全 文 ：基于 GSS序列的猴面花miRNA生物信息学研究
李崇奇 1，2，3 周 鹏 2，3 蔡望伟 1 *
（1海南医学院生物化学与分子生物学教研室，海南海口 571199； 2中国热带农业科学院热带生物技术研究所 分析测试中心； 3海南大学农学院）
摘要 应用 miRtour 在线分析工具对猴面花 GSS 序列进行分析，预测猴面花的 miRNA 序列，应用 psrobot 预测 miRNA 的靶基因。结果
发现 50条不同的猴面花 miRNA 成熟序列，尿嘧啶在 miRNA 5′端第 1 碱基出现频率最高，有 64条编码序列受到猴面花 miRNA 的调控。靶
基因中有 15个编码转录因子，有 21 个编码酶。
关键词 猴面花；miRNA；生物信息学；GSS 序列
中图分类号 Q74 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2014）11-0345-03
Bioinformatics Study on miRNA in Mimulus gutatus Based on GSS Sequences
LI Chong-qi 1，2，3 ZHOU Peng 2，3 CAI Wang-wei 1*
（1 Department of Biochemistry and Molecular Biology，Hainan Medical College，Haikou Hainan 571199； 2 Institute of Tropical Bioscience and
Biotechnology/Analysis & Testing Center，Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences； 3 College of Agronomy，Hainan University）
Abstract Mimulus gutatus miRNA was predicted based on GSS Sequences by miRtour，whereas miRNA-targeted mRNAs were predicted by
psrobot. 50 unique mature miRNA sequences were found in which the uracil nucleotide is dominant in the first position of 5 ′mature miRNAs. 64
mRNAs were regulated by miRNA in which 15 targets was transcription factors，21 targets was enzymes.
Key words Mimulus gutatus；miRNA；bioinformatics；GSS sequence
miRNA是一类长度为 19~24 bp 的内源性小 RNA分子，
其主要通过与靶基因结合后在转录后水平进行基因表达调
控。由中介子（Mediator）将 RNA 聚合酶Ⅱ招募到 miRNA 基
因的启动子后转录 miRNA 初级转录产物（primary miRNA，
pri-miRNA）[1]，然后经历与 mRNA 相同的加帽、加尾和拼接
过程后，形成独特的茎环结构[2]，植物中再在 DCL蛋白的作用
下加工为 miRNA 前体序列（precursor-miRNA，pre-miRNA）。
miRNA 前体序列再经过一些列复杂过程加工为成熟的
miRNA 序列后，与 Argonaute 蛋白结合形成 RISC 复合体后
与靶基因结合在转录后水平发挥调控作用。由于 miRNA 参
与了植物器官的发育、代谢的调节和抗逆反应等一系列复
杂生物学过程 [3]，因而近年来 miRNA 被广泛应用于植物的
遗传品质改良工作。
而猴面花（Mimulus gutatus）为玄参科沟酸浆属草本植物，
原产于北美西部，现在世界范围内被广泛栽培。猴面花可用
于公园、小区的花坛、花台、花境栽培观赏，也是庭院及居室栽
培的优良材料 [4]。此外猴面花还是被广泛应用于生态和进化
遗传学研究领域的模式生物 [5]。本研究拟应用 miRtour 在线
分析工具（http：//bio2server.bioinfo. uni-plovdiv.bg/miRTour/）[6]
对猴面花的 GSS 序列进行分析，识别其 miRNA 基因和靶基
因，为进一步开展猴面花遗传品质改良工作和探讨猴面花
独特的生态特点奠定理论基础。
1 材料与方法
1.1 试验材料
从美国国家生物技术信息中心（National Center for Biote-
chnology Information，NCBI）的网站 （www.ncbi.nlm.nih.gov）的
GSS 数据库中下载 134 919 条猴面花序列，另外分别从 rfam
网站（http：//rfam.sanger.ac.uk/）和 pfam网站（http：//pfam.sanger.
ac.uk/）下载非编码 RNA数据库和蛋白质数据库。
1.2 研究方法
将猴面花 GSS序列分批递交到 miRtour网站上传后参数
设置如下：与已知 miRNA序列能够比对的最小数量（Minimum
number of known miRNAs to be aligned）设置为 1，miRNA序列
与其互补序列的不配对数（Maximum unpaired nt in miR/miR*）
设置为 6，其他参数默认 。下载分析结果可以得到相应的
miRNA序列、前体序列以及前体序列的最小自由能、最小自
由能指数等相关参数 。然后应用 Blast-2.2.27+软件中的
blastn 程序将预测到的 miRNA前体序列与 rfam 数据库进行
比对，应用 blastx 程序与 pfam 数据库进行比对，将 evalue 参
数设置为 1e-6，去除非 miRNA 序列，即可得到 miRNA 前体
序列和相应的 miRNA 序列。将预测到的成熟猴面花 miRNA
序列以 fasta格式上传到 psrobot网站（http：//omicslab.genetics.
ac.cn/psRobot/index.php）[7]进行靶基因预测，参数选择严格模
式，同时将分值（score）设置为 2.5。应用 bioedit 统计 miRNA
及其前体的序列长度，然后统计 miRNA 序列每个位点的碱
基组成，对其碱基偏倚进行分析。
2 结果与分析
2.1 miRNA预测
134 919 条猴面花 GSS 序列经过 miRtour 分析后共发现
72 条具有茎环结构的序列，与 rfam 和 pfam 数据库比对后
发现 2 条蛋白质序列，去除重复预测 miRNA 序列后，共预
测到 50 条不同的猴面花 miRNA 成熟序列（表 1）。这 50 条
猴面花 miRNA 序列隶属于 35 个不同的 miRNA 家族，其中
成员最多的为 miR2607 家族，有 6 个成员。所有前体序列的
最小自由能都为负值 ，最高的为 mgu-miR1534，其自由能
为-32.64 kJ/mol。前体序列的最小自由能指数为 0.70～1.13，
GC含量为 12.22%～72.51%。
2.2 miRNA和前体的碱基组成特征
猴面花 miRNA 长度为 18～23 nt，其中 35 个 miRNA 长
基金项目 海南省研究生创新科研课题（Hyb2012-2）；海南医学院科
研培育基金（HY2013-18）。
作者简介 李崇奇（1979-），男，山西临汾人，在读博士，讲师。研究方
向：分子生物学。
* 通讯作者
收稿日期 2014-05-05
农村经济学现代农业科技 2014 年第 11 期
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农村经济学 现代农业科技 2014年第 11期
度为 21 nt。miRNA 序列中嘌呤与嘧啶的比值为 1.00∶0.97，
其详细碱基组成 A∶G∶C∶U 为 1.00∶0.89∶0.67∶1.17，胞嘧啶比例
明显偏低。同时发现在 miRNA 5′端第 1~2 碱基尿嘧啶的出
现频率都最高，分别为 42%和 60%。而腺嘌呤则在第 15 碱
基、鸟嘌呤在第 12 和第 14 碱基、胞嘧啶在第 4 和第 20 碱
基出现频率最高。miRNA 前体长度为 90～223 nt，平均长度
为 179 nt，嘌呤与嘧啶的比值为 1.00∶0.99，碱基组成 A∶G∶C∶U
为 1.00∶0.66∶0.51∶1.13，鸟嘌呤和胞嘧啶比例偏低。
2.3 miRNA 靶基因预测
50个猴面花 miRNA中有 25个预测到了靶基因，靶基因
数目最多的为 mgu-miR156，发现有 10 条编码序列受其调
控（表 2）。同时发现共 64 条编码序列受到猴面花 miRNA
的调控，大部分基因都受单一 miRNA的调控。但发现编码胡
萝卜素顺反异构酶的 mgv1a008474m序列受 mgu-miR2607a
和 mgu-miR2607b调控；编码 PHO2蛋白的 mgv1a001292m同
时受 mgu-miR399a 和 mgu-miR399b 调控，而且发现 mgu-
miR399b 与 mgv1a001292m 有 3 个结合位点分别为 637～
657、700～720、757～777 nt。靶基因中有 15 个编码转录因子，
主要有 SPL转录因子、AP2蛋白、核因子、bHLH DNA 结合蛋
白和锌指蛋白等；此外还有 21条靶基因序列编码酶。
3 结论与讨论
GSS 序列，又称基因组勘测序列是基因组 DNA 克隆的
一次性部分测序序列，包括随机的基因组勘测序列、cosmid/
BAC/YAC 末端序列、通过 Exon trapped 获得的基因组序列、
通过 Alu PCR 获得的序列以及转座子标记 （ transposon-
tagged）序列等 [8]，也被广泛地应用于植物 miRNA 的预测分
序号 miRNA miRNA 序列 ML PL MFE MFEI GC∥%
1 mgu-miR2676 AAATTATTTGGATAATAAGTT 21 171 -30.50 0.85 21.05
2 mgu-miR1444 GTACAATTACGGTCAACGTT 20 170 -49.10 0.89 32.35
3 mgu-miR1511a GGCCTGGCTCTGATACCATG 20 200 -68.23 0.80 38.64
4 mgu-miR1511b TGGCCTGGCTCTGATACCAT 20 170 -51.45 0.75 40.59
5 mgu-miR1534 CATTTTTGGGTAAATAATAA 20 90 -7.80 0.71 12.22
6 mgu-miR156 TTGACAGAAGATAGAGAGCA 20 170 -58.10 0.88 38.82
7 mgu-miR159 TTTGGATTGAAGTGAGGAATT 21 171 -46.00 0.71 38.01
8 mgu-miR160a CTCCTGGCTCCCTGTTGGCC 20 170 -50.10 0.71 41.76
9 mgu-miR160b TGGCTTGGCTCCCTGAATGCA 21 115 -53.30 0.74 62.61
10 mgu-miR166 GTCGGACCAGGCTTCATTCCC 21 221 -65.30 0.73 40.72
11 mgu-miR169a AAGCAGTCTCCTTGGCGG 18 168 -79.20 0.74 63.69
12 mgu-miR169b CAGCCAAGGATGACTTGCCGA 21 171 -60.10 0.88 39.77
13 mgu-miR171a CAGATTGAGCCGCGCCAATAT 21 171 -49.93 0.76 38.60
14 mgu-miR171b TTGATTGAGCCGTGCCAATAT 21 171 -53.90 0.88 35.67
15 mgu-miR172a ATGAGAATCTTGATGATGCTGCA 23 173 -64.11 0.90 41.04
16 mgu-miR172b TGTGAATCTTGATGATGCTCCAC 23 173 -56.71 0.77 42.77
17 mgu-miR1846 GTCAGGCCTTTCTCCTCGCCG 21 171 -99.20 0.80 72.51
18 mgu-miR1862 ATGAAATGGGTTTATTTTGG 20 220 -49.00 0.88 25.45
19 mgu-miR2607a AATGTGATTATGTGAATTATG 21 221 -45.00 0.73 28.05
20 mgu-miR2607b ATGTGATTATGTGAATTATGT 21 221 -43.40 0.85 23.08
21 mgu-miR2607c GTGTGATTATGTGAAATATGT 21 160 -39.36 0.86 28.75
22 mgu-miR2607d TATGTGATTATGTGAAATATA 21 139 -35.10 1.13 22.30
23 mgu-miR2607e TATGTGATTATGTGAATTATG 21 171 -35.80 0.90 23.39
24 mgu-miR2607f TGTGTGATTATGTGAAATATG 21 171 -34.70 0.77 26.32
25 mgu-miR2635 TATTATTGTCAACTACACTA 20 170 -37.02 0.93 23.53
26 mgu-miR2643 TTTTGGGATCAGAAATGGTGG 21 221 -47.82 0.80 27.15
27 mgu-miR3629 GTTTGGTCAGAAAATGTAGGA 21 221 -53.40 0.73 33.03
28 mgu-miR390 AAGCTCAGGAGGTATAGCGCC 21 171 -93.80 1.00 54.97
29 mgu-miR394 TTTGGCATTCTGTCCACCTC 20 170 -52.60 0.91 34.12
30 mgu-miR395a AATGAAGTGTTTGGGGGAACT 21 171 -58.70 0.93 36.84
31 mgu-miR395b GTTCCCCCAAACACTTCATTG 21 171 -43.20 0.82 30.99
32 mgu-miR396 GTTTCACCATTTTCTTGAACT 21 171 -48.60 0.76 37.43
33 mgu-miR398 CTGTGTTCTCAGGCATCCCAT 21 91 -35.20 0.70 54.95
34 mgu-miR399a CTGCCAAAGGAGAATTGCCCT 21 171 -61.10 0.85 42.11
35 mgu-miR399b CTGCCAAGGGAGATTTGCCCC 21 171 -61.52 0.88 40.94
36 mgu-miR399c TGCCAGAGGAGAACTACGCTG 21 171 -59.50 0.84 41.52
37 mgu-miR403a GTTAGATTCACGCGCAAATCC 21 171 -49.10 0.83 34.50
38 mgu-miR403b TTAGATTCACGCACAAACTCG 21 171 -54.00 0.82 38.60
39 mgu-miR403c TTGTATAAACGCACAAACTTG 21 221 -56.86 0.75 34.39
40 mgu-miR4248 ACATTTTATTTTCGGCTACTA 21 171 -39.40 0.79 29.24
41 mgu-miR437 TTAAGCGAGTGAAGTTTGACT 21 171 -39.61 0.70 30.41
42 mgu-miR4376 TTACGCAGGAGAGACGACACAA 22 222 -60.80 0.87 31.53
43 mgu-miR476 TTAAAATTCTTCTTTGCAAAA 21 221 -38.20 0.71 24.43
44 mgu-miR5205 CATTTAAATTGGGACGGAGGGAG 23 223 -48.40 0.71 30.49
45 mgu-miR5241 GAACTGAATGGAAGAAAGCAT 21 221 -43.90 0.74 26.70
46 mgu-miR536 TTAATGCCAAGCTGTGTGAAAT 22 222 -62.73 0.79 35.59
47 mgu-miR779 ATTGTCTTAAGTTGCTGCTCA 21 171 -44.00 0.77 33.33
48 mgu-miR832 TTGCGGAGATCGGGAATCGAT 21 221 -68.60 0.70 44.34
49 mgu-miR845 CTTCTCTGATACCAATTGTTA 21 221 -58.20 0.77 34.39
50 mgu-miR846 TTGAATTGAAGTCGATGATTT 21 91 -9.30 0.72 14.29
注：ML 为 miRNA 长度；PL 为前体长度；MFE 为最小自由能；MFEI 为最小自由能指数。
表 1 预测的猴面花 miRNA 及其前体序列相关参数
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miRNA 靶基因 注释 miRNA 靶基因 注释
mgu-miR2607a mgv1a008474m 胡萝卜素顺反异构酶 mgu-miR169b mgv1a013110m 核因子
mgu-miR2607b mgv1a008474m 胡萝卜素顺反异构酶 mgu-miR159 mgv1a013635m 核苷二磷酸糖转移酶
mgu-miR394 mgv1a001073m ATP 酶家族蛋白 mgu-miR156 mgv1a005168m 果胶裂解酶
mgu-miR169a mgv1a005322m 锚蛋白 mgu-miR476 mgv1a000157m PHD finger 蛋白家族
mgu-miR395b mgv1a006222m ARM 蛋白 mgu-miR399a mgv1a001292m PHO2 蛋白
mgu-miR395a mgv1a005900m ATP 硫酸化酶 mgu-miR399b mgv1a001292m PHO2 蛋白
mgu-miR779 mgv1a012900m bHLH DNA 结合蛋白 mgu-miR399b mgv1a001292m PHO2 蛋白
mgu-miR169a mgv1a024092m 锌指蛋白 mgu-miR399b mgv1a001292m PHO2 蛋白
mgu-miR1862 mgv1a010139m 叶绿体干旱诱导蛋白 mgu-miR394 mgv1a020012m 磷脂酰基转移酶
mgu-miR2635 mgv1a024033m 染色质重塑蛋白 mgu-miR169a mgv1a005634m 核苷三磷酸水解酶
mgu-miR1534 mgv1a003076m 外被体 mgu-miR2635 mgv11b022019m 蛋白激酶
mgu-miR1862 mgv1a000356m CPL 蛋白 mgu-miR156 mgv1a021125m pumilio 蛋白
mgu-miR396 mgv1a002090m 甘油二脂激酶 mgu-miR156 mgv1a023271m pumilio 蛋白
mgu-miR2676 mgv1a004209m 歧化酶 mgu-miR169a mgv1a026112m AP2 蛋白
mgu-miR169a mgv1a000797m DNA 结合蛋白 mgu-miR169a mgv1a025246m AP2 蛋白
mgu-miR169a mgv1a022024m ERD 蛋白 mgu-miR172a mgv1a008461m AP2 蛋白
mgu-miR396 mgv1a001431m EXS 蛋白 mgu-miR172a mgv1a021246m AP2 蛋白
mgu-miR396 mgv1a002268m EXS 蛋白 mgu-miR390 mgv1a017817m Rhomboid 蛋白
mgu-miR2635 mgv1a003235m F-box 蛋白 mgu-miR156 mgv1a000042m 中介子
mgu-miR394 mgv1a005881m 半乳糖氧化酶 mgu-miR1511b mgv1a013439m RNA 结合蛋白
mgu-miR1862 mgv1a006559m 配子体因子 mgu-miR159 mgv1a004160m 分选连接蛋白
mgu-miR1862 mgv1a012884m 配子体因子 mgu-miR156 mgv1a020120m SPL 转录因子家族
mgu-miR160b mgv1a001132m 谷氨酸受体 mgu-miR156 mgv1a020728m SPL 转录因子家族
mgu-miR160b mgv1a025842m 谷氨酸受体 mgu-miR156 mgv1a005903m SPL 转录因子家族
mgu-miR159 mgv1a022280m 钾离子通道蛋白 mgu-miR156 mgv1a015969m SPL 转录因子家族
mgu-miR166 mgv1a001309m HD-ZIPIII 转录因子 mgu-miR156 mgv1a009499m SPL 转录因子家族
mgu-miR166 mgv1a001344m HD-ZIPIII 转录因子 mgu-miR169a mgv1a000831m 端粒酶激活蛋白
mgu-miR166 mgv1a001350m HD-ZIPIII 转录因子 mgu-miR2676 mgv1a010065m TPR 家族蛋白
mgu-miR396 mgv1a004585m 核仁蛋白 mgu-miR2643 mgv1a002828m TPR 家族蛋白
mgu-miR396 mgv1a004604m 核仁蛋白 mgu-miR437 mgv1a013037m 硫酯酶
mgu-miR396 mgv1a008733m DNA 整合酶 mgu-miR1534 mgv1a000046m TRAF 蛋白
mgu-miR1534 mgv1a001247m 脂加氧酶 mgu-miR396 mgv1a006277m UDP 糖基转移酶
mgu-miR396 mgv1a000100m LDL 蛋白 mgu-miR2643 mgv1a005924m 脲基乙醇酸酰胺水解酶
mgu-miR156 mgv1a003582m NCED 蛋白 mgu-miR1862 mgv1a012150m 脲基乙醇酸水解酶
表 2 猴面花 miRNA靶基因
析。应用 GSS序列识别植物 miRNA 的数量与其 GSS 序列数
量密切相关，Zhang 等 [9]在棉花中发现 30 条 miRNA 序列，
Xie 等 [10]在欧洲油菜（Brassica napus）8 条 miRNA 序列，罗晓
燕等[8]在核果类作物中发现 9条 miRNA 序列，杜江峰等 [11]在
高粱中发现 17 条，而李 婧等 [12]在玉米中仅发现 3 条 。但
Wang 等 [13]对甘蓝（Brassica oleracea）的 680 894 条 GSS 序列
研究中发现 152个 miRNA。而本研究中对猴面花 134 919条
GSS 序列研究中共发现 50 个 miRNA，其识别效率与其他
基于 GSS 的研究相差不大。同时在本研究中发现 miRNA 5′
端第 1 碱基尿嘧啶的出现频率明显高于其他碱基，这与在
拟南芥和水稻的研究一致 [14]，目前认为 miRNA5′端碱基对于
其与选择不同 Argonaute 蛋白结合形成 RISC 复合物是至关
重要的[15]。然而整体来讲，本研究中识别的猴面花 miRNA 数
量与其真实的 miRNA 基因数量还有很大的差距 ，Bartel
等 [16]认为每个物种的 miRNA 数量应该达到其基因数量的
1%，而事实上 mirbase 数据库中有些植物的 miRNA 数量已
经达到 700 余条。因而猴面花的 miRNA 研究在未来还有待
于基于全基因组范围内的生物信息学分析或通过小 RNA
测序等相关实验技术进行识别。
猴面花在北美西海岸地区为夏末季节开花的多年生植
物，而距据此不远的内陆地区却为春季开花的一年生植物，
研究表明这主要是由于猴面花对干旱的内陆地区和潮湿高
盐的沿海地区适应的结果 [17]。Jorgensen 等 [18]认为 SPL 转录因
子家族可能通过调控开花时间基因的表达决定物种是多年
生植物还是一年生植物，同时近来在植物中发现 miRNA156
家族通过调控 SPL 转录因子家族决定植物发育时相的转
变。而在本研究中也发现 miRNA156 的靶基因为 SPL 转录
因子，同时还发现 mgu-miR1862 的靶基因为叶绿体干旱诱
导蛋白，但这 2 个 miRNA 是否与决定猴面花为多年生植物
还是一年生植物直接相关还有待于进一步研究。
4 参考文献
[1] KIM Y J，ZHENG B，YU Y，et al.The role of Mediator in small and long
noncoding RNA production in Arabidopsis thaliana[J].The EMBO Journal，
2011，30（5）：814-822.
[2] WU G.Plant microRNAs and development [J] .Journal of Genetics and
Genomics，2013，40（5）：217-230.
[3] YANG T W，XUE L G，AN L Z.Functional diversity of miRNA in plants[J].
Plant Science，2007，172（3）：423-432.
[4] 徐晔春.花色绚丽的猴面花[J].花木盆景：花卉园艺，2008（8）：2-3.
[5] WU C A，LOWRY D B，COOLEY A M，et al.Mimulus is an emerging
model system for the integration of ecological and genomic studies [J].
Heredity，2008，100（2）：220-230.
[6] MILEV I，YAHUBYAN G，MINKOV I，et al.miRTour：Plant miRNA and
target prediction tool[J].Bioinformation，2011，6（6）：248-249.
[7] WU H J，MA Y K，CHEN T，et al.PsRobot：a web-based plant small RNA
meta-analysis toolbox[J].Nucleic Acids Research，2012（W1）：22-28.
[8] 罗晓燕，侍婷，蔡斌，等.核果类果树中 microRNAs 的生物信息学预测
及验证[J].林业科学，2012，48（2）：75-81.
[9] ZHANG B，WANG Q，WANG K，et al.Identification of cotton microRNAs
and their targets[J].Gene，2007，397（1-2）：26-37.
[10] XIE F L，HUANG S Q，GUO K，et al.Computational identification of
novel microRNAs and targets in Brassica napus[J].FEBS Lett，2007，581
（7）：1464-1474.
[11] 杜江峰，武永军，方晓峰，等.生物信息方法预测高粱 miRNA 及其靶
基因[J].中国科学，2010，55（7）：553-561.
[12] 李婧，熊莉丽，胡久梅，等.基于 EST 和 GSS 序列的玉米未知微 RNA
（下转第 351页）
李崇奇等：基于 GSS序列的猴面花 miRNA 生物信息学研究
347
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
（上接第 347页）
的数据挖掘[J].生物技术通报，2011（12）：108-112.
[13] WANG J，YANG X，XU H，et al.Identification and characterization of
microRNAs and their target genes in Brassica oleracea [J] .Gene ，
2012，505（2）：300-308.
[14] ZHANG B，PAN X，CANNON C，et al.Conservation and divergence of
plant microRNA genes[J].Plant J，2006，46（2）：243-259.
[15] THIEME C J，SCHUDOMA C，MAY P，et al.Give It AGO：The Search
for miRNA-Argonaute Sorting Signals in Arabidopsis thaliana Indicates
a Relevance of Sequence Positions Other than the 5′-Position Alone[J].
Front Plant Sci，2012（3）：272.
[16] BARTEL D P.MicroRNAs：Genomics，biogenesis，mechanism，and fun-
ction[J].Cell，2004，116（2）：281-297.
[17] LOWRY D B，ROCKWOOD R C，WILLIS J H.Ecological reproductive
isolation of coast and inland races of Mimulus guttatus [J].Evolution，
2008，62（9）：2196-2214.
[18] JORGENSEN S A ，PRESTON J C.Differential SPL gene expression
patterns reveal candidate genes underlying flowering time and architec-
tural differences in Mimulus and Arabidopsis[J].Mol Phylogenet Evol，
2014（73）：129-139.
（上接第 349页）
的产业化发展模式，在公司（合作社或大户）、基地、农户之
间建立利益联接机制，发挥农民专业合作社的辐射带动作用，
加速土地有效流转，增加土地经营效益，提高农民收入水平。
4.4 完善土地流转服务系统，进行流转服务和管理
一是建立农村产权交易服务中心。利用农村产权交易
服务中心，及时向广大农户宣传土地流转有关法律政策与
信息，指导农民签订土地流转合同，帮助解决土地流转纠
纷，为农户提供各种产权交易服务。二是建立土地流转信息
服务站。以便可以及时获取当地的土地流转信息，了解农户
的土地流转意愿情况。三是完善土地流转规程。完善土地流
转程序，强化土地流转资质审核。四是建立农村土地流转问
题治理机制。各农业相关部门要加强合作，严格查处非法流
转土地和侵害农民土地承包权益的行为[13-16]。
5 参考文献
[1] 高锁扬，王随民，孙兆军.宝鸡农村土地流转的现状与对策[J].农村工
作通讯，2011（22）：30-31.
[2] 冯建生 .京津廊一体化视野下的农村土地承包经营权流转研究[C]//
廊坊：2009 中国·廊坊基于区域经济发展的京津廊一体化研究——
廊坊市域经济发展与京津廊经济一体化学术会议论文集，2009.
[3] 刘蓉.论壤塘县农村土地承包经营与管理[J].经营管理者，2012（22）：
261-262.
[4] 冷明智.农村土地流转问题研究[D].长沙：湖南农业大学，2011.
[5] 程晓可 ，郭璐 ，郝静 ，等 .河南省农村土地流转现状分析与对策研
究[J].中州大学学报，2010（2）：15-18.
[6] 周再华.益阳农地流转的调查与思考[N].中国县域经济报，2009-03-
19（5）.
[7] 马卉.土地流转中农民权益面临的问题以及对策研究[J].湖南农机，
2013（5）：168-170.
[8] 张敏.农村土地承包经营权流转的法律问题分析[J].农业经济，2011
（10）：31-33.
[9] 姜焕玲.浅谈农村土地承包经营权流转的原因、现状、问题和对策[J].
现代农业，2008（8）：48-49.
[10] 陈永福，张继恒.城乡一体化进程中农村土地承包经营权流转的市
场运行机理及保障途径[J].甘肃理论学刊，2011（6）：115-117.
[11] 蔡颖 .廊坊市农村土地承包经营权流转的现状 [J].河北农业 ，2009
（12）：39-40.
[12] 孙苏梅，郭华，薛庄，等.加快建设新农村步伐 促进土地流转 发展规
模经营——关于农村土地承包经营权流转问题的调查 [J].河南农
业，2008（23）：9-10.
[13] 柏素敏 .论完善农村土地承包经营流转制度的对策措施 [J].河北师
范大学学报：哲学社会科学版，2011（3）：56-60.
[14] 伍雯 .浅析农村土地承包经营权流转对社会主义新农村建设的意
义[J].中外企业家，2009（8）：45-46.
[15] 刘会宇，汪勇，杜仲霞.论我国农村土地承包经营制度的完善[J].陕
西农业科学，2008（1）：173-175.
[16] 黄建水，李丹.农村土地承包经营权流转问题研究[J].商丘师范学院
学报，2010（5）：83-86.
的制种款无法兑付，必将影响农村社会稳定大局，导致执法
尴尬的局面。
3 对策
3.1 落实基层政府属地管理责任
落实县、乡、村三级组织的属地管理责任，将无证生产
管理列入重点工作考核项目。对因领导不重视，责任落实不
到位，推诿扯皮，玩忽职守，工作措施不力的单位和个人，要
严肃追究领导责任和相关人的责任。特别是要加大对乡村
两级干部的思想教育和管理，对主动联系或默许无证生产
单位和个人落实制种面积，甚至参与违法生产行为的要予
以严厉查处。
3.2 加强执法队伍建设，提升执法水平
从事种子执法工作，既要掌握相关的法律法规，又要熟
悉种子相关专业知识，同时要有高度的社会责任感和处理
复杂问题的工作能力 [4-5]。因此，必须加强种子执法人员配
备，保证执法力量，同时要加强种子执法人员的培养，强化
业务培训和实践锻炼，使其既具备种业相关知识又具备法
律相关知识，培养和打造一支专业熟练、作风硬朗、坚持原
则，能够驾驭复杂局面的种子执法队伍。
3.3 加强农民培训，转变思想观念
利用农村劳动力技能培训工程 、阳光工程、科技之冬
春等培训活动的开展，认真宣传中央和省、市、县各级扶持
农业发展的优惠政策 ，采取 “农民点菜 ，专家下厨 ”的方
法，向农民传授农业科技知识，引导农民发展适合当地且
收益较高的特色产业，从而逐步克服对玉米制种过度依赖
的思想。
3.4 加强联合执法，严厉打击无证生产行为
农业、公安、工商等部门要建立联合执法长效机制，尤
其在落实制种基地前要加强协调配合，逐乡、逐村进行摸排，
把无证生产杜绝在播种前 [6-7]。同时，要设立举报奖励制度，
动员全社会积极举报无证生产行为，对举报的情况经查实
给予奖励，形成“过街老鼠人人喊打”的氛围，给无证生产形
成压力，让无证生产这只“过街老鼠”没有藏身之处。
4 参考文献
[1] 王君波 .当前种子纠纷频发的原因及化解对策 [J].种子世界 ，2013
（11）：15-16.
[2] 王斌.张掖市玉米制种业的现状及发展对策[J].中国种业，2012（4）：
29-30.
[3] 杨贵彪 .严厉打击无证非法生产玉米种子行为 [N].张掖日报，2010-
04-10（1）.
[4] 王明远，秦来寿，高宏 .2013 年甘肃省玉米制种生产形势分析与对
策[J].农业展望，2013（12）：46-48.
[5] 杨洁清 .景泰县种子市场管理存在的问题及对策 [J].农业科技与信
息，2014（2）：39-40.
[6] 张玉梅.对玉米制种产业的思考与探索[J].甘肃科技纵横，2006（1）：51.
[7] 赵建刚.对县级玉米种子市场管理的几点思考[J].种子科技，2012（9）：
17-18.
杨 勇等：张掖市无证生产玉米种子行为多发原因及对策
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