10) ,mangiferin (11) ,swertianolin (12).
Compounds 1-9 were isolated from Gentianella genus for the first time.
[Key words] Gentianella acuta;xanthones;structure identification
doi:10. 4268 /cjcmm20161218
尖叶假龙胆 Gentianella acuta (Michx. )Hulten
为龙胆科假龙胆属一年生草本植物,民间俗称“稳
心草”,在我国主要分布于东北、内蒙古、山西、山东
等地,具有清热利湿、利胆退黄的功效,在蒙医中,其
全草入药,可用于治疗黄疸型肝炎,胆囊炎,心绞痛
等[1-2]。尖叶假龙胆中所含的成分有 酮类、黄酮
类、环烯醚萜类、木脂素类等[3-4]。 酮类化合物是
假龙胆属植物的主要成分之一,且对心肌缺血再灌
·0822·
匡海学等:尖叶假龙胆中 酮类成分的分离与鉴定
注损伤具有不同程度的保护作用[5-8],可能为本属植
物用于治疗这类心血管疾病主要的物质基础。为深
入研究尖叶假龙胆中 酮类成分的化学结构,采用
硅胶、ODS柱色谱和制备型 HPLC 等色谱技术从尖
叶假龙胆乙醇提取物中分离了 12 个 酮类化合物。
1 材料
Bruker DPX 500 型核磁共振波谱仪(TMS 为内
标,Bruker公司) ;Xevo Q-TOF-MS 液质联用色谱仪
(Waters公司) ;Agilent 1200 制备高效液相仪(Agi-
lent公司) ;制备型色谱柱 C18(20 mm × 250 mm,5
μm,YMC公司) ;柱色谱硅胶(80 ~ 100 目,200 ~ 300
目)采用青岛海洋化工厂产品;柱色谱 ODS
(ODS-AM,50 μm)为日本 YMC 公司产品;Sephadex
LH-20 型凝胶为 Pharmacia 公司生产;AB-8 型大孔
树脂为南开大学化工产品;高效液相所用试剂均色
谱纯,为 Fisher公司产品;其他均为分析纯。
实验所用尖叶假龙胆于 2010年采自大兴安岭,经
黑龙江中医药大学药学院中药资源学王振月教授鉴定
为尖叶假龙胆 G. acuta 的干燥全草。样品标本
(20100079)保存于黑龙江中医药大学中药化学教研室。
2 提取分离
将尖叶假龙胆全草 7. 0 kg 粉粹后用 70%乙醇
回流提取 3 次,物料比为 1 ∶ 10,每次提取 2 h,合并
提取液并浓缩得浸膏 1. 0 kg。将浸膏用适量水溶解
后,通过大孔吸附树脂色谱柱,分别用水,30%,
60%,90%乙醇洗脱。60%乙醇洗脱组分(230 g)
经硅胶柱色谱,以石油醚-丙酮(50∶ 1 ~ 1∶ 1)溶剂体
系梯度洗脱,得到 10 个组分(Fr. A ~ K)。Fr. A组
分(10. 2 g)经中压 ODS 柱色谱,以甲醇-水(1 ∶ 9 ~
1∶ 0)梯度洗脱,得到 14 个组分(Fr. A-1 ~ 14)。Fr.
A-4 经制备型 HPLC,以甲醇-水(44∶ 56)等度洗脱(6
mL·min -1) ,得到化合物 3(20. 6 mg) ,12(13. 8
mg)。Fr. A-9 经制备型 HPLC,以甲醇-水(52∶ 48)等
度洗脱(6 mL·min -1) ,得到化合物 2(18. 1 mg) ,1
(21. 3 mg)。Fr. B 组分(30. 5 g)经 Sephadex LH-20
凝胶柱色谱(甲醇洗脱) ,得到 6 个组分(Fr. B-1 ~
6) ,Fr. B-3 经制备型 HPLC,以甲醇-水(45∶ 55)等度
洗脱(6 mL·min -1) ,得到化合物 4(22. 8 mg) ,5
(22. 9 mg) ,11(10. 1 mg)。Fr. D 组分(23. 4 g)经
Sephadex LH-20 柱色谱(甲醇洗脱) ,得到 9 个组分
(Fr. D-1 ~ 9) ,Fr. D-2 经制备型 HPLC,以甲醇-水
(55∶ 45)等度洗脱(6 mL·min -1) ,得到化合物 6
(25. 2 mg)。Fr. D-6,Fr. D-8 经制备型 HPLC,以甲
醇-水(60∶ 40)等度洗脱(6 mL·min -1) ,分别得到
化合物 8(25. 4 mg) ,10(12. 3 mg)和化合物 7(15. 7
mg) ,9(26. 9 mg)。
3 结构鉴定
化合物 1 淡黄色粉末,HR-ESI-MS m/z
443. 096 8 [M + Na]+;1 H-NMR (DMSO-d6,500
MHz)δ:7. 66(1H,d,J = 3. 0 Hz,H-8) ,7. 63(1H,d,
J = 9. 0 Hz,H-5) ,7. 54(1H,dd,J = 9. 0,3. 0 Hz,H-
6) ,6. 59(1H,d,J = 2. 0 Hz,H-4) ,6. 40(1H,d,J =
2. 0 Hz,H-2) ,4. 95(1H,d,J = 7. 3 Hz,H-1) ,3. 88
(3H,s,OMe) ;13 C-NMR 见表 1。以上数据与文献
[9]报道对比,故鉴定化合物 1 为 1,7-二羟基-3-甲
氧基 酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。
化 合 物 2 黄 色 粉 末,HR-ESI-MS m/z
599. 161 2 [M + H]+;1 H-NMR (DMSO-d6,500
MHz)δ:7. 27(1H,d,J = 9. 0 Hz,H-6) ,7. 22(1H,d,
J = 9. 0 Hz,H-7) ,6. 56(1H,d,J = 2. 0 Hz,H-4) ,
6. 35(1H,d,J = 2. 0 Hz,H-2) ,4. 79(1H,d,J = 7. 8
Hz,H-1) ,4. 24(1H,d,J = 7. 8 Hz,H-1″) ,3. 88(3H,
s,OMe) ;13C-NMR见表 1。以上数据与文献[10]报
道对比,故鉴定化合物 2 为紫药苷。
化 合 物 3 黄 色 粉 末,HR-ESI-MS m/z
629. 172 2 [M + H]+;1H-NMR (DMSO-d6,500
MHz)δ:7. 40(1H,d,J = 9. 0 Hz,H-6) ,6. 84(1H,s,
H-2) ,6. 66(1H,d,J = 9. 0 Hz,H-7) ,4. 89(1H,d,
J = 7. 7 Hz,H-1) ,4. 23(1H,d,J = 7. 7 Hz,H-1″) ,
3. 89(3H,s,4-OMe) ,3. 85(3H,s,5-OMe) ;13 C-NMR
见表 1。以上数据与文献[11]报道对比,故鉴定化
合物 3 为 1,3,8-三羟基-4,5-二甲氧基 酮-1-O-β-
D-吡喃葡萄糖基(6→1)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。
化 合物 4 淡黄色粉末,HR-ESI-MS m/z
467. 117 2[M + H]+;1H-NMR(DMSO-d6,500 MHz)
δ:7. 61(1H,d,J = 9. 1 Hz,H-3) ,7. 02(1H,d,J = 9. 1
Hz,H-4) ,6. 59(1H,s,H-7) ,4. 91(1H,d,J = 7. 3
Hz,H-1) ,3. 93 (3H,s,6-OMe) ,3. 77 (3H,s,5-
OMe) ;13C-NMR见表 1。以上数据与文献[12]报道
对比,故鉴定化合物 4 为 1,2,8-三羟基-5,6-二甲氧
基 酮-2-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。
化 合物 5 淡黄色粉末,HR-ESI-MS m/z
423. 092 2[M + H]+;1H-NMR(DMSO-d6,500 MHz)
δ:7. 15 (1H,d,J = 8. 8 Hz,H-6) ,6. 61 (1H,d,
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2016 年 6 月 第 41 卷第 12 期 Vol. 41,No. 12 June,2016
表 1 化合物 1 ~ 12 的13C-NMR数据 (DMSO-d6,125 Hz)
Table 1 13C-NMR data of compounds 1-12 (DMSO-d6,125 Hz)
No. 1 2 3 4 5 6 71) 8 9 10 11 12
1 158. 5 163. 1 153. 8 149. 3 160. 2 162. 0 164. 8 162. 6 147. 5 161. 9 161. 6 162. 7
2 92. 7 97. 6 100. 5 140. 5 100. 7 99. 1 99. 2 98. 9 140. 9 97. 5 107. 8 97. 2
3 166. 7 166. 7 157. 4 125. 5 165. 0 165. 0 167. 5 167. 1 124. 7 167. 1 163. 4 166. 3
4 97. 2 92. 6 130. 0 106. 5 97. 0 94. 0 95. 3 94. 8 106. 7 93. 0 93. 5 92. 2
4a 162. 3 156. 8 151. 0 149. 9 159. 0 157. 6 159. 2 157. 9 148. 4 157. 4 156. 0 156. 4
4b 151. 3 145. 4 144. 1 150. 4 147. 2 166. 8 146. 7 143. 7 149. 4 143. 4 150. 6 145. 0
5 126. 2 141. 3 139. 4 128. 6 104. 5 65. 9 147. 4 137. 6 128. 6 137. 3 102. 6 141. 0
6 119. 3 122. 0 120. 5 160. 9 123. 0 26. 6 121. 5 124. 0 160. 7 123. 8 154. 0 121. 1
7 154. 3 112. 9 108. 2 95. 7 142. 9 28. 7 124. 9 109. 8 95. 5 109. 5 143. 6 112. 3
8 110. 7 149. 8 153. 8 158. 1 149. 9 59. 4 116. 4 152. 2 158. 0 151. 8 107. 4 149. 4
8a 120. 5 112. 1 108. 6 101. 7 109. 1 118. 6 122. 6 107. 7 101. 6 107. 5 111. 5 111. 9
8b 102. 7 103. 9 103. 8 107. 6 102. 4 103. 9 103. 8 101. 6 107. 5 102. 1 102. 4 103. 5
9 180. 5 181. 5 180. 7 184. 8 181. 0 181. 1 182. 2 184. 1 185. 0 184. 1 178. 9 181. 1
1 101. 6 103. 3 101. 8 101. 1 104. 7 72. 9 103. 1
2 73. 7 73. 9 73. 6 73. 0 73. 7 70. 5 73. 5
3 76. 8 76. 5 76. 8 76. 4 77. 8 78. 8 76. 1
4 69. 6 70. 5 70. 0 69. 4 69. 8 70. 0 69. 7
5 77. 6 77. 2 76. 1 76. 9 76. 6 81. 4 77. 4
6 61. 4 69. 1 68. 2 60. 5 61. 0 61. 3 60. 8
1″ 104. 0 103. 4
2″ 73. 8 73. 2
3″ 76. 4 76. 4
4″ 70. 3 69. 3
5″ 77. 1 76. 0
6″ 61. 4 61. 0
3-OMe 56. 3 56. 5 56. 2 56. 1
4-OMe 60. 6
5-OMe 57. 1 60. 9 61. 3
6-OMe 56. 9 57. 0
注:1). 该化合物溶剂为 CD3OD。
J = 2. 0 Hz,H-2) ,6. 55(1H,d,J = 8. 8 Hz,H-5) ,
6. 71(1H,d,J = 2. 0 Hz,H-4) ,4. 96(1H,d,J = 7. 7
Hz,H-1) ;13 C-NMR 见表 1。以上数据与文献[13]
报道对比,故鉴定化合物 5 为 1,3,7,8-四羟基 酮-
1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。
化 合物 6 淡黄色粉末,HR-ESI-MS m/z
263. 054 3 [M - H]-;1 H-NMR(DMSO-d6,500Hz)
δ:6. 31(1H,d,J = 2. 0 Hz,H-4) ,6. 15(1H,d,J = 2. 0
Hz,H-2) ,4. 74(1H,dd,J = 4. 5,3. 5 Hz,H-5) ,4. 49
(1H,dd,J = 10. 5,6. 5 Hz,H-8) ,2. 01(1H,m,H-
6a) ,1. 89(1H,m,H-6b) ,1. 75(1H,m,H-7a) ,1. 65
(1H,m,H-7b) ;13 C-NMR 见表 1。以上数据与文献
[14]报道对比,故鉴定化合物 6 为 1,3,5,8-四羟基-
5,6,7,8-四氢 酮。
化合物 7 黄色粉末,HR-ESI-MS m/z 245. 040 0
[M +H]+;1 H-NMR(CD3 OD,500 MHz)δ:7. 53(1H,
dd,J = 7. 8,1. 8 Hz,H-8) ,7. 14(1H,dd,J = 7. 8,1. 8
Hz,H-6) ,7. 11(1H,dd,J = 7. 8,7. 8 Hz,H-7) ,6. 34
(1H,d,J = 2. 2 Hz,H-4) ,6. 09(1H,d,J = 2. 2 Hz,H-
2) ;13C-NMR见表 1。以上数据与文献[15]报道的对
比,故鉴定化合物 7为 1,3,5-三羟基 酮。
化合物 8 淡黄色粉末,HR-ESI-MS m/z 261. 037
4[M +H]+;1H-NMR(DMSO-d6,500 MHz)δ:7. 22(1H,
d,J =9. 0 Hz,H-6),6. 61(1H,d,J = 9. 0 Hz,H-7),6. 38
(1H,d,J = 2. 0 Hz,H-4),6. 19(1H,d,J = 2. 0 Hz,H-
2);13C-NMR见表 1。以上数据与文献[16]报道的对
比,故鉴定化合物 8为 1,3,5,8-四羟基 酮。
化 合物 9 淡黄色粉末,HR-ESI-MS m/z
305. 063 2[M + H]+;1H-NMR(DMSO-d6,500 MHz)
δ:7. 06(1H,d,J = 9. 0 Hz,H-3) ,6. 76(1H,d,J = 9. 0
Hz,H-4) ,6. 59(1H,s,H-7) ,3. 83(3H,s,6-OMe) ,
3. 81(3H,s,5-OMe) ;13 C-NMR 见表 1。以上数据与
文献[17]报道的对比,故鉴定化合物 9 为 1,2,8-三
羟基-5,6-二甲氧基 酮。
·2822·
匡海学等:尖叶假龙胆中 酮类成分的分离与鉴定
化 合 物 10 黄 色 粉 末,HR-ESI-MS m/z
275. 050 7[M + H]+;1H-NMR(DMSO-d6,500 MHz)
δ:7. 29(1H,d,J = 8. 8 Hz,H-6) ,6. 68(1H,d,J = 8. 8
Hz,H-7) ,6. 65(1H,d,J = 2. 2 Hz,H-4) ,6. 44(1H,
d,J = 2. 2 Hz,H-2) ,3. 89(3H,s,OMe) ;13 C-NMR 见
表 1。以上数据与文献[18]报道对比,故鉴定化合
物 10 为雏菊叶龙胆酮。
化合 物 11 黄 色 粉 末,HR-ESI-MS m/z
423. 091 7[M + H]+;1H-NMR(DMSO-d6,500 MHz)
δ:7. 30(1H,s,H-8) ,6. 78(1H,s,H-5) ,6. 29(1H,s,
H-4) ,4. 53(1H,d,J = 9. 8 Hz,H-1) ,4. 04(1H,dd,
J = 9. 0,9. 0 Hz H-2) ,3. 68(1H,dd,J = 12. 0 Hz,
2. 0 Hz,H-6a) ,3. 40(1H,dd,J = 12. 0,6. 0 Hz,H-6
b) ,3. 20(1H,m,H-3) ,3. 16(1H,m,H-5) ,3. 13
(1H,m,H-4) ;13 C-NMR 见表 1。以上数据与文献
[19]报道对比,故鉴定化合物 11 为芒果苷。
化合物 12 淡黄色粉末,HR-ESI-MS m/z
459. 099 7[M + Na]+;1H-NMR(DMSO-d6,500 MHz)
δ:7. 24(1H,d,J = 9. 0 Hz,H-7) ,7. 12(1H,d,J = 9. 0
Hz,H-6) ,6. 51(1H,d,J = 2. 2 Hz,H-4) ,6. 31(1H,d,
J =2. 2 Hz,H-2) ,4. 76(1H,d,J = 7. 7 Hz,H-1) ,3. 73
(3H,s,OMe) ;13 C-NMR 见表 1。以上数据与文献
[20]报道对比,故鉴定化合物 12为当药醇苷。
4 讨论
缺血性心脏病是一种严重危害人类健康的疾
病。目前,临床上用于治疗缺血性心脏病的主要技
术有静脉溶栓、心脏介入或心脏移植手术、冠脉搭桥
手术、经皮腔内冠脉血管成形术等,这些治疗手段虽
然可以使缺血的心肌得到血液再灌注,然而在恢复
血液再灌注的同时会伴随着心肌缺血再灌注损伤的
发生。众多研究显示再灌注后会使心肌组织损伤加
重,促使心肌细胞凋亡、坏死,从而导致心绞痛、心律
失常、微血管功能障碍和心脏衰竭等临床症状的发
生。因此,针对心肌缺血再灌注损伤寻找有效的防
治措施,研究一种高效低毒的药物研究势在必行。
尖叶假龙胆含有大量的 酮类化合物,将尖叶假龙
胆开发成一种用于治疗心肌缺血再灌注损伤的药物
或许是一条可行性途径。
[参考文献]
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[责任编辑 丁广治]
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