全 文 ：·生物技术· 北方园艺２０１１（１６）：１４４～１４７
第一作者简介：韦啸（１９７２－），男，广西永福人，本科，工程师，现主
要从事园林植物与观赏园艺方面的工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｈｓｍｅｉ７４＠
ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ。
责任作者：黄素梅（１９７４－），女，博士，副研究员，现主要从事植物资
源开发利用等研究工作。
收稿日期：２０１１－０５－０４
三苞唇柱苣苔花梗的离体培养
韦 　 啸１，唐 赛 春２，黄 素 梅２，３
（１．广西壮族自治区永福县林业局，广西 永福５４１８００；２．中国科学院 广西植物研究所，广西 桂林５４１００６；
３．广西农业科学院 生物技术研究所，广西 南宁５３０００７）
　　摘　要：以三苞唇柱苣苔带腋芽花梗为外植体，对外植体消毒、不定芽的诱导与增殖、生根培
养以及生根苗的移栽等组织培养相关技术进行研究。结果表明：外植体的消毒以０．１％的升汞消
毒７ｍｉｎ最佳，其成活率为７３．３％；ＭＳ基本培养基适合于芽的诱导及生长；不定芽诱导及增殖
的最佳培养基为：ＭＳ＋ＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．１ｍｇ／Ｌ；最佳的生根培养基为：ＭＳ＋ＩＢＡ
０．３ｍｇ／Ｌ，最佳的移栽基质为腐殖土，移栽成活率为９５％。
关键词：三苞唇柱苣苔；花梗；离体培养
中图分类号：Ｓ　６８１．９　文献标识码：Ａ　文章编号：１００１－０００９（２０１１）１６－０１４４－０４
　　三苞唇柱苣苔（Ｃｈｉｒｉｔａ　ｔｒｉｂｒａｃｔｅａｔａＷ．Ｔ．Ｗａｎｇ）为 苦苣苔科唇柱苣苔属多年生草本植物，其叶片墨绿、叶
脉清晰、花冠蓝色，具有较高的观赏价值和很大的发展
潜力［１］。此外，唇柱苣苔属植物的许多种类还是我国
民间传统的药用植物，该属植物在医药领域同样具有
较大的开发潜力［２－３］。由于唇柱苣苔属植物大多对生
境要求严格，分布范围十分狭窄，这使得该属很多植物
成为珍稀濒危种类，其中三苞唇柱苣苔仅在广西的凤
山县发现一个自然分布点。因此，有必要加强植物资
源保护及开发利用研究，

尤其是加强繁育及种质保存
体系影响最小；ｄＮＴＰｓ在３个水平内有效扩增，对反应
体系影响也不大；Ｍｇ２＋浓度为２．０ｍｍｏｌ／Ｌ时，扩增条
带特异性好，都为预扩增条带，Ｍｇ２＋与扩增条带的特
异性相关性强，对反应体系影响最大。与王娟等［６］优
化苹果ＥＳＴ－ＳＳＲ标记ＰＣＲ反应最佳体系一致（除
ＤＮＡ模板３０ｎｇ／２０μＬ、引物０．４μｍｏｌ／Ｌ）。佟海申
等［７］研究了４个因素（不含 Ｍｇ２＋）对大白菜ＥＳＴ－ＳＳＲ
标记ＰＣＲ反应体系的影响，最佳反应浓度与该研究有
差异，且表明引物对反应影响最大。原因可能是试验
材料不同所致，试验所得最佳体系浓度均符合常规
ＰＣＲ反应体系所需浓度。
参考文献
［１］　贺俊，张忠华，李颖，等．国际马铃薯和番茄基因组测序进展［Ｊ］．园
艺学报，２００８，３５（１０）：１５４５－１５４９．
［２］　陈佳，沈火林，杨文才．番茄分子标记开发进展［Ｊ］．分子植物育种，
２００７，５（６）：１３０－１３８．
［３］　Ｓｑｕｉｒｒｅｌ　Ｊ，Ｈｏｌｉｎｇｓｗｏｒｔｈ　Ｐ　Ｍ，Ｗｏｏｄｈｅａｄ　Ｍ，ｅｔ　ａｌ．Ｈｏｗ　ｍｕｃｈ　ｅｆｆｏｒｔ
ｉｓ　ｒｅｑｕｉｒｅｄ　ｔｏ　ｉｓｏｌａｔｅ　ｎｕｃｌｅａｒ　ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｉｔｅｓ　ｆｒｏｍ　ｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．Ｍｏｌ．Ｅｃｏｌ．，
２００３（１２）：１３３９－１３４８．
［４］　林元震，郭海，刘纯鑫，等．ＥＳＴ－ＳＳＲ标记在木本植物中的开发和
应用［Ｊ］．植物生理学通讯，２００９，４５（１２）：１２２１－１２２５．
［５］　Ｖａｒｓｈｎｅｙ　Ｒ　Ｋ，Ｈｉｒｅｍａｔｈ　Ｐ　Ｊ，Ｌｅｋｈａ　Ｐ，ｅｔ　ａｌ．Ａ　ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ　ｒｅｓｏｕｒｃｅ
ｏｆ　ｄｒｏｕｇｈｔ－ａｎｄ　ｓａｌｉｎｉｔｙ－ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ　ＥＳＴｓ　ｆｏｒ　ｇｅｎｅ　ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ　ａｎｄ　ｍａｒｋｅｒ
ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｉｎ　ｃｈｉｃｋｐｅａ（Ｃｉｃｅｒ　ａｒｉｅｔｉｎｕｍＬ．）［Ｍ］．ＢＭＣ　Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，２０１０，
１０（１）：５２３－５４１．
［６］　王娟，宋尚伟．苹果ＥＳＴ－ＳＳＲ引物的开发及部分品种亲缘关系分
析［Ｄ］．郑州：河南农业大学，２００９．
［７］　佟海申，宋琳，张志刚，等．大白菜 ＥＳＴ－ＳＳＲ反应体系优化及引物
筛选［Ｊ］．科技导报，２０１０，２８（３）：７５－８１．
Ｏｐｔｉｍｉｎｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＥＳＴ－ＳＳＲ　Ｍａｋｅｒ　ＰＣＲ　Ｓｙｓｔｅｍ　ｏｎ　Ｔｏｍａｔｏ
ＨＡＮ　Ｍｉｎｇ－ｌｉ　１，２，ＨＯＵ　Ｌｉ－ｘｉａ１，ＣＵＩ　Ｎａ２，ＷＡＮＧ　Ｓｈｉ－ｈｕｉ　１，ＹＵ　Ｚｈｉ－ｈａｉ　２，ＧＵＯ　Ｃａｉ－ｊｉｅ２
（１．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｖｅｇｅｔａｂｌｅ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｆｏｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　Ｇｒｅｅｎｈｏｕｓｅ
Ｖｅｇｅｔａｂｌｅ　ｏｆ　Ｓｈａｎｄｏｎｇ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ　Ｖｅｇｅｔａｂｌｅ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ　Ｂｒａｎｃｈ，Ｊｉｎａｎ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ　２５０１００；２．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ
Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ，Ｌｉａｏｎｉｎｇ　１１０１６１）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｌ１６（４４）ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｄｅｓｉｇｎ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ＥＳＴ－ＳＳＲ　Ｍａｋｅｒ　ＰＣＲ　ｓｙｓｔｅｍ　ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｏｍａｔｏ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ
ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ＰＣＲ　ｓｙｓｔｅｍ　ｗａｓ：４５ｎｇ／２０μＬ　ＤＮＡ　ｔｅｍｐｌａｔｅ，０．７５μｍｏｌ／Ｌ　ｐｒｉｍｅｒ，２．０ｍｍｏｌ／Ｌ　Ｍｇ
２＋，０．４
ｍｍｏｌ／Ｌ　ｄＮＴＰｓ，０．５Ｕ／２０μＬ　Ｔａｑ　ＤＮＡ　ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｒｉｍｅｒ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｇｒｅａｔｅｓｔ　ｆｏｒ
ｔｈｉｓ　ｓｙｓｔｅｍ．Ｔｈｅ　ｓｙｓｔｅｍ　ｈａｄ　ｂｅｅｎ　ｖｅｒｉｆｉｅｄ　ｂｙ　ｆｉｖｅ　ｐａｉｒｓ　ｏｆ　ｐｒｉｍｅｒｓ　ａｎｄ　Ｐ１，Ｐ２ｇｅｎｏｍｅ　ＤＮＡ，ａｎｄ　ｐｒｏｖｉｄｅｄ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ
ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｏｎ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｍａｒｋｅｒ　ａｓｓｉｓｔｅｄ　ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｏｍａｔｏ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｔｏｍａｔｏ；ＥＳＴ－ＳＳＲ；ｓｙｓｔｅｍ　ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ；ＰＣＲ
４４１
北方园艺２０１１（１６）：１４４～１４７ ·生物技术·
等研究。但三苞唇柱苣苔种子微小、难以收集贮藏，极
大地限制了常规播种繁育的规模及速度，而组织培养
则是实现快速繁殖的有效途径之一。近年关于唇柱苣
苔属植物组织培养研究已陆续有些报道［４－８］，但关于三
苞唇柱苣苔的组织培养方面的研究，除余海霞等［８］以
幼嫩叶片为外植体诱导不定芽取得成功之外，未见其
它报道。现以带腋芽的幼嫩花梗为外植体，对三苞唇
柱苣苔的组织培养相关技术进行研究，以期为该植物
的种质保存、繁育、开发、利用等提供更多参考。
１　材料与方法
１．１　试验材料
１．１．１　供试材料　植物材料采用从野外引种后种植
于广西植物研究所分类研究室种质圃内的三苞唇柱苣
苔植株上带腋芽的幼嫩花梗。
１．１．２　培养基及培养条件　无特殊说明情况下，在基
本培养基中添加３％的白糖、０．４％的琼脂，ｐＨ　５．８～
６．０，培养温度为（２５±２）℃，光照时间为１０ｈ／ｄ，光照
强度为２　０００ｌｘ。
１．２　试验方法
１．２．１　外植体的表面消毒　取三苞唇柱苣苔健壮无
病害植株上带腋芽的幼嫩花梗，用自来水轻轻冲洗干
净后，用纱布吸干表面水分，在超净工作台上，用７５％
酒精表面消毒３０ｓ后，再用０．１％ ＨｇＣｌ２浸泡消毒３～
１１ｍｉｎ，然后用无菌水冲洗３～５遍后，接入培养基中。
１．２．２　不同表面消毒时间对外植体的影响　将经不
同时间消毒处理的外植体剪成ｌ　ｃｍ左右带腋芽小段。
接入 ＭＳ＋ＢＡ　２．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．１ｍｇ／Ｌ培养基中
进行培养，２０ｄ后开始统计各处理外植体的污染率和
褐化死亡情况，获得的无菌材料用于后续试验。
１．２．３　芽的诱导、增殖　将萌动２０ｄ的侧芽接入
ＭＳ＋ＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．１ｍｇ／Ｌ培养基。将在该
培养基上继代３次后的试管苗叶片切成１ｃｍ×１ｃｍ的
正方块，接入不同的培养基中，６０ｄ后进行观测和数据
统计。考察不同基本培养基、不同激素组合对芽诱导
及生长的影响。
１．２．４　生根培养　将高度为１．２ｃｍ左右的无根苗接
入不同的生根培养中，３０ｄ后进行观测和数据统计。
考察不同基本培养基、不同生长素、不同糖分浓度对生
根的影响。
１．２．５　移栽　将在ＭＳ＋ＩＢＡ　０．３ｍｇ／Ｌ＋３％蔗糖培养
３０ｄ的健壮生根苗在自然光下开盖练苗３ｄ后，洗净根
部的培养基，移栽到消毒过的沼泽土、火土、火土＋珍珠
岩（１∶１）、腐殖土（收集于阔叶林下）等基质中，保证一定
的水分和湿度，１个月后进行观测及数据统计。
２　结果与分析
２．１　不同消毒时间对外植体的影响
由表１可知，外植体的污染率随着消毒时间的增
加而降低，消毒时间为７ｍｉｎ，其污染率仅为２６．７％，成
活率达７３．３％；当消毒时间超过９ｍｉｎ后，污染率仅为
６．７％，但外植体很容易变褐最后死亡；大部分未污染
的花梗在１０～１５ｄ侧芽开始萌动，消毒时间越长，侧
芽就越难萌动，６０ｄ后未褐化死亡的外植体萌动率可
达１００％。总体上说，花梗的消毒时间以７ｍｉｎ为佳。
　　表１ 消毒时间对外植体消毒效果的影响
　　Ｔａｂｌｅ　１ Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ
消毒时间
Ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ／ｍｉｎ
变褐枯死率
Ｂｒｏｗｎ　ｄｅａｔｈ　ｒａｔｅ／％
污染率
Ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ／％
成活率
Ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ／％
３　 ０　 ６０．０　 ３０．０
５　 ０　 ３３．３　 ６６．７
７　 ０　 ２６．７　 ７３．３
９　 １３．３　 ２０．０　 ６６．７
１１　 ４０．０　 ６．７　 ５３．３
２．２　不同基本培养基对芽诱导及生长的影响
将三苞唇柱苣苔的试管苗叶片分别接入添加ＢＡ
０．５ｍｇ／Ｌ及ＮＡＡ　０．１ｍｇ／Ｌ的 ＭＳ、Ｂ５、Ｗｈｉｔｅ培养基
中连续培养２代后，进行观测及数据统计。由表２可
知，３种基本培养基中，ＭＳ培养基对不定芽的诱导效
果最好，平均为１５．３芽／块，而且苗高及生长状况也优
于其它处理。在 Ｗｈｉｔｅ培养基上培养的苗细弱，而且
颜色发黄，生长最差，平均芽数明显少于其它处理，由
此可推断，高无机盐含量的基本培养基可能更利于三
苞唇柱苣苔试管苗的生长。
　　表２ 基本培养基对芽诱导及生长的影响
　　Ｔａｂｌｅ　２ Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｂａｓｉｃａｌ　ｍｅｄｉｕｍ　ｏｎ　ｂｕｄ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｇｒｏｗｔｈ
培养基
Ｍｅｄｉｕｍ／ｍｇ·Ｌ－１
不定芽
Ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｎ　ｂｕｄ／芽·块－１
苗高
Ｈｅｉｇｈｔ　ｏｆ　ｐｌａｎｔ／ｃｍ
生长情况
Ｇｒｏｗｔｈ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ
ＭＳ＋ＢＡ　０．５＋ＮＡＡ　０．１　 １５．３　 １．１ 苗粗壮、叶片大而青绿
Ｂ５＋ＢＡ　０．５＋ＮＡＡ　０．１　 ９．６　 ０．６ 苗细弱、叶片中等、黄绿
Ｗｈｉｔｅ＋ＢＡ　０．５＋ＮＡＡ　０．１　 ６．７　 ０．５ 苗极细弱、叶片细小、黄白色
２．３　不同激素配比对芽诱导及生长的影响
将三苞唇柱苣苔的试管苗叶片分别接入添加不同的
ＢＡ（０．３、０．５、０．８ｍｇ／Ｌ）和ＮＡＡ（０．１、０．３、０．５ｍｇ／Ｌ）配比
的ＭＳ培养基中，除１号培养基外，其它培养基中的叶片
５４１
·生物技术· 北方园艺２０１１（１６）：１４４～１４７
均在接种２４～２７ｄ长出绿色芽点，而１号培养基上仅１
块叶片长出３个芽点，而且芽苗长势非常弱，由此可知，
ＢＡ、ＮＡＡ等植物生长调节剂缺乏，对三苞唇柱苣苔丛生
芽的诱导及生长极其不利。继续培养后发现，在５号培
养基（ＭＳ＋ＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．１ｍｇ／Ｌ）上诱导的芽
苗较壮，叶色青绿，而且苗高也高于其它的处理，该处理
对不定芽的诱导及生长都好于其它培养基。因此５号
培养基被认为是芽诱导及生长的最佳培养基。
　　表３ 激素配比对芽诱导及生长的影响
　　Ｔａｂｌｅ　３ Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｈｏｒｍｏｎｅ　ｃｏｎｂｉｎａｔｉｏｎ　ｏｎｂｕｄ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｇｒｏｗｔｈ
培养基编号
Ｍｅｄｉｕｍ　Ｎｏ．
不定芽
Ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｎ　ｂｕｄ／芽·块－１
苗高
Ｈｅｉｇｈｔ　ｏｆ　ｐｌａｎｔ／ｃｍ
生长情况
Ｇｒｏｗｔｈ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ
１ – – ５０ｄ后，仅１块叶片长出３个芽，其余叶片均枯黄死亡
２　 １２．８５　 ０．８　 ２７ｄ长出绿色小芽，苗长势中等
３　 ６．５　 ０．６　 ２７ｄ长出小芽点，芽苗叶片薄、黄绿，茎细弱、气生根多
４　 ５．２５　 ０．６５　 ２７ｄ长出小芽点，芽苗叶片黄绿，茎细弱、气生根多
５　 １５．３　 １．２５　 ２５ｄ长出芽点，苗壮、叶片大而绿，少量气生根
６　 １４．１　 １．０　 ２５ｄ长出芽点，苗长势中等、叶片稍薄
７　 ８．０５　 ０．７　 ２６ｄ长出芽点，苗细弱、叶片黄绿色、部分顶芽水渍状
８　 １０．９　 １．０　 ２４ｄ长出芽点，苗细弱、叶片黄绿色，部分顶芽水渍状
９　 １１．２　 １．１　 ２５ｄ长出芽点，苗长势相对较好、叶片黄绿，部分顶芽水渍状
１０　 １１．３　 ０．８　 ２５ｄ长出芽点，苗细、叶黄、茎弱、部分顶芽水渍状
　　注：培养基编号：１．ＭＳ；２．ＭＳ＋ＢＡ　０．３＋ＮＡＡ　０．１；３．ＭＳ＋ＢＡ　０．３＋ＮＡＡ　０．３；４．ＭＳ＋ＢＡ　０．３＋ＮＡＡ　０．５；５．ＭＳ＋ＢＡ　０．５＋ＮＡＡ　０．１；６．ＭＳ＋ＢＡ　０．５＋ＮＡＡ　０．３；
７．ＭＳ＋ＢＡ　０．５＋ＮＡＡ　０．５；８．ＭＳ＋ＢＡ　０．８＋ＮＡＡ　０．１；９．ＭＳ＋ＢＡ　０．８＋ＮＡＡ　０．３；１０．ＭＳ＋ＢＡ　０．８＋ＮＡＡ　０．５。
２．４　不同基本培养基对生根培养的影响
将高约１．２ｃｍ左右的无根苗接到添加ＮＡＡ　０．３
的１／２ＭＳ、ＭＳ培养基上进行生根培养，１２ｄ后长出新
根。由表４可知，在 ＭＳ或１／２ＭＳ培养基上诱导根的
数量无明显差别，但在诱导根的形态上具有一定差异，
在ＭＳ诱导的根相对较粗，而在１／２ＭＳ上诱导的根则
相对细长。此外，在 ＭＳ培养基上的苗的高度及长势
都优于１／２ＭＳ培养基。因此，ＭＳ培养基更适合于三
苞苦苣苔的生根培养。
　　表４ 基本培养基对生根培养的影响
　　Ｔａｂｌｅ　４ Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｂａｓｉｃａｌ　ｍｅｄｉｕｍ　ｏｎ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｃｕｌｔｕｒｅ
培养基
Ｍｅｄｉｕｍ
生根率
Ｒｏｏｔｉｎｇ　ｒａｔｅ／％
根数
Ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｒｏｏｔｓ／条·株－１
苗高
Ｈｅｉｇｈｔ　ｏｆ　ｐｌａｎｔ／ｃｍ
生长情况
Ｇｒｏｗｔｈ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ
１／２ＭＳ＋ＮＡＡ　０．３　 １００　 ２７．２　 ２．９ 植株黄绿、叶大而薄，根稍细长，韧性一般
ＭＳ＋ＮＡＡ　０．３　 １００　 ２７．０　 ３．６ 植株黄绿，叶大稍厚，根相对稍粗，韧性较好
２．５　生长素对生根培养的影响
通过不同浓度的不同生长素对三苞唇柱苣苔生根
的影响试验发现（表５），不加任何生长素的处理苗细弱
且叶色发黄，基本上不产生新根，苗高明显低于加有生
长素的处理；从表５可看出，只要在培养基中加一定浓
度的ＩＢＡ或ＮＡＡ即可诱导产生根，可见三苞唇柱苣苔
是十分容易诱导生根的；ＩＢＡ诱导的根比ＮＡＡ诱导的
根粗壮，而且诱导出根时间短、苗壮、叶大而绿，长势好
于添加ＮＡＡ的培养基；还发现当ＩＢＡ或ＮＡＡ浓度为
０．５ｍｇ／Ｌ时，诱导的根出现数根并成一块（根）的现象，
这可能是由于生长素浓度过高引起，因而在诱导生根时
生长素浓度不宜过高（不宜超过０．５ｍｇ／Ｌ）；经比较发
现，Ｋ６（ＭＳ＋ＩＢＡ　０．３ｍｇ／Ｌ）培养基不但诱导的根多、粗
壮，而且苗也健壮青绿，因而是最佳的生根培养基。
　　表５ 生长素对生根培养的影响
　　Ｔａｂｌｅ　５ Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆａｕｘｉｎｓ　ｏｎ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｃｕｌｔｕｒｅ
培养基编号
Ｍｅｄｉｕｍ　Ｎｏ．
生根率
Ｒｏｏｔｉｎｇ　ｒａｔｅ／％
根数
Ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｒｏｏｔｓ／条·株－１
苗高 Ｈｅｉｇｈｔ
ｏｆ　ｐｌａｎｔ／ｃｍ
生长情况
Ｇｒｏｗｔｈ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ
Ｋ１ １００　 ０．５　 １．９　 １５ｄ后，叶色逐渐变黄，植株生长缓慢，有少量气生根
Ｋ２ １００　 ２０．０　 ３．６　 １５ｄ后长出新根，植株黄绿色，根系胡须状，根细不易折断
Ｋ３ １００　 ２９．７　 ３．７　 １２ｄ后长出新根，植株健壮青绿，叶多而大，根较Ｋ２粗，韧性好，须根发达
Ｋ４ １００　 ２１．２　 ３．７　 １２ｄ后长出新根，植株青绿，苗健壮，根粗壮、侧根短，部分根并生成块
Ｋ５ １００　 １４．０　 ３．６　 １５ｄ后长出新根，植株叶色青绿，苗健壮，主根较粗、侧根少
Ｋ６ １００　 ２２．０　 ３．７　 １０ｄ后长出新根，植株健壮青绿，叶大、根粗壮韧性好，须根少
Ｋ７ １００　 １５．７　 ３．６　 １０ｄ后长出新根，植株健壮青绿，叶大、根粗短易折断，须根不发达，部分根并生成块
　　注：培养基编号：Ｋ１．ＭＳ；Ｋ２．ＭＳ＋ＮＡＡ　０．１；Ｋ３．ＭＳ＋ＮＡＡ　０．３；Ｋ４．ＭＳ＋ＮＡＡ　０．５；Ｋ５．ＭＳ＋ＩＢＡ　０．１；Ｋ６．ＭＳ＋ＩＢＡ　０．３；Ｋ７．ＭＳ＋ＩＢＡ　０．５。
２．６　糖分浓度对生根培养的影响
将无根苗分别接种在 ＭＳ＋ＩＢＡ　０．３ｍｇ／Ｌ＋１％～
４％蔗糖的各种培养基上诱导生根。结果发现，三苞唇
柱苣苔无根苗在４种糖分浓度均能生根，但当糖分浓
６４１
北方园艺２０１１（１６）：１４４～１４７ ·生物技术·
度太低（如为１％）时，诱导出的根相对细弱，根质量（如
粗壮程度、韧性等）明显不及其它处理，而且苗的叶片
黄白色，苗生长慢；从表６可看出，生根苗的高度及苗
的质量（青绿度、叶片大小、茎粗壮程度等）与糖分浓度
成正相关，当糖分浓度为４％时苗的长势好于其它处
理，根也粗壮，因此是最佳的糖分浓度，但是从降低生
产成本的角度考虑，以选择２％～３％糖分浓度的培养
基诱导生根为佳。
　　表６ 糖分浓度对生根培养的影响
　　Ｔａｂｌｅ　６ Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｓｕｇａｒ　ｃｏｎｃｅｎｔ　ｏｎ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｃｕｌｔｕｒｅ
糖分浓度
Ｓｕｇａｒ　ｃｏｎｃｅｎｔ／％
生根率
Ｒｏｏｔｉｎｇ　ｒａｔｅ／％
根数Ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｒｏｏｔｓ
／条·株－１
苗高
Ｈｅｉｇｈｔ　ｏｆ　ｐｌａｎｔ／ｃｍ
生长情况
Ｇｒｏｗｔｈ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ
１　 １００　 １１．３　 ２．２ 植株叶黄、茎细，叶较其它处理细小，根短
２　 １００　 １４．４　 ３．０ 叶色正常，根比１％糖的处理粗
３　 １００　 ２１．９　 ３．５ 植株茎粗、叶大、叶色青绿，根粗壮，韧性好
４　 １００　 １５．５　 ４．３ 植株茎粗、叶大、叶色青绿，根粗壮，侧根、气生根多
２．７　不同基质对移栽成活率的影响
生根苗在移栽后约１５ｄ后开始长出新叶，３０ｄ后
检查成活率。从表７可看出，生根苗在腐殖土中移栽
成活率最高（９５％），其次是沼泽土（９０％），而其它处理
移栽成活率则比较低，这可能是因为这２种土的保水
能力及通透性与野生三苞唇柱苣苔的生长土壤更接
近。因此移栽最好选择腐殖土或沼泽土。
　　表７　　移栽基质对移栽成活率的影响
　　Ｔａｂｌｅ　７　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｉｎｇ　ｓｕｂｓｔｒａｔｅ　ｏｎ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ
移栽基质
Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｉｎｇ　ｓｕｂｓｔｒａｔｅ
移栽苗数
Ｐｌａｎｔｓ／株
成活率
Ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ／％
沼泽土 ４０　 ９０
火土 ４０　 ４２．５
火土＋珍珠岩（１∶１） ４０　 ４５
腐殖土 ４０　 ９５
３　结论与讨论
在以三苞唇柱苣苔的花梗为外植体的组织培养过
程中，外植体用０．１％ ＨｇＣｌ２表面消毒７ｍｉｎ效果最好，
成活率可达７３．３％；ＭＳ基本培养基更利于芽的诱导
及生长，最佳的增殖培养基为ＭＳ＋ＢＡ　０．５＋ＮＡＡ　０．１，
用该培养基诱导的芽苗较壮，叶色青绿，长势好；三苞
唇柱苣苔试管苗根的诱导十分容易，生根培养基以
ＭＳ＋ＩＢＡ　０．３＋２％～３％糖为佳；生根苗的最佳移栽
基质为腐殖土，移栽成活率可达９５％。
虽然余海霞等［８］报道用 ＭＳ＋ＢＡ　０．５＋ＮＡＡ　０．１
成功诱导三苞唇柱苣苔叶片产生不定芽。但是，在试
验中发现，用野生植株上的叶片不但表面消毒难度较
大（褐化死亡严重），且芽诱导也比用花梗诱导更难，而
用经过继代培养２代后试管苗的叶片则很容易诱导不
定芽，这可能是因为植物激素累积所产生的效应。因
此，认为以带腋芽的花梗为外植体进行组织培养比用
叶片为外植体更具优势。此外，在培养过程中，还发现
三苞唇柱苣苔芽苗顶部叶片容易出现水渍状，有玻璃
化的趋势，尤其是随着培养代数的增加，这种现象更明
显。因此在三苞苦苣苔的组织培养中如何控制玻璃化
苗的发生还有待进一步的研究。
参考文献
［１］　温放，张启翔，王越．广西唇柱苣苔属和小花苣苔属植物的观赏性
状评价与筛选［Ｊ］．园艺学报，２００８，３５（２）：２３９－２５０．
［２］　李家美，常颖，夏至．唇柱苣苔属５种药用植物的考证［Ｊ］．河南农
业大学学报，２０１０，４４（１）：１０３－１０５．
［３］　温放，张启翔．广西苦苣苔科野生观赏植物资源的调查、引种及现
状分析［Ｃ］．２００７年中国园艺学会观赏园艺专业委员会年会，２００７：
６０－６５．
［４］　李翠，凌征柱，姚绍嫦，等．苦苣苔科植物组织培养研究进展［Ｊ］．安
徽农业科学，２０１０，３８（３１）：１７３８７－１７３８８，１７３９０．
［５］　谭晓风，邓建军，胡孝义，等．莨山唇柱苣苔组织培养与植株再生
［Ｊ］．经济林研究，２００９，２７（３）：２４－２７．
［６］　李翠，吕惠珍，凌征柱，等．菱叶唇柱苣苔的组织培养和快速繁殖
［Ｊ］．植物生理学通讯，２０１０，４６（１０）：１０７３－１０７４．
［７］　梁桂友，温放，李湛东．尖萼唇柱苣苔的组织培养和快速繁殖［Ｊ］．
植物生理学通讯，２００７，４３（２）：３２１．
［８］　余海霞，凌征柱，黄雪彦，等．三苞唇柱苣苔的组织培养与快速繁
殖［Ｊ］．植物生理学通讯，２０１０，４６（１１）：１１７７－１１７８．
Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｆ　Ｐｅｄｉｃｅｌ　ｆｒｏｍＣｈｉｒｉｔａ　ｔｒｉｂｒａｃｔｅａｔａ　Ｗ．Ｔ．Ｗａｎｇ
ＷＥＩ　Ｘｉａｏ１，ＴＡＮＧ　Ｓａｉ－ｃｈｕｎ２，ＨＵＡＮＧ　Ｓｕ－ｍｅｉ　２，３
（１．Ｙｏｎｇｆｕ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｂｕｒｅａｕ，Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｚｈｕａｎｇ　Ａｕｔｏｎｏｍｏｕｓ　Ｒｅｇｉｏｎ，Ｙｏｎｇｆｕ，Ｇｕａｎｇｘｉ　５４１８００；２．Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｂｏｔａｎｙ，Ｇｕａｎｇｘｉ
Ｚｈｕａｎｇ　Ａｕｔｏｎｏｍｏｕｓ　Ｒｅｇｉｏｎ，Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｇｕｉｌｉｎ，Ｇｕａｎｇｘｉ　５４１００６；３．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｇｕａｎｇｘｉ　Ａｃａｄｅｍｙ
ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｎａｎｎｉｎｇ，Ｇｕａｎｇｘｉ　５３０００７）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｕｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ｐｅｄｉｃｅｌｓ　ｗｉｔｈ　ａｎ　ａｘｉｌａｒｙ　ｂｕｄ　ｆｒｏｍＣｈｉｒｉｔａ　ｔｒｉｂｒａｃｔｅａｔａ　Ｗ．Ｔ．Ｗａｎｇ　ａｓ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ，ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ
ｒｅｌａｔｅｄ　ｔｏ　ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ｅｘｐｌａｎｔ　ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ，ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｎ　ｂｕｄｓ，ｒｏｏｔｉｎｇ　ｃｕｌｔｕｒｅ
ａｎｄ　ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｉｎｇ　ｏｆ　ｐｌａｎｅｔｓ）ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｏｐｉｔｉｍａｌ　ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　ｗａｓ　ａｂｏｕｔ　７ｍｉｎ，
ａｎｄ　ｉｔｓ　ｓｕｒｉｖｉａｌ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　７３．３％；ｆｏｒ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｎ　ｂｕｄｓ，ＭＳ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｂａｓａｌ
ｍｅｄｉｕｍ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｏｐｉｔｉｍａｌ　ｍｅｄｉｕｍ　ｗａｓ　ＭＳ＋ＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．１ｍｇ／Ｌ；ｔｈｅ　ｏｐｉｔｉｍａｌ　ｍｅｄｉｕｍ　ｆｏｒ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｗａｓ
ＭＳ＋ＩＢＡ　０．３ｍｇ／Ｌ；ｈｕｍｕｓ　ｓｏｉｌ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｏｐｉｔｉｍａｌ　ｔｒａｎｐｌａｎｔｉｎｇ　ｓｕｂｓｔｒａｔｅ，ａｎｄ　ｉｔｓ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　９５％．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｃｈｉｒｉｔａ　ｔｒｉｂｒａｃｔｅａｔａＷ．Ｔ．Ｗａｎｇ；ｐｅｄｉｃｅｌ；ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｃｕｌｔｕｒｅ
７４１