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(2007 -11-01收稿)
玉竹水提液体内外抗氧化的实验研究
徐大量 ,林　辉 ,李盛青 ,李熙灿 ,周玖瑶 ,许晓峰
(广州中医药大学 ,广东广州 510405)
　　摘要　目的:通过对玉竹水提液在体内外抗氧化作用的考察 , 探讨玉竹抗衰老作用的机制。方法:应用 DPPH
法和总还原能力测定法考察玉竹水提液的体外抗氧化能力。通过灌服玉竹水提液 ,考察其对 D-半乳糖所致的亚急
性衰老小鼠血浆 SOD活力及肝脏组织中 MDA含量的影响 。结果:玉竹水提液体外具有与 VitC和芦丁相似的抗氧
化能力 , 且能力随浓度增加而增强 ,灌服玉竹水提液可有效提高衰老小鼠血浆 SOD活力 ,降低肝脏组织中 MDA含
量 , 低剂量组效果明显(P<0.01)。结论:玉竹水提液具有较好的体内外抗氧化作用 , 这可能是其抗衰老的作用机
制之一。
关键词　玉竹;抗氧化;DPPH;总还原能力;D-半乳糖;亚急性衰老小鼠;SOD;丙二醛
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2008)05-0729-03
作者简介:徐大量(1981-),男,在读硕士研究生 ,主要研究中药有效部位。
　　玉竹为百合科植物玉竹 Polygonatumodoratum
(Mil.)Druce的干燥根茎 〔1〕。最早记载出自《神农
本草经 》,列为上品 ,谓其 “味甘平 ,主中风暴热 ,不
能动摇 ,跌筋结肉 ,诸不足 ,久服 ,去面黑 ,好颜色润
泽 ,轻身不老 ”。现代临床主要应用玉竹及其为主
的处方 、制剂治疗多种老年性相关疾病。本文旨在
对玉竹水提液的体内外抗氧化作用进行研究 ,以期
探讨其抗衰老的作用机理 。
1 　材料与方法
1.1 　材料
1.1.1　动物及分组:SPF级昆明种小鼠 60只 ,雌
雄各半 ,体重 18 ～ 22 g,由广州中医药大学实验动物
中心提供(动物合格证号:SCXK(粤)2103-0001)。
将小鼠随机分成 5组 ,即正常对照组 、衰老模型组 、
玉竹水提液低 、中 、高剂量组 ,每组 14只 。
1.1.2 　药品与试剂:玉竹购自广州致信中药饮片
有限公司 (批号:070601),经本校中药鉴定教研室
张丹雁教授鉴定为百合科植物玉竹 Polygonatumod-
oratum(Mil.)Druce的干燥根茎;DPPH(美国 Flu-
ka公司 ,含量 85%);D-半乳糖购自上海试剂厂(批
号:F20061025);SOD、MDA、考马斯亮蓝蛋白试剂盒
均购自南京建成(批号分别为:20070908、20070912
·729·中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 5期 2008年 5月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2008.05.038
和 20070914)。
1.2 　方法
1.2.1　药材的处理及试剂配制:2 kg玉竹烘箱烘
干 ,磨成约 40目粗粉。蒸馏水作为提取溶剂 ,玉竹
质量与提取溶剂体积之比为 1∶10, 100℃提取 3 h,
减压抽滤后 ,滤渣继续按上述条件回流提取 2次 。
合并滤液 ,浓缩至 1 ml相当于原药材 1 g。
DPPH储备液配制:精密称取 DPPH3.98 mg用
50%乙醇定容至 50 ml,充分振摇 ,完全混匀 ,配成
0.2 mol/ml储备液 ,避光 4℃保存 ,用时稀释一倍 。
1.2.2　体外抗氧化:DPPH法:测试时分别以 50%
乙醇将维生素 C、芦丁 、玉竹水提液定容至相应浓
度 。按文献 〔2〕方法略加改进 ,分别在 517 nm处测定
不同浓度样品 2 ml加 2 mlDPPH的吸收光度 Ai,不
同浓度样品 2 ml加 2 ml50%乙醇的吸收光度 Aj,
50%乙醇 2ml加 2 mlDPPH的吸收光度 A0。实验
平行 3次 ,样品及对照品分别测 8个浓度 ,以 50%
乙醇作为空白 。样品对 DPPH自由基的清除能力
(SA)可表示公式为:
SA(%) =1-(Ai-Aj)/A0 ×100 %
总还原能力测定法〔3〕:分别以 50%乙醇将维生
素 C、芦丁 、玉竹水提液定容至相应浓度 。根据文
献 〔3〕方法略加改动 ,分别取不同浓度的样品 1 ml加
磷酸盐缓冲液(0.2 mol/L, pH6.6)2.5 ml和 10
mg/mlK3Fe(CN)6 2.5 ml充分混匀后 50℃水浴 20
min后加入 100 mg/mlTCA2.5 ml, 2500 r/min离心
10 min,取上清液 2.5 ml加蒸馏水 2.5 ml稀释后加
1 mg/mlFeCl3旋涡混匀仪混合 ,于 700 nm处测吸
光度。实验平行 3次 ,样品及对照品分别测 6个浓
度 ,吸光度越大表明总还原能力越强 。
1.2.3　体内抗氧化:动物造模与给药:除正常对
照组外其余 4组小鼠均按 125 mg/kg· d皮下注射
D-半乳糖造模 ,正常对照组皮下注射等体积生理盐
水 ,造模同时给药治疗 ,玉竹水提液低 、中 、高剂量组
分别按相当于生药材 15、30、60 g/kg· d灌胃给药 ,
正常对照和衰老模型组给予等体积蒸馏水 ,连续 56
d。
样品的处理:小鼠摘眼球取血 ,抗凝剂抗凝后
2500 r/min离心 10 min,取上清液冰箱冷藏备用;动
物处死后迅速取出肝组织块用冰生理盐水洗涤除去
血液 ,滤纸试干 ,分别称取 0.2 ～ 0.3 g加入生理盐
水(生理盐水的体积总量是组织块重量的 9倍),制
成 10%的肝组织匀浆 , 3000 r/min离心 10 min,取上
清液置冰箱内冷藏备用。用时稀释。
主要检测指标:血浆 SOD活力及肝匀浆中蛋白
含量 、MDA含量均依据试剂盒所附方法 、步骤进行
测定并计算结果。
1.2.7　统计学处理:数据使用 SPSS11.5软件进行
统计分析 ,结果以 x±s表示 ,组间比较采用 t检验 。
2　结果
2.1　玉竹水提液体外对 DPPH自由基清除及总还
原能力的影响　玉竹水提液具有体外清除 DPPH自
由基和总还原能力 ,随浓度增加而增强 ,且与维生素
C和芦丁相比无显著差异(P>0.05)。结果见图 1、
2。
图 1　玉竹水提液体外抑制 DPPH自由基示意图
图 2　玉竹水提液体外总还原能力示意图
2.2　小鼠血浆 SOD活性及小鼠肝组织中 MDA含
量比较　玉竹水提液低剂量 ,可明显提高血浆 SOD
活性(P<0.01),同时可降低肝脏中 MDA含量(P<
0.01)。结果见表 1。
　表 1　　　　　总超氧化物歧化酶(T-SOD)
活力测定结果( x±s, n=14)
组别 剂量(g/kg) 抑制率(%) SOD活力(U/ml) MDA含量(nmol/mg· prot)
正常对照组 - 39.39±3.91 52.79±5.24 1.56±0.50
衰老模型组 - 35.16±4.66＊＊ 47.12±6.25＊＊ 1.96±0.35＊
水提低剂量组 15 42.88±6.50## 57.46±8.72## 1.27±0.51##
水提中剂量组 30 37.71±7.04 50.53±9.43 1.75±0.51
水提高剂量组 45 34.48±7.21 46.21±9.66 1.73±0.50
　　注:与正常对照组比较 , ＊ P<0.05, ＊＊ P<0.01;与衰老模型组
比较 , ##P<0.01
3　讨论
DPPH法和总还原能力法是考察药物是否具有
体外抗氧化能力的重要方法之一 ,两者具有准确 、灵
敏 、操作简便且价格便宜等特点 ,为国内外广泛应
用〔2, 3〕。应用大剂量 D-半乳糖所致的亚急性衰老模
型是目前最为常用的制备衰老动物模型的方法。超
氧化物歧化酶(SOD)是机体内清除自由基的重要抗
氧化酶之一 ,而丙二醛(MDA)则是脂质过氧化物的
主要代谢产物 ,两项指标从一个侧面反映了药物在
体内的抗氧化活性 〔4〕。
众所周知 ,维生素 C和芦丁是较强的抗氧化
剂。实验结果表明 ,玉竹水提液与维生素 C和芦丁
·730· 中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 5期 2008年 5月
有着相似的体外抗氧化能力 ,能力随浓度增加而增
强 。提示玉竹水提液具有较好的体外抗氧化能力 。
同时 ,连续灌服玉竹水提液 56 d,可有效提高小鼠血
浆 SOD活力 ,降低肝脏中 MDA含量 ,且低剂量组较
为明显(P<0.01),其他剂量组也有改善但不明显 。
提示玉竹具有作用于氧化相关酶 、清除脂质过氧化
物及其代谢废物的作用 ,进而可以起到延缓衰老的
目的。但本实验未发现其作用有明显的量效关系 ,
可能小剂量效果不明显 ,原因有待进一步研究 。
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(2007 -11-06收稿)
仙茅 、淫羊藿颗粒剂对乳腺癌 MCF-7细胞增殖的影响
郭海萍 1 ,刘晓雁 2 ,刘鹏熙2 ,陈秀议 1 ,韦熹雯 1
(1.广州医学院 ,广东广州 510182;2.广州中医药大学第二临床医学院 ,广东广州 510120)
　　摘要　目的:探讨仙茅 、淫羊藿是否有促人乳腺癌 MCF-7细胞增殖的作用。 方法:设立空白 、E2及 TAM对照
组 , 观察二仙汤中两味君药仙茅 、淫羊藿颗粒剂在不同剂量和作用时间下对 MCF-7细胞的生长的影响。应用 MTT
法观察细胞增殖情况。结果:仙茅 、淫羊藿对乳腺癌 MCF-7细胞生长的影响因浓度的不同而不同 ,不同浓度的仙茅
颗粒剂对乳腺癌细胞 MCF-7的促增殖作用均不明显(P>0.05),而中等剂量的淫羊藿颗粒有弱雌激素样作用(P<
0.05)。结论:仙茅颗粒剂应用于乳腺癌患者基本上是安全的 , 但淫羊藿颗粒剂单独应用于 ER(+)乳腺癌患者需
谨慎 , 其正确的使用方法包括使用剂量及持续时间等尚需进一步研究。
关键词　乳腺癌;仙茅;淫羊藿;MCF-7细胞
中图分类号　R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2008)05-0731-03
基金项目:广州市高校科技 、社科一般项目(61046)作者简介:郭海萍(1971-),女,讲师 ,主要研究方向为免疫调节;E-mail:guo hp@126.com。
　　仙茅 、淫羊藿是治疗围绝经期综合征的常用中
药 ,临床上应用于乳腺癌化疗性闭经的患者 ,可以明
显改善患者潮热 、出汗 、烦躁等绝经期症状 ,使患者
恢复正常月经周期的可能性同时增加 。基于二者对
卵巢功能低下的作用机制尚未明了 ,是否具有植物
雌激素样作用 ,应用于乳腺癌等激素敏感性肿瘤患
者是否会提高癌发生或促使癌转移尚未有明确结
论 。故本研究通过仙茅 、淫羊藿作用于 ER(+)人
乳腺癌 MCF-7细胞 ,了解其对乳腺癌细胞增殖的作
用 ,以判断其应用于乳腺癌患者的安全性 。
1 　材料与方法
1.1 　细胞　雌激素受体(ER)阳性人乳腺癌细胞
MCF-7购自中山大学动物实验中心。
1.2 　试剂及仪器　小牛血清(成都哈里公司);胰
蛋白酶 (Difco,上海生物工程公司);雌二醇 (17β-
E2 ,美国 Sigma公司);枸橼酸他莫昔芬(TAM,美国
Sigma公司);仙茅颗粒剂(批号:0609138)、淫羊藿
颗粒剂(批号:0606150),江阴天江药业有限公司。
ELITE.ESP型 流 式 细 胞 仪 (美 国 BECK-
MAN.COUTER公司);OlympusPM-6倒置显微镜
(日本 OLYMPUS公司);ELX800酶联免疫检测仪
(美国 Bio-Tek公司)。
1.3　细胞培养　细胞采用开放式单层贴壁培养 ,
培养液为 RPMI-1640(含 10%小牛血清 ,青霉素 100
U/ml,链霉素 100 μg/ml), 培养条件为 37℃、 5%
CO2相对饱和湿度。每日观察生长情况 ,贴壁 2 ～ 5
d传代一次 。传代时用 0.25%胰酶消化后 ,加入培
养液吹打制成细胞悬液 ,继续传代 ,并取对数生长期
细胞进行实验 。实验开始前 4 d将细胞用 PBS洗涤
后改为在无酚红 RPMI-1640中培养以耗尽细胞内
·731·中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 5期 2008年 5月