全 文 ：收稿日期:2009-10-02;　修订日期:2010-03-21
基金项目:国家 “十一五 ”科技支撑计划子课题(No.2006BAI06A01-01)
作者简介:陈新菊(1960-),女(汉族),江西南昌人 ,现任江西省药物研究
所研究员 ,学士学位 ,主要从事新药开发和质量标准的研究工作.
毛冬青药材中毛冬青皂苷甲和
毛冬青皂苷 B2 的含量测定的研究
陈新菊 ,利家平 ,袁海铭 ,李　艳 ,曾宪仪
(江西省药物研究所 ,江西 南昌　330029)
摘要:目的 建立毛冬青药材的含量测定方法。方法 采用 Lichrospher-C18色谱柱(4.0 mm×250 mm, 5 μm), 流动相为
乙腈 -0.1%醋酸溶液(37∶63),流速 1 ml/min,蒸发光散射检测器:漂移管温度 107℃, 气体流速 2.6 L/min。结果 毛冬
青皂苷甲在 5.19 ～ 64.88 μg浓度范围内线性关系良好 , r=0.999 8(n=6), 平均回收率为 100.26 %, RSD= 1.09 % (n
= 6);毛冬青皂苷 B
2
在 0.9 ～ 11.25 μg浓度范围内线性关系良好 , r=0.999 7(n=6), 平均回收率为 101.39 %, RSD=
1.46 % (n=6)。结论 该法操作快速 、准确 ,可作为毛冬青药材的质量控制方法。
关键词:毛冬青药材;　毛冬青皂苷甲;　毛冬青皂苷 B2;　高效液相 -蒸发光散射
DOI标识:doi:10.3969 /j.issn.1008-0805.2010.08.014
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2010)08-1880-02
DeterminationofIlexsaponinA1andIlexsaponinB2 ContentsinIlexpubescensbyHPLC-ELSD
CHENGXin-ju, LIJia-ping, YUANHai-ming,LIYan, ZENGXian-yi
(JiangxiMedicinalResearchInstitute, Nanchang, 330029, China)
Abstract:ObjectiveToestablishanHPLC-ELSDmethodforthedeterminationofIlexsaponinA1 andIlexsaponinB2 contentsinIlexPubescens.MethodsLichroshper-C18(4.0mm×250mm, 5μm)columnwasusedinHPLCwithAnevaporativelight-scatteringdetector.MobilephasewasAcetonitrite-0.1%Aceticacid(37∶63), theflowratewas1ml/min:drifttubetempera-
turewas107℃, andgasflowratewas2.6L/min.ResultsThelinearrangeofilexsaponinA1 waswithin5.19 ～ 64.88μg, r=
0.999 8(n=6).Theaveragerecoverywas100.26%, RSD=1.09% (n=6).ThelinearrangeofilexsaponinB2 waswithin0.9～ 11.25μg, r=0.999 7(n=6).Theaveragerecoverywas101.39%, RSD=1.46% (n=6).ConclusionThismethodisrap-
idandaccurate.ItcanbeusedforqualitycontrolofIlexPubescens.
Keywords:Llexpubescens;　LlexsaponinA1;　IlexsaponinB2;　HPLC-ELSD
　　毛冬青药材为冬青科冬青属植物毛冬青 IlexpubescensHook
etArm的干燥根 , 生长在我国南方地区 , 具有清热解毒 , 活血通
脉 , 消肿止痛的功效。近年来对毛冬青的许多研究证明毛冬青药
材中含有大量的皂苷类活性物质 [ 1～ 4] 。为了很好的利用这一资
源 , 我们对毛冬青药材进行了质量控制技术的研究 , 建立高效准
确的分析测定方法 , 本文首次采用高效液相 -蒸发光散射(HPLC
-ELSD)的测定方法 , 同时对毛冬青药材中的毛冬青皂苷甲和毛
冬青皂苷 B
2
两种成分进行了含量测定的方法学研究 [ 5] , 取得了
满意的结果。
1　仪器和试药
岛津 LC-10AD泵 , Altech500 ELSD检测器 , Sepu3000色谱
工作站。毛冬青皂苷甲对照品(批号:081211,含量 100%)自制;
毛冬青皂苷 B
2
对照品(批号:080709,含量 100%)自制。毛冬青
药材:各地采挖。乙腈 、甲醇为色谱纯 , 其它试剂均为分析纯 ,水
为重蒸水。
2　方法与结果
2.1　色谱条件 色谱柱为 Lichrospher100RP-18(4.0mm×250
mm, 5μm);流动相为乙腈 -0.1%醋酸溶液(37∶63);流速 1ml/
min;蒸发光散射检测器(飘移管温度为 107℃, 气体流速为 2.6
L/min)。
2.2　测定方法
2.2.1　 对照品溶液的制备 取毛冬青皂苷甲对照品和毛冬青皂
苷 B2对照品适量 , 精密称定 ,加甲醇制成每毫升含毛冬青皂苷甲
为 4 mg;毛冬青皂苷 B2为 0.9 mg的混合溶液 ,即得。
2.2.2　供试品溶液的制备 取毛冬青药材粉末(过 4号筛), 约
1.5 g,精密称定 , 置 250ml回流瓶中 , 加 100ml的乙醇 , 回流 2 h,
取下 , 滤过 , 然后用乙醇洗涤数次 , 滤液蒸干 , 残渣用甲醇溶解到
10 ml量瓶中 , 摇匀 ,即得。
2.2.3　测定法 分别精密吸取对照品溶液 5 μl和 10 μl;供试品
溶液 5 ～ 10 μl注入液相色谱仪 ,测定 ,用外标两点法对数方程计
算 , 即得。
2.3　专属性实验 取对照品和供试品溶液按上述方法进行测定 ,
结果在毛冬青皂苷甲和毛冬青皂苷 B2对照品相应的保留时间处
有相同的峰 , 周边无其它杂质峰干扰。毛冬青皂苷 B
2
的保留时
间在 9 min左右 ,毛冬青皂苷甲的保留时间在 11 min左右 , 理论
板数以毛冬青皂苷甲的峰计大于 8 000。结果见图 1。
2.4　蒸发光散射检测器的条件考察
2.4.1　漂移管温度的选择 在上述色谱条件下 , 先固定漂移管的
气流量为 2.5 L/min,改变漂移管温度 , 用毛冬青皂苷 B2和毛冬
青皂苷甲混合对照品溶液进样 , 记录色谱图 ,测定两个对照品的
峰面积及信噪比(S/N), 选择峰面积和信噪比两者均为最大值时
的温度 ,从实验结果中得到最优化的漂移管温度为 107℃。
2.4.2　漂移管中气流量的选择 在上述色谱条件下 , 固定漂移管
的温度为 107℃,改变漂移管的气流量 , 用毛冬青皂苷 B2和毛冬
青皂苷甲混合对照品溶液进样 ,测定两个对照品的峰面积及信噪
比(S/N), 选择峰面积和信噪比两者均为最大值时的气流量 , 从
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时珍国医国药 2010年第 21卷第 8期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2010VOL.21NO.8
实验结果中得到最优化的漂移管气流量为 2.6 L/min。
因此 , 蒸发光散射检测器的条件选择:飘移管温度为 107℃,
气体流速为 2.6 L/min。
2.5　标准曲线的制备 分别取毛冬青皂苷 B2和毛冬青皂苷甲对
照品各约 9 mg和 52 mg,同置于 10ml量瓶中 ,用甲醇溶解并稀释
到刻度 ,从中吸取 1, 2, 5, 7.5, 10和 12.5 μl注入色谱仪中进行测
定 ,结果毛冬青皂苷甲在 5.19 ～ 64.88 μg的范围内 , 浓度与峰面
积的对数值呈一直线 ,回归方程为 logA=1.329 7 logC+ 4.6775,
相关系数 r=0.999 8(n=6);毛冬青皂苷 B2在 0.9 ～ 11.25 μg
的范围内 ,浓度与峰面积的对数值呈一直线 , 回归方程为 logA =
1.551 8logC+4.512 6 , 相关系数 r=0.999 7(n=6)。
1.毛冬青皂苷 B2　　2.毛冬青皂苷甲
图 1　混合对照品(A)和样品(B)色谱图
2.6　溶液的稳定性实验 取供试品溶液 1份 , 在不同的时间点测
定 , 结果在 24 h内稳定性很好。
2.7　重复性实验 取同一批毛冬青药材 , 分别制配 6份相同浓度
的供试品溶液进行测定 , 计算得毛冬青皂苷甲和毛冬青皂苷 B2
的平均含量分别为 2.09%和 0.44%, RSD分别为 0.85%和
1.33%。
2.8　回收率实验 取同一批毛冬青药材适量 , 加入一定量的毛冬
青皂苷 B
2
和毛冬青皂苷甲对照品, 共 6份 ,制成供试品溶液 , 进行
测定 ,计算毛冬青皂苷甲和毛冬青皂苷 B2平均回收率分别为 100.
26%和 101.39%, RSD分别为 1.09%和 1.46%。结果见表 1 ～ 2。
表 1　毛冬青皂苷甲的回收率实验结果
编号 称样量m/g
样品中量
m/mg
加入对照
品量 m/mg
实测量
m/mg
回收率
(%)
平均值
(%)
RSD
(%)
1 0.751 2 15.700 14.98 30.919 101.59
2 0.750 4 15.683 15.26 30.735 98.64
3 0.764 0 15.968 14.86 30.989 101.09 100.26 1.09
4 0.754 0 15.759 15.12 30.779 99.34
5 0.751 8 15.713 15.30 31.075 100.41
6 0.752 2 15.721 15.26 31.054 100.48
2.9　药材的测定 对从不同产地 、不同时间采集的毛冬青药材 ,
经干燥粉碎 , 过 4号筛 , 分别取 1.5 g, 精密称定 , 按上述方法操
作 , 测定。结果见表 3。
表 2　毛冬青皂苷 B2 的回收率实验结果
编号 称样量m/g
样品中量
m/mg
加入对照
品量 m/mg
实测量
m/mg
回收率
(%)
平均值
(%)
RSD
(%)
1 0.751 2 3.275 3.348 6.622 99.97
2 0.750 4 3.272 3.348 6.608 99.66
3 0.764 0 3.331 3.348 6.801 103.64 101.39 1.46
4 0.754 0 3.287 3.348 6.684 101.46
5 0.751 8 3.278 3.348 6.704 102.32
6 0.752 2 3.280 3.348 6.671 101.28
表 3　毛冬青药材含量测定结果
采集地点 采集时间 毛冬青皂苷甲含量(%)RSD(%)
毛冬青皂苷 B2
含量(%)RSD(%)
江西德兴大茅山 1998-08 1.713 0.59 0.275 0.46
江西德兴大茅山 2000-12 0.841 0.41 0.378 1.23
江西德兴大茅山 2007-10 2.079 0.22 0.440 1.02
江西安远镇岗仙会山 2007-10 2.697 0.30 0.574 1.19
江西安远鹤子老郭坑 2007-10 3.144 0.46 0.412 1.46
江西遂川左安红裕棚下 2007-11 1.673 0.01 0.318 0.56
江西安福太平谷口外柏山 2007-11 2.047 1.01 0.515 0.86
湖南邵东县 2008-11 1.658 1.36 0.502 1.02
广西南宁武鸣双桥 2008-10 0.464 1.18 0.128 0.37
广西桂林荔浦溪江 2008-11 1.629 0.82 0.328 1.41
3　讨论
毛冬青药材中的大部分皂苷类物质没有紫外吸收 ,我们采用
蒸发光散射检测器对其中的皂苷类物质进行检测 ,可得到满意的
结果。
本药材试用过不同浓度的乙醇和甲醇 ,超声和回流提取不同
的时间 , 实验结果表明 ,毛冬青药材采用 95%乙醇 100 ml, 回流 2
h,提取比较完全 ,毛冬青皂苷甲和毛冬青皂苷 B
2
的含量均最高。
本法中浓度和峰面积的对数值曲线为一良好的直线 ,此直线
未过原点 , 因此在本方法中应采用外标两点对数方程来进行计
算。测定时分别精密吸取混合对照品溶液 5 μl和 10 μl;及供试
品溶液 5 ～ 10 μl注入液相色谱仪。
本方法经实验证明 ,准确性高 , 重复性好 , 简便快速 , 适合作
为毛冬青药材的质量控制方法。
参考文献:
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2010VOL.21NO.8 时珍国医国药 2010年第 21卷第 8期