全 文 ：·方药研究 ·
蓍草提取物防治肝纤维化大鼠脂质过氧化作用的实验研究
洪振丰 ,陈艳华 ,李天骄
(福建中医学院中西医结合系 ,福建 福州 350003)
　　摘要:为研究中药蓍草对肝组织纤维化过程中脂质过氧化的防治作用 , 观察了蓍草醇提取物防治 CCL4诱
发的大鼠肝纤维化过程中脂质过氧化作用的效果。结果:蓍草醇提物可有效提高肝组织超氧化物岐化酶
(SOD)的含量 、降低自由基脂质过氧化反应终产物丙二醛(MDA)的含量。结论:蓍草醇提取物可能通过减轻
氧自由基对肝细胞的破坏对肝细胞起到保护作用。
　　关键词:蓍草;大鼠;肝纤维化;脂质过氧化
　　中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1004-5627(2005)06-0023-03
　　蓍草为菊科植物蓍草的地上部分 ,其性味辛苦
微温 ,入心肝肺三经。在福建大田 、永春等地有栽
培 ,用于治疗各型肝炎 ,疗效显著 ,具有良好的民间
用药基础。文献记载蓍草对急性和亚急性炎症有
一定的近期疗效 ,从蓍草分离出的蓍草总酸有明显
的抑菌 、抗炎 、解热作用和一定的镇静止疼作用 [ 1] 。
为研究蓍草防治脂质过氧化作用的疗效及其作用
机理 , 我们研究观察了蓍草醇提物对 CCL4诱发
Wistar大鼠慢性肝损伤肝纤维化过程中脂质过氧
化作用的防治作用 ,现报道如下 。
1 材 料
四氯化碳(CCL4)由广东西陇化工厂生产 ,化
学纯 ,以花生油调和按体积比配成 40%溶液 。蓍草
原药材购自闽南永春 ,经福建中医学院中药系专家
鉴定为菊科植物蓍草(AchileamilefoliunL)。按水
煎剂制备法得浓缩药液 ,滤过 , 滤液中加 3倍量
95%乙醇 ,边加边搅拌 ,使药液含醇量达 70%左右 ,
冷藏 24h,过滤 ,弃含粘液质 、糊化淀粉和蛋白质等
杂质的沉淀物。醇溶液减压回收乙醇至无醇味 ,浓
缩 ,冷藏 24h,滤过弃去含脂溶性成分的沉淀 ,滤液
含有机酸 、生物碱等成分。制成蓍草提取物 1.2 g/
ml(每 1 ml溶液相当 1.2g生药), 4℃冰箱保存待
用 ,用前配制成 0.3 g/ml、0.6 g/ml、1.2 g/ml低 、
中 、高 3种剂量。秋水仙碱由云南西双版纳制药厂
生产 ,批准文号:国药准字 H53021369。将秋水仙
碱片研碎用蒸馏水配成 0.02mg/ml混悬液。 SOD、
MDA试剂盒购自上海海研医学生物技术中心 。
实验用 Wistar大鼠 120只 ,购自中科院上海实
验动物中心 ,符合清洁级标准(合格证书:医动字第
23-016号),体重 180 ～ 200 g,雌雄各半 ,雌雄分笼
按清洁级标准饲养 。设空白对照组 、肝纤维化模型
组 、秋水仙碱阳性对照组 、蓍草预防和治疗各 3个
剂量组。
2　方 法
2.1 预防研究 动物购回后先常规饲养 1周 ,适
应环境后开始造模。除空白对照组外各组动物以
CCL4花生油溶液腹部皮下注射 ,首次 5ml/kg,以后
3ml/kg, 2次 /周 ,连续注射 8周 [ 2] 。造模同时预防
给药灌胃 , 空白组和模型组:给蒸馏水 10ml/kg·d;
秋预组:秋水仙碱 0.2 g/kg·d;蓍预低组:蓍草提取
物 3g/kg·d;蓍预中组:蓍草提取物 6g/kg·d;蓍预
高组:蓍草提取物 12g/kg·d, 1次 /d。分组确定之
后对每只大鼠编号建立档案 ,逐日观察大鼠活动 、
进食量 、毛色等情况。 8周末各组大鼠于末次灌胃
24 h后取材 、处死。
2.2 治疗研究 第 1 ～ 8周造模 ,造模方法同 2.1
部分 。于造模成功后(第 9周)开始给药治疗 ,连续
6周 。正常对照组和模型组以蒸馏水作对照 ,蓍草
治疗组均按相应预防组使用的剂量和方法给予蓍
草提取物灌胃 ,阳性药物对照组给予相应剂量秋水
仙碱灌胃 。逐日观察大鼠活动 、进食量 、毛色等情
况。第 14周末即各组动物末次灌胃 24 h后取材 、
处死 。
2.3　实验标本采集　采用大鼠摘眼球法取血 ,每
只大鼠取血约 3 ml,装入预先滴有肝素 50 μl的 EP
收稿日期:2005-09-16
基金项目:福建省科技三项费用资助项目(K02086)
作者简介:洪振丰(1953—),男 ,硕士 ,教授 ,硕士研究生导师。
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福建中医学院学报 2005年 12月 第 15卷 第 6期JournalofFujianColegeofTCMDecember2005, 15(6)
DOI :10.13261/j.cnki.j futcm.001274
管中 ,以 3000 r/min离心 10min,取上清液 ,于冰箱
中 -20℃保存待测 。取血完毕后处死大鼠 ,立刻剖
开腹腔 ,暴露肝脏 ,取部分肝组织经 4℃生理盐水漂
洗 ,除去血液 ,滤纸拭干 ,称取 10 mg,剪碎后装入玻
璃匀浆器中 ,加入 1ml冰等渗盐水充分匀浆 ,倒入
试管内 ,并另加 1 ml冲洗干净玻璃匀浆器 ,一并倒
入试管内 。将匀浆液以 3000r/min离心 15min,取
上清液 ,于冰箱中 -20℃保存待测。
2.4　检测指标及方法 嘌呤氧化法检测肝组织匀
浆 SOD活性 ,硫代巴比妥法检测肝组织匀浆 MDA
的含量 ,考马斯亮兰法检测组织中蛋白定量 ,以代
入公式中计算出 SOD、MDA含量 。所有数据采用
平均数 ±标准差表示。计量资料两组间比较用 t
或者 t检验 ,多组间比较用单因素方差分析。所有
数据统计采用 Spss11.5 forwindows软件处理。
3 结 果
3.1 预防组大鼠肝组织 SOD、MDA的变化　模型
组大鼠肝组织 SOD活性降低 , MDA含量升高 ,与空
白组比较差异非常显著。各药物预防组肝组织
SOD活性明显高于模型组 ,其中蓍预低 、中剂量组
与空白组比较已无显著性差异(P<0.05)。蓍草
低 、中剂量可明显降低血清中 MDA含量 ,与模型组
比较有显著性差异 ,见表 1。
表 1 蓍草对肝纤维化脂质过氧化作用的预防比较(x±s)
组　别 n SOD(U/mgprot)MDA(nmol/mgprot)
空白组 10 154.89±19.01 1.07±0.18
模型组 10 96.32±16.801) 3.17±0.541)
秋预组 10 135.27±17.493) 2.75±0.741)
蓍草 3g/kg组 10 135.49±8.313) 2.13±0.441)3)
蓍草 6g/kg组 10 142.77±9.933) 2.00±0.481)3)
蓍草 12g/kg组 10 122.83±6.70 2)3) 2.35±0.69 1)
　　注:与空白组比较 , 1)P<0.01, 2)P<0.05;与模型组
比较 , 3)P<0.01
3.2　治疗组大鼠肝组织 SOD、MDA的变化　各药
物治疗组均能提高肝组织 SOD活性 ,其中低 、中剂
量组与模型空白组比较有显著性差异(P<0.05)。
各治疗组均可明显降低血清中 MDA含量 ,与模型
组比较有显著性差异 ,见表 2。
4 讨 论
CCL4引起的肝损伤肝纤维化中 ,自由基及其引
发的脂质过氧化是其损伤的主要机制 [ 3] 。关于对
抗氧自由基的物质研究最多的是超氧化物歧化酶
(superoxidedismutase, SOD),体内 SOD对机体的氧
化与抗氧化平衡起着至关重要的作用 ,它具有把自
表 2　蓍草对肝纤维化脂质过氧化作用的治疗比较(x±s)
组　别 n SOD(U/mgprot)MDA(nmol/mgprot)
空白组 10 143.89±16.78 1.11±0.17
模型组 10 95.54±10.731) 3.24±0.521)
秋治组 10 101.89±11.801) 2.49±0.631)
蓍草 3 g/kg组 10 116.37±9.241)3) 2.19±0.651)3)
蓍草 6g/kg组 10 119.45±9.061)4) 1.82±0.542)4)
蓍草 12g/kg组 10 111.49±18.521) 2.22±0.721)3)
　　注:与空白组比较 , 1)P<0.01, 2)P<0.05;与模型组
比较 , 3)P<0.05, 4)P<0.01
由基反应的始动因子超氧化阴离子歧化产生 H2O2
并进一步生成水和氧的能力 ,因此 SOD活力的高
低间接反映了机体清除氧自由基的能力。丙二醛
(malonyldialdehyde, MDA)是自由基脂质过氧化反
应的终产物 ,因肝细胞过多的脂质过氧化 ,故产生
大量的 MDA,使肝组织中 MDA水平升高 。其含量
的高低又间接反映了机体细胞受自由基攻击的严
重程度[ 4] 。故肝组织内 MDA、SOD含量的变化可
反映肝损伤的程度及治疗后肝功能恢复的情
况[ 5, 6] 。
本实验提示 CCL4可引起脂质过氧化作用 ,损
伤肝细胞 ,与相关报道一致 。各药物预防及治疗组
肝组织 SOD活性明显高于模型组 ,其中蓍预低 、中
剂量组与空白组比较已无显著性差异(P>0.05),
提示蓍提物能有效提高肝细胞 SOD活性 ,以清除
脂质过氧化作用过程中产生的具有高度活性的超
氧阴离子 ,减低其毒性作用 ,保护肝细胞的结构和
功能 ,阻止肝细胞的损伤 。蓍草预防及治疗组低 、
中剂量可明显减低肝组织中 MDA含量 ,提示蓍草
提取物对肝细胞受自由基攻击均有一定的防护作
用 ,但与正常组相比仍有显著性差异 ,说明蓍草还
不能将肝细胞损伤恢复至正常水平。预防和治疗
研究均显示中剂量组效果明显优于其它各组 。
蓍草富含有机酸等多种成分 ,具有抗菌 、消炎 、
解热 、镇静和止痛作用。本实验结果提示蓍草可能
是通过抑制脂质过氧化而对肝损伤及纤维化起抑
制作用。蓍草价格低廉 ,栽培种植广泛 。因此 ,应
用蓍草防治慢性肝损伤及肝纤维化有广泛的应用
价值 ,其作用机制值得深入研究。
参考文献:
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技术出版社 , 1991.464.
24 福建中医学院学报　　　　　　　　　 　　　　　　第 15卷
灵芝孢子粉对大鼠长期毒性研究
吴黎敏
(莆田学院附属医院 ,福建 莆田 351100)
　　摘要:观察连续重复给予灵芝孢子粉对大鼠产生的毒性反应。选大鼠 80只 , 随机分为 4组 ,每组 20只 , 实
验设低 、中 、高 3个剂量组和 1个对照组 ,连续灌胃给药 30d,每周称体重 1次 , 停药后测试大鼠血液学 、血液生
化学 、脏器系数及病理组织学变化。结果:各剂量组大鼠各项生化指标 、血常规均在正常值范围内 , 对受检脏器
进行组织病理学检查 , 未见特异性病变。结论:灵芝孢子粉 4.50 g/kg剂量大鼠连续服用 30d为无毒剂量。
　　关键词:灵芝孢子粉;长期毒性;SD大鼠
　　中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1004-5627(2005)06-0025-03
　　灵芝孢子粉(ThesporesfromGanodermalucid-
ummkarst)是灵芝发育周期中生长成熟期从菌盖弹
射出来的象淡雾状的极其微小的孢子 ,是一种珍贵
的药用真菌 ,传统的药用部位仅限于其子实体 。近
年来随着人工栽培技术和孢子破壁技术的发展 ,使
得灵芝孢子(粉)作为灵芝的又一药用部位逐渐为
人们所认识 ,对灵芝孢子粉的研究日益增多 。已有
研究表明 ,灵芝孢子粉具有调节免疫功能和抗辐射
作用 [ 1] ,在体内外试验显示有抑制肿瘤作用[ 2] 。有
报道灵芝孢子粉也有抗突变作用[ 3] 。为了解灵芝
孢子粉的安全性 ,本文对其长期毒性进行了研究 。
1 材 料
灵芝孢子粉由福建省健神生物工程有限公司
提供 ,呈棕褐色粉末状 ,临用前用蒸馏水配成 0.112
收稿日期:2005-09-06
作者简介:吴黎敏(1961—),男 ,副主任医师。
[ 3] 　骆抗先.乙型肝炎基础和临床(第二版)[ M] .北京:人民出版
社 , 2001.370.
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alphageneexpressionisassociatedwithlipidperoxodationinhep-
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1994, 19:1262— 1271.
ExperimentalStudyofExtractofAchileamilefoliun
LonLipidPeroxidationofHepaticFibrosis
HONGZhen-feng, CHENYan-hua, LITian-jiao
(Departmentofintegrativemedicine, FCTCM, Fuzhou, Fujian350003, china)
　　Abstract:Tostudytheprophylaxisandanti-lipidperoxidationefectoftheextractofAchileamilefoliunL
onexperimentalhepaticfibrosisinducedbyCCL4.TheresultshowedthattheextractofAchileamilefoliunL
couldelevatethecontentofSODandreducetheabnormalyhighlevelsofMDA(malondialdehyde).Conclusion:
ExtractofAchileamilefoliunLcanprotecthepatocytesfrominjuryandpreventtheprogressofhepaticfibrosisby
anti-lipidperoxidationefectinrats, whichmayassociatewiththeefectofanti-oxidiationoftheextract.
Keywords:AchileamilefoliunL;rat;hepaticfibrosis;lipidperoxidation
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福建中医学院学报 2005年 12月 第 15卷 第 6期JournalofFujianColegeofTCMDecember2005, 15(6)