全 文 ：郭 丽，朱飞雪，贾文庆． 大岩桐高频再生体系的研究［J］． 江苏农业科学，2015，43(5):51 － 53，356．
doi:10． 15889 / j． issn． 1002 － 1302． 2015． 05． 015
大岩桐高频再生体系的研究
郭 丽1，朱飞雪1，贾文庆2
(1．河南农业职业学院，河南郑州 451450;2．河南科技学院，河南新乡 453003)
摘要:采用大岩桐叶片为试验材料，研究了不同培养基对大岩桐的愈伤组织诱导、分化、增殖以及生根培养的影
响。结果表明:大岩桐叶片在 MS + 6 － BA 2． 0 mg /L + NAA 0． 2 mg /L 培养基上的出愈率最高，为 93． 4%;在 MS +
6 － BA 1． 0 mg /L + NAA 0． 1 mg /L培养基上既生长愈伤组织又生长较少的不定芽，其芽的再生率最高，为 83． 3%;在
MS + 6 － BA 0． 5 mg /L + NAA 0． 1 mg /L培养基上很少或不形成愈伤组织，而直接形成不定芽。生根培养用 1 /2MS 培
养基较好，生根速度快，生根平均为 24． 3 条。
关键词:大岩桐;离体培养;高频再生体系
中图分类号:Q945． 52 文献标志码:A 文章编号:1002 － 1302(2015)05 － 0051 － 03
收稿日期:2014 － 06 － 20
基金项目:河南农业职业学院科研项目(编号:KY201 － 11)。
作者简介:郭 丽(1979—)，女，河南开封人，硕士，讲师，从事园林植
物研究。E － mail:guoli197979@ 163． com。
大岩桐(Sinningia speciosa)别称落雪泥、新宁治花、丝绒
花，属苦苣苔科苦苣苔属(也有学者认为属大岩桐属)，原产
南美巴西，为多年生草本花卉，株高 20 ～ 30 cm，叶长椭圆形，
密被白色绒毛，花顶生或腋生，花期长。1845 年苏格兰人
John Fif率先育出向上开花的大花型品种，引起了育种家的兴
趣，对它加以改良，就产生了现在这样丰富多彩和各种类型的
大岩桐品种［1］。其花大色泽艳丽，雍容华贵，性喜温湿，耐
阴，是不可多得的著名室内观赏花卉、案头花卉［2］。在欧洲
有 150 多年的栽培历史，但引入我国较晚，还没有形成规模生
产和销售，所以是具有很大开发前景的商品花卉。
大岩桐单瓣品种因花柱与花药不等高不能自花授粉，且
种子繁殖的后代不能保持原有的优良性状，复瓣品种因雌雄
蕊退化丧失结实能力，因而常应用组织培养技术对其进行快
速繁殖。大岩桐组织培养方面的最先报道是 Haramaki 采用
茎尖培养获得不定芽的研究［3］，Johson 用花和花梗培养完成
了试管繁殖［4］。国内关于大岩桐组织培养的研究较多［5 － 10］，
本研究着重探讨不同激素对愈伤组织、不定芽和生根方面的
影响，用大岩桐的叶片作为外植体，研究了叶片的诱导、增殖、
生根等获得完整植株的全过程，并探讨大岩桐快速繁殖所需
条件，为建立大岩桐快速繁殖体系和工厂化育苗提供一定技
术参数，为大岩桐遗传转化体系的建立及转基因育种提供一
定的参考。
1 材料与方法
1． 1 材料
大岩桐(Sinningia speciosa)由笔者所在实验室提供。
1． 2 方法
1． 2． 1 材料处理
取外植体，在自来水龙头下流水冲洗(因外植体叶片表
面有茸毛，冲洗时放少许洗衣粉)大岩桐幼叶 30 min，滤干水
分，然后置于超净工作台上，用 75%乙醇浸泡 10 s，然后用
0. 1%氯化汞溶液处理 7 ～ 8 min，最后用无菌水冲洗 5 ～ 6 次，
用无菌滤纸吸干表面水分，之后将叶片切成 1 cm × 1 cm的小
块并接种于培养基上。
1． 2． 2 培养条件
1． 2． 2． 1 诱导、分化培养基的设置 诱导、分化、增殖均以
MS为基本培养基，添加不同浓度的 6 － BA和 NAA，蔗糖用量
为 20 g /L［11］，琼脂为 7 g /L，pH值为 5． 8。培养基激素处理浓
度设置见表 1。
表 1 大岩桐的诱导、分化培养基激素处理浓度
培养基代号
激素处理浓度(mg /L)
6 － BA NAA
1 0． 5 0． 1
2 1． 0 0． 1
3 1． 0 0． 2
4 2． 0 0． 2
5 3． 0 0． 2
6 3． 0 0． 5
注:基本培养基均为 MS。
1． 2． 2． 2 生根培养基的设置 生根培养基的基本培养基及
激素处理浓度见表 2，其中蔗糖用量为 20 g /L［5］，琼脂为
7 g /L，pH值为 5． 8。
1． 2． 2． 3 接种数量与培养条件 每个处理接种 18 瓶，每瓶
接种 5 块外植体，培养温度为 24 ～ 26 ℃，光照度 1 500 ～
2 000 lx，光照时间为 16 h /d，30 d后统计形成愈伤组织、不定
芽的外植体数和每块外植体上形成的不定芽数。
1． 2． 2． 4 统计分析 方差分析均采用 LSD 法进行统计
分析。
2 结果与分析
2． 1 芽的诱导、分化及继代增殖
培养 10 d后发现，部分外植体开始弯曲、膨大增厚。培
养 20 d时愈伤组织及不定芽的诱导情况见表 3。
培养30 d后观察，诱导效果更明显(图1至图4)，在前
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表 2 大岩桐的生根培养基激素处理浓度
培养基代号 基本培养基
激素处理浓度(mg /L)
NAA 6 － BA
A 1 /2MS
B 1 /2MS 0． 1
C 1 /2MS 0． 2
D 1 /2MS 0． 5
E 1 /2MS 0． 5
F 1 /2MS 1． 0
G MS
H MS 0． 1
I MS 0． 2
J MS 0． 5
K MS 0． 5
L MS 1． 0
表 3 大岩桐在不同培养基上的诱导情况
培养基
代号
激素处理浓度
(mg /L)
6 － BA NAA
诱导情况
1 0． 5 0． 1 开始从叶片边缘分化少数不定芽，
几乎看不到愈伤组织
2 1． 0 0． 1 叶片膨大适中且愈伤组织颜色淡绿
3 1． 0 0． 2 叶片长得较慢，只在近叶轴处有小块愈伤组织
4 2． 0 0． 2 叶片膨大明显，从切口处形成愈伤组织
5 3． 0 0． 2 叶片膨大明显，从切口处形成愈伤组织
6 3． 0 0． 5 叶片稍膨大，大部分有愈伤组织形成
注:基本培养基均为 MS。
面基础之上，愈伤组织和不定芽继续生长和膨大，对不同激素
浓度配比对叶片再生频率的影响进行统计，结果见表 4。
通过观察发现，不同浓度的 6 － BA 和 NAA 处理组合对
大岩桐叶片的不定芽和愈伤组织的诱导、分化有明显的影响
(表 3)。接种 10 d后，1 号培养基上基本不形成愈伤组织，而
表 4 不同激素浓度配比对大岩桐叶片分化的影响
培养基
代号
激素及浓度
(mg /L)
6 － BA NAA
外植体数
(个)
出愈率
(%)
芽再生率
(%)
平均再生
不定芽数
(个)
1 0． 5 0． 1 90 4． 4d 53． 3b 4． 7b
2 1． 0 0． 1 90 80． 0ab 83． 3a 9． 0a
3 1． 0 0． 2 90 71． 1bc 11． 1d 1． 7c
4 2． 0 0． 2 90 93． 4a 63． 3b 5． 0b
5 3． 0 0． 2 90 56． 7c 26． 7c 3． 7bc
6 3． 0 0． 5 90 73． 3b 6． 7d 1． 7c
注:同列数据后不同小写字母表示在 0． 05 水平上差异显著。下
表同。
是直接长出不定芽;4、5 号培养基则膨大明显，基本上都能形
成愈伤组织，继续培养发现，4 号培养基在诱导出愈伤组织的
基础上继续分化出不定芽，而这个过程历时较长。与之相反，
1 号培养基可从外植体切口处直接分化出不定芽，出芽时间
最早、最快，但分化的不定芽则较少;2 号培养基在诱导出愈
伤组织的基础上继续分化出不定芽，分化出不定芽时间介于
1 号培养基和 4 号培养基之间，但是分化出不定芽的数目远
远多于 1 号培养基。由此可见，培养基中不同激素配比对诱
导愈伤组织和不定芽有很大的影响。
经方差分析后发现，每个培养基上出愈率、出芽率以及每
个外植体形成的不定芽数都有显著差异(表 4)。从出愈率来
看，4 号培养基的出愈率最高，为 93． 4%，其次是 2 号培养基，
出愈率为 80． 0%，二者之间差异不显著。然后依次为 6 号培
养基、3 号培养基和 5 号培养基，其出愈率分别为 73． 3%、
71. 1%和 56． 7%，6 号培养基与 3 号培养基之间差异不显著，
而与 5 号培养基之间差异显著。在 6 个处理中，1 号培养基
的出愈率最低，为 4． 4%。由此分析得出，以上 6 个培养基中，
4 号培养基是诱导大岩桐叶片产生愈伤组织的最好培养基。
从芽的再生率来看，2 号培养基上芽的再生率最高，为
83． 3%，其次为 4 号培养基，为 63． 3%，二者之间差异显著。
—25— 江苏农业科学 2015 年第 43 卷第 5 期
然后依次为 1 号培养基、5 号培养基和 3 号培养基，其芽再生
率分别为 53. 3%、26． 7%、11． 1%，三者之间差异显著。芽再
生率最低的为 6 号培养基，只有 6． 7%。
从每个外植体的再生不定芽数来看，2 号培养基的芽数
最多，为 9 个，与其他几种培养基差异显著。其次为 4 号培养
基，为 5 个，最少的为 3 号培养基和 6 号培养基，其平均再生
不定芽数均为 1． 7 个。
2． 2 生根培养
当不定芽在增殖培养基上长有 3 ～ 4 张真叶时，选取长势
一致的再生不定芽接种到生根培养基上，30 d 后观察统计根
的生长情况。
不定芽在几种不同处理的生根培养基上均能生根，培养
中先在基部切口处膨大，形成少量愈伤组织，6 ～ 8 d后 1 /2MS
培养基中最先开始生根，基本培养基为 MS 的培养基上均无
根的形成;30 d后的生根情况见表 5。
表 5 大岩桐再生不定芽的生根
培养基
代号
基本
培养基
激素处理浓度
(mg /L)
NAA IBA
幼苗数
生根
幼苗数
平均生
根条数
A 1 /2MS 0 0 90 90 24． 3abc
B 1 /2MS 0． 1 0 90 90 20． 0cde
C 1 /2MS 0． 2 0 90 90 25． 0ab
D 1 /2MS 0． 5 0 90 90 26． 7a
E 1 /2MS 0 0． 5 90 90 22． 0abcd
F 1 /2MS 0 1． 0 90 90 21． 3bcd
G MS 0 0 90 90 16． 0efg
H MS 0． 1 0 90 90 12． 3g
I MS 0． 2 0 90 90 13． 7g
J MS 0． 5 0 90 90 16． 3efg
K MS 0 0． 5 90 90 14． 0fg
L MS 0 1． 0 90 90 18． 7def
通过生根试验观察发现，以 1 /2 MS为基本培养基的处理
组，生根速度较以 MS为基本培养基的处理组早，块茎上的毛
细根系发白、较长，且生根数量和质量均高于以 MS 为基本培
养基的处理组;在添加生长素的培养基中，以 1 /2 MS + NAA
0． 5 mg /L和 1 /2 MS + NAA 0． 2 mg /L 培养基为好，其次为
1 /2 MS 培养基。
从生根条数观察，经方差分析后发现，在以上几个处理
中，平均生根条数差异显著，基中 D 培养基的最多，为 26． 7
条，其次较多的依次为 C培养基、A 培养基和 E 培养基，分别
为 25． 0、24． 3、22． 0 条，四者之间差异不显著。而生根条数最
少的为 H培养基，为 12． 3 条。介于中间的为 F、B、L、J、G、K、
I培养基，分别为:21． 3、20、18． 7、16． 3、16、14、13． 7 条。
在生根培养中，以 1 /2 MS为基本培养基的处理组中的须
根平均长 2． 0 ～ 3． 5 cm，以 MS为基本培养基的处理组中的须
根长 0． 5 ～ 2． 0 cm，无块茎形成，并且在移栽冲洗根部培养基
时须根易脱落，不易成活。因此，从生根效果和经济角度来
看，1 /2 MS是最适的培养基(图 5、图 6)。
2． 3 炼苗与移栽
当大岩桐不定芽切到生根培养基后，待株高 3 ～ 4 cm 时
可进行炼苗移栽(图 7、图 8)。将封口膜掀开炼苗 2 ～ 3 d，将
大岩桐幼苗取出，放清水中漂洗，小心洗净上面附着的培养 (下转第 356 页)
—35—江苏农业科学 2015 年第 43 卷第 5 期
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37 － 39．
(上接第 53 页)
基。为提高大岩桐瓶苗移栽成活率，可先栽在珍珠岩中，也
可栽在珍珠岩 ∶ 椰糠 = 1 ∶ 1 的基质中［12］，最好先将基质灭
菌。大岩桐栽培时，浇水时坚持“见干才浇，不干不浇，浇则
浇透”的原则，并注意避免直接将水喷洒在叶片和花朵上，
尤其是在通风不良、温度偏低时，这是由于大岩桐叶片表面
有密集茸毛，叶面渍水易腐烂生病。大岩桐虽不喜多水的
土壤环境，却喜较高的空气湿度，注意土壤要通气性好，栽
植不宜过深。
3 讨论
鉴于大岩桐的生物学特性和发展前景，本试验以大岩桐
叶片为外植体进行离体培养，优化了其再生体系，研究目的旨
在指导并应用于生产、节约成本和适应大规模生产，并在优化
大岩桐高频再生体系的基础上，为大岩桐的遗传转化体系的
建立和大岩桐的品种改良提供参考。适当浓度的细胞分裂素
6 － BA和 NAA能有效诱导愈伤组织和芽的继代增殖，浓度太
高则抑制愈伤组织分化成芽与芽丛的分化和生长。大岩桐叶
片在 MS +6 － BA 2． 0 mg /L + NAA 0． 2 mg /L培养基上的出愈
率最高;在 MS +6 － BA 1． 0 mg /L + NAA 0． 1 mg /L培养基上
既生长愈伤组织又生长较少的不定芽，其芽的再生率最高;在
MS +6 － BA 0． 5 mg /L + NAA 0． 1 mg /L培养基上很少或不形
成愈伤组织，而直接形成不定芽。可以根据不同的目的，调整
激素不同配比来满足需要，为建立大岩桐快速繁殖体系和工
厂化育苗提供一定技术参数，并为大岩桐种质资源的保护和
开发利用奠定一定的基础。
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